高效液相-审计追踪检查ppt参考课件
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高效液相色谱仪ppt课件
8
高压泵应具有以下性能
流量稳定，精度在1%左右 输出压力高，通常20~30MPa，最高50 MPa 流量范围宽，一般在0.01~10mL/min范围内 能抗溶剂腐蚀 压力波动小、更换溶剂方便、容易清洗、具梯度洗脱 操作方便、容易维修
9
根据泵的操作原理不同，分为恒压泵和恒流泵
进样装置 （正面）
进样装置 （背面）
11
图中a为进样阀处于“装样load”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱，
样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品 注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样inject”位时，进样阀的 流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。
的出峰顺序相反。
30
2. 流动相类别
按流动相组成成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 正己烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、 甲 醇、异丙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
氰基(CN)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基 团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即 极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱；正相色谱使用的流动相极性相 对比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。
反相柱：固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的
键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲 醇，乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被 冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填 料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
高压泵应具有以下性能
流量稳定，精度在1%左右 输出压力高，通常20~30MPa，最高50 MPa 流量范围宽，一般在0.01~10mL/min范围内 能抗溶剂腐蚀 压力波动小、更换溶剂方便、容易清洗、具梯度洗脱 操作方便、容易维修
9
根据泵的操作原理不同，分为恒压泵和恒流泵
进样装置 （正面）
进样装置 （背面）
11
图中a为进样阀处于“装样load”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱，
样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品 注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样inject”位时，进样阀的 流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。
的出峰顺序相反。
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2. 流动相类别
按流动相组成成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 正己烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、 甲 醇、异丙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
氰基(CN)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基 团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即 极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱；正相色谱使用的流动相极性相 对比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。
反相柱：固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的
键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲 醇，乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被 冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填 料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
高效液相色谱法 PPT课件
①固定相：非极性键合相 如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（C8）
键合硅胶 ②流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极 性调整剂
常用甲醇－水、乙腈－水等 应用：最广。非极性至中等极性的组分，（还有 有机酸、碱及盐等极性组分）
1. 保留机制:
疏溶剂理论 （solvophobic theory）
（二）紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理： 朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号 （吸光度）与浓度成正比A=εCl
2.特点： 灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性 范围宽，稳定性好，适于梯度洗脱，不破坏样品， 应用广（分析、制备）。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样 气相流动相 液相流动相 气相柱温 液相柱温
气体、 容易转
气体、 常用氢气 液体、 、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节 高效液相色谱法的主 要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法 分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC）
（二）流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性（强度） 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故 选择性不同
混合溶剂（二元或多元流动相）
以反相色谱流动相的选择为例：
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈
键合硅胶 ②流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极 性调整剂
常用甲醇－水、乙腈－水等 应用：最广。非极性至中等极性的组分，（还有 有机酸、碱及盐等极性组分）
1. 保留机制:
疏溶剂理论 （solvophobic theory）
（二）紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理： 朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号 （吸光度）与浓度成正比A=εCl
2.特点： 灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性 范围宽，稳定性好，适于梯度洗脱，不破坏样品， 应用广（分析、制备）。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样 气相流动相 液相流动相 气相柱温 液相柱温
气体、 容易转
气体、 常用氢气 液体、 、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节 高效液相色谱法的主 要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法 分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC）
（二）流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性（强度） 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故 选择性不同
混合溶剂（二元或多元流动相）
以反相色谱流动相的选择为例：
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈
高效液相-审计追踪检查
28
三、红外分光光度计审计追踪功能
（五）、图谱查看
1 1、在“仪器”选择仪器， 打开，再点击“再解 析”，出现如下界面。
2
3
29
三、红外分光光度计审计追踪功能
（五）、图谱查看 2、选择图谱，打开查看具体信息。
30
结束语
软件所具有的审计追踪功能可以帮助用户更好、更方便地满足 法规的要求，也能够帮助管理者发现实验室的问题。重要的是， 作为检验员，需要真实、完整的记录实验过程。
9
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（三）、用户权限分配
1、在“开始”菜单中选择 “控制面板/所有控制面板项 /管理工具/本地安全策略”， 出现如右对话框：
10
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（三）、用户权限分配
2、选择“本地策略/用 户权限分配”，即可对 用户的权限进行分配。
5、选择“应用程序和服务日 志/ Microsoft/Windows”。
8
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（二）、事件查看器的检查 7 6、选择“Date Time Control Panel/ operational”。 7、查看信息，如：图例中显 示将时间修改为：2017-9-23 8：49：51。 6
仪器审计追踪
CONTENTS
目录
01 02 03
Windows7系统的审计追踪
安捷伦液相色谱系统审计追踪
红外分光光度计审计追踪
2
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（一）、查看时间修改功能是否锁定
1、 单击电脑桌面右下角时间日期，
弹出如左对话框
2、单击“更改日期和时间设置”， 弹出如下图对话框 2、
高效液相色谱 PPT
(2)≡Si－C或Si一N共价键合固定相
制备反应如下
+ Si OH
SO Cl 2
HgBr
Si
Si Cl
NH 2 CH 2 NCH 2 H2
Si NH
CH 2 CHNH 2
共价键健合固定相不易水解,并且热稳定较硅酸 酯好。缺点就是格氏反应不方便;当使用水溶液时,必须 限制PH在4～8范围内。
(3)硅烷化(≡Si—O－Si－C)键合固定相 制备反应如下:
第3节 高效液相色谱得固定相和流动相
(－)固定相
高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类, 可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化硅 为基质,可承受高压,可制成直径、形状、孔隙度不同 得颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官能团,就就 是键合固定相,可扩大应用范围,她就是目前最广泛使 用得一种固定相。硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻 色谱中,她由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。固定 相按孔隙深度分类,可分为表面多孔型和全多孔型固 定相两类。
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交
12
3 分离系统——色谱柱
色谱柱就是液相色谱得心脏部件,她包括柱管 与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜 及内衬光滑得聚合材料得其她金属。玻璃管耐压有限, 故金属管用得较多。一般色谱柱长5～30cm,内径为 4～5mm,凝胶色谱柱内径3～12mm,制备往内径较大,可 达25mm 以上。
(三)液一固吸附色谱法(LSAC)
液一固吸附色谱就是以固体吸附剂作为固定 相,吸附剂通常就是些多孔得固体颗粒物质,在她们 得表面存在吸附中心。液固色谱实质就是根据物 质在固定相上得吸附作用不同来进行分离得。
1、分离原理
当流动相通过固定相(吸附剂)时,吸附剂表面得活性中 心就要吸附流动相分子。同时,当试样分子(X)被流动相带 入柱内,只要她们在固定相有一定程度得保留就要取代数目 相当得已被吸附得流动相溶剂分用)于就是,在固定相表面 发生竞争吸附:
制备反应如下
+ Si OH
SO Cl 2
HgBr
Si
Si Cl
NH 2 CH 2 NCH 2 H2
Si NH
CH 2 CHNH 2
共价键健合固定相不易水解,并且热稳定较硅酸 酯好。缺点就是格氏反应不方便;当使用水溶液时,必须 限制PH在4～8范围内。
(3)硅烷化(≡Si—O－Si－C)键合固定相 制备反应如下:
第3节 高效液相色谱得固定相和流动相
(－)固定相
高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类, 可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化硅 为基质,可承受高压,可制成直径、形状、孔隙度不同 得颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官能团,就就 是键合固定相,可扩大应用范围,她就是目前最广泛使 用得一种固定相。硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻 色谱中,她由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。固定 相按孔隙深度分类,可分为表面多孔型和全多孔型固 定相两类。
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交
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3 分离系统——色谱柱
色谱柱就是液相色谱得心脏部件,她包括柱管 与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜 及内衬光滑得聚合材料得其她金属。玻璃管耐压有限, 故金属管用得较多。一般色谱柱长5～30cm,内径为 4～5mm,凝胶色谱柱内径3～12mm,制备往内径较大,可 达25mm 以上。
(三)液一固吸附色谱法(LSAC)
液一固吸附色谱就是以固体吸附剂作为固定 相,吸附剂通常就是些多孔得固体颗粒物质,在她们 得表面存在吸附中心。液固色谱实质就是根据物 质在固定相上得吸附作用不同来进行分离得。
1、分离原理
当流动相通过固定相(吸附剂)时,吸附剂表面得活性中 心就要吸附流动相分子。同时,当试样分子(X)被流动相带 入柱内,只要她们在固定相有一定程度得保留就要取代数目 相当得已被吸附得流动相溶剂分用)于就是,在固定相表面 发生竞争吸附:
高效液相色谱分析ppt课件
• 分离极性物质，选用极性固定液，各组分按极性顺序分 离，极性小的先流出色谱柱，极性大的后流出色谱柱。
• 分离非极性和极性混合物时，一般选用极性固定液，这 时非极性组分先出峰。
• 对于形成氢键的试样，如醇、酚、胺和水等，一般选用 极性或氢键型固定液，各组分按与固定液分子间形成氢 键能力大小先后出峰。
用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见； 现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料；
（2）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体） 30～40μm的玻璃微球，
表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。
表面积小，柱容量底；
2019/10/28
（3）化学键合固定相
化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C
速率理论(与GC对比)
• GC: HAB/uCu(填充)柱 HAB/uCu (毛细管) 柱
A2dp Adp B2Dm2Dg BtR, BDg
DgT或Dg T
η
M
CCmCs Cg Cl Cl
df2
T
Cl Dl
DL
• HPLC: HACu
3、离子色谱装置类型 suppressed apparatus of IC
抑制型：抑制柱型、连续抑制型 分离柱中离子交换树脂的交换容量通常在0.01～0.05
毫摩尔/克干树脂。 非抑制型: 当进一步降低分离柱中树脂的交换容量(0.007～ 0.07毫摩尔/克干树脂),使用低浓度、低电离度的有机弱酸 及弱酸盐作淋洗液，如苯甲酸、苯甲酸盐等。检测器可直接 与分离柱相连，不需抑制柱。
全部在死体积前出峰； 可对相对分子质量在100105范围内的化合物按质量分离
• 分离非极性和极性混合物时，一般选用极性固定液，这 时非极性组分先出峰。
• 对于形成氢键的试样，如醇、酚、胺和水等，一般选用 极性或氢键型固定液，各组分按与固定液分子间形成氢 键能力大小先后出峰。
用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见； 现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料；
（2）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体） 30～40μm的玻璃微球，
表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。
表面积小，柱容量底；
2019/10/28
（3）化学键合固定相
化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C
速率理论(与GC对比)
• GC: HAB/uCu(填充)柱 HAB/uCu (毛细管) 柱
A2dp Adp B2Dm2Dg BtR, BDg
DgT或Dg T
η
M
CCmCs Cg Cl Cl
df2
T
Cl Dl
DL
• HPLC: HACu
3、离子色谱装置类型 suppressed apparatus of IC
抑制型：抑制柱型、连续抑制型 分离柱中离子交换树脂的交换容量通常在0.01～0.05
毫摩尔/克干树脂。 非抑制型: 当进一步降低分离柱中树脂的交换容量(0.007～ 0.07毫摩尔/克干树脂),使用低浓度、低电离度的有机弱酸 及弱酸盐作淋洗液，如苯甲酸、苯甲酸盐等。检测器可直接 与分离柱相连，不需抑制柱。
全部在死体积前出峰； 可对相对分子质量在100105范围内的化合物按质量分离
《高效液相》课件
蛋白质分离与纯化
蛋白质分离
高效液相色谱技术可以用于蛋白质的分离和纯化，通过不 同的分离模式和固定相选择，实现对蛋白质的快速分离和 纯化。
蛋白质性质分析
通过高效液相色谱技术可以对蛋白质的性质进行分析，如 蛋白质的分子量、等电点等，为蛋白质的结构和功能研究 提供有力支持。
蛋白质相互作用研究
高效液相色谱技术可以用于研究蛋白质之间的相互作用， 如蛋白质与配体、抑制剂等之间的相互作用，有助于深入 了解蛋白质的功能和作用机制。
原理
利用不同物质在固定相和流动相之间 的分配系数差异进行分离，通过检测 器进行检测，收集各个组分，达到分 析样品组分的目的。
发展历程
01
02
03
04
起源
20世纪初，俄国植物学家茨 维特发明了色谱法。
1940年代
气相色谱法（GC）出现，并 逐渐发展成熟。
1960年代
高效液相色谱法（HPLC）开 始发展，并逐渐取代气相色谱
02
高效液相色谱仪
仪器组成
进样器
将样品注入色谱柱，是 色谱仪的重要部件之一
。
色谱柱
用于分离样品中的各组 分，由固定相和流动相
组成。
检测器
检测色谱柱流出的组分 ，并将其转换为电信号
。
数据处理系统
用于采集、处理和显示 检测器输出的信号。
重要部件介绍
01
02
03
色谱柱填料
常用的填料有硅胶、氧化 铝、活性炭等，根据不同 分离需求选择合适的填料 。
《高效液相》ppt课件
目录
• 高效液相色谱法简介 • 高效液相色谱仪 • 高效液相色谱分离技术 • 高效液相色谱在生物医药领域的应用 • 高效液相色谱实验技术 • 高效液相色谱技术前沿与展望
高效液相色谱法(HPLC) ppt课件
此法在杂环类药物的鉴别实验中有广泛应用。
ppt课件
32
流动相选择该注意的几点问题
1、尽量使用高纯度试剂做流动相，防止微 量杂质长期积聚而损坏色谱柱；
2、避免流动相与固定相发生相互作用而使 柱效下降或损坏柱子；
3、试样在流动相中应有适宜的溶解度，防 止产生沉淀并在柱中沉积；
4、流动相同时还应满足检测器的需求。
高效液相色谱法 （HPLC）
ppt课件
1
色谱法定义
• 色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分 离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测 手段，就成为色谱分析法。
• 色谱法中，流动相可以是气体，也可以是液体， 由此可分为气相色谱法（GC）和液相色谱法 （LC）。固定相既可以是固体，也可以是涂在 固体上的液体，由此又可将气相色谱法和液相 色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、 液-液色谱。
阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；
流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液 ；
阳离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；
应用：离子及可离解的化合物、氨基酸、核酸等。
而ＨＰＬＣ改变的是流动相极性，使样品各组分
在最佳条件下得以分离。
ppt课件
10
四、液相色谱分析法的原理
• （二）高效液相色谱的分离过程 •
• 同其他色谱过程一样，ＨＰＬＣ也是溶质在固 定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。 它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或 分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶 质得以分离。
ppt课件
32
流动相选择该注意的几点问题
1、尽量使用高纯度试剂做流动相，防止微 量杂质长期积聚而损坏色谱柱；
2、避免流动相与固定相发生相互作用而使 柱效下降或损坏柱子；
3、试样在流动相中应有适宜的溶解度，防 止产生沉淀并在柱中沉积；
4、流动相同时还应满足检测器的需求。
高效液相色谱法 （HPLC）
ppt课件
1
色谱法定义
• 色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分 离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测 手段，就成为色谱分析法。
• 色谱法中，流动相可以是气体，也可以是液体， 由此可分为气相色谱法（GC）和液相色谱法 （LC）。固定相既可以是固体，也可以是涂在 固体上的液体，由此又可将气相色谱法和液相 色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、 液-液色谱。
阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；
流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液 ；
阳离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；
应用：离子及可离解的化合物、氨基酸、核酸等。
而ＨＰＬＣ改变的是流动相极性，使样品各组分
在最佳条件下得以分离。
ppt课件
10
四、液相色谱分析法的原理
• （二）高效液相色谱的分离过程 •
• 同其他色谱过程一样，ＨＰＬＣ也是溶质在固 定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。 它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或 分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶 质得以分离。
7高效液相色谱法 ppt课件
1. 在食品分析中的应用
• 1)食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类 等；
• 2)食品添加剂分析：防腐剂、着色剂等； • 3)食品污染物分析：霉菌毒素等。
2. 在环境分析中的应用
• 多环芳烃（特别是稠环芳烃）、农药残留等。
2021/2/20
五、高效液相色谱法的应用
3. 在生命科学中的应用
• 1) 低分子量物质，如氨基酸、糖类、维生素等 的分离和测定。
2021/2/20
(2) 梯度淋洗装置
外梯度: 利用两台高压输液泵，
将两种不同极性的溶剂按一 定的比例送入梯度混合室， 混合后进入色谱柱。
内梯度: 一台高压泵, 通过比例
调节阀,将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽 入高压泵中混合。
2021/2/20
(3) 进样装置
流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六 通阀进样装置，也可配备自动进样装置。
可分离分析：核苷酸、碳水化合物、有机酸、蛋白 质、酶等
4. 凝胶色谱（空间排阻色谱）
按分子尺寸的差异进行分离的一种液相色谱方法。以 凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状 结构和不同孔径的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂 糖等软质凝胶；多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶。
2021/2/20
五、高效液相色谱法的应用
其结构如图所示：
2021/2/20
(4) 高效分离系统
色谱分离系统包括色谱柱、固定相和流动相。色谱 柱是其核心部分，柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
2021/2/20
(5) 高效液相色谱检测器
紫外光度检测器（UVD）：最小检测量10-9g·mL-1， 对流量和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱。
• 1)食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类 等；
• 2)食品添加剂分析：防腐剂、着色剂等； • 3)食品污染物分析：霉菌毒素等。
2. 在环境分析中的应用
• 多环芳烃（特别是稠环芳烃）、农药残留等。
2021/2/20
五、高效液相色谱法的应用
3. 在生命科学中的应用
• 1) 低分子量物质，如氨基酸、糖类、维生素等 的分离和测定。
2021/2/20
(2) 梯度淋洗装置
外梯度: 利用两台高压输液泵，
将两种不同极性的溶剂按一 定的比例送入梯度混合室， 混合后进入色谱柱。
内梯度: 一台高压泵, 通过比例
调节阀,将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽 入高压泵中混合。
2021/2/20
(3) 进样装置
流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六 通阀进样装置，也可配备自动进样装置。
可分离分析：核苷酸、碳水化合物、有机酸、蛋白 质、酶等
4. 凝胶色谱（空间排阻色谱）
按分子尺寸的差异进行分离的一种液相色谱方法。以 凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状 结构和不同孔径的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂 糖等软质凝胶；多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶。
2021/2/20
五、高效液相色谱法的应用
其结构如图所示：
2021/2/20
(4) 高效分离系统
色谱分离系统包括色谱柱、固定相和流动相。色谱 柱是其核心部分，柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
2021/2/20
(5) 高效液相色谱检测器
紫外光度检测器（UVD）：最小检测量10-9g·mL-1， 对流量和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱。
高效液相色谱法培训PPT课件
注意事项与常见问题解答
样品处理注意事项
01
避免样品污染、损失或变质，确保处理过程的准确性和可重复
性。
常见问题及解决方法
02
针对样品处理过程中可能出现的问题，如回收率低、干扰物质
多等，提供相应的解决方法。
安全与防护
03
注意有毒有害试剂的使用安全，做好个人防护和环境保护工作。
04 方法开发与优化策略
梯度洗脱程序设计思路
初始比例确定
根据待测组分的极性差异，选 择合适的初始流动相比例。
梯度斜率设置
根据组分的分离情况，调整梯 度斜率，使各组分在合适的保 留时间内洗脱出来。
梯度时间设置
确保梯度洗脱过程中，各组分 能够充分分离，同时避免过长 的分析时间。
梯度曲线类型
根据实际需求选择合适的梯度 曲线类型，如线性梯度、凹形
梯度或凸形梯度等。
方法验证内容及标准
精密度
准确度
通过添加回收率试验，验证方法 的准确度，确保测定结果可靠。
考察方法的重复性和中间精密度， 确保测定结果的稳定性。
线性范围
确定方法的线性范围，确保待测 组分浓度在该范围内时，测定结 果准确可靠。
专属性
考察方法对待测组分的选择性， 确保其他共存物质不干扰测定。
长期稳定性
考察样品在规定的储存条件下放置一定时间后的稳定性，以确定 样品的保质期和储存条件。
方法学考察
对分析方法本身进行稳定性考察，包括方法的耐用性、重复性和 中间精密度等指标的评估。
质量控制图绘制和应用
质量控制图绘制
根据长期稳定性考察数据，绘制质量控 制图，包括平均值、标准差和控制限等 指标。
VS
发展历程及应用领域
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（三）、查看当前工作日志
2、查看工作能
（四）、查看方法审计跟踪（方法一）
1、选择“方法/方法审计跟踪”。
17
二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（四）、查看方法审计跟踪（方法一）
2、出现如下“方法审计跟踪”对话框后，
3
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（一）、查看时间修改功能是否锁定
3、 单击“更改日期和时间”，查
看是否能进行修改 3、
4、单击“更改时区”，查看是否
4、
能进行修改
4
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（二）、事件查看器的检查
1、右键单击桌面“计算机” 图标 2、单击“管理”，出现如 下对话框
11
二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（一）、登录 每次开启 Chemstation 都需要登入 保护所有 Chemstation 数据、方法等内容，
禁止非授权人员使用 启动安全登入功能后，非授权人员无法使用
Chemstation
12
二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（一）、登录
点击“帮 助”、“关 于”，查看 系统版本号
查看时间顺序，方法创建、复制等信息。
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（四）、查看方法审计跟踪（方法二）
在（脱机）数 据分析下，选 中某一项目， 单击右键，选 择“当前数据 文件工作日 志”，查看 。
19
二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（五）、查看序列审计跟踪
在“数据”文件 夹下，选择某一 文件夹，打开 “***.LOG”， 查看文件夹名称 和文件名称应该 一致。打开记事 本，查看时间顺 序。
9
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（三）、用户权限分配
1、在“开始”菜单中选择 “控制面板/所有控制面板项 /管理工具/本地安全策略”， 出现如右对话框：
10
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（三）、用户权限分配 2、选择“本地策略/用 户权限分配”，即可对 用户的权限进行分配。
28
三、红外分光光度计审计追踪功能
（五）、图谱查看
1
1、在“仪器”选择仪器， 打开，再点击“再解 析”，出现如下界面。
2 3
29
三、红外分光光度计审计追踪功能
（五）、图谱查看 2、选择图谱，打开查看具体信息。
30
结束语
软件所具有的审计追踪功能可以帮助用户更好、更方便地满足 法规的要求，也能够帮助管理者发现实验室的问题。重要的是， 作为检验员，需要真实、完整的记录实验过程。
（三）、日志浏览器查看 1、在“管理工具” 中选择“日志浏 览器”，如下图。
26
三、红外分光光度计审计追踪功能
（三）、日志浏览器查看 2、可进行筛选查看具体日志信息。
27
三、红外分光光度计审计追踪功能
（四）、安全策略查看
在“管理工具”中选择“安 全策略”、“帐户”，可对 账户进行安全策略设置或查 看。
5
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（二）、事件查看器的检查 3、单击“事件查看器”
6
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（二）、事件查看器的检查 4、选择“Windows日志”。
查看其项下“应用程序”、“安全”、 “系统”等 。
7
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
仪器审计追踪
1
CONTENTS
目录
01 Windows7系统的审计追踪 02 安捷伦液相色谱系统审计追踪 03 红外分光光度计审计追踪
2
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（一）、查看时间修改功能是否锁定
1、 单击电脑桌面右下角时间日期， 弹出如左对话框 2、单击“更改日期和时间设置”， 弹出如下图对话框 2、 1、
23
三、红外分光光度计审计追踪功能
（一）、登录 双击桌面图标，填写用户ID，
密码，登录。
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三、红外分光光度计审计追踪功能
（二）、查看版本信息
1 1、选择“仪器”。 2、单击图标。 3、查看版本信息。 注：本资料中的红外 分光光度计均以该版 本截图（遮挡部分信 息）。
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三、红外分光光度计审计追踪功能
（二）、事件查看器的检查 5、选择“应用程序和服务日 志/ Microsoft/Windows”。
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一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（二）、事件查看器的检查 7
6、选择“Date Time Control Panel/ operational”。
6 7、查看信息，如：图例中显 示将时间修改为：2017-9-23 8：49：51。
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（六）、查看数据审计跟踪
1、根据用户的 储存位置，找到 “数据”文件夹。
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（六） 、查看数据审计跟踪
2、在“数据” 文件夹下找到 “RUNLOG” 。
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（六） 、查看数据审计跟踪
3、打开。查看 时间顺序，查看序 列号。
*本资料中的
液相图片均以 该版本为例
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（二）、查看系统日志
系统活动日志记录 了账户创建、登入 等账户管理信息， 也记录了仪器创建、 配置和修改等信息。
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（三）、查看当前工作日志
1、联机状态下， 选择“视图/工作日志 /当前工作日志”，打 开，如下图所示：
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（三）、查看当前工作日志
2、查看工作能
（四）、查看方法审计跟踪（方法一）
1、选择“方法/方法审计跟踪”。
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（四）、查看方法审计跟踪（方法一）
2、出现如下“方法审计跟踪”对话框后，
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一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（一）、查看时间修改功能是否锁定
3、 单击“更改日期和时间”，查
看是否能进行修改 3、
4、单击“更改时区”，查看是否
4、
能进行修改
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一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（二）、事件查看器的检查
1、右键单击桌面“计算机” 图标 2、单击“管理”，出现如 下对话框
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（一）、登录 每次开启 Chemstation 都需要登入 保护所有 Chemstation 数据、方法等内容，
禁止非授权人员使用 启动安全登入功能后，非授权人员无法使用
Chemstation
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（一）、登录
点击“帮 助”、“关 于”，查看 系统版本号
查看时间顺序，方法创建、复制等信息。
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（四）、查看方法审计跟踪（方法二）
在（脱机）数 据分析下，选 中某一项目， 单击右键，选 择“当前数据 文件工作日 志”，查看 。
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（五）、查看序列审计跟踪
在“数据”文件 夹下，选择某一 文件夹，打开 “***.LOG”， 查看文件夹名称 和文件名称应该 一致。打开记事 本，查看时间顺 序。
9
一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（三）、用户权限分配
1、在“开始”菜单中选择 “控制面板/所有控制面板项 /管理工具/本地安全策略”， 出现如右对话框：
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一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（三）、用户权限分配 2、选择“本地策略/用 户权限分配”，即可对 用户的权限进行分配。
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三、红外分光光度计审计追踪功能
（五）、图谱查看
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1、在“仪器”选择仪器， 打开，再点击“再解 析”，出现如下界面。
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三、红外分光光度计审计追踪功能
（五）、图谱查看 2、选择图谱，打开查看具体信息。
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结束语
软件所具有的审计追踪功能可以帮助用户更好、更方便地满足 法规的要求，也能够帮助管理者发现实验室的问题。重要的是， 作为检验员，需要真实、完整的记录实验过程。
（三）、日志浏览器查看 1、在“管理工具” 中选择“日志浏 览器”，如下图。
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三、红外分光光度计审计追踪功能
（三）、日志浏览器查看 2、可进行筛选查看具体日志信息。
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三、红外分光光度计审计追踪功能
（四）、安全策略查看
在“管理工具”中选择“安 全策略”、“帐户”，可对 账户进行安全策略设置或查 看。
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一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（二）、事件查看器的检查 3、单击“事件查看器”
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一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（二）、事件查看器的检查 4、选择“Windows日志”。
查看其项下“应用程序”、“安全”、 “系统”等 。
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一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
仪器审计追踪
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CONTENTS
目录
01 Windows7系统的审计追踪 02 安捷伦液相色谱系统审计追踪 03 红外分光光度计审计追踪
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一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（一）、查看时间修改功能是否锁定
1、 单击电脑桌面右下角时间日期， 弹出如左对话框 2、单击“更改日期和时间设置”， 弹出如下图对话框 2、 1、
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三、红外分光光度计审计追踪功能
（一）、登录 双击桌面图标，填写用户ID，
密码，登录。
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三、红外分光光度计审计追踪功能
（二）、查看版本信息
1 1、选择“仪器”。 2、单击图标。 3、查看版本信息。 注：本资料中的红外 分光光度计均以该版 本截图（遮挡部分信 息）。
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三、红外分光光度计审计追踪功能
（二）、事件查看器的检查 5、选择“应用程序和服务日 志/ Microsoft/Windows”。
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一、计算机Windows7系统的审计追踪功能
（二）、事件查看器的检查 7
6、选择“Date Time Control Panel/ operational”。
6 7、查看信息，如：图例中显 示将时间修改为：2017-9-23 8：49：51。
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（六）、查看数据审计跟踪
1、根据用户的 储存位置，找到 “数据”文件夹。
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二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（六） 、查看数据审计跟踪
2、在“数据” 文件夹下找到 “RUNLOG” 。
22
二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（六） 、查看数据审计跟踪
3、打开。查看 时间顺序，查看序 列号。
*本资料中的
液相图片均以 该版本为例
13
二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（二）、查看系统日志
系统活动日志记录 了账户创建、登入 等账户管理信息， 也记录了仪器创建、 配置和修改等信息。
14
二、安捷伦液相色谱系统审计追踪功能
（三）、查看当前工作日志
1、联机状态下， 选择“视图/工作日志 /当前工作日志”，打 开，如下图所示：