生理生化实验方法2
《植物生理生化》实验指导
令狐采学《植物生理生化》实验指导（适用专业：农学类相关专业）黑龙江八一农垦大学植物科技学院生理生化教研室目录生物化学实验部分：实验一、氨基酸的纸层析 (1)实验二、蛋白质含量测定（设计性实验） (5)实验三、酶的基本性质 (7)实验四、维生素C含量的测定 (12)实验五、还原糖和总糖的测定 (14)实验六、淀粉酶活性的测定 (17)实验七、脂肪浸提——索氏脂肪浸提法 (20)实验八、一种简单实用的提取植物DNA的方法 (22)实验九、聚丙烯酰胺电泳法测定大麦、小麦种子纯度 (24)实验十、淀粉酶的诱导、提取和活性测定（综合性实验） (26)植物生理学实验部分:实验一、植物组织水势的测定（小液流法） (28)实验二、植物伤流量的测定 (30)实验三、根系活力的测定 (31)实验四、蒸腾强度的测定 (35)实验五、叶绿体色素的提取、分离、性质和定量测定（综合性实验） (37)实验六、光合强度的测定（改良半叶法） (39)实验七、呼吸强度的测定 (41)实验八、植物抗逆性的鉴定（电导仪法） (43)实验九、植物缺水程度的测定（脯氨酸法） (45)生物化学实验部分实验一氨基酸的纸层析一、目的：层析分析法已广泛用于氨基酸、核酸、激素、维生素、糖类的分离与分析。
其优点是能够分离与分析在组成、结构及性质上极为相似的物质；设备简单，操作容易，样品用量很少，结果也较明确。
本实验的目的在于要求学生掌握纸层析法的一般原理和操作技术。
二、原理：纸层析法是以滤纸作为支持物的分配层析法。
分配层析法是利用物质在两种不同混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的。
通常用α表示分配系数。
在一定条件下，一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数。
）溶质在流动相的浓度（）溶质在静止相的浓度（l s C C =α 层析溶剂是选用有机溶剂和水组成的。
由于滤纸纤维素对水有较强的亲和力（纸上有很多-OH 基与水以氢键相连），吸附很多水分子，一般达滤纸重的22%左右（其中约有6%的水与纤维素结合成复合物），因此使这一部分水扩散作用降低形成静止相；而有机溶剂与滤纸的亲和力很弱，可以在滤纸的毛细管中自由流动，便形成流动相。
玉米生理生化实验报告
一、实验目的1. 探究玉米在不同生长阶段的主要生理生化特性。
2. 分析玉米光合作用、呼吸作用、水分利用效率等生理指标。
3. 通过实验了解玉米种子萌发、幼苗生长及植株发育过程中的生理生化变化。
二、实验材料与方法1. 实验材料：玉米种子（品种：郑单958）、生长培养基、蒸馏水、NaOH溶液、碘液、斐林试剂等。
2. 实验方法：（1）种子萌发实验：将玉米种子浸泡在蒸馏水中，置于恒温培养箱中，定期观察种子萌发情况，并记录萌发率。
（2）幼苗生长实验：将萌发的玉米幼苗移栽至生长培养基中，定期测量幼苗株高、叶面积等生长指标。
（3）生理生化指标测定：a. 光合作用：利用光合仪测定玉米叶片的光合速率、蒸腾速率等指标。
b. 呼吸作用：利用呼吸仪测定玉米叶片的呼吸速率。
c. 水分利用效率：通过测定玉米植株的水分含量和光合速率，计算水分利用效率。
d. 植物激素含量：利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定玉米叶片中的生长素、细胞分裂素等植物激素含量。
e. 酶活性测定：利用比色法测定玉米叶片中过氧化物酶、超氧化物歧化酶等酶活性。
三、实验结果与分析1. 种子萌发实验：- 种子萌发率随浸泡时间延长而增加，浸泡时间为24小时时，种子萌发率最高。
- 种子萌发过程中，呼吸速率和水分含量逐渐增加，表明种子在萌发过程中需要消耗大量能量和水分。
2. 幼苗生长实验：- 玉米幼苗在生长培养基中生长良好，株高、叶面积等生长指标随培养时间延长而逐渐增加。
- 幼苗生长过程中，叶片颜色逐渐由黄绿色转变为绿色，表明光合作用逐渐增强。
3. 生理生化指标测定：- 光合作用：玉米叶片的光合速率和蒸腾速率随光照强度增加而增加，表明玉米具有较强的光合作用能力。
- 呼吸作用：玉米叶片的呼吸速率随温度升高而增加，表明玉米在较高温度下呼吸作用较强。
- 水分利用效率：玉米水分利用效率较高，表明玉米具有较强的水分利用能力。
- 植物激素含量：玉米叶片中生长素和细胞分裂素含量较高，表明玉米具有较强的生长调节能力。
实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定
实验二萌发麦苗淀粉酶活性的测定实验二：萌发麦苗淀粉酶活性的测定一、实验目的本实验旨在测定萌发麦苗中淀粉酶的活性，了解其在萌发过程中的变化规律，为进一步研究萌发麦苗的生理生化特性提供参考。
二、实验原理淀粉酶是一种能够水解淀粉为葡萄糖的酶，其在萌发麦苗中发挥着重要的作用。
本实验采用碘化钾法测定淀粉酶的活性，通过测定反应液在一定时间内生成碘化钾的量，计算出淀粉酶的活性。
三、实验步骤1.准备实验材料：选取健康萌发的小麦种子，用蒸馏水冲洗干净，放入无菌培养皿中，加入适量蒸馏水，于25℃恒温培养箱中培养。
每天观察种子的萌发情况，适时补充水分。
2.制备样品：从培养箱中取出一定量的萌发麦苗，用蒸馏水冲洗干净，滤纸吸干表面水分。
称取一定量的样品，加入适量的蒸馏水，放入研钵中研磨成匀浆。
将匀浆转入离心管中，于4℃下离心10分钟（转速为10000 r/min），收集上清液备用。
3.测定淀粉酶活性：取两个试管，分别加入1.0 mL 0.5%的可溶性淀粉溶液和1.0 mL 0.02 M的磷酸缓冲液（pH 6.9），摇匀。
再分别加入1.0 mL上清液和1.0 mL 0.5 M的氢氧化钠溶液，混匀。
将试管置于40℃恒温水浴中保温10分钟。
取出试管，加入1.0 mL 0.5 M的硫酸溶液终止反应。
最后加入2.0 mL碘化钾溶液，摇匀后静置1分钟，用紫外分光光度计在660 nm波长下测定吸光度。
4.计算淀粉酶活性：根据实验结果，计算淀粉酶的活性。
公式如下：淀粉酶活性（U/gprot）= (ΔA660 × V × t) / (W × 1000 × 0.01 × ΔT)其中，ΔA660为吸光度变化值，V为反应体系总体积（mL），t为反应时间（min），W为样品质量（g），ΔT为温度差（℃）。
四、实验结果与数据分析1.数据记录：记录实验过程中各步骤的数据，包括种子萌发情况、样品制备过程中的质量变化、淀粉酶活性测定中的吸光度变化等。
细菌常用生理生化鉴定
细菌鉴定中常用的生理生化反应录入时间:2009-8-13 15:12:12 来源：中国生命科技论坛1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
（3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验）很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。
若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
（4）大分子物质代谢实验．靛基质（口引睬）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖），再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
实验八微生物生理生化试验
伏－普试验用于测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产 物的能力,如丙酮酸,丙酮酸进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇,此化合 物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰,二乙酰与蛋白胨中的 精氨酸的呱基作用,生成红色化合物,即伏－普试验阳性,不产生红色化 合物为反应阴性,
实验八 微生物生理生化试验
一 实验器材 1 菌种 大肠杆菌,普通变形杆菌,金黄色葡萄球菌,产气肠杆菌 2 培养基 尿素琼脂试管,蛋白胨水培养基,葡萄糖蛋白胨水培养基,葡萄糖发酵管 和乳糖发酵管各3支, 3 溶液和试剂 甲基红指示剂,5％萘酚,乙醚和吲哚试剂 4 仪器和其他用品 接种针
二 目的要求 1 大分子物质水解试验
三 糖发酵试验 1 在发酵管上标明所接种的细菌名称, 2 取葡萄糖发酵管3支,分别接入大肠杆菌、普通变形杆菌,第三支不接 种,作为对照,另取乳糖发酵管3支,同样操作, 3 将接种和对照的发酵管置37 ℃培养24－48h, 4 观察发酵管的颜色和有无气泡,
各试验需接种的菌种:
1 明胶水解试验：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 20 ℃ 2－5 d
3 尿素试验 1 取2支尿素培养基试管,用记号笔表面各管欲接种的菌名, 2 分别接种普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌 两种细菌对尿素的分解速
度不同 ,需要观察2次, 3 将接种后的试管置35 ℃培养24－48h, 4 观察培养基颜色变化, 尿素酶存在时为红色,无尿素酶时为黄色,
二 IMViC试验
1 接种与培养 1 用接种针将大肠杆菌和产气肠杆菌分别穿刺接入2支醋酸铅培养基中
温15－30 min,红色为阳性,大肠杆菌阴性,产气肠杆菌阳性
思考题
1. 为什么尿素实验可用于鉴定变性杆菌属 细菌
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。
生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。
本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。
二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。
三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。
四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。
结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。
若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。
2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。
3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。
4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。
结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。
细菌鉴定中常用的生理生化反应
细菌生化试验1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
（3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验）很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。
若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
（4）大分子物质代谢实验．靛基质（口引睬）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖），再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
(完整word版)细菌的生理生化鉴定方法
方法2.3。
5 细菌的生理生化鉴定１、形态学观察采用插片法、埋片法, 对该拮抗细菌的菌落形态特征作镜检观察。
用革兰氏染色进行油镜观察。
① 革兰氏染色溶液和试剂：革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式碘液，95％乙醇，番红复染液等.试验步骤：（1) 涂片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片（不易过厚）、干燥和固定。
(2) 初染：滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位1～２min，用水冲洗至流出水无色。
（3）媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖１min，倾去碘液，水洗至流出水无色。
(4）脱色：在上述涂片上流加95％乙醇溶液（一般20~30s）,当脱色至流出液无色时立即用水洗去乙醇。
（5）复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min,水洗,用吸水纸吸去残水晾干。
(6）镜检：用油镜观察。
②芽孢染色（1）制片:按常规方法涂片、干燥及固定。
（2）加热染色：向载玻片滴加数滴5％孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持５min,加热时应注意补充染液，切勿让涂片干涸.脱色：待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色.(3）复染：用0.5％番红水溶液复染2min。
(4) 水洗:用缓流自来水冲洗至无色。
(5) 镜检：晾干载玻片后油镜镜检。
③鞭毛染色(硝酸银染色法）(1) 载玻片准备:将载玻片置于含洗衣粉或洗涤剂的水中煮沸 20min，然后用清水充分洗净,再置于 95%乙醇中浸泡，使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。
(2) 菌液制备：用接种环挑取菌落边缘菌体，悬浮于1～2mL无菌水中制成菌悬液，不能剧烈震荡。
（3) 制片:取一滴菌悬液滴到载玻片一侧，倾斜玻片,使菌悬液流向另一边,用吸水纸吸取多余的菌悬液,自然干燥。
（4）染色：滴加硝酸银染色A液覆盖3～5min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴加B液染色约1 min，期间可用微火加热，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告细菌鉴定是微生物学中的一个重要分支，它是通过对细菌的形态、生理生化反应、生长特性等方面进行分析，来确定细菌种类的过程。
在细菌鉴定中，生理生化反应实验是一种常用的方法，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况，来确定细菌的种类。
本文将介绍几种常用的生理生化反应实验。
1. 氧气需求实验氧气需求实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧气需求量。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧气浓度的培养基中，然后观察细菌的生长情况。
如果细菌只能在氧气充足的条件下生长，那么它就是一种需氧菌；如果细菌只能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种厌氧菌；如果细菌既能在氧气充足的条件下生长，也能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种兼性厌氧菌。
2. 糖类发酵实验糖类发酵实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌对不同糖类的发酵能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同糖类的培养基中，然后观察培养基的酸碱度变化。
如果培养基的酸碱度发生了变化，那么说明细菌对这种糖类进行了发酵。
通过这个实验，我们可以确定细菌对哪些糖类具有发酵能力，从而进一步确定细菌的种类。
3. 氧化还原实验氧化还原实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧化还原能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧化还原剂的培养基中，然后观察培养基的颜色变化。
如果培养基的颜色发生了变化，那么说明细菌对这种氧化还原剂具有反应能力。
通过这个实验，我们可以确定细菌的氧化还原能力，从而进一步确定细菌的种类。
4. 酶活性实验酶活性实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的酶活性。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同底物的培养基中，然后观察底物的变化情况。
如果底物发生了变化，那么说明细菌对这种底物具有酶活性。
通过这个实验，我们可以确定细菌的酶活性，从而进一步确定细菌的种类。
生理生化试验
微生物鉴定中常用生理生化试验一、实验目的1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。
3.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
4.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种四种细菌（枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、普通变形杆菌、铜绿假单胞菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2.糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
（1）吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
三、实验材料1.菌种大肠杆菌（Escherichia coli），铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis Cohn），产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，普通变形杆菌（Proteus.vulgaris)2.培养基固体油脂培养基，固体淀粉培养基，葡萄糖发酵培养基（5支，附德汉式小管），乳糖发酵培养基（5支，附德汉式小管），蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基。
植物生理生化实验原理和技术.第2版
植物生理生化实验原理和技术.第2版
植物生理生化实验原理和技术是一门综合性学科，其主要是研究植物生理、生化过程及其依赖于环境胁迫的知识。
其实验方法覆盖多个学科，包括植物的形态结构、生命发育及其与环境的关系;物质的合成和代谢;细胞器的结构及其对应的功能;生殖学;分子生物学等。
本课程以实验为主，旨在培养学生熟悉一般植物生理生化实验原理及技术，以及综合运用实验结果进行植物生理生化过程的理解能力。
实验原理和技术是植物生理和生化学研究的驱动力，这门课程将涵盖植物生理生化实验所需的各种基本原理和技术，比如观察技术、细胞及组织技术、测定理论和操作技术、分析检测技术以及分子生物学技术等。
本课程围绕植物的生命特性介绍植物生理生化实验的原理和方法，重点关注植物物质合成及代谢过程中实验技术的应用，包括：植物形态学实验技术、抑制和调控植物生长的实验技术、理化分析实验技术、分子标记实验技术、放射有关实验技术等。
实验还将着重讲述植物光合作用和调节生物学、植物内源性激素活性以及植物耐受环境异常状况的实验技术。
另外，本课程还将专门介绍一些新技术，如植物分子标记技术和植物全基因组学研究技术等。
本课程旨在培养学生掌握植物生理生化实验的原理和技术，包括植物的形态学、生殖学、理化分析和分子生物学等。
此外，学生还需要了解植物物质合成、代谢物动态和植物对环境的反应等问题。
同时，要求学生掌握有关最新技术，学习实验室中使用的设备及其原理，熟悉实验室的安全规定，学会进行实验体验和准确分析数据，以及运用实验结果进行问题分析和判断。
生理生化实验研究方法
1.研究方法（1）利用生物信息学进行序列检索和同源性分析以及性质与功能预测等，并设计引物；（2）利用分子生物学技术进行分子克隆、载体构建；（3）利用农杆菌介导法进行水稻基因遗传转化；（4）利用E.coli 原核表达系统，进行外源基因诱导表达及Western 免疫印迹检测。
2.技术路线：OsASP2干涉OsASP2片段抗体制备OsASP2超表达酶活性测定转基因植株筛选分子检测与生理生化指标分析3.实验方法和步骤1)成功构建以调控水稻细胞质天冬氨酸转移酶(OsASP2)的超表达及干涉载体，通过农杆菌介导法分别已获得15 株独立的水稻转基因株系，收获T1代转基因种子,T2代筛选纯合子。
2)构建了OsASP2片段的的原核表达载体，在IPTG诱导下已获得大量目标蛋白表达，并制备多克隆抗体。
3)根据拟南芥天冬氨酸氨基转移酶不同功能的突变位点，构建了不同位点突变的OsAAT2的载体，将它们分别侵染水稻中花11。
4)对水稻、烟草和大肠杆菌TOP10菌种中天冬氨酸转氨酶(AAT)进行活性染色，发现它们的AAT分子量大小不同，说明可以在大肠杆菌或烟草中表达水稻突变或非突变OsAAT2的活性。
4.可行性分析：我已经完成相关专业课程的学习，掌握了相应的实验技术。
而且论文订题比较早，已经开始了相关的实验。
且在这一年半的学习中，已经阅读了大量相关的文献，对研究课题比较了解。
加之导师参与过相关课题的直接研究，这些对我的实验都有很重要的指导意义，为课题的顺利完成打下了坚实的基础。
本实验室具备基础生理生化实验及分子生物学研究的常规仪器设备，为本研究提供了硬件支持。
本实验室长期进行载体构建及水稻转化实验，积累了大量经验，为本实验的构建各种载体、农杆菌侵染和基因遗传转化等各种工作提供了理论基础。
细菌鉴定中常用的生理生化反应
菌于以上平板的各相应部位。 3. 培养：倒置于37℃培养48 h后观察结果。
淀粉水解试验示意图
淀粉水解后遇碘不再显蓝色。 培养：置28℃培养48～120 h后观察结果。 淀粉水解后遇碘不再显蓝色。 掌握细菌生化反应试验的基本方法。
（二）明胶液化试验 明胶液化试验结果观察 观察试管明胶培养基是否液化及液化的形态。
枯草杆菌。 器材 : 试管、小套管、培养皿、接种环、酒精灯、恒温培养箱
淀粉水解试验 某些细菌能产生淀粉酶将淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，再吸收利用。
2. 接种：以无菌操作分别穿剌接种大肠杆菌、枯草杆 标记 ：取淀粉培养基平板1块，在其左右两边分加标记大肠杆菌、枯草杆菌。
coli）、变形杆菌、枯草杆菌 了解几种细菌鉴定中常用的生化反应及其原理。
菌至以上各相应试管中。 明胶液化试验 某些细菌能分泌明胶酶分解明胶产生小分子物质，使培养基由凝固状态变成液态。
掌握细菌生化反应试验的基本方法。 了解几种细菌鉴定中常用的生化反应及其原理。
3. 培养：置28℃培养48～120 h后观察结果。 培养基灭菌时要尽量排尽锅内冷空气，灭菌后要等锅内压力降到零再打开排气阀。
菌株生理生化鉴定实验方法
菌株生理生化鉴定实验方法菌株的生理生化鉴定是确定菌株的分类地位和特性的重要实验方法。
下面将介绍一种常用的菌株生理生化鉴定的实验方法，包括实验步骤和鉴定结果的解析。
实验步骤：1.菌株的预处理将菌株从培养基上取下，用生理盐水或无菌的蒸馏水洗净，放入灌装好的试管或培养皿中。
2.观察形态特征观察菌株在不同培养基上的形态特征，包括菌落形状、颜色和质地等。
也可以在显微镜下观察菌丝和孢子的形态特征。
3.生化特性鉴定（1）氧需求鉴定：将菌株接种到含有不同浓度的氧气的试管中，观察菌株在厌氧和需氧条件下的生长情况。
（2）温度需求鉴定：将菌株接种到不同温度的培养基上，观察菌株在不同温度下的生长情况和生长速率。
（3）酸碱度鉴定：将菌株接种到不同pH值的培养基上，观察菌株在不同酸碱度条件下的生长情况。
（4）氧化还原鉴定：通过添加不同氧化剂和还原剂来观察菌株的氧化还原反应能力。
（5）酶活性鉴定：利用不同底物和指示剂来检测菌株的酶活性，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等。
（6）碳源利用鉴定：将菌株接种到含有不同碳源的培养基上，观察菌株对不同碳源的利用情况。
4.生理特性鉴定（1）产酸和产气鉴定：将菌株接种到含有指示剂的管中，观察产酸和产气的情况。
（2）抗生素敏感性鉴定：通过将菌株接种到含有抗生素的培养基上，观察菌株对抗生素的敏感性。
（3）生长速率鉴定：观察菌株在不同培养基和条件下的生长速率，包括生长曲线的绘制和计算生长速率。
（4）生殖方式鉴定：通过观察菌丝和孢子的产生情况来确定菌株的生殖方式。
鉴定结果的解析：例如，菌株的形态特征观察结果可以用来确定菌株的属名，生化特性鉴定结果可以用来确定菌株的代谢途径和功能，生理特性鉴定结果可以用来确定菌株的环境适应能力和生长要求。
综上所述，菌株的生理生化鉴定是一种全面了解菌株特性和分类地位的重要实验方法，通过观察形态特征、生化特性和生理特性，可以准确鉴定菌株的分类地位和特性。
生理实验报告2(蛙心离体灌泳)
广州大学动物生理学实验报告开课学院及实验室：生科院生化楼6032019年3月18日学院生命科学学院年级、专业、班生技171姓名GDZ学号实验课程名称动物生理学实验成绩实验项目名称实验2：1.缺乏钙、钾等离子对青蛙离体心脏活动的影响2.离子对青蛙离体心脏活动的影响3.递质对青蛙离体心脏活动的影响指导老师[实验目的]1.学习制备离体蛙心脏及离体心脏灌流的方法2.观察Na+、K+、Ca2+种离子，肾上腺素、乙酰胆碱、阿托品对心脏活动的影响3.理解内环境理化因素相对恒定对维持心脏正常活动的重要性，对递质、受体、受体兴奋剂与阻断剂的概念有感性的认识[实验原理]1.两栖类正常起搏点是静脉窦。
正常节律性活动需要一个适宜的理化环境。
如果将离体蛙心用接近其血浆理化特性的任氏液灌流，保持心脏适宜的理化环境，在一定时间内心脏仍能产生节律性兴奋和收缩活动。
2.当改变灌流液的组成成分，这种节律性舒缩活动也随之发生改变，说明内环境理化因素的相对稳定是维持心脏正常节律性活动的必要条件。
因此，可以通过改变心脏灌流液的理化成分，观察心肌的生理特性。
3.心脏受自主神经的双重支配，交感神经兴奋时，其末梢释放去甲肾上腺素（结合β受体），使心肌收缩力加强，传导速度增快，心率加快；而迷走神经兴奋时，其末梢释放乙酰胆碱（结合M 受体），使心肌收缩力减弱，传导速度减慢，心率减慢。
4.阿托品是一种抗胆碱药，为M-受体阻断剂。
肾上腺素与去甲肾上腺素作用效果一致。
[实验对象]蛙任氏液、0.4%肝素-任氏液，0.65%NaCl、5%NaCl、2%CaCl、1%KCl、1：5000肾上腺素（NA）、21：30000乙酰胆碱（ACh）、阿托品[仪器与器械]器材：毁髓针、手术镊、直尖剪、金冠剪、眼科剪、玻璃分针、铁支架、蛙心夹、双凹夹、试管夹、滑轮仪器：生物信号采集系统（含电脑）、张力换能器（10g）其他：细线、蛙板、烧杯（大中小3个）、滴管、蛙心插管[实验方法与步骤]1离体蛙心标本制备1.1取蛙，破坏脑和脊髓，暴露心脏1.2穿线结扎1.3斯氏蛙心插管，剪除多余，离体心脏2连接实验装置3进行实验项目3.0记录心脏在仅有任氏液时的收缩曲线，观察心率及收缩幅度，作为正常对照。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告背景细菌鉴定是微生物学中的一项重要任务，通过对细菌的形态、生理特征和生化反应进行分析，可以确定细菌的种属和特性。
生理生化反应实验是其中的关键步骤，通过观察细菌对不同物质的代谢情况，可以获取有关其代谢能力、营养需求和产物生成等信息。
本报告旨在介绍常用的细菌生理生化反应实验方法，并分析实验结果以提供准确的鉴定和分类建议。
分析1. 嗜热/嗜冷性嗜热/嗜冷性是指细菌对温度的适应能力。
常用实验方法包括在不同温度条件下进行培养观察，并记录生长情况。
根据结果可将细菌分为嗜热菌（适宜高温）、嗜冷菌（适宜低温）或中温菌（适宜中等温度）。
2. 好氧/厌氧性好氧/厌氧性是指细菌对氧气需求的差异。
常用实验方法包括在含氧和不含氧的培养条件下观察细菌生长情况。
根据结果可将细菌分为好氧菌（需氧）、厌氧菌（不需氧）或兼性厌氧菌（能在有或无氧的条件下生长）。
3. 革兰氏染色革兰氏染色是观察细菌壁结构的常用方法。
该实验通过处理细菌样品，并使用革兰染色剂将其染色，然后观察其颜色变化。
根据结果可将细菌分为革兰阳性（蓝紫色）或革兰阴性（红粉色）。
4. 淀粉酶活性淀粉酶活性实验用于检测细菌对淀粉的降解能力。
该实验将待测细菌培养于含淀粉的琼脂平板上，经过一段时间后，用碘液滴定并观察是否出现透明圈。
透明圈表示淀粉被降解且产生了淀粉酶。
5. 水解酪蛋白活性水解酪蛋白活性实验用于检测细菌对酪蛋白的降解能力。
该实验将待测细菌培养于含酪蛋白的琼脂平板上，经过一段时间后，用盖有硫酸铜的试管放置在平板上，观察是否出现由蓝色转变为紫色的反应。
颜色变化表示细菌产生了水解酪蛋白酶。
6. 氧化/发酵代谢氧化/发酵代谢实验用于检测细菌在代谢过程中产生的产物。
该实验将待测细菌接种于含有碳源的培养基中，并根据pH指示剂颜色变化观察细菌是通过氧化代谢还是发酵代谢产生能量。
氧化代谢通常伴随着pH值升高，培养基呈碱性；而发酵代谢则通常伴随着pH值降低，培养基呈酸性。
实验实验十细菌的生理生化实验二
四、操作步骤
1、细菌的生理生化反应： 将供试菌株分别接种在相应的培养液中，置适宜的温箱中
恒温培养。在规定的时间内，选用相应的指示剂测定和观察试 验结果。
（1）糖发酵试验
菌株
糖液中
培养
观察结果
(2) v-p试验（伏-普试验）
菌株
葡萄糖蛋白胨水培养基
2ml+2mlv-p试剂 混合均匀
观察结果
培养
取培养液
产气杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水时要将 两者分开。
三、实验材料
1、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。 2、培养基：牛肉膏蛋白胨斜面培养基，PDA液体培养基、葡萄糖 发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管、蛋白胨水培养基、葡萄 糖蛋白胨水培养基 3、试剂：吕氏碱性美兰染色液、中性红染色液、碘液、甲 基红指 示剂，40％KOH，5％α-萘酚，乙醚，吲哚试剂等。 4、仪器或其他用具： 显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片等。
37度培养30分钟
(3)甲基红试验
菌株
葡萄糖蛋白胨水培养基
2ml+2滴甲基红试剂 混合均匀
培养 取培养液 观察结果
(4)吲哚试验 菌株 蛋白胨水培养基 培养液 观察结果
培养
取乙醚2ml加入到
吲哚试验
乙酰甲基甲醇试验（伏-普试验）
五、实验报告
1、列表说明各供试菌对糖类的分解利用情 况和吲哚、甲基红、伏-普试验结果。
发酵培养基含有蛋白胨，指示剂，倒置的德汉氏小管 和不同的糖类。
当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）变 为黄色（pH5.2）。
气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明 。
吲哚、甲基红、伏-普这三个试验主要是用来快速鉴别 大肠杆菌和产气杆菌，多用于水的细菌学检查。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Ray Kuo 2008
菌种的生理生化分析
1.2 放线菌形态观察。
在高氏一号培养基[4]、蔗糖蔡氏琼脂培养基、葡萄糖－天门冬素琼脂培养基及甘油淀粉谷氨酸盐琼胶培养基[11]上，插片培养菌种，观察其基内菌丝体以及气生菌丝体的颜色。
将培养基融化后，以每皿15－18ml的量倾倒平板，待凝固，将放线菌划线接种在皿中，然后取无菌的盖玻片以45度角插入培养基内，盖玻片插入深约1/3（玻片必须于接种线垂直），每皿可以插2－3片。
盖上皿盖，置于28℃培养，菌丝将沿玻片向上生长，定期观察。
[12]
菌株生理生化特性测定
明胶液化
将待检菌种接种于柱型明胶培养基[8]表面（不用穿刺）28℃下培养，分别在5，10，20及30天各观察一次液化情况。
观察前将菌种管冷藏20－30分钟，如明胶不液化则仍是固体状态，若呈液体即为液化。
明胶的水解是由于菌种所产生的蛋白酶的作用。
牛奶凝固与胨化测定 将牛奶10000rpm离心，去上层油脂成脱脂牛奶。
将代测定菌株接种于脱脂牛奶中，28℃下培养，分别在3，6，10，20及30天各观察一次。
如牛奶出现凝块，则为凝固。
这是由于凝乳酶或发酵乳糖时产酸的作用，依据凝固原因的不同，尚有酸凝和酶凝脂粉。
牛奶中的酪蛋白在蛋白酶的作用下被水解，使牛奶变得清亮而透明，此为胨化。
凝固速度在开始的3－6天最快。
淀粉水解测定 将待检菌接种于淀粉培养基平板上。
28℃培养10天至20天后在培养基表面加入碘液。
若有淀粉酶产生，则淀粉变成糊精或糖而被吸收利用，菌落遇碘液不显蓝色，可在培养物周围形成无色透明圈。
圈的大小表示淀粉酶产生的强弱。
如不产生淀粉酶，则菌落周围遇碘成蓝色。
纤维素水解
将菌种接种于滤纸条上，接种材料最好是孢子（不带培养基）置28℃培养30天后观察。
滤纸条分解表明产生了纤维素酶，滤纸条无变化者为阴性。
硫化氢产生实验
将待检菌接种于含柠檬酸铁（即Tresner’s）有机培养基斜面上，置28℃培养10天左右（视菌苔生长成丛为宜）观察结果。
如产生褐色则说明有H 2S产生，H 2S与柠檬酸铁结合产生黑色硫化铁。
酪氨酸水解
将待检菌接种到斜面培养基上，适温培养3－7天，观察斜面，若有黑色素即为阳性反应，说明菌种具有酪氨酸酶。
碳源利用试验]
细菌能否利用某些含碳化合物作为唯一碳源，反映细菌是否含有代谢这种含碳化合物的酶，因而可以作为鉴定的依据。
菌种收集后应经离心洗涤制成菌悬液，以避免带入它种碳源，干扰实验结果。
基础培养
Ray Kuo 2008
基为无碳源培养基。
培养基制成斜面。
常用的碳源有9种：阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、木糖、果糖、蔗糖、棉子糖、甘露糖、肌醇等。
每种碳源均按基础培养基的1%加入。
每一测定都必须接种于未加碳水化合物的空白基础培养基作对照。
用经灭菌的吸管吸取菌悬液定量滴加至液体培养基中，28℃培养7－14天后观察。
分别记载生长利用情况。
凡测定菌在有碳水化合物的培养基中的生长情况明显超过空白基础培养基的生长情况者称阳性，否则为阴性。
如两种培养基上生长情况差别不明显，可在同一培养基上连续移三次，如差别仍不明显，则为阴性。
全细胞糖分析以及全细胞氨基酸分析
［6］
制板
把20×20cm玻璃板用洗涤剂洗净，取微晶纤维素一定量，每克加蒸馏水3.5ml，用磁力搅拌机搅拌均匀，用5ml吸管吸取适量微晶纤维素悬液倾注于玻璃板上成薄层，轻轻振荡使之均匀。
平放实验台上，晾干，无尘，干燥处保存。
玻璃板上微晶纤维素厚度控制在每板（20×5cm）约1.2g－1.5g。
使用前于100℃烘箱活化40分钟。
［6］收集菌体
在500ml三角瓶中装100ml的培养液，接入斜面菌种（不能带入琼脂），28℃震荡培养至对数生长期。
用灭菌离心管称装培养液4000rpm离心30分钟收集菌体。
用蒸馏水洗涤两次，无水乙醇洗涤两次。
取上述处理过的湿菌体各30mg，分别置于两个安培瓶中，一个用于氨基酸分析。
另一个用于糖分析。
[5]菌体水解 吸取0.1ml 6N HCl加入用于氨基酸分析的安培瓶中，在用于糖分析的安培瓶中加入0.5N HCl 0.1ml，火焰封口，放入烘箱。
待烘烤温度上升到120℃后，持续15分钟取出。
用于氨基酸分析的水解液以黑褐色为宜，用于糖分析的水解液以黄棕色为宜。
［6］点样
在薄板上距长轴底边约1.0cm－1.5cm处用铅笔标点，每点间隔1cm。
用热胀冷缩法将安培瓶打开。
用微量进样器点样品糖水解液2ul和1％的标准糖液（鼠李糖、核糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖）各1ul，以及上述糖等量混合液1ul。
点氨基酸水解液0.4ul；点DAP标准液0.2－0.4ul；点0.1％其他氨基酸溶液（天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丙氨酸）各0.4ul。
展层与显色
分别量取DAP展层剂和糖展层剂各30ml，加入层析缸，分别立放斜靠DAP薄板和糖薄板。
点样端接触展层剂但点样点不能碰到。
上行2次，每次3小时左右。
每次取出薄板置通风处干燥，再次放入前更换新鲜展层剂。
最后取出薄板，在通风处充分干燥，必要时可用电吹风吹干。
分别量取一定量氨基酸显色剂和糖显色剂，加入喉头喷雾器中，将显色剂分别喷于薄板上，要求喷的均匀，充分。
将薄板置于100℃烘箱中显色5－7分钟取出薄板观察并计算Rf值。