从落叶松根中提取二氢槲皮素可研报告
二氢槲皮素的研究进展
生物技术进展2020年㊀第10卷㊀第3期㊀226~233CurrentBiotechnology㊀ISSN2095 ̄2341进展评述Reviews㊀收稿日期:2020 ̄01 ̄15ꎻ接受日期:2020 ̄03 ̄23㊀基金项目:中国农业科学院基本科研业务基金项目(1610042018005)ꎮ㊀联系方式:董潞娜E ̄mail:1581986901@qq.comꎻ∗通信作者王海胜E ̄mail:wanghaisheng@caas.net.cn二氢槲皮素的研究进展董潞娜ꎬ㊀曹浩ꎬ㊀张欣宇ꎬ㊀王海胜∗中国农业科学院研究生院ꎬ北京100081摘㊀要:二氢槲皮素是自然界中一种重要的黄酮类化合物ꎬ主要存在于高寒带落叶松的根部ꎮ由于其具有较好的抗氧化㊁抗肿瘤等生物学活性而被广泛应用于食品领域㊁工业领域和医药领域ꎮ然而ꎬ目前二氢槲皮素的工业化生产仍然依赖于传统的植物提取ꎬ原料稀缺㊁提取难度大㊁产率较低ꎬ阻碍了其工业化应用的推进ꎮ基于此ꎬ主要综述了二氢槲皮素的化学结构及性质㊁生物合成的分子机制㊁生物学活性以及生产工艺的研究进展ꎬ并对未来二氢槲皮素的相关研究趋势进行了展望ꎬ以期为日后二氢槲皮素的生物合成研究提供理论参考ꎮ关键词:二氢槲皮素ꎻ生物学活性ꎻ生产工艺DOI:10.19586/j.2095 ̄2341.2020.0008ResearchProgressonDihydroquercetinDONGLunaꎬCAOHaoꎬZHANGXinyuꎬWANGHaisheng∗GraduateSchoolofChineseAcademyofAgriculturalSciencesꎬBeijing100081ꎬChinaAbstract:DihydroquercetinisanimportantflavonoidcompoundinnatureꎬwhichmainlyexistsintherootofLarixgmeliniiinalpinezone.Ithasbeenwidelyusedinfoodꎬindustryandmedicinefieldsduetoitsgoodbiologicalactivitiessuchasanti ̄oxidationandanti ̄tumor.Howeverꎬatpresentꎬtheindustrialproductionofdihydroquercetinstilldependsontraditionalplantextractionꎬwhichisscarceinrawmaterialsꎬdifficulttoextractandlowinyieldꎬthushinderingtheadvancementofitsindustrialapplication.Basedonthisꎬtheresearchprogressofchemicalstructureandpropertiesꎬmolecularmechanismofbiosynthesisꎬbiologicalactivityandproductiontechnologyofdihydroquercetinweremainlyreviewedꎬandtherelatedresearchtrendsindihydroquercetininthefuturewereprospectedꎬsoastoprovidetheoreticalreferencesforthebiosynthesisresearchondihydroquercetininthefuture.Keywords:dihydroquercetinꎻbiologicalactivityꎻproductionprocess㊀㊀二氢槲皮素(dihydroquercetinꎬDHQ)ꎬ别名花旗松素(taxifolin)ꎮ它存在于多种植物中ꎬ在落叶松中含量较高ꎬ特别是花旗松[1]ꎮ二氢槲皮素最早由日本学者Fukui从针叶植物Chamaecyparisobtusa叶中提取分离ꎬ近年来ꎬ在很多水果中也发现了二氢槲皮素的存在ꎬ如葡萄㊁橘子和西柚等[2]ꎮ二氢槲皮素结构的特殊性ꎬ决定了其具有较强的抗氧化特性[3 ̄6]㊁调节酶活等[7 ̄8]多种生物活性ꎮ因此ꎬ二氢槲皮素在食品㊁药品㊁化妆品等领域均有广泛的应用ꎬ市场需求量巨大ꎮ但是ꎬ目前二氢槲皮素的工业化生产仍然依赖于传统的植物提取ꎬ原料稀缺㊁提取难度大㊁产率较低等缺点阻碍了其工业化应用的推进ꎮ本文主要综述了二氢槲皮素的基本性质和生物合成途径㊁生物学活性和生产工艺ꎬ并对二氢槲皮素以后的研究方向进行了展望ꎬ以期为二氢槲皮素的生物合成研究提供理论参考ꎮ1㊀二氢槲皮素的化学结构与性质二氢槲皮素是自然界中存在的一种重要的二氢黄酮醇类化合物ꎬ属于P族维生素[9]ꎮ它在植物中以苷元或苷2种形式存在ꎬ分子式为C15H12O7(图1)ꎬ相对分子质量为304.25ꎬ其分子. All Rights Reserved.结构中有2个手性碳(C∗2和C∗3)ꎮDHQ在理论上存在4个对映异构体ꎬ绝对构型和CA登记号分别为Ⅰ(C2SꎬC3S)[11003 ̄33 ̄9]㊁Ⅱ(C2SꎬC3R)[153666 ̄25 ̄2]㊁Ⅲ(C2RꎬC3S)[114761 ̄89 ̄6]㊁Ⅳ(C2RꎬC3R)[480 ̄18 ̄2]ꎮDHQ呈淡黄色或无色针状的结晶ꎬ没有任何气味ꎬ熔点为240ħꎬ易溶于乙醇㊁乙酸㊁沸水等溶剂ꎬ稍溶于冷水ꎬ几乎不溶于苯ꎮ图1㊀二氢槲皮素分子式Fig.1㊀Molecularformulaofdihydroquercetin2㊀二氢槲皮素的生物合成途径及关键基因2.1㊀二氢槲皮素的生物合成途径目前ꎬ二氢槲皮素的生物合成过程已基本探明ꎬ涉及到苯丙烷和类黄酮两个阶段(图2)ꎮ在苯丙烷途径中ꎬ在苯丙氨酸解氨酶(phenylalnineammonialyaseꎬPAL)的催化下ꎬ来源于莽草酸途径的苯丙氨酸脱去1个氨基生成肉桂酸ꎻ接着肉桂酸经过肉桂酸羟化酶(cinnamate4 ̄hydroxylaseꎬC4H)的催化作用获得1个羟基ꎬ生成对香豆酸ꎻ在4 ̄香豆酰辅酶A连接酶(coumaryl4 ̄ligaseꎬ4CL)的催化下ꎬ对香豆酸发生硫酯化反应ꎬ生成对香豆酰辅酶Aꎮ1分子的对香豆酰辅酶A和3分子的丙二酰辅酶A在查耳酮合成酶(chalconesynthaseꎬCHS)的催化下进行缩合ꎬ生成柚皮素查尔酮ꎬ它是类黄酮物质合成的起点ꎮ然后柚皮素查尔酮在查尔酮异构酶(chalconeIsomeraseꎬCHI)的催化下生成柚皮素ꎮ类黄酮途径中ꎬ柚皮素在黄烷酮3 ̄羟化酶(flavanone3 ̄hydroxylaseꎬF3H)的催化下生成二氢黄酮醇类物质ꎮ二氢槲皮素可由二氢黄酮醇经类黄烷酮3 ̄羟化酶(flavanone3ᶄ ̄hydroxylaseꎬF3ᶄH)催化生成[10 ̄14]ꎮ同时ꎬ该过程也可先经F3ᶄH催化ꎬ再经F3H催化ꎮ在类黄酮途径中涉及到2个基因F3H和F3ᶄHꎬ它们是二氢槲皮素生物合成途径中的关键基因ꎮ图2㊀二氢槲皮素的生物合成途径Fig.2㊀Biosynthesisofdihydroquercetin722董潞娜ꎬ等:二氢槲皮素的研究进展. All Rights Reserved.2.2㊀F3H基因F3H基因的cDNA最早于1991年从金鱼草(Antirrhinummajus)中分离克隆得到[15]ꎮ到目前为止ꎬ其已在多种植物中被克隆ꎬ如枣(ZiziphusjujubaMill.)㊁紫花苜蓿(Medicagosativa)㊁拟南芥(Arabidopsisthaliana)㊁茶树(Camelliasinensis)等[16 ̄19]ꎮF3H基因以单拷贝形式存在[20]ꎬ在进化上十分保守[21 ̄22]ꎮF3H的作用底物是柚皮素和圣草酚ꎬ它调控着黄酮类物质与花青素苷的合成ꎬ是黄酮类化合物代谢途径中的关键酶之一[23]ꎮ经过对来自矮牵牛的F3H研究表明ꎬF3H是一种单体蛋白ꎬ分子量约为42kDꎬ该蛋白中Ser290㊁His220㊁Arg222和His278等氨基酸残基能够较为明显地对酶活性产生影响[24]ꎮ它主要催化柚皮素C3位的羟基化ꎬ生成二氢山奈酚(dhiydor ̄kaempeforlꎬDHK)ꎬ催化过程需要2 ̄酮戊二酸㊁分子氧㊁铁和抗坏血酸的参与ꎮ此外ꎬ研究表明ꎬ在不同植物或组织中ꎬF3H具有底物特异性[25]ꎮ2.3㊀F3ᶄH基因F3ᶄH基因最早由Brugliera等从矮牵牛(Pe ̄tuniahybrida)中分离得到ꎬ经鉴定属于细胞色素P450亚家族[26 ̄27]ꎮ此后ꎬ相继在拟南芥(Arabidopsisthaliana)㊁矢车菊(Centaureacyanus)㊁金鱼草(Antirrhinummajus)㊁紫茎泽兰(Eupatoriumadenophorum)㊁大豆(Glycinemax)㊁玉米(Zeamays)㊁葡萄(Vitisvinifera)㊁苹果(Malusdomestica)等多种植物中克隆得到了F3ᶄH基因[13ꎬ28 ̄31]ꎮ不同植物F3ᶄH基因的cDNA系列的相似性为69.5%[32]ꎮF3ᶄH可以催化底物为柚皮素(naringenin)和DHK的3ᶄ位置发生羟基化反应ꎬ分别生成花青素和原花青素生物合成所需的重要中间产物圣草酚(eriodictyol)和DHQ[33]ꎮ而花青素和原花青素可以保护植物细胞免受紫外线照射造成的伤害[34]ꎮ将多种植物F3ᶄH蛋白的氨基酸序列比对之后发现ꎬF3ᶄH存在于多种植物中高度保守的细胞色素P450结构域 LPPGP ꎬ它可以使F3ᶄH稳定锚定在微粒体膜上[35]ꎮ3㊀二氢槲皮素的生物学活性3.1㊀二氢槲皮素对肝脏细胞的影响肝脏是人体内的重要器官ꎬ它以代谢功能为主ꎬ并在身体内起着去氧化㊁储存肝糖原以及合成分泌性蛋白质等作用ꎮ肝脏健康对于维持人体健康至关重要ꎮ国内外大量的研究表明ꎬDHQ对肝脏具有较好的保护作用ꎬ对肝脏疾病的治疗有着巨大的潜力[36 ̄40]ꎬ其作用机制包括:①激活或抑制相关酶的活性ꎻ②调节相关转录因子的表达ꎻ③诱导细胞自噬等ꎮDHQ可以通过调节酶活和减少活性氧(reactiveoxygenspeciesꎬROS)的积累来改善机体氧化和血糖过高的现象ꎮ研究发现ꎬDHQ以剂量依赖型的方式抑制对乙酰氨基酚(acetaminophenꎬAPAP)诱导肝细胞坏死ꎬ并抑制乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenaseꎬLDH)的释放ꎬ从而调节细胞外信号末端激酶(extracellularsignal ̄terminalki ̄naseꎬERK ̄JNK)的应激反应ꎮ此外ꎬDHQ还能够减少ROS的积累㊁减轻线粒体的功能障碍等[36]ꎮDing等[37]的研究表明在高脂饮食/链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病(diabeticnephropathyꎬDN)大鼠中ꎬ添加剂量为100mg kg-1 d-1的DHQ可以显著减弱尿微量白蛋白的排泄并稳定血糖水平和脂质代谢ꎬ减轻肾组织的病理学损伤ꎻ在体外研究中ꎬDHQ可以显著抑制细胞增殖和过量的ROS生成ꎬ并减少核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide ̄bindingoligomerizationdomain ̄likereceptorprotein3ꎬNLRP3)炎症小体的激活和肾脏中肾纤维化相关蛋白的表达ꎮ同时ꎬDHQ对酒精性脂肪肝变性及其伴有的炎症也有一定的抑制作用[38]ꎮZhang等[39]研究发现DHQ可以通过激活LKB1基因的表达增强腺苷酸活化蛋白激酶(adenosinemonophosphateactivatedproteinkinaseꎬAMPK)磷酸化来调节胆固醇调节元件结合蛋白SREBP1和乙酰辅酶A羧化酶(acetyl ̄CoAcarboxylaseꎬACC)的表达ꎻDHQ还可以上调SIRT1(负责去乙酰化)的表达ꎬ下调P2X7R(负责促炎因子的合成与释放)和NLRP3等转录因子的表达ꎮ综上所述ꎬDHQ可以通过调节相关转录因子的表达从而起到抑制脂肪生成和保肝的功效ꎬ提示DHQ对酒精性肝脂肪变性具有一定的治疗潜力ꎮDHQ还可以在调节酶活的同时ꎬ介导细胞自噬ꎮChen等[40]利用刀豆球蛋白A(concanavalinAꎬConA)诱导小鼠免疫性肝损伤ꎬ发现DHQ给药显著降低了血清丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶水平ꎬ并提高了ConA处理小鼠的存活率ꎬ证明822生物技术进展CurrentBiotechnology. All Rights Reserved.了DHQ可起到保肝作用ꎻ同时ꎬ研究了DHQ对刀豆球蛋白ConA诱导的小鼠肝损伤的免疫调节作用ꎬ结果表明ꎬDHQ可以通过抑制Caspase ̄3㊁Caspase ̄7和Caspase ̄8(Caspase家族是一类与细胞凋亡有关的蛋白)的活化来保护HepG2细胞免受TNF ̄α/ActD诱导的细胞凋亡ꎮ3.2㊀二氢槲皮素对心肌细胞的影响DHQ还具有降低血压㊁保护心肌缺血再灌注损伤和抑制心肌肥厚等作用ꎮ王秋红等[41]研究发现DHQ能改善大鼠心电图J点的位移ꎬ显著降低心肌缺血大鼠血清中肌酸激酶(creatinekinaseꎬCK)㊁肌酸激酶同工酶(creatinekinaseisoenzymeꎬCK ̄MB)㊁乳酸盐脱氢酶(lactatedehy ̄drogenaseꎬLDH)的含量ꎬ提高心肌组织匀浆中超氧化物歧化酶(superoxidedismutaseꎬSOD)的活力ꎬ降低心肌组织匀浆中脂质过氧化终产物丙二醛的含量ꎬ从而有效抑制异丙肾上腺素(isoprena ̄lineꎬISO)导致的心肌组织缺血ꎬ保护心肌细胞免受损伤ꎬ进而起到治疗冠心病的作用ꎮ而大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的抗氧化实验结果表明ꎬDHQ对离体大鼠缺血/再灌注损伤具有明显的保护作用ꎬ此保护作用可能与DHQ可以减少氧自由基产生㊁提高氧自由基清除㊁降低脂质过氧化损伤有关[42]ꎮ王知斌等[43]同样发现二氢槲皮素对H2O2诱导的H9c2心肌细胞的损伤具有保护作用ꎮ其作用机制可能与其能够提高细胞内抗氧化酶活性㊁增强细胞稳定性有关ꎮ3.3㊀二氢槲皮素对淋巴细胞的影响淋巴细胞在人机体免疫反应中具有关键作用ꎬ而DHQ可以特异地抑制白血病淋巴病细胞的增殖ꎬ从而在一定程度上保护人的免疫系统ꎮDevi和Das[44]研究了多种天然植物中的黄酮类活性物质对人类普通淋巴白血病细胞系MoIt ̄4及其组织分化的成人淋巴细胞系IM ̄9的生长影响ꎮ其中ꎬ当DHQ的浓度为10~50μmol L-1时ꎬ普通淋巴细胞中白介素 ̄2(interleukin ̄2ꎬIL ̄2)的分泌受到抑制ꎬMoIt ̄4细胞中的IL ̄2水平升高ꎬ对IM ̄9细胞没有影响ꎮ而IL ̄2分泌水平与MoIt ̄4细胞的生长抑制率有直接关系ꎬ故这一研究可能成为日后将DHQ等多种天然黄酮类物质开发为治疗急性淋巴白血病药物的依据之一ꎮ3.4㊀二氢槲皮素的抗炎抗氧化作用由于DHQ结构的特殊性ꎬ其抗炎㊁抗过敏㊁止痒作用也得到了广泛研究[45 ̄46]ꎮDHQ能显著对抗二甲苯所致的小鼠耳肿胀ꎬ缓解二硝基氯苯诱导的小鼠过敏反应ꎬ并且能明显减少4 ̄氨基吡啶诱导的瘙痒反应的舔体次数[40]ꎮBorovskaya等[46]研究了DHQ对大鼠前列腺慢性非细菌性炎症模型的作用ꎮ发现施用DHQ之后ꎬ大鼠前列腺中结缔组织的面积减少至初始水平ꎬ这证明了该氧化剂的抗纤维化性质ꎮ此外ꎬDHQ还可以阻止腺泡上皮的萎缩ꎬ如研究发现DHQ的抗氧化能力对神经细胞有保护作用ꎬ可以有效防治阿尔兹海默氏症或帕金森氏病[47]ꎻ通过动物实验也证明了DHQ的抗氧化能力使其具有抗心肌坏死的能力[48]ꎮ3.5㊀二氢槲皮素的抗病毒作用DHQ还被发现对病毒也有一定的抵抗性ꎮDHQ对由柯萨奇病毒B4(CoxsackievirusB4ꎬCVB4)引起的白色小鼠胰腺炎的影响实验表明ꎬDHQ的使用会导致胰腺组织中病毒滴度的剂量依赖性降低[49]ꎮ形态学上ꎬ与安慰剂治疗的小鼠相比ꎬ经过DHQ处理的小鼠的胰腺组织表现出较少的炎性细胞浸润并且没有组织破坏的迹象ꎻ经过利巴韦林和DHQ处理的小鼠产生较少的胰腺炎症病灶ꎬ并且这些病灶包含的浸润细胞少于安慰剂治疗的小鼠[49]ꎮ此外ꎬDHQ的使用还可导致胰腺炎过程中受损的胰腺组织的抗氧化活性的恢复[49]ꎮ研究结果表明了DHQ的高抗病毒活性及其在治疗复杂病毒性胰腺炎中的潜力ꎮ3.6㊀二氢槲皮素对多种细胞内酶的影响DHQ能够激活或抑制多种酶的酶活ꎬ从而产生不同的生理学效应ꎮ研究发现ꎬDHQ可以作为α ̄淀粉酶的新型抑制剂[7]ꎮ利用不同浓度的DHQ处理后ꎬ测定α ̄淀粉酶的酶活ꎬ该化合物的半抑制浓度(inhibitoryconcentrationꎬIC50)接近9mmol L-1ꎬ证明了它具有竞争性抑制的动力学机制ꎻ其抑制常数为(2.25ʃ0.22)mmol L-1ꎬ表明DHQ对酶的高亲和力[7]ꎮ因此ꎬDHQ对研究开发治疗糖尿病的新药具有重要意义ꎮ此外ꎬ不同来源的DHQ对同一种酶的作用也会有所不同ꎮ付警辉等[8]研究了长白落叶松DHQ对酪氨酸酶的抑制作用ꎬ并与兴安落叶松922董潞娜ꎬ等:二氢槲皮素的研究进展. All Rights Reserved.DHQ进行了对比ꎮ结果表明ꎬ质量浓度在0.001~0.01g L-1时ꎬ长白落叶松DHQ对酪氨酸酶的抑制作用高于兴安落叶松DHQꎮ长白落叶松DHQ低质量浓度时ꎬ纯度越高ꎬ对酪氨酸酶的抑制作用越强ꎻ高质量浓度时ꎬ纯度越高ꎬ抑制作用越弱ꎮ而且DHQ对酪氨酸酶表现为竞争性抑制ꎬ抑制常数KI为0.017ꎮ3.7㊀二氢槲皮素的其他活性除了以上活性ꎬDHQ对脑部疾病也有一定的改善作用ꎮPlotnikov等[50]研究发现DHQ可通过改善大鼠大脑皮层的微循环超微结构从而改善脑部微循环ꎬ经过DHQ处理的自发性高血压(spon ̄taneoushypertensionꎬSHR)大鼠视皮层局部的脑血流量显著高于未接受DHQ处理的大鼠ꎬ且接近京都种大鼠(Wistar ̄Kyotoꎬ正常对照)的值ꎮ其原因可能是DHQ在动脉高血压形成期间改善了SHR大鼠大脑皮层的微血管化ꎮ此外ꎬDHQ还具有肠道保护作用ꎬ还可以通过促进骨代谢相关蛋白的表达影响骨代谢等[51]ꎮ4㊀二氢槲皮素的生产工艺虽然DHQ的生物学活性多样ꎬ应用广泛ꎬ但目前其产量仍较低ꎬ生产方式还主要依赖于植物提取ꎬ包括有机试剂萃取㊁乙醇回流㊁超声法㊁微波提取等方法ꎬ提取率较低且不环保ꎮ此外ꎬ还有采用化学试剂进行人工合成等ꎬ但此种方法合成的产物纯度较低且原料成本较高ꎮ随着国际㊁国内市场对于黄酮类物质需求量的快速增长ꎬ迫切地需要研发一种来源限制少㊁生产成本低㊁安全性高和污染排放低的方法进行生产ꎬ而微生物合成法或许可以成为解决该问题的关键方法ꎮ4.1㊀植物提取法由于DHQ主要以游离状态存在于落叶松中ꎬ且含量高达7%ꎬ所以植物提取时主要选取落叶松为原料ꎮ在植物提取早期ꎬ主要采用溶剂提取法将DHQ从植物中提取出来ꎮ金建忠[52]以落叶松为原料ꎬ用80ħ的沸水进行提取ꎬ再进一步将提取液沉淀之后用有机溶剂进行萃取㊁重结晶ꎬ最终的提取率达到0.29%ꎮ而刘妍和王遂[53]分别用水㊁丙酮-水作为提取溶剂从落叶松中提取DHQꎬ通过L9(34)正交实验优化了最佳提取条件ꎬ结果显示以丙酮-水为提取剂的提取量高于以沸水作为提取剂的提取量ꎮ此外ꎬ吸附剂的加入也可提高提取率ꎮ如以落叶松木屑为原料ꎬ以90ħ沸水为溶剂㊁聚酰胺为吸附剂提取DHQꎬ在此条件下DHQ的提取率为0.814%[54]ꎮ后期出现了回流提取法㊁超声-微波法和酶诱导法等多种提取方法ꎮ韩俊凤和贾林艳[55]改进了传统水热提取法ꎬ采用微波辅助预处理来提取落叶松中的DHQꎬ平均提取率为0.981%ꎮ与传统的水热提取法比较ꎬ微波辅助提取效率提高了22.17%ꎮ同时ꎬ也有诸多研究表明ꎬ采用超声辅助提取法可以不同程度地提高DHQ的提取率[56 ̄58]ꎮ苏丹等[59]对热水回流提取法㊁乙醇回流提取法㊁微波提取法和乙醇超声辅助提取法进行了比较ꎬ热水回流提取和乙醇回流提取所用时间较长ꎬ120min其提取率分别为0.17%和0.20%ꎻ微波和乙醇超声提取时间较短ꎬ30min时提取率分别为0.21%和0.22%ꎬ其提取率较前2种方法稍有提高ꎮ此外ꎬWang等[60]采用酶诱导法ꎬ使用因子设计和中心复合设计方法对兴安落叶松木屑中DHQ的提取进行优化ꎮ最优条件为0.5mg mL-1纤维素酶和果胶酶0.5mg mL-1ꎬ在优化条件下DHQ的得率分别增加到(1.06ʃ0.08) ~(1.35ʃ0.04)mg g-1ꎮ可以看出ꎬ随着提取工艺的不断改进ꎬ不再单纯以沸水作为提取试剂ꎬ且提取量有所提高ꎮ植物落叶松的提取工艺的提取率一般在1%~2%ꎬ纯度在95%以上ꎬ可操作性也相对较强ꎬ但是这种工艺对植物资源和各种试剂的浪费较多ꎬ且存在不环保的缺点ꎮ4.2㊀化学合成法为了降低对植物资源的依赖ꎬ拓展DHQ的来源ꎬ各种化学合成的方法也被开发出来[61]ꎬ但在其研发过程中也面临着诸多问题ꎮ孙淑香[62]以甲基氯甲醚为原料采用AFO(algar ̄flynn ̄olyamada)反应法合成了DHQꎬ其回收率约为20%ꎬ但是甲基氯甲醚毒性较大ꎬ已有资料显示接触其蒸汽后催患肺癌的概率很高ꎬ因此ꎬ有学者正在寻找其他酚羟基保护剂做替代品ꎮ也有研究人员采用各种化学试剂(如过钌酸四丙胺盐㊁AD ̄mix ̄α等)利用光延反应法合成DHQꎬ回收率约为30%[63]ꎬ但这些试剂在我国国内市场并不常见ꎬ若不解决这些试剂的获取途径ꎬ则该工艺不具备032生物技术进展CurrentBiotechnology. All Rights Reserved.在国内工业化的价值ꎮ胡昆等[64]将2ꎬ4ꎬ6 ̄三羟基苯乙酮与3ꎬ4 ̄二羟基苯甲醛进行甲氧甲氧基保护羟基㊁羟醛缩合㊁环氧化及脱保护关环反应合成了DHQꎬ但此合成方法的纯度并不高ꎮ此外ꎬ也可将其他天然产物作为原料ꎬ如可以将儿茶素作为原料利用半合成法制备DHQꎬ摩尔回收率约为5%[65]ꎬ但需要注意的是ꎬ儿茶素的市场价格约为1000元 kg-1ꎬ可以计算得出ꎬ该工艺生产二氢懈皮素的成本在20000元 kg-1左右ꎬ远超过提取法的成本ꎮ4.3㊀生物合成法目前基于生物合成法的研究仍处于实验室阶段ꎬ尚未进行大规模生产ꎮLeonard等[66]对大肠杆菌进行代谢工程改造ꎬ在大肠杆菌内异源表达多种黄酮代谢相关的酶类ꎬ当使用黄烷酮为前体分子时ꎬ从工程菌株中生物合成了B环三羟基黄酮醇杨梅素ꎬ并少量检测到多种类黄酮物质的存在ꎮ也有研究表明ꎬ可将茶树类黄酮3ᶄ ̄羟基化酶(F3ᶄH)基因应用于圣草酚㊁二氢槲皮素和槲皮素的生物合成[67 ̄68]ꎮ而本实验室基于二氢槲皮素的生物合成途径ꎬ主要对由柚皮素向二氢槲皮素合成的方向进行了研究ꎬ筛选了3种不同植物来源(大豆㊁茶树㊁银杏)的F3H基因ꎬ并将其在大肠杆菌和酿酒酵母中进行了异源表达ꎬ现已证实均有活性且表达量较高(未发表数据)ꎮ综上ꎬ相较于化学合成法来说ꎬ生物合成法更为环保ꎬ研究潜力较大ꎮ5㊀展望二氢槲皮素作为一种重要的黄酮类化合物ꎬ普遍存在于多种植物中ꎬ由于其在抗炎㊁抗病毒㊁抗氧化等方面的突出作用ꎬ其药理活性正被逐步探究并被广泛应用于保健品㊁药品㊁食品等领域ꎮ2018年3月21日ꎬ欧盟委员会发布了2017/461号法规ꎬ此项法规正式授权了二氢槲皮素提取物可以作为新的食品成分进入欧盟市场ꎮ此外ꎬ二氢槲皮素可用于治疗脑梗及其后遗症㊁脑血栓㊁心脏冠状动脉等疾病ꎬ应用于调节脂代谢㊁抗脂质过氧化㊁抗病毒㊁抗肿瘤等医学领域ꎬ均具有较大的开发潜力ꎮ然而ꎬ二氢槲皮素在研究过程中仍存在以下问题ꎮ①对于二氢槲皮素应用过程中的毒副作用研究甚少ꎬ该物质应用于临床治疗仍需要大量的研究来确保其安全性ꎮ②由于二氢槲皮素水溶性较差ꎬ传统的提取工艺复杂且效率低等一些生产工艺问题ꎬ尚未实现大规模自动化生产ꎬ这种情况使得目前二氢槲皮素单价较高ꎬ在各领域应用中的利用度很低ꎮ当下ꎬ代谢工程㊁合成生物学快速发展ꎬ而二氢槲皮素的基因工程菌株构建的研究报道鲜有报道ꎬ因此构建良好的基因工程菌将是解决其大规模应用的重要途径ꎮ参㊀考㊀文㊀献[1]㊀WANGYꎬWANGWꎬLIAOJꎬetal..Preventionofmacro ̄phageadhesionmolecule ̄1(Mac ̄1) ̄dependentneutrophilfirmadhesionbytaxifolinthroughimpairmentofproteinkinase ̄de ̄pendentNADPHoxidaseactivationandantagonismofGprotein ̄mediatedcalciuminflux[J].Biochem.Pharmacol.ꎬ2004ꎬ67(12):2251-2262.[2]㊀WANGXꎬMENGMꎬGAOLꎬetal..PermeationofastilbinandtaxifolininCaco ̄2cellandtheireffectsontheP ̄gp[J].Int.J.Pharm.ꎬ2009ꎬ378(1-2):1-8.[3]㊀MAROZIENAꎬKLIUKIENRꎬŠARLAUSKASJꎬetal..Inhi ̄bitionofphthalocyanine ̄sensitizedphotohemolysisofhumane ̄rythrocytesbypolyphenolicantioxidants:descriptionofquanti ̄tativestructure ̄activityrelationships[J].CancerLett.ꎬ2000ꎬ157(1):39-44.[4]㊀YUNBSꎬLEEIKꎬKIMJPꎬetal..Lipidperoxidationinhib ̄itoryactivityofsomeconstituentsisolatedfromthestembarkofEucalyptusglobulus[J].Arch.Pharm.Res.ꎬ2000ꎬ23(2):147-150.[5]㊀HARAGUCHIHꎬMOCHIDAYꎬSAKAISꎬetal..ProtectionagainstoxidativedamagebydihydroflavonolsinEngelhardtiachrysolepis[J].Biosci.Biotech.Bioch.ꎬ2014ꎬ60(6):945-948.[6]㊀NAKAYAMATꎬYAMADAMꎬOSAWATꎬetal..Suppressionofactiveoxygen ̄inducedcytotoxicitybyflavonoids[J].Biochem.Pharmacol.ꎬ1993ꎬ45(1):265-267. 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一种从落叶松中制备二氢槲皮素的方法[发明专利]
专利名称:一种从落叶松中制备二氢槲皮素的方法
专利类型:发明专利
发明人:祖元刚,杨磊,祖柏实,马春慧,黄金明,孙震,刘婷婷,郝婧玮,王涵
申请号:CN201010184375.X
申请日:20100527
公开号:CN101851221A
公开日:
20101006
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:一种从落叶松中制备二氢槲皮素的方法,其特征在于:以落叶松木粉为原料,用乙醇溶液回流提取一次,过滤得提取液,将强酸性离子交换树脂和含氯溶剂加入提取液中,回流水解使结合态二氢槲皮素转化为游离态二氢槲皮素,反应结束后分离出含氯溶剂相,浓缩至干,重结晶后得到产品。
本操作工艺的主要特点为能耗少,水解和萃取同时完成,生产成本低,得率高;强酸性离子交换树脂催化水解过程无污染,所有溶剂均可回收使用,便于工业规模化生产。
申请人:东北林业大学,祖元刚
地址:150040 黑龙江省哈尔滨市和兴路26号东北林业大学
国籍:CN
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《落叶松木中二氢槲皮素提取纯化工艺研究》
《落叶松木中二氢槲皮素提取纯化工艺研究》一、引言二氢槲皮素是一种具有广泛生物活性的天然化合物,其独特的化学结构及生理功能使其在医药、保健、化妆品等领域具有重要应用价值。
近年来,随着人们对天然产物的深入研究,从植物中提取纯化二氢槲皮素已成为研究热点。
落叶松木作为一种重要的林木资源,其富含二氢槲皮素,因此研究其提取纯化工艺具有重要意义。
本文将就落叶松木中二氢槲皮素的提取纯化工艺进行详细研究,以期为相关领域提供参考。
二、材料与方法1. 材料本实验所使用的落叶松木采自我国北方地区,经过粉碎、筛分后得到实验所需的原料。
二氢槲皮素标准品购自国内外知名供应商。
2. 方法(1)提取工艺:采用不同溶剂对落叶松木进行浸泡、渗漉等操作,比较不同溶剂对二氢槲皮素提取效果的影响,确定最佳提取工艺。
(2)纯化工艺:通过吸附、洗脱、结晶等方法对提取液进行纯化,比较不同纯化方法对二氢槲皮素纯度的影响,确定最佳纯化工艺。
(3)分析方法:采用紫外分光光度法、高效液相色谱法等方法对二氢槲皮素的含量及纯度进行测定。
三、结果与分析1. 提取工艺结果与分析通过比较不同溶剂对二氢槲皮素的提取效果,发现乙醇溶液对二氢槲皮素的提取效果最佳。
在适宜的浓度和浸泡时间条件下,二氢槲皮素的提取率可达到较高水平。
同时,通过对浸泡、渗漉等操作条件的优化,可进一步提高二氢槲皮素的提取率。
2. 纯化工艺结果与分析在纯化过程中,采用大孔吸附树脂、硅胶等吸附剂对提取液进行吸附、洗脱等操作。
通过对不同纯化方法的比较,发现结合大孔吸附树脂和硅胶的纯化方法对二氢槲皮素的纯度提高效果最佳。
在适宜的洗脱剂浓度和洗脱时间条件下,二氢槲皮素的纯度可达到较高水平。
同时,通过对结晶条件的优化,可进一步得到高纯度的二氢槲皮素。
3. 二氢槲皮素含量及纯度分析采用紫外分光光度法、高效液相色谱法等方法对二氢槲皮素的含量及纯度进行测定。
结果表明,经过优化后的提取纯化工艺,二氢槲皮素的含量及纯度均得到显著提高。
落叶松中二氢槲皮素提取工艺研究
落叶松中二氢槲皮素提取工艺研究
王宇;王遂
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2009(030)024
【摘要】采用分光光度法,以二氧槲皮素为标准品,测定落叶松中二氢槲皮素提取率.以浸取法为提取方法,通过L_9(3~4)正交试验设计,考察了提取条件与二氢槲皮素提取率的关系.结果表明,落叶松中二氢槲皮素的最佳提取工艺为乙醇体积分数30%、提取温度40℃、料液比1:20(g/m1)、提取时间120min.
【总页数】3页(P141-143)
【作者】王宇;王遂
【作者单位】哈尔滨师范大学化学化工学院,黑龙江,哈尔滨,150025;哈尔滨师范大学化学化工学院,黑龙江,哈尔滨,150025
【正文语种】中文
【中图分类】Q946.833
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二氢槲皮素的提取及抗氧化性研究
q e c t n df r n a s W v la e . e a t xd n y e g f Vc u r ei i i e e tf t a e a u t d Th n i i a ts n r y o ,BH n s o T,ED n i c a i n dh d o q e c t a TA a d c t c d o i y r u r ei W i r n s c mp r d R s l n ia e h tte o t lc n i o s o t r s a ig W s f l w :e ta t n t mp r t r a 0 ,l u d o a e . e u t i dc t d t a h p i o d t n fwae o k n a a ol s xr ci e e au e w s 9 ℃ s ma i s o o i i q
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A bsr c Di d o ue c i s e ta td fo lr h wih wa e n a t n — tra x r ci ov n e pe tv l .Th ptmum t a t: hy r q ret wa xr ce rm a c t t ra d ceo e wae s e ta t n ng s le tr s cie y eo i
一种从落叶松树根提取二氢槲皮素的方法
专利
01 专利背景
03 附图说明 05 实施方式
目录
02 发明内容 04 权利要求 06 荣誉表彰
《一种从落叶松树根提取二氢槲皮素的方法》是沈立乾于2012年10月25日申请的专利,该专利的公布号为 CNA,授权公布日为2013年2月13日,发明人是王彦军、郑毅男、沈立国、沈阳、沈立乾。
《一种从落叶松树根提取二氢槲皮素的方法》包括以下步骤:
①、原材料选定:选定的落叶松树根中二氢槲皮素含量在2.9%-3.9%之间;
②、原材料清理、清洗:将选定的落叶松树根锯掉、弃去根须,高压水枪冲洗泥沙,然后风干,在相对湿度 65%条件下避光存放;
③、原材料处理:将步骤②中存放的原材料破碎成木屑,粒度为3x3x6毫米,比表面积约为16,纤维间有撕 裂状态。
二氢槲皮素属黄酮类,被命名为维生素P,是一种强抗氧化剂,可阻止人体内活性氧(自由基)的活动,具有 抗辐射、解毒、抗体逆流的作用,能抑制过酸氧化脂化合物和细胞膜的病变。植物提取物属非合成类。
二氢槲皮素的用途包括:
①、黄酮类比较:紫杉醇、原花青素、银杏叶素、沙棘素、芦丁、桑色素、橙皮苷、槲皮素等在医学保健、 治疗中得到认识和应用,但二氢槲皮素除治疗作用外,在防病方面的超强,医学研究证明,人吸入体内的氧气有 98%被正常利用,但2%被转变为化学反应极其活跃的自由基,又称活性氧,其对生命来说是剧毒物质,由于自由 基的存在致使人的肌体免疫能力下降,器官提前老化,循环系统衰退,而二氢槲皮素的存在可阻止自由基活动和 由此产生的破坏作用。从药理学方面讲,它是一种强抗氧化剂、抗辐射剂,具有再生、解毒和抗体逆流的作用, 能抑制过酸氧化脂化合物和细胞膜的病变。
实施例1 设备:0.5立方米热回流提取罐、100升/小时真空吸入单效外循环蒸发器、100升水解罐、100升萃取罐、 ZG—5真空干燥箱、2BV5121水环真空泵。50升重结晶罐。 原料:3千克、二氢槲皮素平均含量3.3%,来自伊春美溪林场的树根,树龄38—42年之间的间伐区。 原材料清理、清洗:将选定的落叶松树根原材料锯掉、弃去根须,高压水枪冲洗泥沙,然后风干,在相对湿 度65%条件下避光存放; 原材料处理:将步骤③中存放的原料破碎成木屑,粒度为3x3x6毫米,比表面积为16,纤维间有撕裂状态; 操作过程: 1、将3千克物料投入提取罐,加入31千克去离子水和乙腈体积比为1:1的混合溶剂,提取罐加热至60℃时恒 温静浸1小时。 2、提取液在真空的作用下抽入与之配套的单效蒸发器,提取罐一级冷凝器开始工作,当提取液50%进入蒸发 器后,关闭真空阀门。
二氢槲皮素抗炎抗过敏止痒作用的活性研究
二氢槲皮素抗炎抗过敏止痒作用的活性研究蔡华君;郑毅男;刘文丛【摘要】目的研究二氢槲皮素抗炎、抗过敏、止痒的作用.方法利用二甲苯致小鼠耳肿胀法,观察其抗炎作用;利用2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导小鼠迟发性超敏反应(DTH),观察其抗过敏作用;利用4-氨基吡啶(4-AP)诱导小鼠皮肤过敏性瘙痒,观察其止痒作用.结果二氢槲皮素能显著对抗二甲苯所致小鼠耳肿胀和降低DNCB诱导的小鼠过敏反应有显著改善作用,并且能明显减少4-AP诱导的瘙痒反应的舔体次数.结论二氢槲皮素有显著的抗炎、抗过敏、止痒作用.【期刊名称】《人参研究》【年(卷),期】2015(027)003【总页数】4页(P32-35)【关键词】二氢槲皮素;抗炎;抗过敏;止痒【作者】蔡华君;郑毅男;刘文丛【作者单位】吉林农业大学中药材学院吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院吉林长春·130118【正文语种】中文黄酮类化合物广泛存在于植物界,其化学活性具有清除皮肤中自由基、促进皮肤新陈代谢、减少色素沉着、润泽肌肤等作用[1]。
在国外,含有植物类黄酮具有抗衰老、抗炎、美白或皮肤再生功效的化妆品[2~8]越来越受到人们的青睐;在国内,已产业化开发出许多植物黄酮类提取物,如银杏提取物、竹叶提取物、甘草黄酮、大豆异黄酮等[9]。
二氢槲皮素作为一种重要的黄酮类化合物存在于多种植物中[l0],它在落叶松中含量较高,特别是在花旗松中。
近年来,在水果中也发现了二氢槲皮素的存在,特别是葡萄、橘子和西柚中[11]。
现今经研究发现,二氢槲皮素具有抗肿瘤[12~14]抗氧化[15~18]抗辐射[19]抗病毒[20~21]抗心血管系统疾病及改善毛细血管微循环、改善脑部血液循环、抗血小板凝聚等作用[22],且已用于治疗脑梗及其后遗症、脑血栓、心脏冠状动脉等疾病。
但对于二氢槲皮素抗炎、抗过敏、止痒方面的研究还没有报道,因此,本研究从抗炎、抗过敏、止痒对二氢槲皮素进行药理活性实验研究。
从落叶松根中提取二氢槲皮素可研报告
从落叶松根中提取二氢槲皮素可行性研究报告一、总论1.1项目名称:大兴安岭林区从落叶松中提取高纯度(95%以上)二氢槲皮素可行性研究1.2拟建规模:年产二氢槲皮素30吨1.3建设性质:新建1.4建设地点:加格达奇工业园区1.5项目设计依据:专利发明1.6项目设立的宗旨:一是项目符合国家产业政策,具有低碳、环保、节能等特点,属节能环保类。
二是项目所使用原料为,100年以上兴安落叶松的根部高度0-100厘米部分,主要存在于原条墩根中,少占用木材,属废物利用。
三是项目属高科技,产出比大,消耗原料少,产值利润高。
四是开创大兴安岭以兴安落叶松为原料,生产林化产品的新纪元。
1.7经营范围:(1)范围:主要生产95%高纯度二氢槲皮素;同时生产副产品阿拉伯半乳聚糖、落叶松油(2)规模:年产30吨二氢槲皮素;200吨阿拉伯半乳聚糖;50吨落叶松油1.8主要经济技术指标表一,主要经济技术指标二、项目背景及建设的必要性分析2.1项目背景二氢槲皮素又称花旗松素或紫杉叶素,属维生素p。
是一种二氢酮醇类化合物。
俄罗斯和美国药典中都收录有二氢槲皮素。
二氢槲皮素在植物中的含量偏低,主要植物资源是西伯利亚落叶树(花旗松),多分布于俄罗斯西伯利亚地区,其他地区少见。
或有通过化合物合成的二氢槲皮素,因程序复杂,成本较高,无法达到工业化生产要求。
目前中国医药领域所使用的二氢槲皮素主要来自于俄罗斯和美国,因为供需差距较大,价格较为昂贵,这也进一步阻碍了它的工业化生产和应用。
(1)国内外研究现状二氢槲皮素在落叶松中的含量约在0.3~5.7%左右,二氢槲皮素最早由日本学者Fukui从针叶植物Chamaecyparis obtusa(Sieb. et Zucc.) Endl.叶中提取出来,为一种葡萄糖苷的苷元。
随后他又研究了它的3-O-葡萄糖苷在针叶植物中的分布以及细菌存在下苷键的水解。
以后又有人从多种植物中分离出二氢槲皮素及其衍生物,在植物中以苷元或苷两种形式存在。
二氢槲皮素的研究进展
OH
Moloney鼠 白血球 增 多症 病 毒 的 反转 录酶 活 性 表现
出极 高 的 抑 制 效 应 ;Biziagos l 等 人 采 用 培 养 的肝
炎 A病 毒 (HAV)cF53,研究 了二 氢槲 皮 素对 感染 和
细胞抗 体 的效 应 ,发 现 可 以抑 制 对 加 入感 染 细胞 引
本文着 重从 二氢槲 皮 素的结 构功 能 、检 测手段 、 提取 方法 和应用 开发等 四个 方面 的研究 进展 对其 进 行 阐述 。
物 理性 质 :淡 黄色 粉 末 ,无 色 针状 结 晶 (50% 乙 醇 ),熔 点 240 ̄C。易 溶 于 乙 醇 、乙酸 、沸 水 等 溶 剂 , 稍 溶 于冷水 ,几乎 不溶 于苯 。
l 结构 与 功能
1.1 化 学 结构及 性质 二 氢槲 皮 素 (dihydroquercetin),别 名 紫 杉 叶 素 (taxifolin),也 叫 作 黄 杉 素 、花 旗 松 素 、双 氢 栎 精 或 (2R,3R)一二 氢槲 皮 素 ,是 自然 界 中存 在 的一 种 重 要 的二 氢黄 酮 醇类 化 合 物 ,属 于 维 生 素 PP族 】 。 分 子式为 c 5HI2O7,分 子量 为 304.25,CAS:480—18 — 2,分子式 如 图 1所示 。
第 二 十 一卷 第 二 册 2011年 4月
· 综 述 ·
口 腔 护 理 用 品 工 业 ORAL CARE INDUSTRY
二 氢槲 皮 素 的研 究进展
张宏 伟
郑 伟
(黑龙江省科学院高技术研究院 哈尔滨 150000)(黑龙江省轻工科 学研究 院 哈尔滨 150010)
摘 要 :本 文从 四个 方 面对 二 氢槲 皮 素 的研 究进 展 进 行 了详 细 的 阐述 。 首 先 ,研 究 表 明二 氢槲皮素具有抗肿瘤 、抗氧化 、抗病毒 、抗心血 管 系统 疾病等 生物活性作 用。其 次 ,采 用 薄层 扫 描 法 、分 光 光 度 法 、高效 液 相 色谱 法 、反 相 高 效 液相 色谱 法 和 高 效 液 相 色 谱 一质谱联用法等不 同方法检测二氢槲 皮素 的含 量。再次 ,从剌玫 蔷薇和 落叶松 中提 取二氢槲 皮素的工艺研 究。最后 ,介绍 了二氢槲皮素在食品 、医药和 工业等方面的应 用 开 发 。 深 度 开 发 二 氢槲 皮 素 ,不 但 可 以产 生 可 观 的 经 济 效 益 和 社 会 效 益 ,而且 还 可 以 大 大提 高人 类 健 康 水 平 。
落叶松中二氢槲皮素提取工艺优化及其纯化的研究
的质量浓度 × 平衡溶液体积) 10 × 0%
12 1中的回归方程 ,计算二氢槲皮素含量。 .. 123 二氢槲 皮 素 的提 取 ..
将落 叶松木 屑粉 碎 ,取 2 0目以上作 为实 验原 料 ,以不 同料 液 比在 水 浴条 件 下 加 热 原料 ,提取
一
2 结 果 与 分 析
a l w x a t n t p r uew s 0 ,sl —l ud r i w s1: ( / ) x at n t ew s 0 i ,e — s l :e t c o m ea r a 9 % o f o r i e t od i i ao a i q t 1 g mL ,e t c o m a 4 m n x 2 r i i
12 1 标 准 曲线 的绘 制 .. 采用 R P—H L P C法 ,以二 氢 槲皮 素 标 准
品在 2 8 m下 测 定 峰 面积 , 以质 量浓 度 Y ( g 8n m/
m )对 峰 面积 x绘 制标 准 曲 。 L 122 样 品溶液 中二氢 槲皮 素含 量 的测定 .. 对 样 品 提 取 液 定 容 ,测 定 峰 面 积 ,代 人
量 。沉 淀部 分烘 干后 称重 。 1 2 4 2 树脂 纯化 法 .. . 取 等量 预处 理好 的树脂 于
制 备分 离液 相 ,但 纯 化 成 本 高 。 国 内外 也有 报 道
用 聚 酰胺 吸附 法 纯 化二 氢 槲 皮 素 。本 实 验 研
锥 形 瓶 中 ,分 别 准 确 加 入 等 量 落 叶 松 水 提 浓 缩 液 ,置 于恒 温 摇 床 中速 振 荡 2 h 4 ,取 样 测 定 平 衡 溶 液 中 二 氢 槲 皮 素 含 量 ,得 到 吸 附 量 和 吸 附
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从落叶松根中提取二氢槲皮素可行性研究报告一、总论1.1项目名称:大兴安岭林区从落叶松中提取高纯度(95%以上)二氢槲皮素可行性研究1.2拟建规模:年产二氢槲皮素30吨1.3建设性质:新建1.4建设地点:加格达奇工业园区1.5项目设计依据:专利发明1.6项目设立的宗旨:一是项目符合国家产业政策,具有低碳、环保、节能等特点,属节能环保类。
二是项目所使用原料为,100年以上兴安落叶松的根部高度0-100厘米部分,主要存在于原条墩根中,少占用木材,属废物利用。
三是项目属高科技,产出比大,消耗原料少,产值利润高。
四是开创大兴安岭以兴安落叶松为原料,生产林化产品的新纪元。
1.7经营范围:(1)范围:主要生产95%高纯度二氢槲皮素;同时生产副产品阿拉伯半乳聚糖、落叶松油(2)规模:年产30吨二氢槲皮素;200吨阿拉伯半乳聚糖;50吨落叶松油1.8主要经济技术指标表一,主要经济技术指标二、项目背景及建设的必要性分析2.1项目背景二氢槲皮素又称花旗松素或紫杉叶素,属维生素p。
是一种二氢酮醇类化合物。
俄罗斯和美国药典中都收录有二氢槲皮素。
二氢槲皮素在植物中的含量偏低,主要植物资源是西伯利亚落叶树(花旗松),多分布于俄罗斯西伯利亚地区,其他地区少见。
或有通过化合物合成的二氢槲皮素,因程序复杂,成本较高,无法达到工业化生产要求。
目前中国医药领域所使用的二氢槲皮素主要来自于俄罗斯和美国,因为供需差距较大,价格较为昂贵,这也进一步阻碍了它的工业化生产和应用。
(1)国内外研究现状二氢槲皮素在落叶松中的含量约在0.3~5.7%左右,二氢槲皮素最早由日本学者Fukui从针叶植物Chamaecyparis obtusa(Sieb. et Zucc.) Endl.叶中提取出来,为一种葡萄糖苷的苷元。
随后他又研究了它的3-O-葡萄糖苷在针叶植物中的分布以及细菌存在下苷键的水解。
以后又有人从多种植物中分离出二氢槲皮素及其衍生物,在植物中以苷元或苷两种形式存在。
美国专利(US2744919A)介绍了用水或极性稍大的醇或酮从树皮中提取二氢槲皮素,减压浓缩溶剂得到一种含有单宁、糖类和有色物质的粗提物,然后用低极性的醇、酮或醚萃取,脱除溶剂后的膏状物用热水进行结晶纯化制得二氢槲皮素粗品。
此法溶剂萃取后得到的浸膏溶液含有较多杂质,在结晶的过程中纯度提高不明显且结晶次数较多。
俄罗斯专利(RU2184561C1)介绍了一种以落叶松木粉为原料提取二氢槲皮素的方法,将木粉与有机溶剂混合加热到110~120℃提取,冷却后过滤,减压浓缩溶剂直10%,调节滤液PH值直5~6,90~98℃加热使苷水解为苷元的形式,然后在酸性条件下结晶得到粗产品。
此方法虽然提高了二氢槲皮素的收率,但没有经过萃取操作,很难提高结晶后的纯度。
公开号为CN101333203和CN101333204的中国专利介绍了一种从落叶松木屑中制备二氢槲皮素的方法,将落叶松木屑和乙醇溶液加入到提取罐中充分搅拌混合,两者的加入量为落叶松木屑50公斤、50%乙醇溶液500~800升,提取后过滤,经第二次提取,合并滤液,萃取,收集有机溶液,用真空蒸发器减压蒸馏有机相至干,按重量份数10∶1用热水溶解残留物,用活性炭脱色,在3-5℃温度下结晶,析出二氢化槲皮素产品,再经真空干燥、粉碎为成品。
此法所用的落叶松木屑由于颗粒较小且不均匀,造成过滤操作的诸多不便;由于木屑质量较轻,浮于溶剂上方,在搅拌和浸泡过程中需要消耗大量的溶剂,给后续减压蒸馏增加了溶剂回收的负担。
公开号为CN101054369的专利介绍了一种从黄杞叶中提取分离二氢槲皮素的方法,以黄杞叶为原料,通过提取、浓缩、柱层析、结晶、水解,得到一种针状结晶,类白色的二氢槲皮素。
此法所用柱层析成本高,生产周期长。
东北林业大学一项新研究成果以兴安落叶松为原料,用乙醇溶液回流提取一次,过滤得提取液,将强酸性离子交换树脂和含氯溶剂加入提取液中,回流水解使结合态二氢槲皮素转化为游离态二氢槲皮素,反应结束后分离出含氯溶剂相,浓缩至干,重结晶后得到产品。
其特点是采用离子交换树脂作为固体酸用于结合态二氢槲皮素水解过程,效率高,比液体酸更环保,易于实现清洁生产;水解和萃取同时进行,有效地避免了二氢槲皮素因强酸条件的降解,节省操作工序和溶剂的使用量,生产成本低,得率高。
(2)国内外生产现状由于化学合成方法成本高,产量低无法进入工业化生产。
而从植物中提取,原料又受到影响,只有俄罗斯形成了工业化生产,但因技术应用和投资成本的限制,产量也仅在年5吨左右,部分出口到美国。
目前中国国内的研究主要局限在实验室研究,并无工业化生产,而工业化应用也还没有进入工厂,这多少限制了工业化进程。
具备5吨二氢槲皮素生产能力的俄罗斯科学院生物仪器研究所叶.阿.别尔缅科夫所长来到大兴安岭考察,经现场采集样品并回到俄罗斯研究所化验,提取到90%纯度时含量达3%以上,证明了植物原料中国的存在。
二氢槲皮素在中国、在大兴安岭存在工业化生产的原料基础。
(3)原料具体研究成果兴安落叶松中二氢槲皮素含量情况东北林业大学有比较深入的研究。
二轻槲皮素在兴安落叶松中的含量可媲美于西伯利亚落叶松,树高0-600厘米处含量皆较高,高峰出现在0厘米处,100厘米后变化较大。
横截面树皮和边材含量较少,主要集中在心材,髓心部分含量相对较少,但较边材多。
多集中于秋材。
以树根优等为佳,腐朽部分含量少。
树龄越大,含量越高,以100年以上为宜。
在枝叶中也有含量,在一级枝上有发现,但含量不多。
针对大兴安岭区域情况,分别在漠河、松岭取样试验,二轻槲皮素含量没有大的变化。
高度0-100厘米处重量比在3.0%-3.4%之间。
大兴安岭是祖国最北部边疆,位于北纬50010'至53033',东经121012'至127000'。
经营总面积822.46万公顷,林业用地760.79万公顷,有林地面积665.11万公顷。
活立木总蓄积5.27亿立方米,年增长量978.44万立方米,可采蓄积1.26亿立方米。
其中兴安落叶松占66.38%,白桦占26.77%,以及樟子松、杨柳木等用材树种。
虽然,大兴安岭十二五规划年产量大幅调减,仅60.3万立方米,但按墩根10%、落叶松占70%计算,可产生4.4万立方米原料。
这些原料中,若有30%的选择余地,仅墩根一项足可以满足30吨二氢槲皮素生产的需求。
2.2应用与市场需求预测二氢槲皮素的应用相当广泛,在食品工业、医药行业、工业领域中,都有应用的深入研究。
(1)理化性质。
二氢槲皮素因其分子结构比槲皮素多两个氢原子而得名。
外观为白色粉末,没有任何气味,不溶于苯、乙醚等极性溶剂,易溶于乙醇、乙醚等,易溶于热水,再冷水中的溶性也较好,这也是二氢槲皮素发挥生理活性的主要原因。
(2)生物学特性。
一是能通过调节酶的活性而影响脂肪的代谢。
抑制肝脏中的脂肪合成;对肝癌细胞中胆固醇的酯化以及三脂酰甘油和磷脂的合成具有明显抑制作用;有效激活磷酸二酯酶。
二是对淋巴细胞的作用较大,可抑制淋巴细胞病变。
三是可以有效地抑制鳞状癌细胞和白血病细胞的生长。
四是具有明显的抗氧化作用。
经研究,二氢槲皮素的抗氧化力是广泛使用的槲皮素的3-5倍。
五是减少肠蠕动,抑制醛糖还原酶,还原细胞色素C,对线粒体氧化呼吸链产生抑制,降低血脂,保护血管壁,消炎,保护肠胃的作用。
(3)现实应用。
一是食品工业,即食品添加剂。
利用它的抗氧化能力,特别在大剂量试验中未发现它对胎儿致畸、致突变、致过敏作用,可用于植物油、动物脂肪、干奶粉、含脂肪的糖果心儿中,可延长其有效期2-3倍,并改善食品性能;二是制药业。
如人的循环系统的治疗,即增强血管壁的弹性;如制造治疗因照射、放射性后果的药,制造延缓衰老药,治疗遗传异常药及提高免疫功能药,制造治疗高血压药等;抑制癌细胞并致使癌细胞间互杀,且对正常细胞无影响;抗病毒、消炎明显。
同时可以作为制药的中间原料。
三是工业用。
用于抗震、稳定剂、颜料漆的抗氧化剂、火箭燃料、发动机油脂添加剂等等。
(4)市场需求。
虽然因原料和生产工艺问题,二氢槲皮素未能进行大量生产,但他的抗氧化能力和广泛应用价值,吸引科学家在生产和应用领域不断深入研究,取得了众多成果,也逐渐被人们所认识。
世界上,只有美、俄两个国家以二氢槲皮素为原料开发出了药用、食用等多种产品,而生产技术则主要以俄罗斯比较成熟,且形成小批量工业化生产,年产量5吨,目前世界产量也不超过10吨。
往往制药工业用槲皮素代替二氢槲皮素,其效果也明显有差别,因此二氢槲皮素的价格居高不下,在俄罗斯市场上公斤售价可达1500美元。
二氢槲皮素在世界上蕴含着巨大的市场。
纵观问题根源,其主要的制约因素是产量的限制,其产量受限的根本原因则是原料的限制。
独特的大兴安岭环境,造就了丰富的原料资源,同时还是废物利用,又蕴含了巨大的价值,这一项目实施建设,并将为人类做出巨大的贡献。
三、项目建设条件和厂址选择3.1原料供应条件本项目所需原料主要有100年以上落叶松的树根,根高0-100厘米处,6000-10000立方米。
大兴安岭境内有足够的原料保障。
需要蒸馏水7万立方米;乙醇700吨。
其他溶剂即凝结型强酸性离子交换树脂、1,2二氯乙烷适量。
这些原料在国内市场均可以采购。
3.2交通运输加格达奇位于大兴安岭南部,是地区首府所在地,是全区的政治、经济、文化、交通中心。
西北与内蒙古大兴安岭相接,其与大兴安岭环境条件相当,同时能为生产提供所需的原料。
境内铁路、公路四通八达,去省城哈尔滨火车仅需12个小时,而乘汽车也仅需8个小时,交通十分便利。
3.3厂址条件3.3.1给水、供电:项目建设在工业园区内,水电统一供应。
其中水主要是生活用水,用水量较小;而用电量相对较大,在园区内有独立的变电设备,能够满足用电需求。
3.3.2供暖:地区引资14亿元改造加格达奇统一供暖网线,目前已立项建设。
届时,将完成统一供暖建设,享受集中供暖条件。
在统一供暖之前,仅需上一台0.5-1吨锅炉,完全可以满足供暖要求。
3.3.3厂址选择:建厂需土地面积5000平方米。
其中厂房面积2000平方米,库房面积1000平方米,办公用地500平方米。
其他为公用或绿地面积。
厂址设在加格达奇工业园区内。
四、技术方案本项目包括六条生产线,包括二个贮备库,三个去皮及原料粉碎车间、六个反应车间、六个成品制备车间4.1产品方案4.1.1规模:成品产量年30吨;月工作25天,日产成品100公斤。
4.1.2包装:二氢槲皮素采取精包装,5公斤一袋;落叶松油5公斤一桶;阿拉伯半乳聚糖25公斤一袋。
4.1.3工艺流程:乙醇含氯溶剂原料—去皮——粉碎——萃取——水解——分离——干燥——成品强酸性树脂4.1.4设备:去皮机、粉碎机、萃取罐、真空蒸汽罐、水解罐、分离罐、干燥装置、包装机、储液罐。