二氢杨梅素的抑菌性能研究及其与苯甲酸钠的比较

二氢杨梅素的抑菌性能研究及其与苯甲酸钠的比较
熊伟;李雄辉;王慧宾;袁菊如;王金昌
【摘要】对二氢杨梅素的抑菌性能进行初步研究,结果表明:二氢杨梅素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌和白色念珠菌6种菌均有一定的抑制作用,二氢杨梅素对各菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为0.625、0.313、0.625、0.313、1.250mg/m L和0.313mg/m L,最低杀菌浓度(MBC)分别为2.5、2.5、2.5、2.5、10.0mg/m L和2.5mg/m L。

同时,对二氢杨梅素与苯甲酸钠的抑菌和杀菌效果进行对比,结果表明:二氢杨梅素对大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、白色念珠菌3种菌的抑菌和杀菌效果要明显高于苯甲酸钠,而对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌3种菌的抑菌和杀菌效果则与苯甲酸钠相当。

【期刊名称】《生物化工》
【年(卷),期】2016(000)001
【总页数】3页(P12-14)
【关键词】二氢杨梅素;抑菌;最小抑菌浓度;最小杀菌浓度
【作者】熊伟;李雄辉;王慧宾;袁菊如;王金昌
【作者单位】江西省科学院应用化学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.3
藤茶，学名显齿蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata)，为葡萄科蛇葡萄属（Ampelopsis）的一种野生木质落叶藤本植物，主要分布于我国湖南、湖北、云
南、贵州、广东、广西和福建等省区。

藤茶具有抑菌、降血脂、降血压、抗氧化、降血糖、保肝护肝以及减轻乙醇中毒等功效[1-7]，研究表明，藤茶中发挥药理作用的主要化学成分为黄酮类化合物[8，9]，而二氢杨梅素则为藤茶中的主要黄酮类成分。

本文系统研究了二氢杨梅素对常见6种致病菌的抑制作用，得出其最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC），并与传统抗菌药苯甲酸钠进行了抑菌效果对比，为新型食品天然防腐剂的进一步研究与开发提供依据。

1.1 实验材料
二氢杨梅素，实验室自提并纯化，经HPLC检测纯度为95%以上；苯甲酸钠，分析纯,中国医药（集团）上海化学试剂公司。

1.2 供试菌种
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、副伤寒沙门氏菌（Salmonella paratyphi）、绿脓杆菌（Pseu-domonas aeruginosa）、枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）和白色念珠菌（Candida albicans），以上菌种均由江西省科学院微生物研究所提供。

1.3 实验仪器
JM-10002天平（余姚市纪铭称重校验设备公司）；NC202-9电热型恒温干燥箱（江西电热设备厂）；恒温培养箱（常州中捷实验仪器制造有限公司）；手提式高压蒸汽灭菌锅（嘉兴中新医疗仪器有限公司）；超净工作台（苏州苏洁净化设备公司）。

1.4 培养基
本实验采用LB培养基，培养基的制备方法为：酵母提取物5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂20g，定容于1 000mL，采用氢氧化钠调结pH值为7.4～7.6，分装，121℃条件下灭菌20min，备用。

1.5 菌悬液的制备
将供试菌种移入相对应的试管斜面培养基，于37℃下培养18～24h，用接种环挑取少许菌体，放入装有无菌水的试管内，振动摇匀，制成菌悬液。

采用比浊法计数，调整菌悬液浓度，使其含菌数约为107 个/mL，备用。

1.6 抑菌实验
1.6.1 滤纸片法测定抑菌作用
取直径为6mm的滤纸片放入配好的浓度为10%的二氢杨梅素溶液中浸泡6h，取出置于真空干燥箱中灭菌干燥。

将各种供试菌悬液取0.2mL分别注入直径为
120mm的无菌培养皿中培养，再倒入20.0mL LB培养基，混匀后冷却成含菌平板，然后用无菌镊子夹取含浸出液的滤纸片贴在含菌平板上，每皿贴6片，每菌
重复3次，细菌培养箱中37℃培养24h后，测定滤纸片周围抑菌圈直径大小，比较抑菌效果。

1.6.2 最低抑菌浓度（MIC）的测定
用LB培养基以二倍稀释法分别稀释二氢杨梅素，浓度分别为20.000、10.000、5.000、2.500、1.250、0.625、0.313mg/mL和0.156mg/mL，然后分别接种金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌和白色念珠菌的过夜培养液200μL，于细菌培养箱中37℃下培养24h，观察生长现象，取没有细菌生长的最低浓度为MIC。

1.6.3 最低杀菌浓度（MBC）的测定
将上述浓度大于MIC的各管培养液，用直径4mm的接种环，划线接种于LB培
养基上，在37℃的生化培养箱中培养24h后，观察有无细菌生长，凡无细菌生长的药物最低浓度管，即为药物对该菌种的最低杀菌浓度MBC。

1.6.4 二氢杨梅素与苯甲酸钠的抑菌效果对比
在上述实验的条件下，使用同样浓度的苯甲酸钠进行抑菌实验，得出其最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC），并与二氢杨梅素抑菌效果进行对比。

2.1 二氢杨梅素的抑菌效果
二氢杨梅素对各实验菌株的抑菌效果见表1。

从表1可以看出，二氢杨梅素对各实验菌株均有一定的抑制作用，但对绿脓杆菌、大肠杆菌的抑制作用较强，其次是白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、副伤寒沙门氏菌，而对枯草芽胞杆菌的抑制作用较弱。

2.2 最低抑菌浓度（MIC）
由表2可以看出，随着二氢杨梅素溶液浓度的增加，二氢杨梅素对各实验菌株的
抑菌作用也逐渐增强。

二氢杨梅素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌和白色念珠菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为：0.625、0.313、0.625、0.313、1.250mg/mL和0.313mg/mL，可见二氢杨梅素在较低
浓度下有较明显的抑菌作用。

2.3 最低杀菌浓度（MBC）
由表3可以看出，二氢杨梅素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、
绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌、白色念珠菌最低杀菌浓度（MBC）分别为：2.5、2.5、2.5、2.5、10.0mg/mL和2.5mg/mL。

可见，二氢杨梅素对枯草芽胞杆菌的杀菌效果较弱，对其他菌株的杀菌效果则较好。

2.4 二氢杨梅素与苯甲酸钠的抑菌效果对比
从表4二氢杨梅素与苯甲酸钠的抑菌效果对比可以看出，二氢杨梅素对大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、白色念珠菌3种菌的抑菌和杀菌效果要明显比苯甲酸钠强，而
金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌3种菌的抑菌和杀菌效果则与苯甲酸
钠相当。

综合来看，二氢杨梅素较苯甲酸钠表现出更强的抑菌和杀菌效果。

1）二氢杨梅素的抑菌实验可以看出，其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌和白色念珠菌均有一定的抑制效果。

2）二氢杨梅素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌和白色念珠菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为：0.625、0.313、0.625、0.313、
1.250mg/mL和0.313mg/mL；最低杀菌浓度（MBC）分别为：
2.5、2.5、2.5、
2.5、10.0mg/mL和2.5mg/mL。

二氢杨梅素与苯甲酸钠的抑菌和杀菌效果对比
可以看出：二氢杨梅素对大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、白色念珠菌3种菌的抑菌
和杀菌效果要明显比苯甲酸钠强，而金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌3种菌的抑菌和杀菌效果则与苯甲酸钠相当。

综合来看，二氢杨梅素较苯甲酸钠表现出更强的抑菌和杀菌效果。

3）二氢杨梅素作为一种天然提取物，基于它对常见病菌的抑制作用，可用于天然食品防腐剂和药用资源的开发，以保障药品的绿色和安全。

【相关文献】
[1]潘利华,夏云梯.绿色食品新资源——藤茶[J].粮食与食品工业,2001(2):30-31.
[2]莫国艳.藤茶药理作用研究进展[J].广西中医学院学报,2003,6 (4):66-67.
[3]刘翠娥,王海玉,王亚东,等.藤茶辅助降血脂作用的研究[J].食品科学,2005,26(11):231-240.
[4] Matsumoto T,Tahara S. Ampelopsin,a major antifungal constitutent from Salix sachalinensis,and its methyl ethers[J]. Nippon nogeikagaku kaishi-journal of the japan society for bioscience biotechnology and agrochemistry, 2001, 75(6): 659-667.
[5] Oshima Y ,Ueno y. Ampelopsins D, F ,H and cis-ampelopsin E, oligostil benes form Ampelopsis brevipedunculata var hancei roots[J]. Phytochemistry (oxford), 1993, 33(1): 179.
[6] Yabe, Noritsugu, matsui, et al. Effects of Ampelopsis brevipedunculata (vitaceae) extract on hepotic M cell culture: Function in collagen biosynthesis[J]. Journol of Ethnopharmacology, 1997, 56(1): 31-44.
[7] Hase K, Ohsugi M, Xiong QuanBo. Hepatoprotective effect of Hovenia dulcis thunb on experimental liver injuries induced by carbon tetrachloride or D-
galactosamine/lipopolysaccharide[J]. Biological and pharmaceutical Bulletin, 1997, 20(4): 381-385
[8]罗祖友,付晓芳,吴谋成.藤茶的研究进展[J].食品科学,2005,26 (8):513-516.
[9]袁阿兴,黄筱美,陈劲.显齿蛇葡萄化学成分的研究[J].中国中药杂志,1998,23(6):359.。