线性评价及方法可报告范围的确定张传宝
自动生化分析仪的使用、校准和维护
自动生化分析仪的使用、校准和维护卫生部检验中心张传宝第一节概述临床实验室检验操作经历了手工操作、半自动分析和自动分析过程。
目前，自动生化分析仪以高新技术为基础，以高准确性、精密度、灵活性和高效率为特点，在现代临床实验室中承担大部分的常规工作，成为实验室特别是大、中型实验室必备的检验仪器。
一自动生化分析仪的基本结构及工作原理按照反映装臵的结构，自动生化分析仪主要分为流动式、分立式、袋式及干化学自动生化分析仪。
其中，分立式自动生化分析仪应用最广，参加卫生部临床检验中心全国临床化学室间质量评价的实验室，绝大多数都使用该类自动生化分析仪。
干化学自动生化分析仪由于其方便快捷的优点，目前多用于急诊生化项目的检测。
二典型分立式自动生化分析仪的基本结构（一）样品系统样本包括校准品、质控品和病人样品。
系统一般由样品装载、输送和分配等装臵组成。
样品装载和输送的常见类型有：1 品盘式进样样品放臵在圆形的样本盘中，样本盘为单圈或者多圈，在运行中与分配机械臂配合转动，完成样本分配。
样本盘可以是整体，如日立7170型自动生化分析仪的样本盘。
有的采用更换式样品盘，分工作和待命区，其中放臵多个弧形样本架座转载台，仪器在测定中自动纺织更换，如贝克曼CX9型自动生化分析仪。
有的样品盘与试剂转盘甚至反应转盘相套和，部分小型自动生化分析仪采用该模式。
2传动带式或轨道式进样样本架为单排，通常每个可以容纳10个样品。
通过传送带，将样本架依次送到取样位臵，再由样品分配臂采样。
如奥林帕斯Au 640型自动生化分析仪。
3链式进样试管固定排列在循环的传动链上，水平转动到采样位臵，有的仪器可随后清洗试管。
目前多数仪器对质控品和校准品设臵了独立冷藏舱，有助于保持它们的稳定。
分配加样装臵大都由注射器、步进马达或者传动泵、加样臂和样品探针等组成。
一般加样系统能准确到0.1ul的体积。
（二）试剂系统一般由试剂储放和分配加液装臵组成。
试剂舱常与试剂转盘结合在一起。
线性范围评估的指南
5
低浓度血清(ml) 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00
高浓度血清(ml) 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00
线性范围的评估及数据处理方法
实验样本的制备方法
样本的特殊处理：在无法得到适用的人血清时，需对 样本进行一些特殊处理以满足实验要求。这些处理过 程包括稀释、加入添加物或透析、热处理等，无论进 行何种处理均应以保持基质恒定为基本原则。在评价 报告中应对所使用的稀释液、添加物、溶剂等的材料 来源加以注明。
线性范围评估指南
郑金来 zhengjinlai@
前言
线性范围评估资料是评价拟上市产品有效
性的重要依据，也是产品注册所需的重要 申报资料之一
依据国家食品药品监督管理局《体外诊断
试剂注册管理办法（试行）》、《中华人 民共和国卫生行业标准---定量测定方法的 线性评价》的有关要求，参考CLSI有关标 准
建立一种定量测定方法的线性范围时，需在预期测定 范围内选择7-11个浓度水平。如将预期测定范围加宽至 130%，在此范围内选择更多的浓度水平，然后依据实 验结果逐渐减少数据点直至表现出线性关系，可发现 最宽的线性范围。
线性范围的评估及数据处理方法
实验样本的基本要求
对标称线参数进行验证时，需在已知线性范 围内选择5-7个浓度水平。
无论是建立或验证线性范围，所选用的浓度水 平应可覆盖整个预期测定范围并包括与临床有 关的重要评价浓度，如最小测定浓度或线性范 围的最低限、不同的医学决定水平、最大测定 浓度或线性范围的高限等。
线性范围的评估及数据处理方法
实验样本的制备方法
不同浓度水平的样本可通过将高浓度样本与低浓度样 本进行倍比稀释得到，注意在进行液体吸取时应选择 精密度与准确性好的移液装置。制备时应将样本完全 混合并避免蒸发或其他使样本变质的情况。每份样本 的浓度与体积单位应统一。
线性评价及方法可报告范围的确定
线性评价及方法可报告范围的确定目录一、内容概括 (2)1. 背景与意义 (2)2. 文献综述 (4)3. 研究目的与问题 (5)二、线性评价的基本概念 (6)1. 线性评价的定义 (7)2. 线性评价的特点 (8)3. 线性评价的常用方法 (9)三、方法可报告范围的概念与重要性 (10)1. 方法可报告范围的定义 (11)2. 方法可报告范围的重要性 (11)3. 确定方法可报告范围的意义 (12)四、线性评价方法的可报告范围确定方法 (13)1. 确定方法可报告范围的原则 (14)1.1 以研究目的和问题为导向 (15)1.2 充分考虑方法的适用性和可行性 (17)1.3 结合实际情况进行灵活调整 (18)2. 确定方法可报告范围的具体步骤 (19)2.1 明确研究目标和内容 (20)2.2 分析方法的技术路线和方法流程 (21)2.3 确定方法的可报告范围和数据收集方式 (22)2.4 制定详细的方法实施计划 (23)五、案例分析 (24)1. 案例背景介绍 (25)2. 线性评价方法的选择与实施 (26)3. 方法可报告范围的确定过程 (28)4. 案例分析与讨论 (30)六、结论与展望 (31)1. 研究结论总结 (31)2. 研究不足与局限性分析 (32)3. 对未来研究的展望和建议 (33)一、内容概括本文档旨在明确线性评价及方法的可报告范围，确保评价过程和结果的准确性和可靠性。
我们将阐述线性评价的基本概念和重要性，明确其适用范围和目的。
结合具体项目需求和实际情况，详细讨论评价指标的选择、权重的确定以及数据的收集与处理等关键环节。
在此基础上，我们还将探讨评价方法的可行性和有效性，并根据评估结果提出相应的改进建议。
为了实现这一目标，我们将采用定性与定量相结合的研究方法，充分利用现有数据和研究成果，确保评价结果的科学性和客观性。
我们也将关注评价过程中可能出现的问题和挑战，及时调整和优化方案，以确保项目的顺利实施和目标的达成。
线性评价及方法可报告范围的确定 张传宝
Xx.xxx 理论浓度-试剂浓度的线性
在制造商给定的线性范围内（10-1000mmol/L) 范围内，相关系数>0.9975.
C．绘制【 (0%，混合物1均值), (25%，混合物2均 值), (50%，混合物3均值), (75%，混合物4均 值), (100%，混合物5均值)】坐标。
D．画出通过数据点的最佳直线给出头3个坐标更多权 重。
E．检查线性图，直观地作出可报告范围的决定。
混合物 混合物1: 0 混合物2: 25% 混合物3: 50% 混合物4: 75% 混合物5: 100%
临床可报告范围（Clinically Reportable Range)是方法 可采用对标本的稀释、浓缩或者其他预处理用于扩展直接 分析测量下的分析物值的范围。
临床有用性
可报告范围（Reportable Range）：实验室可建立或验 证仪器或检测系统测量相应的准确度实验结果值的范围。 （CLIA），也被称为线性范围 （Linear Range）
t0.05,7=2.365
偏差小于0.2，在4.65-15.4范围内，符合线性要 求。
分析测量范围（Analytical Measurement Range）方法 直接测量标本，而不需要任何的稀释、浓缩或者其它预处 理等过程下的分析物值的范围。（CAP）
符合方法学性能，测量总误差满足方法规定的性能指 标。
张传宝 卫生部临床检验中心 cbzhang@
NCCLS EP6-A2 ：Evaluation of Linearity of Quantitative Analytical Methods; Approved Guide-Second Edition
《临床检验方法确认与性能验证》P153
线性评价及方法可报告范围的确定
混合物 混合物1: 0 混合物2: 25% 混合物3: 50%
混合物4: 75% 混合物5: 100%
均值 (Y) 6 138 278
411 545
理论值(X) 0 139 278
417 556
偏倚（bias） +6 -1 0
-6 -11
% 误差 N/A -0.7% 0
-1.4% -2.0%
是以患者样本相同的方式检测已知浓度的材料证实在整个患者试验 结果可报告范围之内仪器或检测系统的校准情况（CLIA）。 包括至少最低（或零）值，中值和最大值接近范围的上限来验证实 验室检测系统试验结果可报告范围； 至少每6个月进行一次，及不论何时出现下列情况时：
试剂批号的改变，除非实验室能证实并没有影响用于报告患者试 验结果的范围，以及室内质控值并没有受到试剂批号改变的影响。 进行了重大的保养维护或关键部件的替换，可能影响试验性能。
室内质控出现异常的趋势或偏移，或超出实验室的可接受界限， 及其他评价和纠正方法未能识别和纠正的问题。 实验室已建立的验证患者试验结果可报告范围的计划要求更经常 性地校准验证。
---陈文祥
[The U.S. CLIA]
线性范围（Linear Range)是指系统最终的输出值（浓度或活性）与 被分析物的浓度成正比的范围。 分析测量范围（Analytical Measurement Range）方法直接测量标 本，而不需要任何的稀释、浓缩或者其它预处理等过程下，测量结果 总误差符合要求的分析物浓度的范围。（CAP） 符合方法学性能，测量总误差满足方法规定的性能指标。 临床可报告范围（Clinically Reportable Range)是方法可采用对标 本的稀释、浓缩或者其他预处理用于扩展直接分析测量下的分析物值 的范围。 临床有用性 可报告范围（Reportable Range）：实验室可建立或验证仪器或 检测系统测量相应的准确度实验结果值的范围。（CLIA）
NCCL正确度验证计划简介张传宝
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5
溯源性（JJF 1001-2011）
• “测量结果或标准量值的属性，它使测量结果或标准量值 通过连续的比较链与给定的标准联系起来，给定的标准通 常是国家或国际标准，比较链中的每一步都有给定的不确 定度。”
精密度 (PRECISION)
重复测量结果之间的接近程度 随机误差
标准差(SD)
[ISO 5725-1: 1994]
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9
TP检测系统
定值（g/L）
Abbott Achitech c8000/ci8200
45.3
Bayer Technicon RA50
49.1
COBAS INTEGRA
-22.9~2.3(1.3)
3/5
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2013 正确度验证-1 原始数据
仪器
所有仪器 Beckman Synchron Systems
Bio-Rad D-10 Bio-Rad VariantII Bio-Rad VariantII Turbo Beckman AU Systems
Primus HPLC Roche cobas c501 Roche MODULAR P
常规EQA 冻干粉 人或者动物血清基质 有 常温 分组、中位数 实验室间结果可比性 收费相对较低 单次测定
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说动说明(2014)
二、样本保存 本次样本为冰冻血清样本，收到样本后，应立即将样本存放在-70℃冰箱 或者-20℃冰箱中。 三、样本处理 共2个批号，每个批号3瓶,共6瓶样本。批号1的编号为201411；批号2的 标签为：201412. 测定日期：2014年5月19日、5月26日、6月2日,每日测定各批号各1瓶， 重复测定5次。 测定方法：测定当天取两个批号样本各1瓶，在室温放置30分钟，待其完 全融化，平衡至室温后上下颠倒10次混匀。每个项目连续测定5次，待所 有测定完成后，通过网络在线填报结果（详见下文），在线回报系统将 于6月2日开放。请务必严格按照本说明要求操作。
线性评价及分析测量范围的确定
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30
非线性程度判断WS/T408-2012—临床
标准的线性与非线性检验
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31
将ADL与临界值表比较，ADL小于临界值，判定为临床可接受
的非线性，即二阶或三阶线性。否则判定为临床不可接受的
非线性，即非线性。
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32
P–标注P的表格表示最优拟合方程的精密度太差，无法进行
线性评价及分析测量范
围的确定
陈明
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湖南 长沙
1
参考材料
CLSI EP6-A ：Evaluation of Linearity of
Quantitative Analytical Methods; Approved
Guide-Second Edition（美国临床和实验室标
准化协会）
它是个离群点。
单个离群点可从数据组中剔除，如发现两个或两个以上离
群点应考查造成误差的可能原因，纠正后对整套样品重新
测定。
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初步数据检查— EP6-A
目视检查散点图可很容易发现非线性或实
验样品浓度范围过宽或过窄，同时还可以
为后续的统计分析选择合适的统计方法提
供依据。
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许误差，临床上可接受。
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非线性程度判断-EP-6A
如果任一点超过设定误差，则代表该点可能是非线性，可
按以下两种方法处理：
寻找非线性的原因：样品准备、干扰、仪器校准等，进行
纠正。
观察散点图，如非线性点位置在两端，可先删除太大的点
参考物质互通性评价方案
作者简介：刘庆香，女，1997年生，学士，主要从事临床生化检验标准化研究。
通信作者：周伟燕，E-mail ：；张传宝，E-mail ：。
参考物质互通性评价方案刘庆香1， 张天娇1， 龙琪琛1， 周伟燕2， 张传宝1（1.北京医院 国家老年医学中心 中国医学科学院老年医学研究院 国家卫生健康委临床检验中心 北京市临床检验工程技术研究中心 中国医学科学院北京协和医学院，北京 100730；2.北京医院 国家老年医学中心 中国医学科学院老年医学研究院 国家卫生健康委临床检验中心 北京市临床检验工程技术研究中心，北京 100730）摘要：具备互通性的参考物质是确保临床实验室检验结果准确、可溯源的基础，评价参考物质的互通性是近年来检验医学领域的研究热点和难点之一。
美国临床和实验室标准化协会（CLSI ）分别于2010年和2014年发布了EP30-A 和EPl4-A3文件，主要通过回归分析法对参考物质进行互通性评价。
2018年，国际临床化学和检验医学联合会（IFCC ）互通性工作组采用偏差差值法对参考物质进行互通性评价。
这3个方案在方案设计、数据分析、判断依据等方面均存在差异，对参考物质进行互通性评价的结果也可能不同。
文章对3个互通性评价方案的内容、适用情况、优缺点及临床应用进行综述，旨在为参考物质进行互通性评价提供帮助。
关键词：参考物质；互通性；EP30-A 文件；EP14-A3文件；国际临床化学和检验医学联合会文章编号：1673-8640（2021）03-0245-05 中图分类号：R446 文献标志码：A DOI ：10.3969/j.issn.1673-8640.2021.03.003互通性是参考物质的一个重要属性，也是参考物质在不同测量程序间保持结果一致的关键性能参数。
参考物质具有互通性是保证患者结果可溯源的关键环节，也是参考物质用于量值溯源与传递的技术基础[1]。
当前，由于绝大多数临床项目分析物对被测量的代表性不足、参考物质基质不同等原因，导致参考物质和临床样本在不同测量系统之间不具有互通性。
ALT测定相关问题探讨--张传宝
ALT测定相关问题探讨
张传宝 卫生部临床检验中心生化室 2013.6.17珠海
转氨酶的生化和临床 常规测定方法 参考体系建立和应用 参考区间
转氨酶的生化和临床 常规测定方法 参考体系建立和应用 参考区间
丙氨酸氨基转氨酶
Alanineaminotransferase(ALT)；曾用名：谷丙转氨酶 （glutamatepyruvatetransaminase,GPT）； 一种参与人体蛋白质新陈代谢的酶，有加快体内蛋白质氨 基酸在体内转化的作用，它广泛存在于人体各种组织、器 官，以肝脏细胞的细胞浆中最多。 肝细胞内ALT浓度高于血清中1000-3000倍。只要有1%的 肝细胞被破坏，就可以使血清酶增高一倍。 因此，其被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测 指标。
酶联-紫外连续监测法
原理： L-丙氨酸+α-酮戊二酸
LD ALT
丙酮酸+L-谷氨酸
丙酮酸+NADH L-乳酸+NAD+ 在第二项反应中，NADH被催化为NAD。NADH的减少速 率与丙酮酸盐的形成速率，也就是ALT的活性，直接成正 比，对此可通过光度计测量。 在340nm连续监测NADH的消耗量，从而计算出ALT的活 力。
• 测定时，应将室间质评样本当做常规病人标本处理，视为有潜在感染 性，按实验室规定做好生物安全防护措施。
定量分析方法的空白限、检出限、定量限的建立和评价-张传宝
空白样本反复测定，计算其均值（M）和标准差 （SD）； M+10SD LoQ M+2SD LoD：
LoB LoD LoQ LLD BLD FS
24-1 空白样本和低浓度样本测定结果的分布图
24-3 空白样本和假定低浓度样本（LoD)重复测定结果分布图
a错误、第一类错误：假阳性 b错误、第二类错误：假阴性 默认a=b=5% 如果空白样本测定结果符合高斯分布（正态分布、对称分布），计算 公式：
如果空白样本测定结果非正态分布，则： ，Pct B=
概念 空白限和检出限的建立和验证 定量限的建立和验证 结果报告
空白限（Limit of Blank, LoB)：（一定概率下）测量空白样本时可能 得到的最高测量结果。 并非样本中的实际被测物浓度； 相当于浓度为LoD的样本（在一定概率下）能得到的最低测量结果， 即Lower Limit of Determination; 也被称为”critical value” (ISO 11843). 检出限（Limit of Detection, LoD)：检测方法可检测出的最低被测物 浓度,也称检测低限(lower limit of detection)或最小检出浓度 (minimum detectable concentration)，有时用以表示”sensitivity”. 定量限（Limit of Quantitation)：检测系统能够得到可靠结果的被测 物最低浓度。规定实验条件下，其精密度和正确度可接受。 也被叫做 “lower limit of determination” 、“lower end of the measuring range.” 通常情况下，LoB<LoD≤LoQ
多种统计学方法对实验室间定量检测结果的比对研究
多种统计学方法对实验室间定量检测结果的比对研究钟堃;张传宝;王薇;何法霖;张妍;姜妤;王治国【摘要】目的用多种统计学方法评价医疗机构间临床检验结果的可比性.方法以葡萄糖检测为例,选择20家临床实验室,对10份新鲜血浆进行重复检测,分别用传统统计学、稳健统计学、3种医学决定水平下的偏移及稳健Z比分数进行分析.结果稳健变异系数为2.57％～4.51％;小于最佳允许偏移的占28.3％(17/60),小于适当允许偏移的占56.7％ (34/60),小于最低允许偏移的占63.3％(38/60);稳健Z 比分数＞90％介于-2与+2.结论各种统计方法从多个方面全面评价了检验结果间的可比性,适用于医疗机构间临床检验结果互认的研究.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2012(030)009【总页数】3页(P697-699)【关键词】统计学;稳健;互认;比对;检验结果【作者】钟堃;张传宝;王薇;何法霖;张妍;姜妤;王治国【作者单位】卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730【正文语种】中文【中图分类】R446.1临床检验结果反映人体的生理和病理状况，为临床医师提供诊断依据。
医疗机构间实现检验结果互认前，短期内同一患者到不同医院就医，常需重复检测，给患者带来不便，并造成了医疗资源的浪费。
卫医发［2006］32号文件明确指出：“在医疗机构间互认医学检验、医学影像检查，对于合理、有效利用卫生资源，降低患者就诊费用，简化患者就医环节，改进医疗服务，在医疗过程中体现以人为本的服务理念都具有重要意义”。
基质效应的评估
10——然后使用评估方法测定临床病人样品的均值作为y值，比对方法测定临床病人样品的均值作为ｘ值,进行线性回归分析(见附录A）
4注：若对两组实际上呈曲线相关的数据采用线性回归模式，计算出来置信区间会变宽,将更难以确定制备样品和临床病人样品之间的真正偏差（基质效应）。
本标准是对临床化学干扰评估试验的补充。干扰评估试验和基质效应评估试验的目的相同：即确定误差来源,改进检测方法;两者之间主要差异如下：
基质效应评估主要关注制备样品和临床病人样品的差异，而干扰试验关注的是特定的物质和条件对临床病人样品测定结果的影响。
为了评估干扰的影响,基质效应评估主要比较制备样品和临床病人样品测定结果的统计学差异;而干扰试验评估是通过在临床病人样品中加入已知干扰物质，来评论对测定结果的影响。
3术语和定义
基质:基质(某一物质系统的)matrix(of a mａteｒial sysｔem)：ﻩ一个物质系统中除被分析物之外的所有成分[EN 1２2８6］
基质效应：独立于被分析物质存在的样品特性,对测量和可测量数值的影响【EN 12287】。
互通性 :指在不同的(指定的）测量系统中，进行一套相同量(参考物)的测量时，某一物质在测量结果间产生的数字关系，当用此相同测量程序测量其它相关类型的物质（如:实际临床样品）时所获得的期望关系(数字关系)一致度的能力【EN 1228７】。
本部分起草单位：卫生部临床检验中心。
本部分主要起草人: 张传宝、闫颖、周伟燕、张天娇、赵海舰、陈文祥
本标准由卫生部委托卫生部临检中心负责解释。
本部分于200X年X月首次发布
150808-室间质量评价-张传宝
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参考测量比对/能力验证
• 用于参考测量实验室间的比对，需采用参考测量程序进行。
其测定要求更为严格，评定方式比较复杂。用于支持ISO 17025校准/ISO 15195参考测量实验室认可。用以评定参 考测量实验室的校准检测能力（不确定度、偏倚的大小）。
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中心生化室EQA计划
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室间质量评价的类别
• 常规室间质量评价 • 正确度验证 • 参考测量实验室比对/能力验证 • 室内质控的室间比对
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常规室间质量评价
• 采用商品冻干或冰冻材料作为质控品，采用的是公议值作
为靶值（指定值），常规EQA结果很大程度代表的是同组 间实验室间检测结果的一致性。样本的基质效应问题是常 规EQA最大的不足，会造成参考方法的定值不可用，不同 方法组间的结果不能比较等局限性。
实验室。全年分3次活动，每次测定其中的5个样本。每次 测定完毕后通过网络上报测定结果。我中心对结果按照方 法学分组后，剔除超出“均值±3标准差（sd）”外的数据， 取组内中位数作为靶值。计算每个实验室每个样本测定结 果与靶值的相对偏差，并与允许总误差比较，得分在80% （4/5）以上，则该项目本次EQA成绩合格。
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正确度
• 正确度(Trueness): 真实度，无限多次测量的均值与真值的
接近程度 • 偏倚(Bias)：检验结果的正确度，同一实验室用同种方法在 多次多里检验中分析同一样品所得结果的均值与靶值之间 的差异。
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精密度
• 精密度(precision): 在规定条件下获得的独立测量结果之间
编码 NCCL-C-01 NCCL-C-02 NCCL-C-03 NCCL-C-04 NCCL-C-05 NCCL-C-06 NCCL-C-07 NCCL-C-08 NCCL-C-09 NCCL-C-10 NCCL-C-11 NCCL-C-12 NCCL-C-13 NCCL-C-14 NCCL-C-15 NCCL-C-16 NCCL-C-17 NCCL-C-18 NCCL-C-19 NCCL-C-20 计划 常规化学 干化学 心肌标志物 脂类 血气 特殊蛋白 内分泌 肿瘤标志物 全血TDM 血清TDM 糖化血红蛋白 BNP/NT proBNP 尿液生化 Cys C 小分子代谢物验证 脂类正确度验证 酶学正确度验证 糖化血红蛋白正确度验证 参考测量能力验证计划 电解质正确度验证 总计 2014 2050 420 895 1042 965 900 1468 1442 179 217 1248 554 278 410 184 208 237 152 15 142 12991 2015 2218 445 1109 1198 1123 970 1647 1613 187 220 1338 723 330 493 228 250 273 182 15 192 14739 增加 8% 6% 24% 15% 16% 8% 12% 12% 4% 1% 7% 31% 19% 20% 24% 20% 15% 20% 0
1-线性评价评价试验-张传宝
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格拉布斯（Grubbs）法 每组数据中有3个测定结果，分别记为 x1，x2，x3。 1)将3个测定值按大小顺序排列,最大值记为 xmax,最小值记为 xmin; 2)由3个测定值计算均值x和标准差s:
x =
x1 x 2 x3 3
s =
x
i 1
3
i
x
2
3
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3)根据可疑值 xmax或 xmin分别按下式计算统计量t： t1 = xmax x
09:48:43
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不精密度和ADL的临界值（PctBnd=5%，d=1或2阶） σ/ c% 1 2 3 4 5 6 7 8 9 >9 L 样本数
L×R=10 5.5 6.1 6.6 7.1 6.6 8.2 8.7(P) P P P R
L×R=12 5.5 6.0 6.4 6.9 7.4 7.9 8.4(P) P P P
09:48:42
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• 测量区间的下限（LLMI）：满足测量程序所有规定的性能指标
(偏倚、不精密度、线性)时的最低被测物浓度； • 线性区间的下限（LLLI）：测量程序（测定结果）和实际被测 物浓度呈线性时的最低被测物浓度。 • 一般情况下，LLMI>LLLI
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思考
• 定量免疫（如化学发光，免疫比浊），校准曲线并非直线，
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可添加分析物
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使用高低混合血清制备系列样本
采用足量的混合血清样本时，准备如下：
• X1: 低浓度混合血清，浓度接近或等于下限； • X5: 高浓度混合血清，浓度等于或接近上限； • X2: 3份X1 + 1份X5 • X3: 2份X1 + 2份X5 • X4: 1份X1 + 3份X5
线性范围评价
EP6-A法分析测量范围评价应用举例分析测量范围（线性检测范围）评价采用的方法有目测法、EP6-P法、改良Doumas法、CAP-IRC 法和EP6-A法。
EP6-A法操作简便，适合于临床常规实验室人员评价线性，是目前最好评价线性的方法。
EP6-A法是NCCLS在EP6-P和CAP-IRC 线性评价方法的基础上，经过不断的实践和不断的改进，于2003年颁发的批准性指南文件。
一、标本要求推荐用高值和低值浓度的样本按比例精确配置等间距的不同浓度样本，低、高值样本分别测定2～4次取均值，为2个样本的实测值，如低值以L表示，高值以H表示，分别为第一管和最后一管，各管依照L与H样品配置的比例，可以计算出实验样品的预期值。
每管的浓度由以下公式来计算，第1管的浓度为C1，体积为V1，以次类推，第5管的浓度和体积分别为C5和V5计算浓度C=（C1×V1+ C5×V5）/(V1+V5) ,注意每管要充分混匀，并防止蒸发或其它改变。
二、结果判断:该法的线性判断过程大致分为四个步骤：（1）确定不同项目可接受不精密度和线性偏差。
EP6-A强调任何用户有必要确定自己对线性程度的要求,或非线性的允许误差范围,目标的确定应基于实验室客户的需要及所用方法的特性。
设定误差目标所要考虑的因素：线性目标来源于偏倚目标，因而应小于或等于偏倚目标；偏倚目标应应小于或等于测量误差。
（2）计算不精密度：目测检查无明显离群值，计算不精密度。
重复性用L个样本的所有重复测量结果的集合方差来评价。
用SDr或CVr表示。
公式………………………………①L为样本数；ri1和ri2分别为两次测量的实际结果,或与均值的百分比。
（3）不精密度符合要求后，作多项式回归分析。
多项式回归分析可以借助多种商业统计软件完成。
例如用SPSS的话，选“分析”→“回归分析”→“曲线估计” →“因变量” 、“自变量” 、“模型（线性、平方、三次方）”→得三个方程。
用两种试剂检测血清甘油三酯的线性及偏差比较
用两种试剂检测血清甘油三酯的线性及偏差比较摘要】目的用临床病人标本分析中生和3V两种甘油三酯（TG）试剂检测血清TG的线性及偏差。
方法依据美国国家临床实验室标准化委员会EP9-A文件，每天取新鲜临床样本8份，分别用两种试剂测定TG，共测5天，记录检验结果，统计学分析其线性方程和相关系数,进行偏差分析。
结果两种试剂测定甘油三酯的相关系数r=0.999；在0.23～11.0 mmol/l范围内，相对偏差为6.57～8.21%。
结论两种试剂测定TG时，在0.23～0.407 mmol/l范围内3V试剂测定结果高于中生试剂，在0.407～11.0mmol/l范围内3V试剂测定结果低于中生试剂测定结果。
【关键词】甘油三酯 EP9 偏差中生 3V目前血清TG常规测定普遍采用过氧化物酶偶联（GPO-PAP）法，大部分医院应用全自动生化分析仪采取开放试剂检测。
在理想情况下，同一样本在同一仪器上用不同试剂测定得到的结果应该相同或者差异在允许范围内，但事实是否如此呢？为此，我们按照张传宝等介绍的EP9-A文件（用患者样本进行方法对比及偏差评估——批准指南）所提供的关于两种试剂（方法或仪器）的对比实验方法，对两种甘油三酯试剂分别进行双份测定，将所得数据进行了相关回归及偏差等分析。
材料与方法1 仪器 liasys全自动生化分析仪(意大利)2 试剂2.1对比方法用试剂中生北控生物科技股份有限公司甘油三酯试剂盒（氧化酶法），批号：070405；2.2实验方法用试剂潍坊三维生物工程有限公司甘油三酯试剂盒（氧化酶法），批号070503；3 校准物 (中生北控生物科技股份有限公司，批号：070188）4 样本临床患者新鲜血提取血清，6小时内测定5 实验方法5.1常规开机，用中生北控生物科技股份有限公公司提供的校准物进行校准；5.2取8份病人新鲜血清，随机编号；5.3分别用两种试剂对血清进行双份测定，测定顺序为1→8、8→1；5.4以上方法重复测定5天。
检验方法确认与验证PPT课件
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医疗机构内同一检验项目在不 同检测系统上可比性的验证
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可比性验证的依据
王治国主编的《临床检验 方法确认与性能验证》
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❖Why ❖When ❖Who ❖Where ❖What
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•Why
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其它：
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WHEN
❖ 方法/系统首次在实验室使用； ❖EQA/PT 结果未通过，采取纠正措施
后；
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WHO&WHERE
第四届次临床检验方法确认与性能 验证培训会议
6月18日— 6月22日 山东 青岛
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1
❖ 统计学基本知识和临床检验方法选择 王志国 卫生部临检中心 ❖ 临床检验质量规范 曾蓉 四川大学附属三院 ❖ 方法临床评价 段勇 昆医附属医院 ❖ 线性评价、干扰、回收、检出限 张传宝 卫生部临检中心
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血清钾、钠、钙、镁离子色谱法候选参考测量程序的建立及性能评估
血清钾、钠、钙、镁离子色谱法候选参考测量程序的建立及性能评估邹继华;张曼;沈敏;屠敏敏;张传宝;闫颖;邹炳德【摘要】Objective To establish a reference measurement procedure for the determination of serum electrolytes(potassium,sodium,calcium and magnesium) based on ion chromatography,and to evaluate its analytical performance. Methods Samples were prepared by a simple digestion and determined by ion chromatography. Fresh sample from patients and the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine External Quality Assessment Scheme for Reference Laboratories in Laboratory Medicine(RELA) sample were used. The accuracy,imprecision and methodology comparison with inductively coupled plasma mass spectrometry(ICP-MS) were evaluated. Results A total of 1.0 mL of serum sample was digested with 2 mL nitric acid. The samples were redissolved and determined by ion chromatography under the optimal eluent concentration of 32 mmol/L methane-sulfonic acid. The accuracy and imprecision were <1.0%. The results were comparable with the reference values obtained by ICP-MS. Conclusions The established reference measurement procedure for the determination of serumpotassium,sodium,calcium and magnesium has the advantages of simple,low-cost,high accuracy and good stability compared to ICP-MS. It may provide an effective way for traceability.%目的建立一种基于离子色谱技术的血清电解质(钾、钠、钙、镁)候选参考测量程序并评价其性能.方法采用一种简单的湿法消化方法对血清样本进行前处理,然后采用离子色谱仪检测.以患者新鲜血清及国际临床化学和检验医学联合会参考实验室外部质量评价计划(RELA)样本作为检测样本,对候选参考测量程序的正确度和不精密度进行评估,同时与决定性方法 [电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)]比较.结果 2 mL硝酸可将1.0 mL血清样本中的蛋白完全去除.32 mmol/L甲基磺酸淋洗液能将钾、钠、钙、镁实现基线分离.建立的候选参考测量程序的正确度和不精密度均在1.0%以内,与ICP-MS具有良好的可比性.结论成功建立了基于离子色谱技术的检测血清钾、钠、钙、镁的候选参考测量程序,相对于ICP-MS,具有操作简便、运行成本低、正确度高、稳定性好等优点,在临床检验的量值溯源中更具实用价值.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2017(032)002【总页数】6页(P143-148)【关键词】钾;钠;钙;镁;离子色谱法;参考测量程序;性能评估【作者】邹继华;张曼;沈敏;屠敏敏;张传宝;闫颖;邹炳德【作者单位】美康生物参考实验室,浙江宁波 315104;首都医科大学附属北京世纪坛医院检验科,北京 100038;美康生物参考实验室,浙江宁波 315104;美康生物参考实验室,浙江宁波 315104;国家卫生计生委临床检验中心,北京 100730;国家卫生计生委临床检验中心,北京 100730;美康生物参考实验室,浙江宁波 315104【正文语种】中文【中图分类】R446.1人体液中含有钾﹑钠﹑钙﹑镁﹑氯等电解质，这些电解质对于保持体液酸碱平衡﹑维持渗透压和水平衡等起重要作用。
线性评价
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Using Proficiency Testing to Improve Lab Performance
校准验证的概念及方法：
方法：所提供的校准验证材料，其浓度或活 性涵盖大多数分析物的可报告范围，分发给 各参加实验室后，按病人样本方式进行分析， 然后将各实验室测定结果与靶值进行比较， 从而判断当前校准是否在可报告范围内保持 稳定及测定结果的准确性
(7)EP12-P ： 用于定性实验评价的用户协议，提议指南（ User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Proposed Guideline ）；
(8)EP13-R ： 实验室统计—标准差，报告 （ Laboratory Statistics — Standard Deviation; A Report ）；
目的:
评价分析方法能报告的可 信的最低、最高的浓度范 围值。
确认厂家所提供该分析 系统的可报告范围是否一 致。
实验指导
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临床生物化学与检验实验指导
常用的方法:
• 目测线性法 • 最小二剩法线性评价 • NCCLS制订并推出的评价方案（EP-6） • 多项式线性评价方案 （2002）
实验指导
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临床生物化学与检验实验指导
(11) EP18-P： 检验单位使用的质量管理，提议指南（ Quality Management for Unit-Use Testing; Proposed Guideline ）；
(12) EP21-P： 临床实验方法 总分析 误差的评估，提议指南（ Estimation of Total Analytical Error for Clinical Laboratory Methods; Proposed Guideline ）。
线性范围评价
EP6-A法分析测量范围评价应用举例分析测量范围（线性检测范围）评价采用的方法有目测法、EP6-P法、改良Doumas法、CAP-IRC 法和EP6-A法。
EP6-A法操作简便，适合于临床常规实验室人员评价线性，是目前最好评价线性的方法。
EP6-A法是NCCLS在EP6-P和CAP-IRC 线性评价方法的基础上，经过不断的实践和不断的改进，于2003年颁发的批准性指南文件。
一、标本要求推荐用高值和低值浓度的样本按比例精确配置等间距的不同浓度样本，低、高值样本分别测定2～4次取均值，为2个样本的实测值，如低值以L表示，高值以H表示，分别为第一管和最后一管，各管依照L与H样品配置的比例，可以计算出实验样品的预期值。
每管的浓度由以下公式来计算，第1管的浓度为C1，体积为V1，以次类推，第5管的浓度和体积分别为C5和V5计算浓度C=（C1×V1+ C5×V5）/(V1+V5) ,注意每管要充分混匀，并防止蒸发或其它改变。
二、结果判断:该法的线性判断过程大致分为四个步骤：（1）确定不同项目可接受不精密度和线性偏差。
EP6-A强调任何用户有必要确定自己对线性程度的要求,或非线性的允许误差范围,目标的确定应基于实验室客户的需要及所用方法的特性。
设定误差目标所要考虑的因素：线性目标来源于偏倚目标，因而应小于或等于偏倚目标；偏倚目标应应小于或等于测量误差。
（2）计算不精密度：目测检查无明显离群值，计算不精密度。
重复性用L个样本的所有重复测量结果的集合方差来评价。
用SDr或CVr表示。
公式………………………………①L为样本数；ri1和ri2分别为两次测量的实际结果,或与均值的百分比。
（3）不精密度符合要求后，作多项式回归分析。
多项式回归分析可以借助多种商业统计软件完成。
例如用SPSS的话，选“分析”→“回归分析”→“曲线估计” →“因变量” 、“自变量” 、“模型（线性、平方、三次方）”→得三个方程。
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也称：（分析）测量范围。
测量程序可给出测量结果（数值）、由测量低限和 测量高限构成的闭区间；
在此区间内，测量总误差满足方法规定的性能指 标。
设备熟悉期：在控、校准、样本准备等；
注意生物安全防护；
样本数量：
证明（Demonstration）：5-7个样本，覆盖线性范围，2次测定； 确认（Validation): 7-9个样本，覆盖线性范围，2-3次测定； 建立（ Establishment）：9-11个样本，超出20-30%预期线性
浓度水平：5个（或以上）； 材料：标准溶液、厂家或者PT机构提供的线性材料；（混
合）患者样本、添加分析物；
稀释液：水、生理盐水、牛蛋白或者血清白蛋白溶液、低 浓度样本、空白血清。
制备稀释物的程序：如前述，高低浓度样本比例混合；
重复测定次数：3次
数据分析：绘图，手工绘制通过所有点的最佳直线，如果 不能通过所有点，应首先通过较低浓度点；对于直线不通 过的点，估算非线性的系统误差。将系统误差与该浓度的 预期随机误差（2s）之和与TEa相比较。
临床可报告范围（Clinically Reportable Range)是方法 可采用对标本的稀释、浓缩或者其他预处理用于扩展直接 分析测量下的分析物值的范围。
临床有用性
可报告范围（Reportable Range）：实验室可建立或验 证仪器或检测系统测量相应的准确度实验结果值的范围。 （CLIA），也被称为线性范围 （Linear Range）
0
5
5
100 100
0
200 200
0
300 300
0
400 390 -10
3
12 24
-34
40
500 470 -30
3ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
15 30
-60
50
线性范围可延伸到400mg/dL
A．X轴标记为0%, 25%, 50%, 75%和100%稀释物。
B．Y轴标记为基于平均值或试验检测范围的适当水平。
C．绘制【 (0%，混合物1均值), (25%，混合物2均 值), (50%，混合物3均值), (75%，混合物4均 值), (100%，混合物5均值)】坐标。
符合方法学性能，测量总误差满足方法规定的性能指标。
临床可报告范围（Clinically Reportable Range)是方法可采用对标 本的稀释、浓缩或者其他预处理用于扩展直接分析测量下的分析物值 的范围。
临床有用性
可报告范围（Reportable Range）：实验室可建立或验证仪器或 检测系统测量相应的准确度实验结果值的范围。（CLIA）
范围，2-4次测定。
样本：混合病人血清、加入待测物的混合人血清、商品质控物或校准 物、水溶液等。避免干扰，尽量减少基质效应。高浓度样本可用说明 书指定稀释液稀释成系列低浓度样本。
评价的是理论值（实际浓度、相对浓度）与仪器给出的最终结果（而 非仪器内部的响应值）之间的线性关系。
采用足量的混合血清样本时，准备如下：
一般要求：实验人员必须熟练掌握仪器操作和维护程序、 样本准备方法和校准。
样本浓度 X1 X2 X3 X4 X5
测定次数及结果
Y1-1 Y2-1 Y3-1 Y4-1 Y5-1
Y1-2 Y2-2 Y3-2 Y4-2 Y5-2
Y1-3 Y2-3 Y3-3 Y4-3 Y5-3
Y1-4 Y2-4 Y3-4 Y4-4 Y5-4
D．画出通过数据点的最佳直线给出头3个坐标更多权 重。
E．检查线性图，直观地作出可报告范围的决定。
混合物 混合物1: 0 混合物2: 25% 混合物3: 50% 混合物4: 75% 混合物5: 100%
均值 (Y) 6
138 278 411 545
理论值(X) 0
139 278 417 556
样本浓度
测定次数及结果
X1
Y1-1 Y1-2 Y1-3 Y1-4
X2
Y2-1 Y2-2 Y2-3 Y2-4
X3
Y3-1 Y3-2 Y3-3 Y3-4
X4
Y4-1 Y4-2 Y4-3 Y4-4
X5
Y5-1 Y5-2 Y5-3 Y5-4
实验室设定cv 2%；非线性5% 无明显离群点，重复测定数据间的偏差随浓度增加而增加。
校准线的斜率与1、截距与0无统计学差异，但校准验证测定值至少
有一个超过了可接受范围，分析检测系统校准无效。反映出有随机误 差
校准线的斜率与1或截距与0有统计学差异，校准验证测定值至少有 一个超出可接受范围，分析检测系统的校准无效。反映出有系统误差
Xx.xxx 理论浓度-试剂浓度的线性
在制造商给定的线性范围内（10-1000mmol/L) 范围内，相关系数>0.9975.
t0.05,7=2.365
偏差小于0.2，在4.65-15.4范围内，符合线性要 求。
分析测量范围（Analytical Measurement Range）方法 直接测量标本，而不需要任何的稀释、浓缩或者其它预处 理等过程下的分析物值的范围。（CAP）
符合方法学性能，测量总误差满足方法规定的性能指 标。
将每个浓度4次按从大到小排列（Yi-1到Yi-4) 计算极差 D = Yi-1 –Yi-4 计算 D1= (Yi-1-Yi-2)/D 计算 D4= (Yi-3-Yi-4)/D D1或D4如果大于0.765（0.05)或0.889（0.01）则该点为 离群点；
以分析物浓度为X轴，测定结果为Y轴，绘制X-Y线性图：Y = aX + b，目测或进行统计学分析，判断是否符合要求。
数据 mg/dL
指定值
测定值
均值
0
0
5
10
5
100
95
100
105
100
200
200
195
205
200
300
310
300
290
300
400
380
390
400
390
500
470
460
480
470
y轴为均值与x轴为指定值的图形
y轴为均值与x轴为指定值的图形
指定值 均值 估计偏差 给定CV% S 2S TE(|bias|+2s) TEa
[The U.S. CLIA]
---陈文祥
线性范围（Linear Range)是指系统最终的输出值（浓度或活性）与 被分析物的浓度成正比的范围。
分析测量范围（Analytical Measurement Range）方法直接测量标 本，而不需要任何的稀释、浓缩或者其它预处理等过程下，测量结果 总误差符合要求的分析物浓度的范围。（CAP）
张传宝 卫生部临床检验中心 cbzhang@
NCCLS EP6-A2 ：Evaluation of Linearity of Quantitative Analytical Methods; Approved Guide-Second Edition
《临床检验方法确认与性能验证》P153
---陈文祥
关于验证 (Verification)
对主要方法性能的证实 在引入新方法时进行 对配套系统，一般验证下列指标： ―准确度(accuracy) ―精密度(precision) ―可报范围(reportable range) ―参考区间(reference interval) 对非配套系统，验证更为广泛，除上述指标外： ―分析特异性 ―分析灵敏度 ―任何其他必要指标
实验室已建立的验证患者试验结果可报告范围的计划要求更经常 性地校准验证。
评价仪器： 贝克曼、日立、Olympus AU 样本数5个 样本重复测定次数：5
验证1：校准线的斜率与1、截距与0无统计学差异，校准验证的测定 值在可接受范围内，分析检测系统的校准有效。
校准线的斜率与1或截距与0有统计学差异，但所有校准验证的测定 值在可接受的范围内，分析检测系统的校准有效.
至少每6个月进行一次，及不论何时出现下列情况时：
试剂批号的改变，除非实验室能证实并没有影响用于报告患者试 验结果的范围，以及室内质控值并没有受到试剂批号改变的影 响。
进行了重大的保养维护或关键部件的替换，可能影响试验性能。
室内质控出现异常的趋势或偏移，或超出实验室的可接受界限， 及其他评价和纠正方法未能识别和纠正的问题。
X1: 低浓度混合血清，浓度接近或等于下限； X5: 高浓度混合血清，浓度等于或接近上限； X2: 3份X1 + 1份X5 X3: 2份X1 + 2份X5 X4: 1份X1 + 3份X5
全部实验和数据采集应在同一试验批（run）内完成。样
本随机排列。有显著携带污染时，应用空白隔开样本。每 个浓度样本重复测定4次。记录分析结果。
D2/2 总和39.05，平均值7.81；平方根2.8，相当 于总体的重复性（SD）；百分差值的SD 0.9%；
随机误差0.9%，分析误差一般小于2%（2SD）， 但是也有可能超过。
低、中、高浓度测定结果超过5%，结论：非线性。
偏差超过非线性误差（0.2）；决定舍去第6点，用1-5进行评价。如 果1-5符合要求，则其线性为4.65-15.4
偏倚（bias） +6 -1 0 -6 -11
% 误差 N/A -0.7% 0 -1.4% -2.0%
是以患者样本相同的方式检测已知浓度的材料证实在整个患者试验 结果可报告范围之内仪器或检测系统的校准情况（CLIA）。
包括至少最低（或零）值，中值和最大值接近范围的上限来验证实 验室检测系统试验结果可报告范围；
关于“确认” (Validation)
方法学研究或方法产品性能研究 由方法建立者或产品生产者完成 给出主要方法性能： ―准确度(accuracy) ―精密度(precision) ―特异性(specificity) ―检测限和定量限(LOD and LOQ, "灵敏度") ―线性(linearity) ―耐变性(robustness) ... ...