真菌检验技术PPT课件
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《食品中真菌的检验》课件
பைடு நூலகம்
3 满足法规要求
真菌检测是许多行业的法 定要求，如食品、制药和 化妆品等，确保企业合规。
真菌在食品中的危害
食品变质
真菌可以导致食品变质，产生 异味和有害物质，影响食品的 风味和口感。
产生毒素
某些真菌会产生毒素，如黄曲 霉毒素和赭曲霉毒素，对人体 健康造成严重威胁。
传播感染
一些真菌可以在食品中繁殖并 传播，造成食品链中的感染和 传染。
3
检测分析
运用适当的检测方法和工具进行真菌的筛查、鉴定和计数。
真菌检测的常见问题
• 如何区分有害真菌和无害真菌？ • 真菌检测是否适用于所有食品类别？ • 如何防止假阳性和假阴性结果？ • 如何选择合适的检测方法和仪器？
真菌检测的案例研究
面包真菌检测
通过培养法和光学显微镜观察， 检测出面包中的镰刀菌和白色念 珠菌。
真菌检测的方法
培养法
通过将食品样品在培养基上 培养，观察和识别真菌的生 长来进行检测。
分子生物学方法
使用PCR等技术，检测和鉴 定食品中的真菌DNA和RNA。
光学显微镜法
使用光学显微镜观察和识别 食品中的真菌形态特征。
真菌检测的步骤
1
样品采集
从食品中采集样品，确保样品代表性和卫生。
2
样品处理
根据检测方法的要求，处理样品以提取和富集真菌。
奶酪真菌检测
使用分子生物学方法，检测出奶 酪中的蓝曲霉和黄霉菌，确保产 品质量。
水果真菌检测
采用PCR技术，检测出水果中的 霉菌，提供食品安全指导。
总结和展望
通过本课件，我们了解了真菌检测的重要性和危害，并探讨了检测的方法、步骤以及一些常见问题和案例研究。 希望能够帮助大家更好地了解和应用真菌检测技术，保障食品安全。
3 满足法规要求
真菌检测是许多行业的法 定要求，如食品、制药和 化妆品等，确保企业合规。
真菌在食品中的危害
食品变质
真菌可以导致食品变质，产生 异味和有害物质，影响食品的 风味和口感。
产生毒素
某些真菌会产生毒素，如黄曲 霉毒素和赭曲霉毒素，对人体 健康造成严重威胁。
传播感染
一些真菌可以在食品中繁殖并 传播，造成食品链中的感染和 传染。
3
检测分析
运用适当的检测方法和工具进行真菌的筛查、鉴定和计数。
真菌检测的常见问题
• 如何区分有害真菌和无害真菌？ • 真菌检测是否适用于所有食品类别？ • 如何防止假阳性和假阴性结果？ • 如何选择合适的检测方法和仪器？
真菌检测的案例研究
面包真菌检测
通过培养法和光学显微镜观察， 检测出面包中的镰刀菌和白色念 珠菌。
真菌检测的方法
培养法
通过将食品样品在培养基上 培养，观察和识别真菌的生 长来进行检测。
分子生物学方法
使用PCR等技术，检测和鉴 定食品中的真菌DNA和RNA。
光学显微镜法
使用光学显微镜观察和识别 食品中的真菌形态特征。
真菌检测的步骤
1
样品采集
从食品中采集样品，确保样品代表性和卫生。
2
样品处理
根据检测方法的要求，处理样品以提取和富集真菌。
奶酪真菌检测
使用分子生物学方法，检测出奶 酪中的蓝曲霉和黄霉菌，确保产 品质量。
水果真菌检测
采用PCR技术，检测出水果中的 霉菌，提供食品安全指导。
总结和展望
通过本课件，我们了解了真菌检测的重要性和危害，并探讨了检测的方法、步骤以及一些常见问题和案例研究。 希望能够帮助大家更好地了解和应用真菌检测技术，保障食品安全。
医学微生物课程课件：细菌和真菌的鉴定与培养技术
医学微生物课程课件：细 菌和真菌的鉴定与培养技 术
本课程将深入讲解细菌和真菌的鉴定与培养技术，帮助学生掌握微生物学实 验室中的重要技能。
绪论
1 介绍
微生物学的重要性及其在医学领域中 的应用。
3 知识储备
学习这门课程所需要的基础知识。
2 概述
研究细菌和真菌的目的和意义。
细菌的鉴定技术
形态特征的鉴定
通过观察细菌的形状、颜色和 结构等特征来进行识别。
生理生化特性的鉴定
通过研究细菌的代谢能力和生 化反应来进行鉴定。
免疫学方法的鉴定
利用免疫学技术，如免疫沉淀 和免疫荧光等，进行细菌的鉴 定。
真菌的鉴定技术
形态特征的鉴定
观察真菌的形态、菌丝结构和孢子等特征进行识 别。
生理生化特性的鉴定
研究真菌的产物、代谢途径和反应来进行鉴定。
细菌的培养技术
1
培养基的配制
选择适当的培养基成分，并进行质量控制。
2
培养条件的控制
控制温度、湿度和氧气浓度等条件，以促进细菌的生长。
真菌的培养技术
1
培养基的配制
选择适当的培养基成分，并进行质量控制。度、湿度和光照等条件，以促进真菌的生长。
结论
实验室研究的重要性
通过细菌和真菌的鉴定与培养技 术，我们可以更好地理解微生物 的特征和功能。
微生物学的前沿
微生物学研究在医学和生物领域 中具有广泛的应用前景。
应用实践
培养和鉴定微生物是许多实际应 用的基础，如医学诊断和药物研 发。
本课程将深入讲解细菌和真菌的鉴定与培养技术，帮助学生掌握微生物学实 验室中的重要技能。
绪论
1 介绍
微生物学的重要性及其在医学领域中 的应用。
3 知识储备
学习这门课程所需要的基础知识。
2 概述
研究细菌和真菌的目的和意义。
细菌的鉴定技术
形态特征的鉴定
通过观察细菌的形状、颜色和 结构等特征来进行识别。
生理生化特性的鉴定
通过研究细菌的代谢能力和生 化反应来进行鉴定。
免疫学方法的鉴定
利用免疫学技术，如免疫沉淀 和免疫荧光等，进行细菌的鉴 定。
真菌的鉴定技术
形态特征的鉴定
观察真菌的形态、菌丝结构和孢子等特征进行识 别。
生理生化特性的鉴定
研究真菌的产物、代谢途径和反应来进行鉴定。
细菌的培养技术
1
培养基的配制
选择适当的培养基成分，并进行质量控制。
2
培养条件的控制
控制温度、湿度和氧气浓度等条件，以促进细菌的生长。
真菌的培养技术
1
培养基的配制
选择适当的培养基成分，并进行质量控制。度、湿度和光照等条件，以促进真菌的生长。
结论
实验室研究的重要性
通过细菌和真菌的鉴定与培养技 术，我们可以更好地理解微生物 的特征和功能。
微生物学的前沿
微生物学研究在医学和生物领域 中具有广泛的应用前景。
应用实践
培养和鉴定微生物是许多实际应 用的基础，如医学诊断和药物研 发。
临床真菌学检验基本技术
二、真菌分类及存在形式
1、Ainsworth（1973）分类系统 特点：成立菌物界，分2门，真菌门下分成5个亚门；取 消藻状菌纲，依据鞭毛的有无划分成鞭毛菌亚门、接合 菌亚门。
2、Alexopoulos & Mims （1979） 分类系统
特点：成立菌物界，菌物界Myceteae、Fungi分3个门； 真菌类依鞭毛的有无分2门。 3、菌物分别归属藻界、真菌界、和原生生物界的分类系统
三、真菌的一般检查
（1）、一般镜检
B、胶带粘贴法
用透明胶带直接贴于取材部位，数分钟后揭 下，充分展平后，直接置贴于加有一滴浮液的载 玻片上此液可以是10%~20%的KOH，也可以采 用乳酸酚棉蓝染液（易于观察）。该法常用于花 斑癣患处的直接检查。
三、真菌的一般检查
（2）、常规染色
▪ 乳酸酚棉蓝染色
特点：将藻界、真菌界、和原生生物界分开成三个 独立的界属
➢与医学有关的真菌有四个亚门
接合亚门：毛霉、根霉等 子囊霉亚门：酵母菌属、小孢子霉属等 担子霉亚门：新生隐球菌、灵芝、食用菌等 半知霉亚门：假丝酵母菌属、球孢子菌属等
➢最新的真菌分类
接合菌门 子囊菌门 担子菌门 壶菌门
➢根据菌落形态分类：
酵母菌 酵母样菌 霉菌 双相真菌
3、现 代 形 态学技术， 如自动成像分析、电 子颗粒体积、分数几 何学分析形态学的特 点。
二、分子生物学鉴 定
1、表型 分 类 受限， 生理生化技术在丝状 真菌鉴定方面，或是 费时费事或是结果不 准。
2、PCR技术，可以分 析少量真菌细胞，甚 至单个真菌抱子。
3、选择通用寡核昔酸 对真菌种特异性引物， 测定其核昔酸序列。
菌 丝 和 孢 子
三、真菌的一般检查
真菌镜检PPT课件
9
瑞氏染色组织胞浆菌
10
PAS染色甲真菌病黄曲霉甲床病理
11
培养检查
可提高真菌检出率，并能确定菌种。 方法：标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基
（Sabouraud agar/沙氏琼脂）上，置室温或37℃培 养1～3周。 必要时可行小培养协助鉴定。菌种鉴定常根据菌 落的形态及显微镜下形态判断。对某些真菌，有 时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生 物学方法确定。
真菌镜检
.
1
一. 采集标本
浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标 本在分离前常先用75%乙醇处理。
深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、 脓液、口腔或阴道分泌物、血液、脑脊液、各种 穿刺液和活检组织，采集时应注意无菌操作。
2
二. 检查方法
直接涂片 墨汁涂片 染色 培养
12
真菌培养
13
谢谢！
14
3
直接涂片
最简单而重要的诊断方法 方法：取标本置玻片上，加一滴10%KOH溶液，
盖上盖玻片，在酒精灯火焰上稍加热溶解角质后， 轻轻加压盖玻片使标本透明即可镜检。 用于检查有无菌丝或孢子，不能确定菌种。
4
直接检测隐球菌及其它有荚膜的孢子 方法：取一小滴墨汁与标本（如脑脊液）混合，
盖上盖玻片后直接镜检。
6
墨汁涂片
7
涂片或组织切片染色
染色可更好地显示真菌形态和结构 革兰染色适用于白念珠菌、孢子丝菌等 瑞氏染色（美蓝-伊红Y 染料）适用于组织胞浆菌 PAS（Periodic Acid-Schiff stain ）染色（糖原染色 ）
常用于组织切片
8
革兰染色白色念珠菌
瑞氏染色组织胞浆菌
10
PAS染色甲真菌病黄曲霉甲床病理
11
培养检查
可提高真菌检出率，并能确定菌种。 方法：标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基
（Sabouraud agar/沙氏琼脂）上，置室温或37℃培 养1～3周。 必要时可行小培养协助鉴定。菌种鉴定常根据菌 落的形态及显微镜下形态判断。对某些真菌，有 时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生 物学方法确定。
真菌镜检
.
1
一. 采集标本
浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标 本在分离前常先用75%乙醇处理。
深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、 脓液、口腔或阴道分泌物、血液、脑脊液、各种 穿刺液和活检组织，采集时应注意无菌操作。
2
二. 检查方法
直接涂片 墨汁涂片 染色 培养
12
真菌培养
13
谢谢！
14
3
直接涂片
最简单而重要的诊断方法 方法：取标本置玻片上，加一滴10%KOH溶液，
盖上盖玻片，在酒精灯火焰上稍加热溶解角质后， 轻轻加压盖玻片使标本透明即可镜检。 用于检查有无菌丝或孢子，不能确定菌种。
4
直接检测隐球菌及其它有荚膜的孢子 方法：取一小滴墨汁与标本（如脑脊液）混合，
盖上盖玻片后直接镜检。
6
墨汁涂片
7
涂片或组织切片染色
染色可更好地显示真菌形态和结构 革兰染色适用于白念珠菌、孢子丝菌等 瑞氏染色（美蓝-伊红Y 染料）适用于组织胞浆菌 PAS（Periodic Acid-Schiff stain ）染色（糖原染色 ）
常用于组织切片
8
革兰染色白色念珠菌
真菌ppt课件
毛霉菌
引起毛霉病，主要侵犯血管，常见于鼻脑毛霉病、肺胃毛霉病、皮肤毛霉病和播 散性毛霉病，病情凶险，死亡率高。
05
真菌与人类关系探 讨
食用真菌营养价值及开发利用现状
营养价值
食用真菌富含蛋白质、多糖、氨基酸等营养成分，具有提高 免疫力、抗肿瘤等功效。
开发利用现状
目前，市场上已有多种食用真菌产品，如蘑菇罐头、香菇酱 等，深受消费者喜爱。
灭菌处理。
真菌接种
02
从菌种保藏中心或实验室保藏的菌种中挑选目标真菌，进行接
种操作。
实验器材准备
03
准备显微镜、无菌操作台、接种环、培养皿等实验所需器材，
并进行清洗和消毒处理。
实验步骤和注意事项说明
无菌操作
在实验过程中，严格遵守无菌操作规程，避免杂菌污染。
培养条件控制
根据目标真菌的生长特性，控制好培养温度、湿度和光照等条件 ，确保真菌正常生长。
THANKS
感谢您的观看
观察真菌菌落、菌丝、孢子等 形态学特征进行分类鉴定。
培养特性
根据不同真菌在特定培养基上 的生长特性进行鉴定。
生理生化特性
利用真菌的生理生化反应特点 进行分类鉴定。
生物学特性
通过研究真菌与其他生物的互 作关系进行分类鉴定。
现代分子生物学技术在真菌分类鉴定中应用
DNA序列分析
通过比较真菌DNA序列差异进 行分类鉴定。
真菌繁殖方式及特点
无性繁殖
包括分生孢子、芽孢子等，繁殖 速度快，易产生变异。
有性繁殖
通过配子囊结合形成担子或子囊， 进行有性生殖，可产生新的遗传性 状。
准性生殖
介于无性和有性之间的一种生殖方 式，通过基因重组产生新的遗传变 异。
引起毛霉病，主要侵犯血管，常见于鼻脑毛霉病、肺胃毛霉病、皮肤毛霉病和播 散性毛霉病，病情凶险，死亡率高。
05
真菌与人类关系探 讨
食用真菌营养价值及开发利用现状
营养价值
食用真菌富含蛋白质、多糖、氨基酸等营养成分，具有提高 免疫力、抗肿瘤等功效。
开发利用现状
目前，市场上已有多种食用真菌产品，如蘑菇罐头、香菇酱 等，深受消费者喜爱。
灭菌处理。
真菌接种
02
从菌种保藏中心或实验室保藏的菌种中挑选目标真菌，进行接
种操作。
实验器材准备
03
准备显微镜、无菌操作台、接种环、培养皿等实验所需器材，
并进行清洗和消毒处理。
实验步骤和注意事项说明
无菌操作
在实验过程中，严格遵守无菌操作规程，避免杂菌污染。
培养条件控制
根据目标真菌的生长特性，控制好培养温度、湿度和光照等条件 ，确保真菌正常生长。
THANKS
感谢您的观看
观察真菌菌落、菌丝、孢子等 形态学特征进行分类鉴定。
培养特性
根据不同真菌在特定培养基上 的生长特性进行鉴定。
生理生化特性
利用真菌的生理生化反应特点 进行分类鉴定。
生物学特性
通过研究真菌与其他生物的互 作关系进行分类鉴定。
现代分子生物学技术在真菌分类鉴定中应用
DNA序列分析
通过比较真菌DNA序列差异进 行分类鉴定。
真菌繁殖方式及特点
无性繁殖
包括分生孢子、芽孢子等，繁殖 速度快，易产生变异。
有性繁殖
通过配子囊结合形成担子或子囊， 进行有性生殖，可产生新的遗传性 状。
准性生殖
介于无性和有性之间的一种生殖方 式，通过基因重组产生新的遗传变 异。
《真菌》PPT优秀课件
酵母菌的结构模式图
8
青绿色
扫帚状
观察青霉和它的菌丝
9
真菌的结构
10பைடு நூலகம்
（三）动态呈现
11
真菌的生殖
1、孢子生殖
制作孢子印
12
真菌的生殖
2、出芽生殖
酵母菌在环境条件适合时进行出芽生殖，繁殖速 度快； 在营养条件不足时，酵母菌会形成孢子，等到条 件适合时再萌发。
13
（四）小结
大型真菌（蘑菇、木耳等）
6
真菌的结构
细胞壁 细胞核 细胞质 细胞膜
液泡
酵母菌的结构模式图
真菌的细胞有细胞壁，细胞膜，细胞质，细胞核等 7
真菌的结构
细胞壁
细胞膜 叶绿体 细胞核 液泡 细胞质
真菌有真正的细胞核，是真核生物
它没有叶绿体，不能进行光合作 用合成有机物，是异养型生物
DNA 鞭毛
细胞质 荚膜
细胞壁 细胞核 细胞质 细胞膜 液泡
真菌的类别 霉菌
真菌 真菌的结构
酵母菌（单细胞真菌）
细胞壁
细胞膜
细胞质
细胞核
真核生物
液泡
孢子生殖
真菌的生殖
出芽生殖（酵母菌特有）
14
（课堂五练）兵课堂练兵
A 1、酵母菌与大肠杆菌在结构上的主要不同是： (
)
A．酵母菌有成形的细胞核
B．酵母菌有细胞壁
C．酵母菌有细胞质
D．酵母菌无叶绿体
2 、柑橘腐烂长出的真菌是（ C ）
人教版初中生物八年级上册
真菌
-.
1
（一）情景导入
橙子·青霉
奶奶的花生舍 不得吃，放了 一年，拿出来 一看……
花生·黄曲霉
真菌检验技术—真菌的培养技术(微生物检验课件)
染性真菌菌落不下沉,很少引起开裂。
❖ 通过培养可确定菌种，辅助直接检查的不足； ❖ 通常用沙保氏培养基（SDA）（22～28℃）； ❖ 深部真菌可用血琼脂或脑心葡萄糖血琼脂37℃培养；
❖ 温度 :22 ℃ ～ 28℃(深部真菌:28 ℃ / 37℃)需氧、 湿度高;PH :4.0～6.0 (弱酸性)
真菌的分离培养
真菌培养是目前鉴定真菌的惟一方法。培养 真菌的温度为28℃，但深部真菌为37℃。菌落是 鉴别真菌的方法。注意以下几点：
①菌落性质：酵母菌还是霉菌； ②菌落大小:病原性真菌菌落小，而条件致病性真
菌菌落大；
③菌落颜色:病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深；
④致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开裂；污
❖ 生长速度 : 慢(1～4周见典型菌落) ❖ 菌落特征 :酵母/酵母样菌 :光滑 柔软、湿润;丝状
菌:疏松 (绒毛状、棉絮状、粉末状);颜色 (正 / 背 面)
常用培养方法
❖ 试管法---初代培养、菌种保存 ❖ 大培养---纯种的培养、研究 ❖ 小培养---菌种鉴定 (玻片法 钢圈法 方块法)
❖ 通过培养可确定菌种，辅助直接检查的不足； ❖ 通常用沙保氏培养基（SDA）（22～28℃）； ❖ 深部真菌可用血琼脂或脑心葡萄糖血琼脂37℃培养；
❖ 温度 :22 ℃ ～ 28℃(深部真菌:28 ℃ / 37℃)需氧、 湿度高;PH :4.0～6.0 (弱酸性)
真菌的分离培养
真菌培养是目前鉴定真菌的惟一方法。培养 真菌的温度为28℃，但深部真菌为37℃。菌落是 鉴别真菌的方法。注意以下几点：
①菌落性质：酵母菌还是霉菌； ②菌落大小:病原性真菌菌落小，而条件致病性真
菌菌落大；
③菌落颜色:病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深；
④致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开裂；污
❖ 生长速度 : 慢(1～4周见典型菌落) ❖ 菌落特征 :酵母/酵母样菌 :光滑 柔软、湿润;丝状
菌:疏松 (绒毛状、棉絮状、粉末状);颜色 (正 / 背 面)
常用培养方法
❖ 试管法---初代培养、菌种保存 ❖ 大培养---纯种的培养、研究 ❖ 小培养---菌种鉴定 (玻片法 钢圈法 方块法)
真菌检验【送检】SOP--标本采集及处理课件
2h 内常温送检
4°C保存
24
眼(角膜刮片、玻璃体液等)标本采集及处理
. 角膜刮片或针吸玻璃体液。 . 15 分钟内常温送检。若不能及时送检，则常温保存。角膜刮片直接接种
至不含抑制剂的培养皿中，采用 X 或 C 型涂菌方式，玻璃体液离心后取
沉淀物接种。
15min 内常温送检
不含抑制剂的培养皿 接种培养
不能送检时，常温保存
19
无菌体液 (脑脊液、心包液、腹水和关节液) 标本处理二
. 标本大于 2ml，则 2000g 离心10 分钟，取沉渣接种。 . 若标本量少于 2ml，则将标本直接接种于培养基。
. 推荐使用细胞离心机对无菌体液进行涂片镜检。脑脊液可直接接种于血培养瓶。
离心10min
接种培养
涂片镜检
3
2. 最小抑菌浓度 MIC
按照标准操作规程进行体外真菌稀释法或连续浓度梯度稀释法药物敏感性 试验时，在特定培养时间及温度的条件下，能导致特定程度肉眼可见真菌 生长抑制的最低药物浓度。
4
3. 剂量依赖敏感 S-DD
. 给予高于常规给药剂量，且达到最大血药浓度时，临床有效。
4. 最低有效浓度 MEC
9
血液标本采集
. 推荐在抗真菌药物使用前，发热初期或寒颤期、采静脉血或骨髓液。 . 立即注入血培养瓶内并轻轻摇匀。至少采集 2 套。 . 标本与培养基比例为 1/10-1/5 (成人每瓶 8-10ml)、必须包括需氧瓶或
真菌瓶。
10
血液标本处理
. 2h 内常温送检。若不能及时送检，则常温保存。
2h 内常温送检
6
6. 消化液 lysis solution
. 粘液溶解作用，用于呼吸道标本等的前处理，常用N-乙酰-L-半胱氨酸、 5%草酸或二巯基苏糖醇等。
真菌感染实验室检测PPT课件
株数
119 56 46 20 11 22
%
44 21 16 7 4 8
19
2006~2012年念珠菌分布
60%
2006
50%
2007 2008
2009
40%
2010
2011
30%
2012
20%
10%
0%
白色念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 清酒念珠菌 中间念珠菌 近平无滑名念念珠珠菌菌
20
念珠菌药敏试验结果
3 2.2
2
1
0 1978～1982 1983～1987 1988～1992
Grool A, et al. Trends in the postmortern epidemlology of invasive fungal infections at a
university hospital. [J]. J Infect, 1996, 33(1): 23．
8
中国3347例尸检结果IFI发病率
7
6
P<0.01
5
6.06 5.23
4
3
2.77
2
1
1.04
0
1953-1962
1963-1972
1973-1982
1983-1993
北京协和医院对1953-1993年共计3447例尸检进行回顾性调查分析
9
人类最常见的深部真菌病
念珠菌病（监护中心、白血病、烧伤、肿瘤、AIDS、 SARS） 隐球菌病（AIDS、移植、SLE） 曲霉病（白血病、移植、AIDS、SARS ） 接合菌病（白血病、糖尿病、烧伤） 马内菲青霉病（自然疫源）
Pfaller MA，Diekema DJ．Epidemiology of invasive candidiasis：a persistent public health problem E [J]. Clin Mi1cr6obiol Rev, 2007, 20 (1): 133-163.
《真菌诊断标准》课件
真菌诊断标准
汇报人：
单击输入目录标题 真菌诊断概述 真菌诊断标准的内容 真菌诊断标准的实施 真菌诊断标准的评价与改进 真菌诊断标准的应用案例
添加章节标题
真菌诊断概述
真菌诊断的意义
早期发现：及 时发现真菌感 染，避免病情
恶化
精准治疗：根 据诊断结果， 制定个性化治
疗方案
预防传播：了 解真菌感染途 径，采取有效
应用效果分析
提高诊断准确性：通过应用真菌诊 断标准，可以更准确地诊断出真菌 感染
提高治疗效果：通过应用真菌诊断 标准，可以更准确地选择合适的治 疗方案，提高治疗效果
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
减少误诊率：通过应用真菌诊断标 准，可以减少误诊率，避免不必要 的治疗
降低医疗成本：通过应用真菌诊断 标准，可以减少不必要的治疗费用， 降低医疗成本
优点：灵敏度高， 特异性强，可早期 诊断
局限性：可能存在 假阳性和假阴性结 果，需要结合其他 诊断方法进行综合 判断
分子生物学诊断
DNA测序：检测真菌DNA序 列，确定真菌种类
RNA测序：检测真菌RNA序 列，确定真菌种类
基因芯片：检测真菌基因表 达，确定真菌种类
蛋白质组学：检测真菌蛋白 质表达，确定真菌种类
诊断报告：根据分析结果，出具诊 断报告，明确诊断结果和治疗建议
实施要点
明确诊断标准：确定 诊断标准，包括症状、 体征、实验室检查等
培训医务人员：对医 务人员进行培训，使 其了解诊断标准并掌 握诊断方法
规范诊断流程：制定 规范果： 定期评估诊断效果， 包括诊断准确性、诊 断效率等，并根据评 估结果进行改进
预防措施
提高生活质量： 及时治疗真菌 感染，提高患
汇报人：
单击输入目录标题 真菌诊断概述 真菌诊断标准的内容 真菌诊断标准的实施 真菌诊断标准的评价与改进 真菌诊断标准的应用案例
添加章节标题
真菌诊断概述
真菌诊断的意义
早期发现：及 时发现真菌感 染，避免病情
恶化
精准治疗：根 据诊断结果， 制定个性化治
疗方案
预防传播：了 解真菌感染途 径，采取有效
应用效果分析
提高诊断准确性：通过应用真菌诊 断标准，可以更准确地诊断出真菌 感染
提高治疗效果：通过应用真菌诊断 标准，可以更准确地选择合适的治 疗方案，提高治疗效果
添加标题
添加标题
添加标题
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减少误诊率：通过应用真菌诊断标 准，可以减少误诊率，避免不必要 的治疗
降低医疗成本：通过应用真菌诊断 标准，可以减少不必要的治疗费用， 降低医疗成本
优点：灵敏度高， 特异性强，可早期 诊断
局限性：可能存在 假阳性和假阴性结 果，需要结合其他 诊断方法进行综合 判断
分子生物学诊断
DNA测序：检测真菌DNA序 列，确定真菌种类
RNA测序：检测真菌RNA序 列，确定真菌种类
基因芯片：检测真菌基因表 达，确定真菌种类
蛋白质组学：检测真菌蛋白 质表达，确定真菌种类
诊断报告：根据分析结果，出具诊 断报告，明确诊断结果和治疗建议
实施要点
明确诊断标准：确定 诊断标准，包括症状、 体征、实验室检查等
培训医务人员：对医 务人员进行培训，使 其了解诊断标准并掌 握诊断方法
规范诊断流程：制定 规范果： 定期评估诊断效果， 包括诊断准确性、诊 断效率等，并根据评 估结果进行改进
预防措施
提高生活质量： 及时治疗真菌 感染，提高患
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1.常用工具 平皿、试管、接种针、接种环、接种 钩、培养箱等
第二节 真菌培养技术
一、基本条件
2.培养基 真菌营养要求不高，最适pH 4.0～6.0
常用的培养基:
培养基名称 沙氏培养基 放线菌酮-氯霉素琼脂 玉米粉吐温-80琼脂 马铃薯葡萄糖琼脂 尿素琼脂 心脑浸液葡萄糖血琼脂 显色鉴定培养基
培养基用途 真菌的常规培养 真菌的常规培养 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子 观察真菌菌落色素，用于鉴别 生化反应鉴别培养（红色癣菌和石膏样癣菌） 深部真菌培养 真菌的培养与鉴定
尿素分解试验 • 某些真菌具有尿素酶，可分解尿素
第三节 真菌的鉴定方法
二、免疫学检查
皮肤试验
•
提取真菌抗原，进行皮内注射或斑贴试
验，观察注射或试验部位有无红肿硬结出现
血清学检测
•
检测真菌的抗原或抗体，例如：胶乳凝
集试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光技术、
放射免疫分析等
第三节 真菌的鉴定方法
三、其它鉴定诊断方法
第一节 真菌形态检验技术
二、直接镜检
标本+标本处理液
（菌与其他 混杂物的鉴别
标本处理液： （1）KOH溶液 适于检查致密的难以透明的材料 （2）生理盐水 用于观察真菌的出芽现象 （3）水合氯醛-石炭酸-乳酸封固液 透明力较强，只限于不透明的
标本
第一节 真菌形态检验技术
第二节 真菌培养技术
二、培养方法
试管培养法 多用于菌种传代接种与保存
大培养法
仅用于培养生长繁殖较快的真菌
小培养法
观察真菌结构及生长发育过程
玻璃棒 载玻片 培养基 盖玻片
无菌蒸馏水
第二节 真菌培养技术
三、生长现象
观察菌落 生长速度、菌落大小、表面形态、性质、颜色、边缘、底部等
酵母型菌落
类酵母型菌落
l. 厚膜孢子形成试验
假菌丝
厚膜孢子
方法：
待测菌
接种
玉米粉吐温-80琼脂
25℃孵育1～3天
每天于显微镜下观察
结果：白假丝酵母菌在72小时内可观察到丰富的假菌丝，假 菌丝顶端见1～2个厚膜孢子
应用：白假丝酵母菌的鉴定
第三节 真菌的鉴定方法
三、其它鉴定诊断方法
芽管
2.芽管形成试验
方法：
待测菌+0.5～1ml血清 37℃水浴2～3小时
国家卫生和计划生育委员会规划教材
《微生物学检验》
第十四章 真菌检验技术
返回总目录
本章内容
1 第一节 真菌形态检验技术 2 第二节 真菌培养技术 3 第三节 真菌的鉴定方法 4 第四节 真菌药物敏感试验
学习目标及重点
学习目标： • 掌握真菌的检验方法 • 熟悉真菌标本采集及注意事项；真菌的鉴定程序；真菌药物
返回章内容
丝状菌落
第三节 真菌的鉴定方法
一、常用生化试验
糖（醇）类 发酵试验
• 检测真菌对单糖、多糖、醇类等发酵情况
同化碳源试验
• 检测真菌对糖类中的碳源利用能力的试 验，主要用于鉴定酵母菌
同化氮源试验
• 检测真菌对氮源利用能力的试验，主要用 于鉴定酵母菌
明胶液化试验
• 某些真菌具有明胶酶，可分解明胶蛋白 ，使其失去凝胶性质而不能凝固
第一节 真菌形态检验技术
2. 标本采集注意事项
标本来源要适宜 用药前采集标本 严格无菌操作 标本量要充足 立即送检
第一节 真菌形态检验技术
3. 检验程序
临床标本
直接检查
核免
形
酸疫
态
检学
学
测检
检
查
查
直接 镜检
染色 镜检
分离培养
观察菌落
镜生 其 检化 他
反鉴 应定
试 验
病理组 织标本
动物实验
PAS HE
待检菌液制备 用培养基稀释成1×103～5×103 CFU/ml
配成最高试验浓度的10倍（水溶性药物）
药物原液配制 或100倍（脂溶性药物）
药液稀释
以培养基依次作10倍稀释， 浓度范围：原液～10倍于试验终浓度
第四节 真菌药物敏感试验
2．方法
稀释药物
将药液加至无菌96孔微量板
各孔接种0.1ml工作浓度的菌液 35℃孵育48h（假丝酵母菌）或72h（ 新型隐球菌），观察结果
6. 真菌毒素的检测 色谱法等多种方法
7. G试验
用于念珠菌、曲霉菌等深部真菌感染的早期诊断
返回章内容
第四节 真菌药物敏感试验
药敏试验目的
• 指导临床用药 • 监控耐药菌株的发生和耐药性变化 • 预期研究新药的潜在疗效
第四节 真菌药物敏感试验
一、临床常用抗真菌药物
据化学结构分类
• 多烯类：如两性霉素B、制霉菌素等 • 吡咯类：如酮康唑、伊曲康唑等 • 其他：如氟胞嘧啶
三、染色镜检
1. 革兰染色：各种真菌均为革兰阳性（图1） 2. 乳酸酚棉蓝染色：染成蓝色（图2） 3. 墨汁染色：背景染成黑色，菌体不着色（图3） 4. 荧光染色：荧光显微镜下发出荧光 5. 糖原染色：多糖成分呈红色，核为蓝色，背景为淡绿色
（图1）
（图2） 返回章内容
（图3）
第二节 真菌培养技术
一、基本条件
第四节 真菌药物敏感试验
3．结果判断
据作用机制分类
• 作用于真菌细胞膜：如两性霉素B等 • 作用于真菌细胞壁：如尼可霉素Z等 • 干扰真菌DNA合成：如5-氟胞嘧啶等 • 其他：如大蒜新素及冰醋酸等
第四节 真菌药物敏感试验
二、酵母菌药敏试验方法——微量稀释法
1．试验前准备
培养基
RPMI 1640培养基 （含L-谷氨酰胺、酚红，不含碳酸氢钠）
第二节 真菌培养技术
显色鉴定培养基
原
代谢基质 产色基团
理
真菌的酶
分解代谢基质
真菌特异性酶的 底物（无色）
产色基团游离（ 显色）
第二节 真菌培养技术
白色念珠菌： 热带念珠菌： 克柔念珠菌： 光滑念珠菌： 近平滑念珠菌：
蓝绿色 蓝灰色、铁蓝色
粉红色 紫色 白色
SUCCESS
THANK YOU
2019/8/4
镜检
结果：绝大部分白假丝酵母菌可形成典型的放大镜柄状芽管 应用：白假丝酵母菌的鉴定
第三节 真菌的鉴定方法
三、其它鉴定诊断方法
3. 动物接种
用于分离病原性真菌、确定真菌的致病性、研究 抗真菌药物
4. 病理组织检查 用于深部真菌感染的诊断
5. 核酸检测
用于真菌的分型鉴定
有ELISA、生物学方法、薄层层析法、高效液相
敏感试验方法 • 了解常用抗真菌药物 本章重点： ★临床真菌标本的采集和处理
★真菌的形态学检查、培养技术和鉴定试验 ★真菌药物敏感试验
第一节 真菌形态检验技术
一、标本的采集和处理
1. 标本的采集——根据真菌感染部位采集不同的标本
浅部真菌感染
取毛发、皮屑、指（趾）甲等标本
深部真菌感染
取痰液、脓汁、血液、脑脊液等标本
第二节 真菌培养技术
一、基本条件
2.培养基 真菌营养要求不高，最适pH 4.0～6.0
常用的培养基:
培养基名称 沙氏培养基 放线菌酮-氯霉素琼脂 玉米粉吐温-80琼脂 马铃薯葡萄糖琼脂 尿素琼脂 心脑浸液葡萄糖血琼脂 显色鉴定培养基
培养基用途 真菌的常规培养 真菌的常规培养 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子 观察真菌菌落色素，用于鉴别 生化反应鉴别培养（红色癣菌和石膏样癣菌） 深部真菌培养 真菌的培养与鉴定
尿素分解试验 • 某些真菌具有尿素酶，可分解尿素
第三节 真菌的鉴定方法
二、免疫学检查
皮肤试验
•
提取真菌抗原，进行皮内注射或斑贴试
验，观察注射或试验部位有无红肿硬结出现
血清学检测
•
检测真菌的抗原或抗体，例如：胶乳凝
集试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光技术、
放射免疫分析等
第三节 真菌的鉴定方法
三、其它鉴定诊断方法
第一节 真菌形态检验技术
二、直接镜检
标本+标本处理液
（菌与其他 混杂物的鉴别
标本处理液： （1）KOH溶液 适于检查致密的难以透明的材料 （2）生理盐水 用于观察真菌的出芽现象 （3）水合氯醛-石炭酸-乳酸封固液 透明力较强，只限于不透明的
标本
第一节 真菌形态检验技术
第二节 真菌培养技术
二、培养方法
试管培养法 多用于菌种传代接种与保存
大培养法
仅用于培养生长繁殖较快的真菌
小培养法
观察真菌结构及生长发育过程
玻璃棒 载玻片 培养基 盖玻片
无菌蒸馏水
第二节 真菌培养技术
三、生长现象
观察菌落 生长速度、菌落大小、表面形态、性质、颜色、边缘、底部等
酵母型菌落
类酵母型菌落
l. 厚膜孢子形成试验
假菌丝
厚膜孢子
方法：
待测菌
接种
玉米粉吐温-80琼脂
25℃孵育1～3天
每天于显微镜下观察
结果：白假丝酵母菌在72小时内可观察到丰富的假菌丝，假 菌丝顶端见1～2个厚膜孢子
应用：白假丝酵母菌的鉴定
第三节 真菌的鉴定方法
三、其它鉴定诊断方法
芽管
2.芽管形成试验
方法：
待测菌+0.5～1ml血清 37℃水浴2～3小时
国家卫生和计划生育委员会规划教材
《微生物学检验》
第十四章 真菌检验技术
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本章内容
1 第一节 真菌形态检验技术 2 第二节 真菌培养技术 3 第三节 真菌的鉴定方法 4 第四节 真菌药物敏感试验
学习目标及重点
学习目标： • 掌握真菌的检验方法 • 熟悉真菌标本采集及注意事项；真菌的鉴定程序；真菌药物
返回章内容
丝状菌落
第三节 真菌的鉴定方法
一、常用生化试验
糖（醇）类 发酵试验
• 检测真菌对单糖、多糖、醇类等发酵情况
同化碳源试验
• 检测真菌对糖类中的碳源利用能力的试 验，主要用于鉴定酵母菌
同化氮源试验
• 检测真菌对氮源利用能力的试验，主要用 于鉴定酵母菌
明胶液化试验
• 某些真菌具有明胶酶，可分解明胶蛋白 ，使其失去凝胶性质而不能凝固
第一节 真菌形态检验技术
2. 标本采集注意事项
标本来源要适宜 用药前采集标本 严格无菌操作 标本量要充足 立即送检
第一节 真菌形态检验技术
3. 检验程序
临床标本
直接检查
核免
形
酸疫
态
检学
学
测检
检
查
查
直接 镜检
染色 镜检
分离培养
观察菌落
镜生 其 检化 他
反鉴 应定
试 验
病理组 织标本
动物实验
PAS HE
待检菌液制备 用培养基稀释成1×103～5×103 CFU/ml
配成最高试验浓度的10倍（水溶性药物）
药物原液配制 或100倍（脂溶性药物）
药液稀释
以培养基依次作10倍稀释， 浓度范围：原液～10倍于试验终浓度
第四节 真菌药物敏感试验
2．方法
稀释药物
将药液加至无菌96孔微量板
各孔接种0.1ml工作浓度的菌液 35℃孵育48h（假丝酵母菌）或72h（ 新型隐球菌），观察结果
6. 真菌毒素的检测 色谱法等多种方法
7. G试验
用于念珠菌、曲霉菌等深部真菌感染的早期诊断
返回章内容
第四节 真菌药物敏感试验
药敏试验目的
• 指导临床用药 • 监控耐药菌株的发生和耐药性变化 • 预期研究新药的潜在疗效
第四节 真菌药物敏感试验
一、临床常用抗真菌药物
据化学结构分类
• 多烯类：如两性霉素B、制霉菌素等 • 吡咯类：如酮康唑、伊曲康唑等 • 其他：如氟胞嘧啶
三、染色镜检
1. 革兰染色：各种真菌均为革兰阳性（图1） 2. 乳酸酚棉蓝染色：染成蓝色（图2） 3. 墨汁染色：背景染成黑色，菌体不着色（图3） 4. 荧光染色：荧光显微镜下发出荧光 5. 糖原染色：多糖成分呈红色，核为蓝色，背景为淡绿色
（图1）
（图2） 返回章内容
（图3）
第二节 真菌培养技术
一、基本条件
第四节 真菌药物敏感试验
3．结果判断
据作用机制分类
• 作用于真菌细胞膜：如两性霉素B等 • 作用于真菌细胞壁：如尼可霉素Z等 • 干扰真菌DNA合成：如5-氟胞嘧啶等 • 其他：如大蒜新素及冰醋酸等
第四节 真菌药物敏感试验
二、酵母菌药敏试验方法——微量稀释法
1．试验前准备
培养基
RPMI 1640培养基 （含L-谷氨酰胺、酚红，不含碳酸氢钠）
第二节 真菌培养技术
显色鉴定培养基
原
代谢基质 产色基团
理
真菌的酶
分解代谢基质
真菌特异性酶的 底物（无色）
产色基团游离（ 显色）
第二节 真菌培养技术
白色念珠菌： 热带念珠菌： 克柔念珠菌： 光滑念珠菌： 近平滑念珠菌：
蓝绿色 蓝灰色、铁蓝色
粉红色 紫色 白色
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2019/8/4
镜检
结果：绝大部分白假丝酵母菌可形成典型的放大镜柄状芽管 应用：白假丝酵母菌的鉴定
第三节 真菌的鉴定方法
三、其它鉴定诊断方法
3. 动物接种
用于分离病原性真菌、确定真菌的致病性、研究 抗真菌药物
4. 病理组织检查 用于深部真菌感染的诊断
5. 核酸检测
用于真菌的分型鉴定
有ELISA、生物学方法、薄层层析法、高效液相
敏感试验方法 • 了解常用抗真菌药物 本章重点： ★临床真菌标本的采集和处理
★真菌的形态学检查、培养技术和鉴定试验 ★真菌药物敏感试验
第一节 真菌形态检验技术
一、标本的采集和处理
1. 标本的采集——根据真菌感染部位采集不同的标本
浅部真菌感染
取毛发、皮屑、指（趾）甲等标本
深部真菌感染
取痰液、脓汁、血液、脑脊液等标本