【精品】实验十细菌生化实验-微生物实验汇总
微生物实验总结
微生物实验总结微生物实验是一种常见的实验方法，用于研究微生物的生长特性、代谢能力和抗菌性等。
本次实验旨在探究不同条件下微生物的生长情况，并总结实验结果，以期对微生物的生态学特性有更深入的了解。
实验设计：本次实验选择了两种不同的微生物，分别为大肠杆菌和酵母菌。
实验分为三组，分别探究不同温度、不同营养条件和不同抗生素对微生物生长的影响。
实验步骤： 1. 温度实验：将大肠杆菌和酵母菌分别接种于含有富集培养基的琼脂平板，并将其置于不同的温度条件下，分别为25℃、37℃和50℃，培养48小时后观察菌落生长情况。
2.营养条件实验：将大肠杆菌和酵母菌分别接种于含有不同营养成分的琼脂平板，如含有葡萄糖、蛋白胨、大豆酪蛋白等。
培养48小时后观察菌落生长情况。
3.抗生素实验：将大肠杆菌和酵母菌分别接种于含有不同抗生素的琼脂平板，如青霉素、链霉素、四环素等。
培养48小时后观察菌落生长情况。
实验结果： 1. 温度实验结果显示，大肠杆菌在25℃和37℃条件下生长较好，而在50℃条件下几乎无法生长；而酵母菌在25℃和37℃条件下生长较好，但在50℃条件下仅有少量菌落。
2.营养条件实验结果显示，大肠杆菌对葡萄糖和蛋白胨等营养成分有较好的生长适应性，而酵母菌对大豆酪蛋白等营养成分有较好的生长适应性。
3.抗生素实验结果显示，大肠杆菌对青霉素和链霉素等抗生素有较好的抗菌性，而酵母菌对四环素等抗生素有较好的抗菌性。
实验总结：通过本次微生物实验，我们对微生物的生态学特性做了一定的了解。
温度、营养条件和抗生素是影响微生物生长的重要因素。
大肠杆菌和酵母菌对不同条件有不同的生长适应性，这与它们的生物学特性和代谢能力密切相关。
微生物实验的研究对于生物医学领域具有重要意义。
通过对微生物的生长特性和抗菌性的研究，可以为新药物的开发和微生物相关疾病的治疗提供理论支持。
同时，了解微生物的生态学特性也有助于环境保护和食品工业等领域的应用。
在今后的研究中，我们还可以进一步探究微生物的适应性机制、代谢调控等方面的内容，以期更全面地了解微生物的生物学特性。
微生物学检验细菌的生物化学实验
所致疾病
侵袭性疾病 化脓性感染：疖、痈、甲沟炎、中耳炎、 脑膜炎、败血症等 毒素性疾病： 食物中毒、假膜性肠炎等
免疫性
有一定天然免疫力 病后获得的免疫力作用不强、不持久
微生物学检验
细菌鉴定的基本程序
标本
直接涂片 革兰染色镜检
分离培养 取可疑菌落
鉴定试验和药敏试验
结果报告
标本采集
根据病种不同，采集不同标本 脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、尿 液、痰液、脑脊液、粪便
抗原构造
★葡萄球菌A蛋白（SPA） 存在于金黄色葡萄球菌细胞壁 可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性 结合，应用于协同凝集试验 抵抗吞噬细胞的吞噬
★多糖抗原 具有型的特异性,有助于金葡菌感染的诊 断
分类和分型
葡萄球菌包括32种及亚种 根据产生色素的不同分类 根据产生凝固酶与否进行分类 按噬菌体分型法分类
检验方法—分离培养
血标本－→增菌（葡萄糖肉汤）－→分 离培养（血平板） 生长现象：混浊、胶胨状凝固、溶血
金葡菌的鉴定依据
血平板上金黄色色素、β-溶血环 血浆凝固酶 + 发酵甘露醇 + 耐热核酸酶 +
凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）
条件致病菌 医院内感染的重要病原菌 对多种抗生素耐药
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和 耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 （MRCNS）是院内感染的重要病原菌之 一，MRSA、MRCNS对多种抗生素耐药， MRSA不仅对青霉素类、头孢菌素类等β－ 内酰胺类抗菌药物耐药，同时也对四环素、
红霉素、氯霉素、克林霉素及庆大霉素等
常用抗菌药物耐药，对利褔平和磺胺的耐 药率也达30％，但通常对万古霉素敏感。 MRSA、MRCNS常常引起院内感染与播散， 且难于治疗和控制，病死率高。
微生物生化试验
微生物生理生化试验摘要：本实验通过细菌对生物大分子物质的水解试验、糖发酵试验、IMViC试验几个生化反应证明不同细菌生理生化功能的多样性。
生物大分子物质的水解试验证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
糖发酵和IMViC在肠道细菌鉴定中的起着重要作用。
关键词：水解、糖发酵、IMViC、生理生化前言：微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。
淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色变为深红色，说明胞外存在着脂肪酶。
糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。
绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。
有些细菌能分解某种糖产生有机酸和气体；有些细菌只产酸不产气。
发酵培养基含有蛋白胨，指示剂（溴甲酚紫），倒置的德汉氏小管和不同的糖类。
当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）变为黄色(pH5.2)。
气体的产生可由倒置的德汉氏试管中有无气泡来证明。
IMViC是吲哚(indol test)、甲基红(methy1 red test)、伏一普(Voges-Prokauer test)和柠檬酸盐(citrate test)四个试验的缩写，I是在英文中为了发音方便而加上的。
这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，多用于水的细菌学检查。
吲哚试验是用来检测吲哚的产生。
有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。
吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。
细菌生化实验报告
一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应的基本原理和实验方法。
2. 掌握常见细菌生理生化反应的检测方法，如糖发酵、吲哚产生、甲基红反应等。
3. 学会通过生理生化反应对细菌进行初步鉴定。
二、实验原理细菌生理生化反应是指细菌在生长繁殖过程中，利用酶催化底物发生的一系列化学反应。
通过检测细菌对特定底物的利用能力、酶的产生以及代谢产物的生成，可以判断细菌的种类和特性。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、吲哚试剂、甲基红试剂等。
3. 仪器：酒精灯、接种环、培养皿、试管、试管架、滴管等。
四、实验方法1. 糖发酵实验：将待测菌接种于糖发酵培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
观察菌落周围是否出现透明圈，判断细菌是否能发酵该糖。
2. 吲哚产生实验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
取培养液滴加吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀，判断细菌是否能产生吲哚。
3. 甲基红反应实验：将待测菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
取培养液滴加甲基红试剂，观察颜色变化，判断细菌是否能产生有机酸。
五、实验结果与分析1. 糖发酵实验结果：- 大肠杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。
- 金黄色葡萄球菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。
- 枯草芽孢杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。
- 变形杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阳性。
2. 吲哚产生实验结果：- 大肠杆菌：吲哚产生阴性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚产生阳性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚产生阴性。
- 变形杆菌：吲哚产生阳性。
3. 甲基红反应实验结果：- 大肠杆菌：甲基红反应阴性。
- 金黄色葡萄球菌：甲基红反应阴性。
- 枯草芽孢杆菌：甲基红反应阳性。
- 变形杆菌：甲基红反应阳性。
根据实验结果，我们可以初步判断：- 大肠杆菌为革兰氏阴性菌，发酵葡萄糖，不产生吲哚和有机酸。
细菌生理生化实验
细菌的生理、生化实验简介微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下：一、糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验。
试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。
接种后，置36±°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。
本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。
一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。
二、淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20℃培育5天。
然后将碘试剂直接滴浸于培育表面，假设为液体培育物，那么加数滴碘试剂于试管中。
当即检视结果，阳性反映（淀粉被分解）为琼脂培育基呈深蓝色、菌落或培育物周围显现无色透明环、或肉汤颜色无转变。
阴性反映那么无透明环或肉汤呈深蓝色。
淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。
培养基pH必须为中性或微酸性，以最适。
淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。
三：V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
细菌的生化试验
细菌的生化实验一、糖的发酵培养基：糖培养基PH7.6的蛋白胨水溶液（蛋白胨1%）（氯化钠0.5%）适量糖，1% 1.6%澳甲酚紫酒精溶液0.1% 分装10*100mm小试管，每管3-41^,内置一密闭端向上的发酵管， 10磅10分灭菌。
方法: 用接种环取少量纯培养物接种于培养基中，37摄氏度培养18-24小时后观察，一般观察2-3天。
结果: 产酸则培养基由兰紫变黄，用“ + ”表示。
产酸又产气，则培养基变黄，小管内有气泡，用“。
”表示，无变化则培养基仍为兰紫色，管内也无气泡，用“-”表示。
原理: 指示剂澳甲酚紫的指示范围为PH5.2-6.8（黄-紫）。
每一种糖（醇）培养基内只含一种糖（醇）的成分，接种进去的细菌若能发酵这种糖，则可产生乳酸，使PH下降，培养及就由兰紫色变为黄色，如果同时还产生CO2、H2、CH4等气体，则小管内留有气泡，如果不能发酵分解这种糖，则培养及不变色也无气泡。
培养基：蛋白胨水蛋白胨1%氯化钠0.5%蒸馏水适量其中的蛋白胨最好选用含色氨酸较多的多价蛋白胨。
每支小试管分装3-4ml, 10磅10分灭菌。
试剂：（欧立希氏试剂）对二甲基氨基苯甲醛 1g纯乙醇95ml浓盐酸20ml以上物品依次混合溶解方法：接种细菌于培养基中，37摄氏度培养24-48小时后，取出加乙醚约0.7cm厚，塞紧棉塞后摇震，使乙醚与培养物混匀，静置于试管架内数分钟，待乙醚浮至培养基表面，打开棉塞，沿试管壁慢慢加入靛基质试剂4-5滴，不要摇。
结果：乙醚层现红色为阳性，以“ + ”表示，不变者为阴性，以“-”表示。
原理：细菌若有色氨酸酶，就能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（吲哚）。
靛基质无色，但遇到对二甲基氨基苯甲醛，则可以生成红色的靛基质，以肉眼可见。
三、甲基红实验：培养及：葡萄糖蛋白胨水（PH7.4）葡萄糖0.5%磷酸氢二钾0.5%蛋白胨0.5%蒸馏水适量加热溶解后，分装小试管，每管3-4ml，10磅10分灭菌试剂：0.1g甲基红溶于300ml95%乙醇中，加蒸馏水至500ml方法：接种细菌于培养液中，37摄氏度培养2-4天，取出加M、R试剂3-4 滴。
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(一）碳水化合物代谢实验糖(醇、苷）类发酵实验（1)原理：细菌分解糖得能力与该菌就是否含有分解某种糖得酶密切相关,故分解糖得能力各不相同，细菌分解糖类后得终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气,使培养基颜色改变，从而判断细菌就是否分解某种糖或其她碳水化合物。
（2)基本培养基：在培养基中加入0、5％-1％得糖类(单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类(水杨苷、菊糖等）、培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型.（3)实验方法：取某一种细菌得２4h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内,37℃培养2４h，观察结果并记录.（4)结果判定：如果接种进去得细菌可以发酵某种糖或醇,则可产酸,使培养基由紫色变成黄色,如果不发酵,则仍保持紫色。
如发酵得同时又产生气体,则在微量发酵管顶部积有气泡。
（5)应用:就是鉴定细菌最主要最基本得实验,特别就是对肠杆菌科细菌得鉴定尤为重要。
氧化型与发酵型（Ｏ/F）得测定（1）原理:细菌在分解葡萄糖得过程中，必需有氧得参加，称为氧化型(O),细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解得,称为发酵型(F）。
发酵型细菌无论在有氧无氧得环境中都能分解葡萄糖。
不分解葡萄糖得细菌称为产碱型（-)。
这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义.（2）培养基：培养基蛋白胨2g，氯化钠5ｇ,磷酸氢二钾0、３g,葡萄糖10g,琼脂3g，1％溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水10００mL。
将蛋白胨、盐、琼脂与水混合,加热溶解，校正PH至7、2，然后加葡萄糖与指示剂，加热溶解,分装试管，３-4ｍL/管；115℃,高压蒸汽灭菌20m ｉn,取出冷却成琼脂柱。
（3）试验方法：挑取18—2４h得幼龄斜面培养物,穿刺接种,每种细菌接种两管，于其中一管覆盖1ｍL液体石蜡，3７℃培养２4h或更长时间。
（4）结果判定:(５)应用:O／F试验主要适用于G—肠道杆菌得鉴别。
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微生物鉴定之生化实验大全Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】（一）碳水化合物代谢实验糖（醇、苷）类发酵实验（1)原理：细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关，故分解糖的能力各不相同，细菌分解糖类后的终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。
（2)基本培养基：在培养基中加入%-1%的糖类（单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类（水杨苷、菊糖等).培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。
（3)实验方法：取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内，37℃培养24h，观察结果并记录。
（4)结果判定：如果接种进去的细菌可以发酵某种糖或醇，则可产酸，使培养基由紫色变成黄色，如果不发酵，则仍保持紫色。
如发酵的同时又产生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。
（5)应用：是鉴定细菌最主要最基本的实验，特别是对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。
氧化型与发酵型（O/F)的测定（1）原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有氧的参加，称为氧化型（O），细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解的，称为发酵型(F)。
发酵型细菌无论在有氧无氧的环境中都能分解葡萄糖。
不分解葡萄糖的细菌称为产碱型(-)。
这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。
（2）培养基：培养基蛋白胨2g，氯化钠5g，磷酸氢二钾，葡萄糖10g，琼脂3g，1%溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水1000mL。
将蛋白胨、盐、琼脂和水混合，加热溶解，校正PH至，然后加葡萄糖和指示剂，加热溶解，分装试管，3-4mL/管；115℃，高压蒸汽灭菌20min，取出冷却成琼脂柱。
（3）试验方法：挑取18-24h的幼龄斜面培养物，穿刺接种，每种细菌接种两管，于其中一管覆盖1mL液体石蜡，37℃培养24h或更长时间。
细菌生理生化实验报告
细菌生理生化实验报告细菌生理生化实验报告引言细菌是微生物界中最为广泛存在的一类生物，其在自然界中扮演着重要的角色。
为了更好地了解细菌的生理生化特性，我们进行了一系列的实验研究。
本报告将详细介绍实验的目的、方法、结果和讨论。
实验目的本次实验的目的是通过对细菌的生理生化特性进行观察和分析，探究其对环境的适应能力以及与人类的关系。
实验方法1. 细菌培养与分离：我们从自然环境中采集了多个样品，经过适当的稀释后，分别在琼脂平板上进行涂布，培养出各自的菌落。
2. 形态观察：通过显微镜观察细菌的形态特征，包括形状、大小、颜色等。
3. 静态培养：将细菌接种到含有特定营养物质的培养基中，观察其生长情况。
4. 生化反应：利用生化试剂对细菌进行一系列的生化反应测试，包括氧化酶试验、碳水化合物发酵试验等。
5. 抗生素敏感性测试：通过纸片扩散法，测试细菌对不同抗生素的敏感性。
实验结果1. 形态观察：我们观察到不同细菌的形态各异，有的呈球形，有的呈棒状，还有的呈螺旋形。
大小也有差异，从微小的球菌到较长的杆菌都有。
2. 静态培养：在不同培养基上，我们观察到细菌的生长情况有所差异。
有些细菌在富含葡萄糖的培养基上生长迅速，而在其他培养基上生长较慢。
3. 生化反应：细菌的生化反应也表现出多样性。
通过氧化酶试验，我们发现有些细菌能产生氧化酶，而有些则不具备这一能力。
碳水化合物发酵试验结果也显示了不同细菌的差异。
4. 抗生素敏感性测试：我们测试了多种常用抗生素对不同细菌的敏感性。
结果显示，不同细菌对抗生素的敏感性存在差异，有些细菌对某些抗生素表现出耐药性。
讨论通过本次实验，我们对细菌的生理生化特性有了一定的了解。
细菌的形态、生长特性、生化反应以及抗生素敏感性都表现出多样性。
这种多样性使得细菌能够适应不同的环境，并在自然界中发挥重要的作用。
然而，细菌也与人类密切相关。
有些细菌是人类的益生菌，可以帮助我们维持肠道健康；而有些细菌则是致病菌，会引发各种疾病。
微生物生化实验报告
微生物生化实验报告微生物生化实验报告引言微生物是一类极小的生物体，包括细菌、真菌和病毒等。
微生物在生态系统中扮演着重要的角色，对环境和人类健康具有深远影响。
为了更好地了解微生物的生化特性，我们进行了一系列的实验研究。
实验一：细菌的酸碱耐受性在这个实验中，我们选择了常见的大肠杆菌和乳酸菌作为研究对象，通过调整培养基的酸碱度来观察它们的生长情况。
实验结果显示，大肠杆菌对酸性环境更为耐受，而乳酸菌则更适应碱性环境。
这与它们在人体内的定位有关，大肠杆菌主要寄生在肠道中，而乳酸菌则主要存在于酸性环境中，如乳制品中。
实验二：真菌的产酶能力真菌是一类重要的微生物，它们具有丰富的酶系统。
我们选择了常见的曲霉菌和酵母菌进行实验，通过培养在含有特定底物的琼脂平板上，观察它们的酶活性。
实验结果显示，曲霉菌具有较高的纤维素酶和淀粉酶活性，而酵母菌则表现出较高的蛋白酶活性。
这些酶的产生对于真菌的生存和环境适应具有重要意义。
实验三：病毒的感染机制病毒是一种非常特殊的微生物，它无法独立生存，必须寄生在宿主细胞内。
我们选择了常见的流感病毒和艾滋病病毒进行实验，通过观察它们与宿主细胞的相互作用来了解感染机制。
实验结果显示，流感病毒通过与宿主细胞表面的受体结合，进入细胞内部并复制自身。
而艾滋病病毒则通过感染免疫细胞破坏宿主免疫系统。
这些研究有助于我们更好地了解病毒的传播和防治方法。
实验四：微生物的代谢途径微生物的代谢途径对其生存和环境适应至关重要。
我们选择了常见的厌氧菌和好氧菌进行实验，通过观察它们在不同环境条件下的代谢途径来了解其能量来源。
实验结果显示，厌氧菌主要通过无氧呼吸产生能量，而好氧菌则通过有氧呼吸产生能量。
这种代谢途径的差异使得它们在不同环境中具有不同的竞争优势。
结论通过以上实验，我们对微生物的生化特性有了更深入的了解。
不同微生物在酸碱耐受性、产酶能力、感染机制和代谢途径等方面表现出差异，这与它们在不同环境中的生存和适应有关。
实验十细菌生化实验-微生物实验
2、记录大肠杆菌及普通变形杆菌对葡萄糖和乳糖的 发酵试验结果。以“+”表示产酸或产气，“－” 表示不产酸或不产气。
3、记录大肠杆菌和产气杆菌的吲哚试验、甲基红试 验、伏-普试验、柠檬酸盐试验及硫化氢试验结果， 以“+”表示阳性反应。“－”表示阴性反应。
4、不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？
五、实验报告
一马当先，全员举绩，梅开二度，业 绩保底 。20.12. 1720.1 2.1708: 2308:23 :3808:2 3:38Dec-20
牢记安全之责，善谋安全之策，力务 安全之 实。202 0年12 月17日 星期四8 时23分 38秒T hursday, December 17, 2020
相信相信得力量。20.12.172020年12月 17日星 期四8 时23分3 8秒20. 12.17
试验名称
培养基名称
菌种名称 接种 接种 方式 管数
吲哚试验
蛋白胨水培养基 大肠杆菌和 液体 1
甲基红试验 葡萄糖蛋白胨培养基 产气肠杆菌 液体 1
伏普试验 葡萄糖蛋白胨培养基
液体 1
柠檬酸盐试验 柠檬酸盐培养基
斜面 1
五、实验报告
1、分别记录试验菌种对淀粉水解、脂肪水解、明胶 液化、石蕊牛奶及尿素试验的结果。以“＋”表示 阳性，“－”表示阴性。
微生物实验内容汇总
【意义】
革兰氏染色法的原理尚未阐明，可能与以下因素有关。
等电点学说
通透性学说
化学学说
【革兰氏染色法的原理 】
01
G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易进入。
02
G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，含大量脂质，乙醇易渗入。
通透性学说
G+菌等电点（pI2~3）
G-菌等电点（pI4~5） 在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。
芽胞示教片：破伤风杆菌。
鞭毛示教片：变形杆菌。
荚膜示教片：肺炎双球菌。
2.细菌的特殊结构观察
产芽孢细菌的种类
芽孢
芽胞
菌体 （营养细胞）
破伤风梭菌×1000
鞭毛
变形杆菌鞭毛×1000
细菌荚膜示意图
荚膜的观察： 负染色
齿垢
03
生理盐水、结晶紫、碘液、95%乙醇、复红
【材料】
酒精灯、接种环、玻片、 由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。
加琼脂、溶化、定容、（过滤） 分装、加塞、包扎 灭菌
（6、摆斜面）
称量及溶化 调pH
操作步骤
01
02
细菌的分离接种接技术
分离培养 平板分离划线接种法（操作）
纯培养 半固体培养基接种法（操作） 斜面培养基接种法 液体培养基接种法
平板分离划线接种法
连续划线法 ②分段划线法
高度敏感
≧29
≧ 15
﹥ 17
≧ 15
白色葡萄球菌（ G+ ）
大肠杆菌（ G- ）
病原性球菌标本片观察 链球菌、 脑膜炎双球菌
微生物学实验操作大全
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试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布三、操作步骤（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普遍的细菌基础培养基。
其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15~20g，水1000ml，pH7.4~7.61、称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯，牛肉膏极易吸潮，故称量时要迅速。
2、加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失水分。
3、调pH 检测培养基的pH，若偏酸，可滴加1mol/l NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。
实验十 微生物的生理生化反应(二)
五、结果Байду номын сангаас思考题
1，将实验结果填于p123表中
“+”表示阳性反应；“-”表示阴性反应。
实验十 微生物的生理生化反应 （二）
vp试验 甲基红试验 淀粉水解试验
一、目的要求
1.了解细菌的一般生化反应； 2.了解细菌的生化鉴定方法其原理。
二、基本原理
1．伏一普（Voges-proskauer）二氏反应， 即V· P反应 2．甲基红试验（M· R试验） 3．淀粉水解试验
1．伏一普（Voges-proskauer） 二氏反应，即V· P反应
（1）淀粉培养基在水浴中融化后，冷至50℃， 以无菌操作制成平板。用接种环取少量枯 草杆菌在平板的一边划“+”字形接种（或 点种），另取少量大肠杆菌菌在平板的另 一边接种，在各培养皿底部标明菌名和组 别。置37℃温箱中培养16～20小时。
（2）观察结果：打开皿盖，滴加少量碘液 于培养基上，轻轻旋转培养皿，使碘液均 匀铺满整个平板。如果在菌周围出现无色 透明圈，说明淀粉被水解。透明圈大小说 明该菌水解淀粉能力的大小。
1．伏一普（Voges-proskauer） 二氏反应，即V· P反应
（1）取葡萄糖蛋白胨水培养基四支，分别 接种大肠杆菌，自己分离的大肠杆菌，枯 草杆菌，留一支作空白对照，并在试管上 注明菌名和组别。置37℃培养24小时。 （2）培养后取出，按书123页上的要求加 试剂后，放置37℃温室30分钟，呈红色者 为阳性，不呈红色者为阴性。
2．甲基红试验（M· R试验）
（1）取葡萄糖蛋白胨水培养基四支，一支 接种大肠杆菌，第二支接自己分离的大肠 杆菌，第三支接枯草杆菌，第四支不接种， 作空白对照。在各试管上标明菌名和组别， 置37℃培养48小时。 （2）培养后取出，沿管壁加入甲基红指示 剂3～4滴上层呈红色者为阳性。
微生物细菌鉴定试验汇总
精选课件
9
CAMP试验
原理：
B群链球菌能产生一种胞外因子—— CAMP,它能增强金黄色葡萄球菌β-溶
血毒素的活性，因此，在两菌交界处 出现箭头样的溶血增强区。
精选课件
10
CAMP试验方法
方法：
取血平板一块，用产生β-溶血毒素 的金葡菌在中央划一道线，将待检菌据此 线0.5cm处垂直划线。35℃18~24小时培养， 观察结果。
精选课件
8
胆汁溶菌试验方法
方法：
➢ 平板法：取胆酸钠溶液一环，放在平板的 菌落上，35℃30min观察结果。
➢ 试管法：于0.9ml培养了18～24小时的菌 液中，加入取氧胆酸钠试剂0.1ml或牛胆 盐0.2ml混匀，37℃水浴10～30min，观察 结果。
应用：
主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌。
金葡
表葡、腐生
S
素新 生 霉R
精选课件
－
链球菌 肠球菌
表葡
腐生
13 13
链球菌属鉴定流程
触酶试验：阴性
观察血平板上溶血环
β-溶血环
杆菌肽 、CAMP、 胆七 、高盐
非β-溶血环
Optochin、杆菌肽、
胆七 、高盐
精选课件
14 14
非β溶血链球菌鉴定
菌种 肺炎链球菌 草绿色链球菌 牛链球菌
Optochin 敏感试验
精选课件
35
7.动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验
【原理】：培养基为含尿素、蛋白胨的半固体培养基，指示 剂为酚红。具色氨酸酶的细菌能分解色氨酸产生吲哚，加 入吲哚试剂后，培养基上层的吲哚会变红；具脲酶的细菌 能分解尿素产氨，使整个培养基变碱呈红色；有动力的细 菌沿穿刺线扩散生长。
细菌生化试验
微生物常规鉴定技术一.形态结构和培养特性观察1.微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。
2.细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。
不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。
，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。
因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。
2.1细菌的培养特征包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。
在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。
半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。
琼脂平皿上的生长表现观察并记录不同的菌落：大小、形状、边缘、表面性状、隆起度、颜色、透明度、硬度、溶血等。
观察琼脂斜面上的生长表现：菌苔的颜色及茂盛情况。
观察半固体琼脂的生长现象：绒毛状、线状等。
细菌的培养特征：点状圆形丝状不规则形假根状纺锤状扁平隆起凸起垫状脐状边缘整齐波状裂片状啮蚀状 .丝状卷发状丝线状刺毛状串珠状疏展状树根状假根状丝状串珠状乳头状绒毛状树根状量杯状萝卜状漏斗状囊状层状絮状环状蹼状膜状2.2霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。
液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。
霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。
霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。
霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。
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四、实验步骤
1、细菌水解大分子物质试验 2、糖发酵试验
➢培养基：葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基 （内装杜氏小管）（各3支） ➢菌种：大肠杆菌和产气肠杆菌 ➢方法：分别接种于葡萄糖发酵培养基和乳糖发 酵培养基
四、实验步骤 1、细菌水解大分子物质试验 2、糖发酵试验 3、IMViC试验
IMViC试验
➢大 产肠气肠杆杆菌菌：阳：阳性性 ➢产气肠杆菌：阴性
三、实验材料
1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿 假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），普通变形杆菌（Proteus vularis），产气肠杆菌。
2、培养基：固体油脂培养基，固体淀粉培养基，明胶培养基 试管，石蕊牛奶试管，尿素琼脂试管、葡萄糖发酵培养基试 管和乳糖发酵培养基试管各3支，普通变形杆菌（内装有倒 置的德汉氏小管） ，蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培 养基，柠檬酸盐斜面培养基，醋酸铅培养基。
3、溶液或试剂：革兰氏染色用卢氏碘液（Lugol’s iodine solution），甲基红指示剂，40% KOH，5% α-萘酚，乙醚， 吲哚试剂等。
4、仪器或其他用具：无菌平板，无菌试管，接种环，接种针， 试管架。
四、实验步骤
1、细菌水解大分子物质试验
淀粉水解试验 油➢脂培水养解基试：验淀粉培养基平板 明➢➢胶菌 培液种 养化： 基试：大验肠 油杆脂菌培和养枯基草平芽板孢杆菌 石➢➢➢蕊方 菌 培牛法种 养乳： 基：试：平 大肠 试板验上杆管划菌明和胶“金培十黄养”色基字葡接萄种球菌
5、假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验 应该出现什么结果？
6、为什么大肠杆菌的甲基红反应阳性，而产气肠杆 菌为阴性？这个试验与伏－普试验最初底物与最终 产物有何异同之处？
7、说明在硫化氢试验中醋酸铅的作用，可以用哪种 化合物代替醋酸铅？
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➢大 ➢➢➢➢➢➢注 方 注 菌 方 培 菌 方种意 法 意 法 法种 养： ： ： ： ：：： 基接 平 接 穿 粘 斜：大种 板 种 刺 面乳肠试产前上前接划杆管碱在划在种线菌石平折平接菌或蕊板线板种或牛产底接底铜乳气部种部绿培肠作作假养杆记记单基菌号 号胞（；菌2支“）十”字不要太 ➢➢注 注意意：：观20察℃结培构养注意牛乳产酸、产碱、凝固、 胨化现象是连续出现的。
试验名称
培养基名称
菌种名称 接种 接种 方式 管数
吲哚试验
蛋白胨水培养基 大肠杆菌和 液体 1
甲基红试验 葡萄糖蛋白胨培养基 产气肠杆菌 液体 1
伏普试验 葡萄糖蛋白胨培养基
液体 1
柠檬酸盐试验 柠檬酸盐培养基
斜面 1
五、实验报告
1、分别记录试验菌种对淀粉水解、脂肪水解、明胶 液化、石蕊牛奶及尿素试验的结果。以“＋”表示 阳性，“－”表示阴性。
2、记录大肠杆菌及普通变形杆菌对葡萄糖和乳糖的 发酵试验结果。以“+”表示产酸或产气，“－”表 示不产酸或不产气。
3、记录大肠杆菌和产气杆菌的吲哚试验、甲基红试 验、伏-普试验、柠檬酸盐试验及硫化氢试验结果， 以“+”表示阳性反应。“－”表示阴性反应。
4、不利用碘液验
吲哚试验：
甲➢色基氨红酸试酶验：（色M氨.R.酸试→验吲）哚：＋对二甲基氨基苯甲醛→ 伏玫➢产-瑰普酸吲试能哚验力（（：红乙强色酰，）甲甲基基甲红醇变试红验；）弱：：甲基红不变色 柠➢葡檬➢萄酸大糖盐肠→试杆丙验菌酮：：酸阳→性乙酰甲基甲醇→2,3-丁二醇
➢乙能➢否酰产利甲气用基肠柠甲杆檬醇菌酸→：作O阴H为性－碳→源二乙酰＋精氨酸的胍基→红 色化➢合大物肠杆菌：阴性
实验十细菌生化实验-微生物实 验
二、实验原理
1、微生物对生物大分子的分解利用 2、➢糖淀发粉酵水试解验：淀粉酶 3、➢I油产M脂酸ViC水：试解溴验：甲脂酚肪紫酶指示剂
➢明➢胶大液肠化杆：菌蛋：白酶 ➢石➢蕊产牛气乳肠试杆验菌：：产酸、产碱、胨化、酸凝固等。 ➢产气：杜氏小管检测
➢大肠杆菌： ➢产气肠杆菌：