二氢杨梅素合成路线
二氢杨梅素的分离及药理作用
二氢杨梅素的分离及药理作用严赞开1朱慧玲2胡春菊3黄先菊2(1. 韩山师范学院化学系, 广东潮州 521041; 2. 长江大学医学院, 湖北荆州434000;3. 韩山师范学院医务所, 广东潮州 521041)摘要探讨了二氢杨梅素的最佳提取、分离工艺及药理作用。
(1) 最佳提取工艺为: 以50 %乙醇为提取剂, 按45倍蛇葡萄干叶的量加入50 %乙醇, 保温回流2 h, 提取效率为17.8 %。
(2) 最佳分离工艺为: 采用二氯甲烷除色素, 乙醇-水重结晶, 并以硅胶G为固定相, 乙酸乙酯: 石油醚=2: 1（v/v）为流动相, 分离得到白色针状晶体(Rf=0.33), 经UV、IR及Rf证实为二氢杨梅素。
(3) 研究了二氢杨梅素对多种物质诱导的子宫平滑肌收缩的抑制作用, 结果表明其对家兔离体子宫平滑肌有较好的松弛作用。
关键词二氢杨梅素, 分离, 药理试验藤茶, 又名甜茶藤，系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄的嫩茎叶, 主要分布于广东、广西、云南、贵州、湖南、湖北、江西、福建等省区[1]。
我国广西、湖南等省区壮族和瑶族人民常用其茎叶作饮料[2]。
现代药理研究表明, 蛇葡萄该属植物具有明显降脂、降胆固醇、保肝利胆、抗癌、抗炎等作用[3]。
近年来，国内许多学者对蛇葡萄进行了化学研究，探明其主要活性成分为二氢杨梅素[4~7], 并对二氢杨梅素的提取方法进行了深入研究[8~12]。
本文在前人研究的基础上，系统地探讨了以湖北省恩施地区生产的藤茶为原料，从中提取、精制和分离二氢杨梅素的工艺流程；并讨论了二氢杨梅素对多种物质诱导的子宫平滑肌收缩的抑制作用，为生产和应用二氢杨梅素提供科学依据。
1实验部分1.1仪器和材料TU-1900型双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；WQF-510型FTIR 傅立叶变换红外光谱仪，北京瑞科仪器分析公司；501系列超级恒温槽，上海恒平科学仪器有限公司；SHZ-D（Ⅲ）循环水式多用真空泵，河南省巩义市英峪予华仪器厂；LMS-2B型二道生理记录仪，成都仪器厂; 肌张力换能器，贝科测控设备有限公司。
正交实验设计优选二氢杨梅素的提取工艺_杨铃
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二氢杨梅素半合成杨梅素工艺分析
目录摘要 (i)ABSTRACT ........................................................................................................ i ii 第1章绪论 . (1)1.1 显齿蛇葡萄及二氢杨梅素概述 (1)1.1.1显齿蛇葡萄 (1)1.1.2二氢杨梅素 (1)1.2杨梅素概述 (1)1.2.1 杨梅素理化性质 (1)1.2.2 杨梅素植物来源 (2)1.2.3 杨梅素药理作用 (2)1.3 杨梅素含量检测 (4)1.3.1 高效液相色谱法 (4)1.3.2 紫外-可见分光光度法 (4)1.3.3 薄层扫描法 (4)1.4 杨梅素的制备 (5)1.4.1 杨梅素的提取 (5)1.4.2 杨梅素的分离 (6)1.5 杨梅素的合成 (7)1.5.1 查尔酮关环法 (7)1.5.2 DMDO和锂试剂催化法 (7)1.5.3 催化脱氢氧化法 (8)1.5.4 生物合成法 (8)1.6 本课题研究的意义与内容 (9)1.6.1 本课题研究的主要意义 (9)1.6.2 本课题研究的主要内容 (10)第2章杨梅素含量检测方法的建立 (11)2.1 材料与仪器 (11)2.1.1 实验材料 (11)2.1.2 实验仪器 (11)2.2 方法建立与分析 (11)2.2.1 UV法的建立 (11)2.2.2 HPLC检测方法的建立 (13)2.3 小结 (15)第3章AFO法半合成杨梅素工艺研究 (17)3.1 材料与仪器 (17)3.1.1 实验材料 (17)3.1.2 实验仪器 (17)3.2 实验部分 (18)3.2.1 合成方法 (18)3.2.2 半合成杨梅素单因素实验 (18)3.3 结果与分析 (19)3.3.1 不同体积分数溶剂对杨梅素收率的影响 (19)3.3.2 温度对杨梅素收率的影响 (19)3.3.3 溶剂用量对杨梅素收率的影响 (20)3.3.4 加料方式对杨梅素收率的影响 (20)3.3.5 NaOH用量对杨梅素收率的影响 (21)3.3.6 H2O2用量对杨梅素收率的影响 (21)3.3.7 反应时间对杨梅素收率的影响 (22)3.4 小结 (23)第4章吡啶热回流法半合成杨梅素工艺研究 (24)4.1 材料与仪器 (24)4.1.1 实验材料 (24)4.1.2 实验仪器 (24)4.2 实验部分 (24)4.2.1 合成方法 (24)4.2.2 单因素试验对杨梅素合成工艺的优化 (25)4.2.3 响应面法对杨梅素合成工艺参数的优化 (25)4.3 结果与分析 (25)4.3.1 杨梅素合成工艺单因素试验 (25)4.3.2 响应面分析法优化工艺 (27)4.4小结 (30)第5章杨梅素分离纯化、结构表征及扩大实验研究 (31)5.1 材料与仪器 (31)5.1.1 实验材料 (31)5.1.2 实验仪器 (31)5.2 实验部分 (31)5.2.1 活性炭脱色工艺 (31)5.2.2 杨梅素结晶工艺 (33)5.2.3 杨梅素产品结构表征 (33)5.2.4 扩大实验 (33)5.3 结果与分析 (34)5.3.1 活性炭脱色工艺结果分析 (34)5.3.2 杨梅素结晶工艺 (37)5.3.3 杨梅素产品结构表征 (39)5.3.4 扩大实验及成本估算 (44)5.4 小结 (45)第6章杨梅素抗氧化能力比较研究 (47)6.1 材料与仪器 (47)6.1.1 实验材料 (47)6.1.2 实验仪器 (47)6.2 实验部分 (47)6.2.1 杨梅素对菜籽油抗氧化能力比较研究 (47)6.2.2 杨梅素清除DPPH.能力比较研究 (49)6.3 结果与分析 (49)6.3.1 杨梅素对菜籽油抗氧化能力的比较 (49)6.3.2 杨梅素对DPPH.清除能力的比较 (50)6.4 小结 (51)第7章结论 (52)第8章创新点与展望 (54)8.1 创新点 (54)8.2 不足之处 (54)8.3 展望 (54)致谢 (55)参考文献 (56)作者在学期间取得的学术成果 (60)附录A 缩略词 (61)表2.1 UV法的精密度实验结果 (12)Table 2.1 The precision experimental results of UV method (12)表2.2 UV法的稳定性实验结果 (12)Table 2.2 The stability experimental results of UV method (12)表2.3 UV法的重复性实验结果 (13)Table 2.3 The repeatability experimental results of UV method (13)表2.4 UV法的加标回收率实验结果 (13)Table 2.4 The recovery experimental results of UV method (13)表2.5 HPLC法的精密度实验结果 (14)Table 2.5 The precision experimental results of HPLC method (14)表2.6 HPLC法的稳定性实验结果 (14)Table 2.6 The stability experimental results of HPLC method (14)表2.7 HPLC法的重复性实验结果 (15)Table 2.7 The repeatability experimental results of HPLC method (15)表2.8 HPLC法的回收率实验结果 (15)Table 2.8 The recovery experimental results of HPLC method (15)表4.1 响应面分析因子及水平表 (25)Table 4.1 Factors and levels of RSM analysis (25)表4.2 响应面分析方案及试验结果 (28)Table 4.2 The experiment design and results of RSM (28)表4.3 回归分析结果 (28)Table 4.3 Results of regression analysis (28)表5.1 活性炭脱色因素水平表 (33)Table 5.1 Factors and levels (33)表5.2 活性炭脱色正交试验结果 (36)Table 5.2 Results of orthogonal experiment (36)表5.3 正交实验方差分析表 (37)Table 5.3 Results of analysis of variance (37)表6.1 方法精密度(n=5) (48)Table 6.1 The precision of UV method(n=5) (48)表6.2 本方法与国标法比较(n=5) (48)Table 6.2 Compared with the standard method of UV method (48)图1.1 二氢杨梅素结构式 (1)Fig.1.1 The structure of dihydromyricetin (1)图1.2 杨梅素结构式 (2)Fig.1.2 The structure of myricetin (2)图1.3 AFO反应机理 (7)Fig.1.3 The reaction mechanism of AFO (7)图1.4 DMDO法合成黄酮醇 (8)Fig.1.4 DMDO method for the synthesis of flavonol (8)图1.5 有机锂试剂催化合成黄酮醇 (8)Fig.1.5 Organic lithium reagent catalytic synthesis of flavonol (8)图1.6 2,3-脱氢水飞蓟宾的合成 (8)Fig1.6 The synthesis of 2,3-dehydrosilybin (8)图1.7 部分黄酮化合物生物合成途径 (9)Fig.1.7 Part of the biosynthesis pathway of flavonoids (9)图2.1 紫外法测定杨梅素浓度标准曲线 (12)Fig.2.1 UV standard curve (12)图2.2 HPLC法标准曲线 (14)Fig.2.2 HPLC standard curve (14)图3.1 杨梅素的合成 (17)Fig.3.1 Synthesis of myricetin (17)图3.2 甲醇体积分数对杨梅素收率的影响 (19)Fig.3.2 Effects of volume fraction on reaction yield of myricetin (19)图3.3 反应温度对杨梅素收率的影响 (20)Fig.3.3 Effects of temperature on reaction yield of myricetin (20)图3.4 溶剂体积对杨梅素收率的影响 (20)Fig.3.4 Effects of solvent volume on reaction yield of myricetin (20)图3.5 加料方式对杨梅素收率的影响 (21)Fig.3.5 Effects of feeding mode on reaction yield of myricetin (21)图3.6 NaOH体积对杨梅素收率的影响 (21)Fig.3.6 Effects of NaOH volume on reaction yield of myricetin (21)图3.7 H2O2体积对杨梅素收率的影响 (22)Fig.3.7 Effects of H2O2 volume on reaction yield of myricetin (22)图3.8 反应时间对杨梅素收率的影响 (22)Fig.3.8 Effects of reaction time on yield of myricetin (22)图4.1 杨梅素合成路线 (24)Fig.4.1 Synthesis of myricetin (24)图4.2 体积分数对杨梅素收率的影响 (26)Fig.4.2 Effects of volume fraction on reaction yield of myricetin (26)图4.3 反应温度对杨梅素收率的影响 (26)Fig.4.3 Effects of temperature on reaction yield of myricetin (26)图4.4 料液比对杨梅素收率的影响 (27)Fig.4.4 Effects of solid-liquid ratio on reaction yield of myricetin (27)图4.5 反应时间对杨梅素收率的影响 (27)Fig.4.5 Effects of reaction time on reaction yield of myricetin (27)图4.6 Y=f(A, B) 和Y=f(A, C)的响应面图和等高线图 (29)Fig.4.6 Responsive surface and contours of Y= f(A,B) and Y= f(A,C) (29)图4.7 Y=f(B,C)的响应面图和等高线图 (29)Fig.4.7 Responsive surface and contours of Y= f(B,C) (29)图5.1 活性炭种类对杨梅素脱色效果的影响 (34)Fig.5.1 Effect of activated carbon type on the decolorization of myricetin (34)图5.2 活性炭用量对脱色效果的影响 (34)Fig.5.2 Effect of activated carbon dosage on the decolorization of myricetin (34)图5.3 温度对脱色效果的影响 (35)Fig.5.3 Effect of temperature on the decolorization of myricetin (35)图5.4 pH对脱色效果的影响 (35)Fig.5.4 Effect of pH on the decolorization of myricetin (35)图5.5 脱色时间对脱色效果的影响 (36)Fig.5.5 Effect of time on the decolorization of myricetin (36)图5.6 不同溶剂对杨梅素结晶效果的影响 (37)Fig.5.6 Effect of different solvents on crystallization of myricetin (37)图5.7 甲醇溶剂结晶次数对结晶效果的影响 (38)Fig.5.7 The effects of crystallization times on myricetin using methanol (38)图5.8乙醇溶剂结晶次数对结晶效果的影响 (38)Fig.5.8 The effects of crystallization times on myricetin using ethanol (38)图5.9 甲醇（乙醇）体积分数对结晶产率的影响 (38)Fig.5.9 The effects of volume fraction methanol (ethanol) on crystallization yield of myricetin (38)图5.10 40%甲醇的结晶次数对结晶效果的影响 (39)Fig.5.10 The effects of 40% methanol on crystallization of myricetin (39)图5.11 40%乙醇的结晶次数对结晶效果的影响 (39)Fig.5.11 The effects of 40% ethanol on crystallization of myricetin (39)图5.12 杨梅素产品和对照品紫外吸收光谱图 (40)Fig.5.12 Myricetin product and reference product UV absorption spectrum (40)图5.13 杨梅素产品和标准品HPLC色谱图 (40)Fig.5.13 HPLC chromatograms of myricetin product and myricetin standard (40)图5.14 AFO法杨梅素产品红外光谱图 (41)Fig.5.14 IR spectrum of myricetin product using AFO method (41)图5.15 吡啶热回流法杨梅素产品红外光谱图 (41)Fig.5.15 IR spectrum of myricetin product using heat reflux method (41)图5.16 杨梅素标准品红外光谱图 (42)Fig.5.16 IR spectrum of myricetin standard (42)图5.17 AFO法杨梅素产品核磁共振氢谱图 (42)Fig.5.17 1H-NMR spectrum of myricetin product using AFO method (42)图5.18 吡啶热回流法杨梅素产品核磁共振氢谱图 (43)Fig.5.18 1H-NMR spectrum of myricetin product using heat reflux method (43)图5.19 AFO法杨梅素产品核磁共振碳谱 (43)Fig.5.19 13C-NMR spectrum of myricetin product using AFO method (43)图5.20 吡啶热回流法杨梅素产品核磁共振碳谱 (44)Fig.5.20 13C-NMR spectrum of myricetin product using heat reflux method (44)图6.1紫外法测定I2含量标准曲线 (48)Fig.6.1 Determination of I2 content standard curve of UV method (48)图6.2 添加0.02%和0.04%抗氧化剂对过氧化值的影响 (50)Fig.6.2 Effect of adding 0.02% and 0.04% antioxidants on peroxide value (50)图6.3 添加0.06%抗氧化剂对过氧化值的影响 (50)Fig.6.3 Effect of adding 0.06% antioxidants on peroxide value (50)图6.4 浓度为1 μg/m和3 μg/mL抗氧化剂对DPPH.清除能力的影响 (50)Fig.6.4 Effect of 1μg/mL and 3 μg/mL antioxidants on DPPH. s cavenging (50)图6.5 5 μg/mL抗氧化剂对DPPH.清除能力的比较 (51)Fig.6.5 Effect of 5 μg/mL antioxidants on DPPH. scavenging (51)摘要杨梅素广泛存在于自然界植物中，具有多种药理活性，是多种先导药物的前体，也可以直接作为药物。
二氢杨梅素
五、提取工艺
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称取一定量的植物叶子，粉碎至60目过筛，将粉末放于锥形瓶中， 加入一定量的热水溶解，置于恒温水浴锅中浸提，一段时间后， 趁热抽滤，待冷却至室温置于冰箱中静置，析出白色晶体，过滤， 得到滤渣（二氢杨梅素在高温时溶解度很大，低温时溶解度很低， 结晶析出），干燥至恒重，得粗提取物。 取由以上方法制备的二氢杨梅素干燥粗提取物加入丙酮（去除杨 梅素），加热使粗提取物充分溶解，趁热抽滤，滤液置于4℃冰 箱中静置24h，有大量白色晶体析出，过滤，干燥滤渣，滤渣即 初步纯化的二氢杨梅素
七、主要作用
二氢杨梅素为葡萄属植物藤茶的提取物，是藤茶中的主要 活性成分黄酮类化合物，此类物质具有清除自由基、抗氧 化、抗血栓、抗肿瘤、消炎等多种奇特功效;而二氢杨梅素 是较为特殊的一种黄酮类化合物，在解除醇中毒、预防酒 精肝、脂肪肝、抑制肝细胞恶化、降低肝癌的发病率、抗 高血压、抑制体外血小板聚集和体内血栓的形成、降低血 脂和血糖水平，提高SOD活性以及保肝护肝等方面具有特 殊功效。 1、抗菌作用 2、对血糖、血脂的调节作用 3、护肝作用 4、抗氧化作用 5、抗肿瘤作用
三、理化性质
白色或类白色粉末白色针状结晶，易溶于热水，热乙 醇及丙酮，溶于乙醇、甲醇，极微溶于醋酸乙酯，不 溶于氯仿、石油醚。 二氢杨梅素热稳定性较好，但随着温度的升高大于 100℃二氢杨梅素会发生不可逆的氧化反应。二氢杨梅 素在中性和偏酸性条件下稳定。
四、工艺流程
植物叶子—粉碎—水提—抽滤—滤液—结晶—抽滤—干燥—粗提取物— 丙酮回流提取—浓缩—加水沉淀—多次重结晶—干燥—二氢杨梅素
谢谢观赏
1、抗菌作用 二氢杨梅素对枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、 大肠埃希菌、产气杆菌、啤酒酵母、黏红酵母、青霉、黑曲 霉、黄曲霉、毛霉及根霉均有抑菌作用用, 尤其对革兰阳性、 革兰阴性球菌或杆菌作用明显 。 2、对血糖、血脂的调节作用 二氢杨梅素能明显抑制由四氧嘧啶、肾上腺素、链脲霉 素等诱导的小鼠血糖升高，同时升高血清胰岛素水平, 胰腺组 织中淋巴细胞浸润明显减少、炎症反应明显减轻, 胰岛数目明 显增加。 3、护肝作用 二氢杨梅素能保护肝脏，加速乙醇代谢产物乙醛迅速分 解，变成无毒物质，降低其对肝细胞的损害。此外，二氢杨 梅素能够改善肝细胞损伤引起的血清乳酸脱氢酶活力增加， 抑制肝性M细胞胶原纤维的形成，从而起到保肝护肝的作用， 大幅度降低乙醇对肝脏的损伤，使肝脏正常状态迅速得到恢
二氢杨梅素的理化性质及其提取方法研究进展
二氢杨梅素的理化性质及其提取方法研究进展二氢杨梅素是一种黄酮类化合物，本文简要介绍了二氢杨梅素的理化性质及几种常用提取方法，仅供参考。
标签：二氢杨梅素；理化性质；提取方法0 前言二氫杨梅素（Dihydromyricetin，DMY），又称蛇葡萄素，属于黄酮类有机化合物，分子式为C15H12O8，化学式为（2R，3R）-3，5，7-三羟基-2-（3，4，5-三羟基苯基）苯并二氢吡喃-4-酮，多提取自葡萄科蛇葡萄属的一种木质藤本植物，用显齿蛇葡萄幼叶制成的类茶产品具有消炎、止咳、祛痰、镇痛[1]等功效，因此二氢杨梅素逐渐受到人们的关注。
1 二氢杨梅素的理化性质二氢杨梅素为白色针状结晶，易溶于热水，乙醇及丙酮，微溶于醋酸乙酯，不溶于氯仿、石油醚。
研究表明二氢杨梅素在温度大于100℃的条件下，会发生不可逆氧化反应。
二氢杨梅素在中性和偏酸性条件下稳定。
二氢杨梅素是一种特殊的黄酮类化合物，除具有黄酮类化合物的一般特性外，还具有抗氧化、抗血栓、抗肿瘤、消炎等多种药理作用[2，3]。
2 二氢杨梅素的提取方法从藤本植物中提取二氢杨梅素的工艺，主要包括溶剂（有机溶剂、热水、碱液）提取、超声技术提取、微波技术提取、超临界CO2萃取法、酶法提取等[4]。
2.1 溶剂提取法通常以热水或有机溶剂（乙醇、乙酸乙酯、正丁醇）等为提取剂。
曹敏惠等[5]以藤茶为原料，经热水浸取，活性炭脱色，重结晶，色谱分析及正交实验得最佳提取条件为：取温度为100℃，提取时间为60 min，料液比为1：25（g /mL）。
王岩等[6]以乙醇为溶剂，采用正交试验设计，得到最佳提工艺为：以80% 乙醇为溶剂，乙醇用量为原料量的10倍，加热流2次，每次60 min，提取效率可达到8. 98%。
二氢氧酶素易溶于有机溶剂，但用有机溶剂提取存在成本高，提取率低，易造成污染等问题。
可采用乙醇浸泡进行预处理，以水为溶剂提取二氢杨梅素，提取率提高，污染较小[7]。
提取二氢杨梅素的原理
提取二氢杨梅素的原理
提取二氢杨梅素的原理可以通过以下步骤进行：
1. 采集杨梅样品：选择新鲜、成熟的杨梅果实作为提取样品。
2. 粉碎样品：将杨梅果实去皮、去核，然后将果肉切碎或使用搅拌机进行粉碎，增加表面积以便于溶剂的浸提。
3. 溶剂浸提：将粉碎好的样品与适当的溶剂（如乙醇、乙醚等）进行浸提。
溶剂的选择要考虑到提取目标物的溶解度和选择性。
4. 过滤提取液：将浸提液通过滤纸或滤膜过滤，以去除固体残渣和杂质。
5. 浓缩提取液：使用旋转蒸发仪或其他浓缩方法，将提取液中的溶剂去除，使得目标物浓缩。
6. 结晶：通过降低温度或添加适当的沉淀剂，使得目标物溶液中的二氢杨梅素结晶出来。
7. 分离与纯化：通过过滤、离心、洗涤等方法，将结晶得到的二氢杨梅素和其他杂质分离。
8. 干燥：将纯化后的二氢杨梅素溶液或固体样品进行干燥，去除残留的溶剂，得到干燥的二氢杨梅素。
以上就是提取二氢杨梅素的一般原理。
不同的实验条件和提取方法可能略有差异，具体的实验步骤应根据实际情况进行调整。
一种杨梅素的合成方法[发明专利]
![一种杨梅素的合成方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/2115b6ccccbff121dc36839e.png)
专利名称：一种杨梅素的合成方法专利类型：发明专利
发明人：宋昆元
申请号：CN201910967198.3申请日：20191012
公开号：CN110627761A
公开日：
20191231
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本申请公开了一种杨梅素的合成方法，包括以下步骤：在二氢杨梅素水溶液中，加入碱性溶液，加完后回流状态下加热；加入二氧化硒水溶液，加完后在回流温度下搅拌，反应完毕，冷却至室温；加入酸调节pH，搅拌，旋转蒸发，搅拌，过滤；滤饼加入乙醇水溶液打浆，过滤，滤饼用乙醇水溶液冲洗，收集滤饼烘干，得到红硒；合并有机相，旋干至没有乙醇味道为止，有大量固体析出，过滤，滤饼用乙醇水溶液冲洗得黄色的固体，即为杨梅素。
其优点表现在：1、反应简单易操作；2、主要以水和少量的乙醇为溶剂，三废排放少；3、能回收有经济价值的红硒；4、所得杨梅素纯度高；5、一举多得，有很好的经济效益，适合放大生产。
申请人：上海尹胜咨询管理合伙企业(有限合伙)
地址：201808 上海市宝山区沪太路8885号6幢A2843室
国籍：CN
代理机构：上海翰信知识产权代理事务所(普通合伙)
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cas27200-12-0_Dihydromyricetin_MedBio合成路线
快速分光光度测定法用于测定乙内酰脲酶，尿囊素酶，二氢酪氨酸酶和亚氨酶的酶活性。二氢尿嘧啶，5-丙基-乙内酰脲和邻苯二甲酰亚胺用作底物。除非另有明确说明，否则二氢尿嘧啶（2mM）用作二氢嘧啶酶的标准测定中的底物。简而言之，分别在25℃下二氢尿嘧啶，5-丙基-乙内酰脲和邻苯二甲酰亚胺作为底物水解时测量在230,248和298nm处的吸光度的降低。为了开始反应，将纯化的二氢嘧啶酶（10-70μg）加入到含有底物和100mM Tris-HCl（pH8.0）的2mL溶液中。用UV / vis分光光度计监测底物水解。通过用分光光度计直接测量来实验确定每个基板的消光系数。二氢尿嘧啶，5-丙基-乙内酰脲和邻苯二甲酰亚胺的消光系数分别在230nm处为0.683mM-1cm -1，在248nm处为0.0538mM-1cm -1，在298nm处为3.12mM-1cm -1。初始变化率是酶浓度在0.01-0.18min -1的吸光度范围内的函数。活性单位定义为催化水解1μmol底物/分钟的酶量，比活性以每毫克酶的活性单位表示。通过拟合从各个实验到Michaelis-Menten方程[1]的水解速率，从非线性图确定动力学参数Km和Vmax。
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二氢杨梅素合成路线
二氢杨梅素的合成路线主要包括以下步骤：
1.提取：从藤茶中提取二氢杨梅素。
具体方法包括有机溶剂提取法、碱提取法、酶提取法及超临界流体萃取等。
2.纯化：通过真空浓缩、活性炭脱色、重结晶等步骤去除杂质，得到的终产品二氢杨梅素纯度达到98％以上，总得率达到75％以上。
3.合成：二氢杨梅素的合成方法有多种，包括在强碱条件下开环生成查尔酮，查尔酮经AFO反应生成杨梅素；加热条件下，在吡啶溶液中二氢杨梅素2、3位脱氢氧化可生成杨梅素；将二氢杨梅素与醇类混合，加入次氯酸钠和催化剂，待反应完全后继续加入次氯酸钠溶液，分离纯化可得杨梅素。