热原检查法(精品课件)

热原的危害
热原反应：热原进入机体后的数分钟至1小时内,突然发冷、 寒战、面色苍白、四肢冰冷、烦躁不安等症状。持续时间约 0.5~1小时。寒战消失后,随即高热,但也有无寒战期而突然高 热者。病人体温迅速上升,在2~4小时体温上升至高峰,一般在 39~40℃,严重者高达41℃以上,病人面色潮红、头痛、恶心、 呕吐。严重者瞻妄、昏迷,甚至死亡。
第三节 热原检查法
热原的定义
热原（pyrogen）系指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。
它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化 学热原等。
这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的尸体 及其代谢产物。大多数微生物都能产生热原，致热能力最强的是 革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌 则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。它的化学结构 是脂多糖和微量蛋白的复合物
初试
1.试验前至少1小时停止给食并置于适宜的装置中，使其适应试验环境，饲 养温度与环境温度相差≤±3℃。
2.每隔30分钟测量体温1次，一般测量2次（英国药典测4次，但前2次舍 去），两次体温之差不得超过0.2℃,以此两次体温的平均值作为该兔的正常 体温。当日使用的家兔，正常体温应在38.0～39.6℃的范围内，且各兔间正 常体温之差不得超过1℃。两次体温的平均值作为兔的正常体温。 2、测定 其正常体温后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入规定剂量（10ml/kg）并温热 至约38℃的供试品溶液.
温升高总和低于1.3℃
1.3℃
三只动物体温升高均 低于0.5℃
三只动物出现体温升高数高于 0.5℃
体温升高≥0.6℃的动物数 量超过1只
—
英国药典
3只体温升高总和 ≤1.15℃
1.15℃ ＜3只体温升高总和≤2.65℃ 2.80℃ ＜ 6只体温升高总和≤4.30℃ 4.45℃ ＜ 9只体温升高总和≤5.95℃
美国药典
另取5只动物进行 合并初试、复试8只动物，体温升高超 合并初试、复试8只动物，体温升高
复试，试验方法初 过0.5℃的动物数≤3只，或者超过3只， 超过0.5℃的动物数＞3只，体温升高
英国药典
≥1.5kg
不限，雌兔 应无孕
20-23℃ 变化≤3℃
—
中国药典
时间
3-7天
给药
N
美国药典 7天内
N
测量次数
选择条件
8次 30min/次
8次体温均在38.0-39.6℃之间， 且最高与最低体温相差≤0.4℃，
个体间体温差≤1℃
8次 30min/次
体温不超过39.8℃，个体间体温 差≤1℃
英国药典
3只体温升高总和＞2.65℃
复试及结果判断:
•
实验步骤
合格
不合格
中国药典
另取5只动物进行 复试，试验方法同
初试
复试5只动物中体温升高≥0.6℃的动物 数不超过1只，合并初试三只动物，体
温升高总和≤3.5℃
复试5只动物中体温升高＞0.6℃的动 物超过1只；或合并初始、复试8只动
物体温升高总和＞3.5℃
热原与细菌内毒素的区别
热原物质包括了细菌内毒素，细菌内毒素是众多热原物质 中的一种，也是最主要的一种。
一般来说内毒素是热原,但热原不仅仅包括内毒素。不是每 一种热原都具有脂多糖的结构，但所有已知的细菌内毒素脂 多糖都有热原活性。在药品生产质量管理规范（GMP）条 件下，药品生产的质量控制一般可以接受的观点是：不存在 细菌内毒素意味着不存在热原。
热原检查法的定义
本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在 规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试 品中所含热原的限度是否符合规定
实验耗材去热原
试验用的注射器、针头及 一切和供试品溶液接触的耐高 温器皿,应置烘箱中用250℃加 热30分钟（英国药典200℃1h）
不耐高温器皿可置于30％ 双氧水中浸泡4h，再用细菌内 毒素检查用水充分冲洗，60℃ 烘干备用
热源的性质
热原除具有很强的致热性外，还具有下列性质： 耐热性：180℃2小时以上或250℃30min以上才能彻底破坏热原。因 此，玻璃制品如生产过程中所用的容器和注射时使用的注射器等，均可 用高温破坏热原。 水溶性：热原能溶于水，可用大量无热原注射用水冲洗以除去热原。 不挥发性：热原本身不挥发，但可随水蒸汽雾滴带入蒸馏水中，故用 蒸馏法制备注射用水时，蒸馏水器应有隔离装置。 滤过性：热原体积极小,直径1~50nm,可通过普通滤器进入滤液中。 不耐强酸、强碱、强氧化剂：热原能被盐酸、硫酸、氢氧化钠、高锰 酸钾、重铬酸钾等所破坏。
3.每隔30min按前法测量其体温1次,共测6次。
4.以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高度数，当动 物升温为负值时，以0℃计算。
初试结果判断:
合格
复试
不合格
中国药典 美国药典
三只动物体温升高均低 三只动物出现体温升高高于0.6 ℃ ，
于0.6℃，且三只动物体 或者三只动物体温升高总和高于
实验动物的选择
—
体重
性别
条件
饲养温度 试验温度
中国药典 美国药典
＞1.7kg ≥2.0kg
不限，雌兔 应无孕
使用7天预养期未见异常的未试动 物，或已试的符合热原规定的动 物。
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17-25℃
不限，雌兔 不使用3天内已试动物，不使用热 20-23℃ 应无孕 原试验不合格的动物。
变化≤3℃
选定温度 ±3℃
1-3天
10ml/kg生 理盐水
（38.5℃）
10次
30min/次，舍 去前2次
体温在38.0-39.8℃之间，个体 间体温差≤1℃
注意事项
1. 抓取兔子的正确方法：一手抓持兔颈背部皮毛，一手托起兔臀部。 2. 在热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室
和饲养室的温度相差不得大于3℃，在试验全部过程中，应注意室温变化不得 大于3℃。 3. 应避免噪音干扰。 4. 整个试验操作过程应尽量轻柔，避免激惹动物，造成体温大幅波动，影响结 果。 5. 家兔在试验前至少1小时停止给食并置于适宜的装置中,直至试验完毕。 6. 读取体温：一手拿住体温计尾部，使眼与体温计保持同一水平，然后慢慢地 转动体温计 ，从正面看到水银柱时就可读出相应的温度值 ，切记不可用手 碰触水银球端 7. 静脉给药前需将供试品温热至38℃（美国药典37±2℃，英国药典38.5℃）， 注射要缓慢。