实验八 微生物生理生化试验
生理性生化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些糖的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色物质，为甲基红反应阳性。
三、实验方法1. 吲哚试验：将细菌接种于含有色氨酸的培养基中，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
2. 甲基红试验：将细菌接种于含有葡萄糖的培养基中，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
四、实验结果1. 吲哚试验：接种了大肠杆菌的试管在加入乙醚和吲哚试剂后，能在乙醚和液体培养基的交界面上产生红色环状物质，大肠杆菌的吲哚试验显阳性。
2. 甲基红试验：大肠杆菌甲基红试验阳性，即大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH。
五、实验分析1. 吲哚试验失败原因分析：可能是因为乙醚加量太少，影响实验现象的观察；另一个可能的原因是大肠杆菌菌种有问题。
2. 甲基红试验结果分析：大肠杆菌在培养后仍能维持酸性，而产气杆菌则转化为非酸性末端产物。
六、实验结论1. 通过本实验，我们了解了细菌生理生化反应原理；2. 掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 认识到生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
七、实验注意事项1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免污染；2. 注意观察实验现象，记录实验数据；3. 分析实验结果，找出实验失败的原因。
第2篇一、实验目的1. 了解生理性生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握常用的生理性生化指标及其检测方法。
3. 通过实验，学会使用生理性生化检测仪器，提高实验技能。
二、实验原理生理性生化实验是研究生物体内各种生化反应及其代谢过程的重要手段。
生理生化实验报告
微生物实验报告微生物的生理生化实验侯汶青201300140031 组别：周四下午五组同组者：李璇、李倩茜实验完成时间：2014年12月6号一、实验目的1、证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2、掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
3、了解糖发酵的原理，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
4、了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
5、熟习生理生化反应培养基的配制原理和一般方法步骤。
6、巩固无菌实验操作。
二、实验器材1、菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌（大分子水解实验）；大肠杆菌、变形杆菌（糖发酵实验）；大肠杆菌、产气杆菌（吲哚实验）；大肠杆菌、产气杆菌（甲基红实验）；2、培养基：（1）固体淀粉培养基，固体油脂培养基（淀粉和油脂的大分子水解实验）；（2）葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基试管每组共5支，而且内装有倒置的德汉氏小管（糖发酵实验）；（3）蛋白胨水培养基（吲哚实验）（4）葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红实验）3、溶液和试剂：卢戈氏碘液，乙醚，吲哚试剂，甲基红试剂，蒸馏水，去离子水、氢氧化钠溶液、中性红试剂、溴甲酚紫乙醇溶液等4、仪器或其他用具：成套培养皿，试管，玻璃棒、酒精灯，烧杯，德汉氏小管，接种环、吸管、滴管、洗耳球、无菌操作台、量筒、试管架等三、实验原理1、微生物的生理生化反应原理：在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。
代谢过程主要是酶促反应过程。
许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以催化细胞外的化学反应。
各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。
微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性，因此使得微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。
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对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根通保据过护生管高产线中工敷资艺设料高技试中术卷资，配料不置试仅技卷可术要以是求解指，决机对吊组电顶在气层进设配行备置继进不电行规保空范护载高与中带资负料荷试下卷高问总中题体资，配料而置试且时卷可，调保需控障要试各在验类最；管大对路限设习度备题内进到来行位确调。保整在机使管组其路高在敷中正设资常过料工程试况中卷下，安与要全过加，度强并工看且作护尽下关可都于能可管地以路缩正高小常中故工资障作料高；试中对卷资于连料继接试电管卷保口破护处坏进理范行高围整中，核资或对料者定试对值卷某，弯些审扁异核度常与固高校定中对盒资图位料纸置试，.卷保编工护写况层复进防杂行腐设自跨备动接与处地装理线置，弯高尤曲中其半资要径料避标试免高卷错等调误，试高要方中求案资技，料术编试交写5、卷底重电保。要气护管设设装线备备置敷4高、调动设中电试作技资气高，术料课中并3中试、件资且包卷管中料拒含试路调试绝线验敷试卷动槽方设技作、案技术，管以术来架及避等系免多统不项启必方动要式方高，案中为；资解对料决整试高套卷中启突语动然文过停电程机气中。课高因件中此中资，管料电壁试力薄卷高、电中接气资口设料不备试严进卷等行保问调护题试装，工置合作调理并试利且技用进术管行，线过要敷关求设运电技行力术高保。中护线资装缆料置敷试做设卷到原技准则术确：指灵在导活分。。线对对盒于于处调差，试动当过保不程护同中装电高置压中高回资中路料资交试料叉卷试时技卷，术调应问试采题技用，术金作是属为指隔调发板试电进人机行员一隔，变开需压处要器理在组；事在同前发一掌生线握内槽图部内 纸故，资障强料时电、，回设需路备要须制进同造行时厂外切家部断出电习具源题高高电中中源资资，料料线试试缆卷卷敷试切设验除完报从毕告而，与采要相用进关高行技中检术资查资料和料试检，卷测并主处且要理了保。解护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
微生物的生理生化试验
一、糖类代谢试验
5、β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）
二、蛋白质代谢试验
不同细菌分解蛋白质能力不同，可利用不 同氮源来合成菌体蛋白质，可通过检测加 入蛋白质分解后的产物或PH变化来鉴定细 菌。
二、蛋白质代谢试验
1、吲哚（indole）试验（又称靛基质试验） 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：细菌分解蛋白胨中色氨酸生成的吲哚与试剂 中的二甲氨基苯甲醛作用生成红色的玫瑰吲哚。 方法：纯培养物接种蛋白胨水后35℃培养24-48h沿 管壁徐徐加入Kovac氏试剂或欧氏试剂0.5ml观察。 结果：两层液体交界处出现红色为阳性，无色为阴 性。
2、凝固酶试验
目的：常用于鉴别葡萄球菌。 原理：金黄色葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维 蛋白原转变为纤维蛋白附着于细菌表面产生凝固。分为 与细胞壁结合的凝固酶（玻片法）与菌体生成后释放在 培养基中的游离凝固酶（试管法）。 玻片法：在玻片上加生理盐水与血浆个一滴，观察凝集 情况 试管法：三只含1：4血浆0.5ml的试管各接种待检菌、 阳性菌株和肉汤阴性菌株，待检菌出现凝固且阴性对照 不凝固为阳性。
三、碳源和氮源利用试验
2、丙二酸盐利用试验 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：某些细菌将丙二酸盐作为唯一的碳源时，丙 二酸盐被分解成为碳酸钠，使培养基变碱性。 结果：培养基变蓝色为阳性，颜色无变化为阴性。
三、碳源和氮源利用试验
2、丙二酸盐利用试验
三、碳源和氮源利用试验
3、醋酸盐利用试验 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：细菌利用铵盐作为唯一氮源同时利用醋酸盐 作为唯一碳源时，分解醋酸钠产生二氧化碳和水与 钠离子结合生成碳酸钠使培养基呈碱性，指示剂由 绿变蓝。 结果：斜面上有菌落生长且培养基变蓝色为阳性。
实验八微生物生理生化试验
伏－普试验用于测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产 物的能力,如丙酮酸,丙酮酸进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇,此化合 物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰,二乙酰与蛋白胨中的 精氨酸的呱基作用,生成红色化合物,即伏－普试验阳性,不产生红色化 合物为反应阴性,
实验八 微生物生理生化试验
一 实验器材 1 菌种 大肠杆菌,普通变形杆菌,金黄色葡萄球菌,产气肠杆菌 2 培养基 尿素琼脂试管,蛋白胨水培养基,葡萄糖蛋白胨水培养基,葡萄糖发酵管 和乳糖发酵管各3支, 3 溶液和试剂 甲基红指示剂,5％萘酚,乙醚和吲哚试剂 4 仪器和其他用品 接种针
二 目的要求 1 大分子物质水解试验
三 糖发酵试验 1 在发酵管上标明所接种的细菌名称, 2 取葡萄糖发酵管3支,分别接入大肠杆菌、普通变形杆菌,第三支不接 种,作为对照,另取乳糖发酵管3支,同样操作, 3 将接种和对照的发酵管置37 ℃培养24－48h, 4 观察发酵管的颜色和有无气泡,
各试验需接种的菌种:
1 明胶水解试验：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 20 ℃ 2－5 d
3 尿素试验 1 取2支尿素培养基试管,用记号笔表面各管欲接种的菌名, 2 分别接种普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌 两种细菌对尿素的分解速
度不同 ,需要观察2次, 3 将接种后的试管置35 ℃培养24－48h, 4 观察培养基颜色变化, 尿素酶存在时为红色,无尿素酶时为黄色,
二 IMViC试验
1 接种与培养 1 用接种针将大肠杆菌和产气肠杆菌分别穿刺接入2支醋酸铅培养基中
温15－30 min,红色为阳性,大肠杆菌阴性,产气肠杆菌阳性
思考题
1. 为什么尿素实验可用于鉴定变性杆菌属 细菌
实验八 微生物生理生化特性检测(糖发酵、氨化作用、IMVC、硫化氢试验等)
菌，第三支不接做对照。
▪ 将接种的和做对照的9支试管放置28~30℃培养2~3天。
表1 糖发酵试验结果
试验菌种
发酵特性
供试糖
葡萄糖 蔗糖
乳糖
大肠杆菌
产酸
产气
枯草杆菌
产酸
产气
对照
产酸、产气
注：记录生长情况用符号表示： —：不生长； +：生长差； ++：生长一般； +++：生长良好
观察各管红色石蕊试纸变色及培养液浑浊情况。
表2 好气菌的氨化作用试验结果
检测 工程
接种 菌样
培养液
浑浊程度
红色石蕊试 纸变色程度
土壤颗粒
大肠杆菌
枯草杆菌
空白对照
三 IMVC试验及H2S试验
1 目的要求 2 根本原理 3 试验材料 4 操作步骤
1 目的要求
❖ 学习掌握IMVIC试验原理。 ❖ 学习硫化氢试验检测细菌产生硫化氢的原理和方法。 ❖ 学习掌握IMVIC试验及H2S试验在肠道菌鉴定中的方法及意
二 好气氨化作用试验
1 目的要求 2 根本原理 3 试验材料 4 操作步骤
1 目的要求
▪ 了解好气氨化作用的原理。 ▪ 掌握通过氨化作用鉴别不同微生物的方法。 ▪ 稳固微生物的接种技术。
2 根本原理
不同微生物对含氮有机物分解能力及代谢途 径、最终产物不尽相同，这些特征性生化反响可作 为菌种鉴定的重要依据。微生物可分解含氮有机物， 最终产生氨气。以酸碱指示剂试纸检测。
吲哚试验
检测吲哚的产生。 某些细菌可产生色氨酸酶，分解蛋白胨 中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。对二甲基氨 基苯甲醛遇吲哚形成玫瑰吲哚〔红色〕。 红色者为吲哚试验阳性。
微生物生理生化实验
姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别3【实验题目】微生物生理生化实验【实验目的】1.了解生理生化的意义。
2.掌握几种常用生理生化的实验方法。
【实验器材】1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌，变形杆菌，产气肠杆菌2、试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等3、仪器和用具：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等4、培养基淀粉培养基、油脂培养基（大分子物质水解实验）葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内附倒置的德汉氏小管）（糖发酵实验）蛋白胨水培养基（吲哚实验）葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红培养基）【实验原理】在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程。
具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶。
许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以促进细胞外的化学反应。
各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分解能力以及分解代谢的最终产物的不同，反映出他们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的内容。
具体实验原理如下：一、大分子物质的水解实验原理姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别31、淀粉水解由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，所以必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精,双糖和单糖，能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉。
已知淀粉遇到碘会显现蓝色，因此可通过在淀粉培养基上滴加碘液来判断微生物是否能产生淀粉酶分解淀粉，菌落周围不呈蓝色，出现无色透明圈，则该菌种能够水解淀粉。
2、油脂水解脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，而产生的脂肪酸可改变培养基的PH,因此在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后可通过观察菌苔的颜色判断菌种是否能够水解油脂，若出现红色斑点，则说明这种菌可产生分解油脂的酶。
微生物生化实验实训报告
一、实验目的1. 理解微生物生理生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握微生物生理生化实验的操作技能。
3. 通过实验，了解微生物的代谢特性，为微生物分类、鉴定及利用提供依据。
二、实验原理微生物生理生化实验是研究微生物生理生化特性的实验技术，通过对微生物代谢过程中产生的各种代谢产物进行分析，可以了解微生物的生理生化特性。
实验原理主要包括以下几个方面：1. 微生物代谢过程中，各种代谢产物具有不同的生物化学特性，可以通过特定的生化反应进行检测。
2. 通过微生物对各种底物的分解能力，可以了解微生物的酶系统及其功能。
3. 通过微生物的生理生化反应，可以鉴定微生物的种类。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台、显微镜、移液器、试管、培养皿、酒精灯等。
2. 试剂：葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、蛋白胨水、卢戈氏碘液、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
四、实验内容1. 微生物生理生化实验一：微生物对糖类的分解实验（1）实验原理：微生物对糖类的分解能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关。
在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。
（2）实验方法：取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内，37℃培养24h，观察结果并记录。
（3）结果分析：如果接种进去的细菌可发酵某种糖或醇，则可产酸，使培养基由紫色变成黄色，如果不发酵，则仍保持紫色。
如，发酵的同时又产生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。
2. 微生物生理生化实验二：微生物的吲哚和甲基红试验（1）实验原理：吲哚和甲基红试验是鉴定肠道细菌的重要方法。
吲哚试验检测细菌是否产生吲哚，甲基红试验检测细菌的代谢类型。
（2）实验方法：取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到蛋白胨水中，加入吲哚试剂和甲基红试剂，观察结果并记录。
（3）结果分析：若产生吲哚，则在试剂中加入的固体石蕊纸条变红；若产生甲基红，则试剂颜色由黄色变为红色。
微生物生理生化反应实验报告
微生物的生理生化反应一、实验目的1.掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的测定方法。
2.了解细菌代谢类型的多样性。
3.了解细菌生长现象及代谢产物在鉴别中的意义。
4.学习接种技术。
二、实验原理在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌。
1.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。
产酸后再加入溴甲酚紫指示剂后会使溶液呈黄色，且杜氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且杜氏小管中无气体。
2.甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色，即甲基红反应。
大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
3.伏-普试验（VP）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成非酸性或中性末端产物，某些细菌产生丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇，在碱性条件下被氧化成二乙酰，二乙酰与胍基作用，生成红色化合物，为阳性。
4.靛基质（吲哚）试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测的指标。
大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。
5.硫化氢实验：某些细菌分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫酸铵亚铁等铁盐可与硫化氢反应生成不溶性硫化亚铁之黑色沉淀，为硫化氢实验阳性。
微生物的生理生化实验
实验名称：微生物的生理生化实验姓名：学号：系别：实验日期：同组同学名单：摘要：本实验通过应用细菌鉴定中常用的生理生化反应及原理，验证了几种常见菌种的生理生化特性，充分体现了微生物生理学实验在微生物分类鉴定中的意义。
实验目的：1.学习细菌鉴定中常用的生理生化反应及原理2.了解微生物与氧的关系3.学习抗菌谱的测定方法4.学习微生物学生理学实验的观察方法。
5.学习微生物生理学实验在微生物分类鉴定中的意义。
实验材料：1.各种药品、指示剂、试剂（吲哚试剂、甲基红试剂、V. P. 试剂、抗生素等）2.玻璃器皿3.高压灭菌器4.菌种：E. coliStaphylococcus arueusEnterobacter aerogenes (产气肠杆菌)Proteus vulgaris (变形杆菌)Bacillus subtilisClostridium acetobutylicum (丙酮丁醇梭菌)实验方法及步骤：一、各种培养基的配制以及物品的准备(一)培养基的配制：1.名称：葡萄糖蛋白胨水培养基分装：5支中试管（5ml/支）用途： V. P. 实验、甲基红实验2.名称：蛋白胨水培养基分装：5支中试管（5ml/支）用途：吲哚实验3.名称：葡萄糖发酵培养基分装：4支中试管（5ml/支）用途：糖发酵4.蔗糖发酵培养基分装：4支中试管（5ml/支）用途：糖发酵5.乳糖发酵培养基分装：4支中试管（5ml/支）用途：糖发酵6.名称：酚红半固体柱状培养基分装：大试管，20ml/支，每组3支用途：微生物与氧的关系7.名称：牛肉膏蛋白胨固体培养基分装：100ml/250ml 三角瓶用途：微生物与抗生素的关系8.名称：牛肉膏蛋白胨液体培养基分装：2支中试管，2ml/支2支三角瓶，5ml/支8支中试管， 4.5ml/支用途：细菌转导9.名称：素琼脂培养基（9）分装： 6支中试管，4ml/支用途：细菌转导10.名称：EMB（10），碳源：半乳糖分装： 100ml/250ml三角瓶用途：细菌转导(二)物品准备1.小培养皿，内装一只大头针；2.0.2ml和1ml吸头等；3.培养皿12套。
浙江师范大学微生物实验报告实验8 细菌的生理生化鉴定
实验8 细菌的生理生化鉴定1 实验目的1)了解微生物对大分子物质水解的原理和方法，了解糖发酵及IMViC的原理和方法。
2)鉴定未知菌对淀粉、明胶的水解能力。
3)鉴定未知菌糖发酵试验、IMViC 试验中的能力。
2 实验原理1)大分子物质的水解试验微生物不能直接利用大分子的淀粉、蛋白质和脂肪，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白为氨基酸等。
淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
明胶是由胶原蛋白经水解产生的蛋白质，在25°C以下维持凝胶状态，呈固体形式存在，在25°C以上明胶会液化。
有些微生物能产生明胶酶，水解明胶而使之液化。
石蕊在酸性条件下为粉红色，在碱性条件下紫色，被还原时为无色。
2)糖发酵试验糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。
绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。
有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等）；有些细菌只产酸不产气。
大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖并产气。
当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）变为黄色（pH5.2）。
气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。
3)IMViC试验吲哚试验是用来检测吲哚的产生。
有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。
吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。
大肠杆菌吲哚试验为阳性。
甲基红试验是用来检测葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂由橘黄色（pH6.3）变为红色（pH4.2），即甲基红反应。
实验八微生物生理生化实验
例一 1大格=16中格 =16 X 25小格 =400小格
（3）解释在细菌培养中吲哚试验的化学原理，为什么在这个试验 中用吲哚的存在作为色氨酸酶活性的指示剂，而不用丙酮酸？
酵母菌大小的测定和细胞计数
材料：酵母菌，血球计数板
内容： 细胞数量测定数板的分区与分格
* * # # * * # 例二 1大格=25中格 =25 X 16小格 =400小格 # #
2. 糖类发酵试验：（含碳化合物的分解利用）
（1）以液体接种的方式分别接种B.S和E.C于葡萄糖、蔗 糖、乳糖培养基中。 （2）接种后置于37℃恒温培养箱，培养2d。 （3）观察结果时，看各管颜色变化及杜氏小管有无气 泡。产酸产气用“⊕”表示；只产酸不产气用“+” 表示；不产酸也不产气用“—”表示。
糖 发 酵 试 验
3. 吲哚试验：（含氮化化合物的分解利用）
（1）以液体接种的方式分别接种枯草杆菌和大肠杆菌于蛋 白胨水培养基中。 （2）接种后置于37℃恒温培养箱，培养2d。 （3）观察结果时，在培养液中加入乙醚约1毫升（使呈明 显的乙醚层）。充分振荡，使吲哚溶于乙醚中，静置片 刻，待乙醚浮于培养液上面时，沿管壁慢慢加入吲哚 试剂10滴。如吲哚存在，则乙醚层呈玫瑰红色 （注意：加入吲哚试剂后，不可再摇动，否则红色不 明显）。以“+”、“—”表示有无红色的玫瑰吲哚。
实验八
微生物的生理生化反应
一、目的要求
学习检测微生物代谢特性的试验方法
掌握淀粉水解试验、糖发酵试验、吲哚试验、石蕊 牛乳试验的反应原理
二、基本原理
代谢：在所有生活细胞中存在的化学反应 应（酶促反应 ） 生理生化反
微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性，因 此使得微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，同时 也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。
实验八 微生物生理生化试验共17页共19页
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
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36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯
拉
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底
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（二）IMViC试验
机酸为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH大约升至6。因此， 此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
大肠杆菌为阳性（红色），产气肠杆菌为阴性（黄色）。
伏－普试验用于测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产
物的能力，如丙酮酸。丙酮酸进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，此化 合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中 的精氨酸的呱基作用，生成红色化合物，即伏－普试验阳性，不产生红 色化合物为反应阴性。 产气肠杆菌为阳性，大肠杆菌为阴性。 硫化氢试验也是检查肠道细菌的生化试验。硫化氢试验是检测硫化 氢的产生，也是用于肠道细菌检查的常用生化试验。有些细菌能分解含 硫的有机物如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸等产生硫化氢，硫化氢与培 养基中的铅盐或铁盐等形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物，为硫化氢 试验阳性，可用于鉴别细菌。 产气肠杆菌为阳性，大肠杆菌为阴性。
1 接种与培养
（1）用接种针将大肠杆菌和产气肠杆菌分别穿刺接入2支醋酸铅培养基 中（硫化氢试验），置37℃培养48 h。
（2）将大肠杆菌和产气肠杆菌分别接入2支葡萄糖蛋白胨水培养基（甲
基红和伏－普试验），置37℃培养48 h。 2 结果观察
（1）硫化氢试验：培养48 h后，观察黑色硫化铅的产生。
（2）甲基红试验：培养48 h后，葡萄糖蛋白胨水培养物内加入甲基红 试剂2滴，培养基变为红色为阳性，变为黄色为阴性。
有些微生物能水解牛奶中的蛋白质酪素，石蕊牛奶培养基由脱脂牛
奶和石蕊配制而成，是昏浊的蓝色，酪素水解成氨基酸和肽后，培养基 会变成透明。石蕊牛奶也用于检测乳糖发酵，在酸存在下，石蕊会转变
成粉红色，过量的酸可引起牛奶的固化（凝乳形成），氨基酸的分解会
引起碱性反应，石蕊变为紫色。某些细菌能还原石蕊，使试管底部变为 白色。
（4）糖发酵试验：葡萄糖发酵管和乳糖发酵管：
大肠杆菌、普通变形杆菌
37℃
24－48 h
（5）硫化氢、甲基红（葡萄糖蛋白胨水）和伏－普试验（葡萄糖蛋白胨
水） ：大肠杆菌、产气肠杆菌
37℃
48 h
各试验结果判定：
（1）明胶水解试验：明胶液化 （＋）， 明胶不液化（－） （2）石蕊牛奶试验： 酸性条件下粉红色，碱性条件下紫色，被还原时白色。
2 IMViC（吲哚、甲基红、伏－普和柠檬酸盐）试验
这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气杆菌，多用于水的 细菌检查。 吲哚试验是用来检测吲哚的产生，有些细菌产生色氨酸酶，分解蛋 白胨中的色氨酸，产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合， 形成红色的玫瑰吲哚（红色化合物）。但并非所有的微生物都具有分解 色氨酸产生吲哚的能力，因此吲哚试验可作为一个生物化学检测的指标。 大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。
思考题
1. 为什么尿素实验可用于鉴定变性杆菌属 细菌？ 2. 加入某些微生物可以有氧代谢葡萄糖， 发酵试验应该出现什么结果？ 3. 为什么大肠杆菌是甲基红反应阳性，儿 产气肠杆菌为阴性？这个试验与伏-普实验 最初底物和最终产物有何异同？为什么会 出现不同？ 4. 说明在硫化氢试验中醋酸铅的作用，可 以用哪些化合物代替醋酸铅？
（3）尿素试验： 红色为尿素酶阳性，黄色为尿素酶阴性 葡萄球菌分解较慢，普通变形杆菌分解较快 （4）糖发酵试验：产酸为黄色,（＋） 普通变形杆菌，分解葡糖产酸产气，不分解乳糖；大肠杆菌分解乳糖和葡糖产 酸产气 （5）硫化氢： 培养基黑色为H2S阳性 大肠杆菌阴性，产气肠杆菌阳性 （6）甲基红:加入甲基红试剂，红色为阳性，黄色为阴性 大肠杆菌阳性，产气肠杆菌阴性 （7）伏－普试验：先加甲液，再加等量乙液，用力振荡， 37℃温箱中保 温15－30 min。红色为阳性，大肠杆菌阴性，产气肠杆菌阳性
3 糖发酵试验 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上 尤为重要，不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶，因此不同细菌在分解 糖类物质的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖产生有机酸 （如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等），有 些细菌只产酸不产气。比如，大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸产气， 普通变形杆菌能分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。糖发酵管含有蛋 白胨、指示剂（溴甲酚紫）和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指
实验八 微生物生理生化试验
一 实验器材 1 菌种 大肠杆菌，普通变形杆菌，金黄色葡萄球菌，产气肠杆菌 2 培养基
尿素琼脂试管，蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，葡萄糖发
酵管和乳糖发酵管各3支。 3 溶液和试剂
甲基红指示剂，5％萘酚，乙醚和吲哚试剂
4 仪器和其他用品 接种针
二 目的要求
1 大分子物质水解试验
甲基红试验是用来检测有葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳
酸等。当细菌代谢糖产酸时，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基
红由橙黄色（pH6.3）转变为红色（pH4.2），即甲基红反应。利用该 试验可区分大肠杆菌和产气肠杆菌。这两个细菌在培养早期均产生有机
酸，但大肠杆菌在培养后期仍能维持酸性pH4，而产气肠杆菌则转化有
尿素酶能分解尿素释放氨。尿素琼脂含有尿素、葡萄糖和酚红，酚
红在pH6.8时为黄色，在培养过程中，产尿素酶的细菌将分解尿素产生 氨，培养基的pH升高，在pH8.4时，指示剂转变为深粉红色。尽管许多
微生物都可以产生尿素酶，但是利用尿素的速度比变形杆菌属的细菌要
慢，因此尿素酶实验被用于从其它非发酵乳糖的肠道微生物中快速区分 这个属的成员。
（1）证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明 不同微生物有着不同的酶系统；
（2）掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。
2 IMViC试验 了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
3 糖发酵试验
（1）了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中的重要作用。 （2）掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
示剂可由紫色（pH6.8）转变为黄色（pH5.2）。气体的产生可由发酵管
中有无气泡来证明。
四、操作步骤 （一）大分子物质水解试验
1 明胶水解试验 （1）取3支明胶培养基试管，用记号笔表面各管欲接种的菌名。 （2）用接种针分别穿刺接种枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。 （3）将接种后的试管置20 ℃培养2－5 d。
三 基本原理
1 大分子物质水解试验
微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的 胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要是水解酶，通
过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。水解过程可通过
底物的变化来证明，如细菌对大分子的淀粉不能直接利用，产生胞外酶(淀粉酶) 将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖(或麦芽糖)，再被细菌吸收利用， 这一过程可以用碘测定不再产生蓝色来证明；水解明胶可观察到明胶被液化；脂 肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH，其中的中性红指示剂使培养基从淡红色变 为深红色。 明胶是由胶原蛋白水解产生的蛋白质，在25℃以下可维持凝胶状态，以固体 形式存在，而在25℃以上明胶会液化。有些微生物能产生明胶酶，水解明胶蛋白， 而使明胶液化，甚至在4 ℃仍能保持液化状态。
3 将接种和对照的发酵管置37 ℃培养24－48h。
4 观察发酵管的颜色和有无气泡。
各试验需接种的菌种:
（1）明胶水解试验：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌
20 ℃ 2－5 d （2）石蕊牛奶试验：普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌
35℃ 24－48 h
（3）尿素试验：普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌 35℃ 24－48 h
（3）伏－普试验：葡萄糖蛋白胨水培养物内加入甲液，然后加入等量
的乙液，用力振荡，置37℃15－30 min,加快反应速度，培养物呈红色 者，为伏－普试验阳性。
（三）糖发酵试验 1 在发酵管上标明所接种的细菌名称。 2 取葡萄糖发酵管3支，分别接入大肠杆菌、普通变形杆菌，第三支不 接 种，作为对照，另取乳糖发酵管3支，同样操作。
（4）观察明胶液化情况。
2 石蕊牛奶试验
（1）取2支石蕊牛奶培养基试管，用记号笔表面各管欲接种的菌名。 （2）用接种针分别穿刺接种普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌。 （3）将接种后的试管置35 ℃培养24－48h。 （4）观察培养基颜色变化。 石蕊在酸性条件下为粉红色，碱性条件下为紫色，而被还原时为白色。