22.12.常用特殊染色
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常用特殊染色
特殊染色是近代病理学研究工作和临床病理检验工作 不可忽视的重要手段. 不可忽视的重要手段. 一.胶原纤维:广泛分布于各脏器内,胶原纤维染色主要 胶原纤维:广泛分布于各脏器内, 用于和肌纤维鉴别.来源于间胚叶的肿瘤,如纤维瘤, 用于和肌纤维鉴别.来源于间胚叶的肿瘤,如纤维瘤, 平滑肌瘤,横纹肌瘤,神经纤维瘤. 平滑肌瘤,横纹肌瘤,神经纤维瘤.甚至它们 的肉瘤都 产生一定的纤维.H.E染色难以区别. 产生一定的纤维.H.E染Βιβλιοθήκη Baidu难以区别.用胶原纤维染色 可以区别. 可以区别.慢性炎症 机化和瘢痕形成中出现胶原纤维, 机化和瘢痕形成中出现胶原纤维, 通过胶原纤维染色可证实, 慢性肾小球肾炎, 通过胶原纤维染色可证实,如:慢性肾小球肾炎,大叶 性肺炎,良性高血压,小动脉玻璃样变等. 性肺炎,良性高血压,小动脉玻璃样变等.
操作方法: 操作方法: ①组织固定10%甲醛液,常规脱水包埋切片 组织固定10%甲醛液, ②切片脱蜡至水 ③ weigert氏铁苏木素液5-10分钟 weigert氏铁苏木素液5 10分钟 ④流水稍洗 ⑤ 1%盐酸酒精迅速分化 1%盐酸酒精迅速分化 ⑥流水冲洗数分钟 ⑦ Van Gieson 氏染液染1-5分钟 氏染液染1 ⑧倾去染液,直接用95%酒精分化和脱水, ⑧倾去染液,直接用95%酒精分化和脱水,吹干 ⑨中性树胶封闭 结果:胶原纤维呈鲜红色, 结果:胶原纤维呈鲜红色,肌纤维胞质及红细胞黄色 胞核蓝褐色
取一烧杯盛蒸馏水30ml,加入苏木素, 取一烧杯盛蒸馏水30ml,加入苏木素,稍加温 使苏木素完全溶解.另一烧杯盛蒸馏水70ml, 使苏木素完全溶解.另一烧杯盛蒸馏水70ml, 加入磷钨酸使其完全溶解. 加入磷钨酸使其完全溶解.待苏木素液冷却 后与磷钨酸液混合,置于光亮处数周或数月. 后与磷钨酸液混合,置于光亮处数周或数月. 待成熟后才可使用. 待成熟后才可使用. ② 酸化高锰酸钾水溶液 甲液 高锰酸钾 0.5g 0.5g 蒸馏水加至 100ml 100ml
⑥滴入Gordon-sweets氏银氨液作用1分 滴入Gordon-sweets氏银氨液作用1 钟,蒸馏水稍洗 ⑦10%中性甲醛还原1分钟,流水洗5-10分 10%中性甲醛还原1分钟,流水洗5 10分 钟 ⑧常规脱水透明 ⑨中性树胶封闭 结果:网状纤维呈黑色, 结果:网状纤维呈黑色,胶原纤维黄棕色
2.Masson三色法 2.Masson三色法 试剂配置: 试剂配置: ① weigert氏铁苏木素液 weigert氏铁苏木素液 ② 丽春红酸性品红液 丽春红 酸性品红 蒸馏水 冰醋酸 ③ 1%磷钼酸水溶液 1%磷钼酸水溶液 磷钼酸1 磷钼酸1g加蒸馏水至 100ml 0.7g 0.7g 0.3g 0.3g 99ml 99ml 1 ml
Zenker氏液固定的组织脱蜡至水后 Zenker氏液固定的组织脱蜡至水后 入0.5%碘酒精作用10分钟,稍水洗, 0.5%碘酒精作用10分钟,稍水洗, 5%硫代硫酸钠作用5分钟,流水冲洗 5%硫代硫酸钠作用5分钟, 10分钟后染色. 10分钟后染色
二.网状纤维 网状纤维分布很广泛. 网状纤维分布很广泛.网状纤维的形态 分布增多或减少断裂或崩解等的病理 变化在病理诊断上具有重要意义. 变化在病理诊断上具有重要意义.特别 是对协助肿瘤诊断和鉴别诊断有较大 帮助.如用于区别癌与肉瘤. 帮助.如用于区别癌与肉瘤.鉴别早期癌 鉴别血管内皮瘤和血管外皮瘤等. 鉴别血管内皮瘤和血管外皮瘤等.
注意事项: 注意事项: ① 本染色法组织最好用Bouin氏或Zenker氏 本染色法组织最好用Bouin氏或Zenker氏 液固定为佳.如已用10%甲醛固定. 液固定为佳.如已用10%甲醛固定.切片脱 蜡至水后放入Bouin氏液作用一晚或至37 蜡至水后放入Bouin氏液作用一晚或至37 度温箱内1 小时, 度温箱内1-2小时,流水冲洗切片至黄色 消失.再染色. 消失.再染色.
淋巴结网状纤维染色
三.弹力纤维:广泛分布于身体各处,特别是 弹力纤维:广泛分布于身体各处, 肺泡壁,动脉壁和皮肤最为丰富. 肺泡壁,动脉壁和皮肤最为丰富. 间苯二酚品红法 试剂配置: 试剂配置: ①30%三氯化铁液 30%三氯化铁液 三氯化铁 30g 30g 蒸馏水加至100ml 蒸馏水加至100ml
操作方法: 操作方法: ①组织固定10%甲醛液,常规脱水包埋切片 组织固定10%甲醛液, ②切片脱蜡至95%乙醇 ②切片脱蜡至95%乙醇 ③入间苯二酚品红液1-2小时 入间苯二酚品红液 ④直接用95%乙醇洗去多余染液并分化至无 ④直接用95%乙醇洗去多余染液并分化至无 色脱下:镜下观察,如染色不清晰, 色脱下:镜下观察,如染色不清晰,可再用 1%盐酸酒精稍分化,自来水冲洗 1%盐酸酒精稍分化,
注意事项: 注意事项: ① weigert氏铁苏木素液因分甲乙两液 不宜 weigert氏铁苏木素液因分甲乙两液 预先混合, 预先混合,否则易氧化沉淀而逐渐失去染色 力 ② Van Gieson 氏染液也甲乙两液分瓶盛放,临 氏染液也甲乙两液分瓶盛放, 用时取甲液1 乙液9份混合, 用时取甲液1份,乙液9份混合,放置一段时 间后, 间后,酸性品红则不易着色 ③ V.G法染色容易褪色 V.G法染色容易褪色
注意事项: 注意事项: ①所使用的玻璃器皿都必须用洗液浸泡并 冲洗干净 ②所用试剂质量要纯, GR或AR级试剂, ②所用试剂质量要纯,用GR或AR级试剂,最 好用双蒸水配置试剂 ③配置银氨液时加氢氧化胺要恰当. ③配置银氨液时加氢氧化胺要恰当.配置的 银氨液至冰箱内可保存数天至数周. 银氨液至冰箱内可保存数天至数周.
④ 2%硫酸铁胺液 2%硫酸铁胺液 硫酸铁胺 2g 蒸馏水加至 100ml 100ml ⑤10%中性甲醛液 10%中性甲醛液 甲醛 10ml 10ml 蒸馏水 90ml 90ml 碳酸钙 加至饱和,用时取上清液 加至饱和,
操作方法: 操作方法: ①组织固定10%甲醛液,常规脱水包埋切片 组织固定10%甲醛液, ②切片脱蜡至水 ③滴入酸化高锰酸钾液 氧化5分钟, ③滴入酸化高锰酸钾液,氧化5分钟,稍水洗 ④ 2%草酸水溶液漂白1-2分钟,稍水洗 2%草酸水溶液漂白1 分钟, ⑤ 2%硫酸铁胺水溶液媒染5分钟,稍水洗, 2%硫酸铁胺水溶液媒染5分钟,稍水洗, 蒸馏水洗一次
② 酸化高锰酸钾水溶液 甲液 高锰酸钾 0.5g 0.5g 蒸馏水加至 100ml 100ml 乙液 硫酸 0.5m 0.5m l 蒸馏水 99.5ml 99.5ml 甲乙两液分瓶盛放, 甲乙两液分瓶盛放,临用时两液等量混合 ③ 2%草酸 2%草酸 草酸2 草酸2g 蒸馏水加至 100ml 100ml
乙液 硫酸 0.5ml 0.5ml 蒸馏水 99.5ml 99.5ml 甲乙两液分瓶盛放, 甲乙两液分瓶盛放,临用时两液等量混合 ③ 2%草酸 草酸2g 2%草酸 草酸2 蒸馏水加至 100ml 100ml ④0.5%碘酒精液 碘片 0.5g 0.5%碘酒精液 0.5g 70%酒精加至100ml 70%酒精加至100ml ⑤5%硫代硫酸钠液 硫代硫酸钠 5g 5%硫代硫酸钠液 蒸馏水加至100ml 蒸馏水加至100ml
②间苯二酚品红液 间苯二酚品红液 碱性品红 1 g 间苯二酚 2 g 蒸馏水 100 ml 30%三氯化铁液 30%三氯化铁液 12.5 ml 浓盐酸 2 ml
取一300ml烧杯,放入碱性品红, 取一300ml烧杯,放入碱性品红,间苯二酚 和蒸馏水,用玻璃棒搅拌加热煮沸,再慢加入30% 和蒸馏水,用玻璃棒搅拌加热煮沸,再慢加入30% 三化铁液 ,搅拌煮沸3-5分钟,冷却后过滤,倾 搅拌煮沸3 分钟,冷却后过滤, 去滤液,将滤纸和沉淀物一同放入烧杯, 去滤液,将滤纸和沉淀物一同放入烧杯,置干燥 箱内烘干,加入95%乙醇100ml在水浴锅内加热搅 箱内烘干,加入95%乙醇100ml在水浴锅内加热搅 拌至沉淀物完全溶解,取出滤纸,冷却后过滤, 拌至沉淀物完全溶解,取出滤纸,冷却后过滤,补 充乙醇至100ml,加浓盐酸2ml,混合后用. 充乙醇至100ml,加浓盐酸2ml,混合后用.
④2%苯胺蓝液 苯胺蓝 2g 2%苯胺蓝液 冰醋酸 2ml 蒸馏水加至 蒸馏水加至 100ml ⑤亮绿液 亮绿 1g 冰醋酸 1 ml 蒸馏水 99 ml
操作方法: 操作方法: ①组织常规固定脱水包埋切片 ②切片脱蜡至水 ③ weigert氏铁苏木素液5-10分钟 weigert氏铁苏木素液5 10分钟 ④流水稍洗 ⑤1%盐酸酒精迅速分化 1%盐酸酒精迅速分化 ⑥流水冲洗数分钟封闭
⑤常规脱水透明 ⑥中性树胶封固
结果: 结果:弹力纤维呈深蓝黑色 注意事项: 注意事项: 间苯二酚品红液用小口砂塞瓶装, 间苯二酚品红液用小口砂塞瓶装,置 4度冰箱保存,可保存3-6月,临用时 度冰箱保存,可保存3 取出恢复室温使用. 取出恢复室温使用.
四 肌纤维:肌纤维是肌组织成份,由肌细胞 肌纤维:肌纤维是肌组织成份, 组成.VG和Masson三色法是显示肌纤维 组成.VG和Masson三色法是显示肌纤维 常用的方法. 常用的方法.多用于肿瘤组织鉴别诊断中 区别肿瘤为肌源性或纤维源性. 区别肿瘤为肌源性或纤维源性.横纹肌肉 瘤的诊断常用磷钨酸苏木素法法显示横 纹肌的横纹. 纹肌的横纹. 1. 磷钨酸苏木素法(P.T.A.H)法 磷钨酸苏木素法(P.T.A.H)法 试剂配制: 试剂配制: ①磷钨酸苏木素液 苏木素 0.1 g 磷钨酸 2 g 蒸馏水 100ml
氢氧化银氨液浸染法 ① Gordon-sweets氏银氨液: Gordon-sweets氏银氨液: 用小量杯盛10%硝酸银水溶液2ml,逐滴 用小量杯盛10%硝酸银水溶液2ml,逐滴 加入氢氧化胺,边滴边摇动容器. 加入氢氧化胺,边滴边摇动容器.先出现 沉淀物, 沉淀物,继续滴入氢氧化胺至形成的沉 淀恰好溶解.加入3%氢氧化钠水溶液2ml, 淀恰好溶解.加入3%氢氧化钠水溶液2ml, 再次形成沉淀. 再次形成沉淀.继续滴入氢氧化胺至形成 的沉淀又恰好溶解.最后加蒸馏水至40ml, 的沉淀又恰好溶解.最后加蒸馏水至40ml, 配好后用棕色砂塞瓶装,放于冰箱内保存, 配好后用棕色砂塞瓶装,放于冰箱内保存, 用时恢复至室温. 用时恢复至室温.
②Van Gieson 氏染液 甲液: 1%酸性品红水溶液 甲液: 1%酸性品红水溶液 酸性品红 1 g 蒸馏水 100ml 乙液: 苦味酸饱和水溶液( 乙液: 苦味酸饱和水溶液(约1.2%) 甲乙两液分瓶盛放,临用时取甲液1 甲乙两液分瓶盛放,临用时取甲液1份,乙液 9份混合使用 ③ 1%盐酸酒精液 1%盐酸酒精液 70%酒精 70%酒精 99 ml 盐酸 1 ml
② 1%磷钼酸水溶液处理时可在镜下控制,见 1%磷钼酸水溶液处理时可在镜下控制, 肌纤维红色, 肌纤维红色,胶原纤维呈淡红色即可
附:
Bouin氏固定液 Bouin氏固定液 饱和苦味酸水溶液 75 ml 甲醛 25 ml 冰醋酸 5 ml Zenker氏液固定液 Zenker氏液固定液 升汞 5g 重铬酸钾 2.5g 冰醋酸 蒸馏水 5 ml 100 ml
1.Van Gieson 氏苦味酸-酸性品红染色法(V.G法) 氏苦味酸-酸性品红染色法(V.G法 试剂配制: 试剂配制: ① weigert氏铁苏木素液 weigert氏铁苏木素液 甲液: 甲液: 苏木素 1 g 无水酒精 100 ml 乙液: 30%三氯化铁 乙液: 30%三氯化铁 4 ml 蒸馏水 100 ml 盐酸 1 ml 甲乙两液分瓶盛放,临用时两液等量混合. 甲乙两液分瓶盛放,临用时两液等量混合.
⑦丽春红酸性品红染液染5-10分钟 丽春红酸性品红染液染5 10分钟 ⑧蒸馏水稍冲洗 ⑨ 1%磷钼酸水溶液 处理约5分钟 1%磷钼酸水溶液 处理约5 ⑩直接用苯胺蓝液或亮绿液染5 ⑩直接用苯胺蓝液或亮绿液染5分钟 ⑾1%冰醋酸处理1分钟 1%冰醋酸处理1 ⑿95%酒精脱水多次,吹干 95%酒精脱水多次, ⒀中性树胶 染色结果:胶原纤维呈蓝色或绿色, 染色结果:胶原纤维呈蓝色或绿色,肌纤维胞 质及红细胞红色,胞核蓝色. 质及红细胞红色,胞核蓝色.
特殊染色是近代病理学研究工作和临床病理检验工作 不可忽视的重要手段. 不可忽视的重要手段. 一.胶原纤维:广泛分布于各脏器内,胶原纤维染色主要 胶原纤维:广泛分布于各脏器内, 用于和肌纤维鉴别.来源于间胚叶的肿瘤,如纤维瘤, 用于和肌纤维鉴别.来源于间胚叶的肿瘤,如纤维瘤, 平滑肌瘤,横纹肌瘤,神经纤维瘤. 平滑肌瘤,横纹肌瘤,神经纤维瘤.甚至它们 的肉瘤都 产生一定的纤维.H.E染色难以区别. 产生一定的纤维.H.E染Βιβλιοθήκη Baidu难以区别.用胶原纤维染色 可以区别. 可以区别.慢性炎症 机化和瘢痕形成中出现胶原纤维, 机化和瘢痕形成中出现胶原纤维, 通过胶原纤维染色可证实, 慢性肾小球肾炎, 通过胶原纤维染色可证实,如:慢性肾小球肾炎,大叶 性肺炎,良性高血压,小动脉玻璃样变等. 性肺炎,良性高血压,小动脉玻璃样变等.
操作方法: 操作方法: ①组织固定10%甲醛液,常规脱水包埋切片 组织固定10%甲醛液, ②切片脱蜡至水 ③ weigert氏铁苏木素液5-10分钟 weigert氏铁苏木素液5 10分钟 ④流水稍洗 ⑤ 1%盐酸酒精迅速分化 1%盐酸酒精迅速分化 ⑥流水冲洗数分钟 ⑦ Van Gieson 氏染液染1-5分钟 氏染液染1 ⑧倾去染液,直接用95%酒精分化和脱水, ⑧倾去染液,直接用95%酒精分化和脱水,吹干 ⑨中性树胶封闭 结果:胶原纤维呈鲜红色, 结果:胶原纤维呈鲜红色,肌纤维胞质及红细胞黄色 胞核蓝褐色
取一烧杯盛蒸馏水30ml,加入苏木素, 取一烧杯盛蒸馏水30ml,加入苏木素,稍加温 使苏木素完全溶解.另一烧杯盛蒸馏水70ml, 使苏木素完全溶解.另一烧杯盛蒸馏水70ml, 加入磷钨酸使其完全溶解. 加入磷钨酸使其完全溶解.待苏木素液冷却 后与磷钨酸液混合,置于光亮处数周或数月. 后与磷钨酸液混合,置于光亮处数周或数月. 待成熟后才可使用. 待成熟后才可使用. ② 酸化高锰酸钾水溶液 甲液 高锰酸钾 0.5g 0.5g 蒸馏水加至 100ml 100ml
⑥滴入Gordon-sweets氏银氨液作用1分 滴入Gordon-sweets氏银氨液作用1 钟,蒸馏水稍洗 ⑦10%中性甲醛还原1分钟,流水洗5-10分 10%中性甲醛还原1分钟,流水洗5 10分 钟 ⑧常规脱水透明 ⑨中性树胶封闭 结果:网状纤维呈黑色, 结果:网状纤维呈黑色,胶原纤维黄棕色
2.Masson三色法 2.Masson三色法 试剂配置: 试剂配置: ① weigert氏铁苏木素液 weigert氏铁苏木素液 ② 丽春红酸性品红液 丽春红 酸性品红 蒸馏水 冰醋酸 ③ 1%磷钼酸水溶液 1%磷钼酸水溶液 磷钼酸1 磷钼酸1g加蒸馏水至 100ml 0.7g 0.7g 0.3g 0.3g 99ml 99ml 1 ml
Zenker氏液固定的组织脱蜡至水后 Zenker氏液固定的组织脱蜡至水后 入0.5%碘酒精作用10分钟,稍水洗, 0.5%碘酒精作用10分钟,稍水洗, 5%硫代硫酸钠作用5分钟,流水冲洗 5%硫代硫酸钠作用5分钟, 10分钟后染色. 10分钟后染色
二.网状纤维 网状纤维分布很广泛. 网状纤维分布很广泛.网状纤维的形态 分布增多或减少断裂或崩解等的病理 变化在病理诊断上具有重要意义. 变化在病理诊断上具有重要意义.特别 是对协助肿瘤诊断和鉴别诊断有较大 帮助.如用于区别癌与肉瘤. 帮助.如用于区别癌与肉瘤.鉴别早期癌 鉴别血管内皮瘤和血管外皮瘤等. 鉴别血管内皮瘤和血管外皮瘤等.
注意事项: 注意事项: ① 本染色法组织最好用Bouin氏或Zenker氏 本染色法组织最好用Bouin氏或Zenker氏 液固定为佳.如已用10%甲醛固定. 液固定为佳.如已用10%甲醛固定.切片脱 蜡至水后放入Bouin氏液作用一晚或至37 蜡至水后放入Bouin氏液作用一晚或至37 度温箱内1 小时, 度温箱内1-2小时,流水冲洗切片至黄色 消失.再染色. 消失.再染色.
淋巴结网状纤维染色
三.弹力纤维:广泛分布于身体各处,特别是 弹力纤维:广泛分布于身体各处, 肺泡壁,动脉壁和皮肤最为丰富. 肺泡壁,动脉壁和皮肤最为丰富. 间苯二酚品红法 试剂配置: 试剂配置: ①30%三氯化铁液 30%三氯化铁液 三氯化铁 30g 30g 蒸馏水加至100ml 蒸馏水加至100ml
操作方法: 操作方法: ①组织固定10%甲醛液,常规脱水包埋切片 组织固定10%甲醛液, ②切片脱蜡至95%乙醇 ②切片脱蜡至95%乙醇 ③入间苯二酚品红液1-2小时 入间苯二酚品红液 ④直接用95%乙醇洗去多余染液并分化至无 ④直接用95%乙醇洗去多余染液并分化至无 色脱下:镜下观察,如染色不清晰, 色脱下:镜下观察,如染色不清晰,可再用 1%盐酸酒精稍分化,自来水冲洗 1%盐酸酒精稍分化,
注意事项: 注意事项: ① weigert氏铁苏木素液因分甲乙两液 不宜 weigert氏铁苏木素液因分甲乙两液 预先混合, 预先混合,否则易氧化沉淀而逐渐失去染色 力 ② Van Gieson 氏染液也甲乙两液分瓶盛放,临 氏染液也甲乙两液分瓶盛放, 用时取甲液1 乙液9份混合, 用时取甲液1份,乙液9份混合,放置一段时 间后, 间后,酸性品红则不易着色 ③ V.G法染色容易褪色 V.G法染色容易褪色
注意事项: 注意事项: ①所使用的玻璃器皿都必须用洗液浸泡并 冲洗干净 ②所用试剂质量要纯, GR或AR级试剂, ②所用试剂质量要纯,用GR或AR级试剂,最 好用双蒸水配置试剂 ③配置银氨液时加氢氧化胺要恰当. ③配置银氨液时加氢氧化胺要恰当.配置的 银氨液至冰箱内可保存数天至数周. 银氨液至冰箱内可保存数天至数周.
④ 2%硫酸铁胺液 2%硫酸铁胺液 硫酸铁胺 2g 蒸馏水加至 100ml 100ml ⑤10%中性甲醛液 10%中性甲醛液 甲醛 10ml 10ml 蒸馏水 90ml 90ml 碳酸钙 加至饱和,用时取上清液 加至饱和,
操作方法: 操作方法: ①组织固定10%甲醛液,常规脱水包埋切片 组织固定10%甲醛液, ②切片脱蜡至水 ③滴入酸化高锰酸钾液 氧化5分钟, ③滴入酸化高锰酸钾液,氧化5分钟,稍水洗 ④ 2%草酸水溶液漂白1-2分钟,稍水洗 2%草酸水溶液漂白1 分钟, ⑤ 2%硫酸铁胺水溶液媒染5分钟,稍水洗, 2%硫酸铁胺水溶液媒染5分钟,稍水洗, 蒸馏水洗一次
② 酸化高锰酸钾水溶液 甲液 高锰酸钾 0.5g 0.5g 蒸馏水加至 100ml 100ml 乙液 硫酸 0.5m 0.5m l 蒸馏水 99.5ml 99.5ml 甲乙两液分瓶盛放, 甲乙两液分瓶盛放,临用时两液等量混合 ③ 2%草酸 2%草酸 草酸2 草酸2g 蒸馏水加至 100ml 100ml
乙液 硫酸 0.5ml 0.5ml 蒸馏水 99.5ml 99.5ml 甲乙两液分瓶盛放, 甲乙两液分瓶盛放,临用时两液等量混合 ③ 2%草酸 草酸2g 2%草酸 草酸2 蒸馏水加至 100ml 100ml ④0.5%碘酒精液 碘片 0.5g 0.5%碘酒精液 0.5g 70%酒精加至100ml 70%酒精加至100ml ⑤5%硫代硫酸钠液 硫代硫酸钠 5g 5%硫代硫酸钠液 蒸馏水加至100ml 蒸馏水加至100ml
②间苯二酚品红液 间苯二酚品红液 碱性品红 1 g 间苯二酚 2 g 蒸馏水 100 ml 30%三氯化铁液 30%三氯化铁液 12.5 ml 浓盐酸 2 ml
取一300ml烧杯,放入碱性品红, 取一300ml烧杯,放入碱性品红,间苯二酚 和蒸馏水,用玻璃棒搅拌加热煮沸,再慢加入30% 和蒸馏水,用玻璃棒搅拌加热煮沸,再慢加入30% 三化铁液 ,搅拌煮沸3-5分钟,冷却后过滤,倾 搅拌煮沸3 分钟,冷却后过滤, 去滤液,将滤纸和沉淀物一同放入烧杯, 去滤液,将滤纸和沉淀物一同放入烧杯,置干燥 箱内烘干,加入95%乙醇100ml在水浴锅内加热搅 箱内烘干,加入95%乙醇100ml在水浴锅内加热搅 拌至沉淀物完全溶解,取出滤纸,冷却后过滤, 拌至沉淀物完全溶解,取出滤纸,冷却后过滤,补 充乙醇至100ml,加浓盐酸2ml,混合后用. 充乙醇至100ml,加浓盐酸2ml,混合后用.
④2%苯胺蓝液 苯胺蓝 2g 2%苯胺蓝液 冰醋酸 2ml 蒸馏水加至 蒸馏水加至 100ml ⑤亮绿液 亮绿 1g 冰醋酸 1 ml 蒸馏水 99 ml
操作方法: 操作方法: ①组织常规固定脱水包埋切片 ②切片脱蜡至水 ③ weigert氏铁苏木素液5-10分钟 weigert氏铁苏木素液5 10分钟 ④流水稍洗 ⑤1%盐酸酒精迅速分化 1%盐酸酒精迅速分化 ⑥流水冲洗数分钟封闭
⑤常规脱水透明 ⑥中性树胶封固
结果: 结果:弹力纤维呈深蓝黑色 注意事项: 注意事项: 间苯二酚品红液用小口砂塞瓶装, 间苯二酚品红液用小口砂塞瓶装,置 4度冰箱保存,可保存3-6月,临用时 度冰箱保存,可保存3 取出恢复室温使用. 取出恢复室温使用.
四 肌纤维:肌纤维是肌组织成份,由肌细胞 肌纤维:肌纤维是肌组织成份, 组成.VG和Masson三色法是显示肌纤维 组成.VG和Masson三色法是显示肌纤维 常用的方法. 常用的方法.多用于肿瘤组织鉴别诊断中 区别肿瘤为肌源性或纤维源性. 区别肿瘤为肌源性或纤维源性.横纹肌肉 瘤的诊断常用磷钨酸苏木素法法显示横 纹肌的横纹. 纹肌的横纹. 1. 磷钨酸苏木素法(P.T.A.H)法 磷钨酸苏木素法(P.T.A.H)法 试剂配制: 试剂配制: ①磷钨酸苏木素液 苏木素 0.1 g 磷钨酸 2 g 蒸馏水 100ml
氢氧化银氨液浸染法 ① Gordon-sweets氏银氨液: Gordon-sweets氏银氨液: 用小量杯盛10%硝酸银水溶液2ml,逐滴 用小量杯盛10%硝酸银水溶液2ml,逐滴 加入氢氧化胺,边滴边摇动容器. 加入氢氧化胺,边滴边摇动容器.先出现 沉淀物, 沉淀物,继续滴入氢氧化胺至形成的沉 淀恰好溶解.加入3%氢氧化钠水溶液2ml, 淀恰好溶解.加入3%氢氧化钠水溶液2ml, 再次形成沉淀. 再次形成沉淀.继续滴入氢氧化胺至形成 的沉淀又恰好溶解.最后加蒸馏水至40ml, 的沉淀又恰好溶解.最后加蒸馏水至40ml, 配好后用棕色砂塞瓶装,放于冰箱内保存, 配好后用棕色砂塞瓶装,放于冰箱内保存, 用时恢复至室温. 用时恢复至室温.
②Van Gieson 氏染液 甲液: 1%酸性品红水溶液 甲液: 1%酸性品红水溶液 酸性品红 1 g 蒸馏水 100ml 乙液: 苦味酸饱和水溶液( 乙液: 苦味酸饱和水溶液(约1.2%) 甲乙两液分瓶盛放,临用时取甲液1 甲乙两液分瓶盛放,临用时取甲液1份,乙液 9份混合使用 ③ 1%盐酸酒精液 1%盐酸酒精液 70%酒精 70%酒精 99 ml 盐酸 1 ml
② 1%磷钼酸水溶液处理时可在镜下控制,见 1%磷钼酸水溶液处理时可在镜下控制, 肌纤维红色, 肌纤维红色,胶原纤维呈淡红色即可
附:
Bouin氏固定液 Bouin氏固定液 饱和苦味酸水溶液 75 ml 甲醛 25 ml 冰醋酸 5 ml Zenker氏液固定液 Zenker氏液固定液 升汞 5g 重铬酸钾 2.5g 冰醋酸 蒸馏水 5 ml 100 ml
1.Van Gieson 氏苦味酸-酸性品红染色法(V.G法) 氏苦味酸-酸性品红染色法(V.G法 试剂配制: 试剂配制: ① weigert氏铁苏木素液 weigert氏铁苏木素液 甲液: 甲液: 苏木素 1 g 无水酒精 100 ml 乙液: 30%三氯化铁 乙液: 30%三氯化铁 4 ml 蒸馏水 100 ml 盐酸 1 ml 甲乙两液分瓶盛放,临用时两液等量混合. 甲乙两液分瓶盛放,临用时两液等量混合.
⑦丽春红酸性品红染液染5-10分钟 丽春红酸性品红染液染5 10分钟 ⑧蒸馏水稍冲洗 ⑨ 1%磷钼酸水溶液 处理约5分钟 1%磷钼酸水溶液 处理约5 ⑩直接用苯胺蓝液或亮绿液染5 ⑩直接用苯胺蓝液或亮绿液染5分钟 ⑾1%冰醋酸处理1分钟 1%冰醋酸处理1 ⑿95%酒精脱水多次,吹干 95%酒精脱水多次, ⒀中性树胶 染色结果:胶原纤维呈蓝色或绿色, 染色结果:胶原纤维呈蓝色或绿色,肌纤维胞 质及红细胞红色,胞核蓝色. 质及红细胞红色,胞核蓝色.