荧光相关光谱要点
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荧光相关光谱
（ Fluorescence CorrBaidu Nhomakorabealation Spectroscopy ）
一、概念
• FCS通过测定溶液中微区内（fL）发光粒 子因布朗运动或化学反应而产生的荧光 涨落现象，分析荧光涨落的相关函数而 获得单个粒子（如分子）的浓度、化学 动力学参数等信息。 • 概念于20世纪70年代提出，90年代开始 发展。（计算机技术、光学检测技术、 激光共焦技术）
Rhodamine green
488nm激发
相关公式
• 微区内荧光分子数在任一时间t的变化导致荧光 强度的涨落值为：
• 用归一化自相关函数将荧光涨落与延迟时间τ 相关：
二、相关实验技术
• 激光器
• 共焦显微镜
• 高数值孔径物镜
• 1.单光子激发 • 2.双光子激发
• 3.荧光互相关光谱：
• B.胞内 • 线粒体中NADH、黄素蛋白有自发荧光 • 乳胶微球在细胞内的扩散行为 • 寡聚核苷酸在细胞核内的分子运动 • β-半乳糖酶融合蛋白在胞内的运动
3.核酸研究 • DNA PCR扩增动力学研究
• DNA单个分子构象波动
4.疾病诊断 • 结合PCR扩增或其他扩增
• HIV • HBV、HCV、SARS • 朊病毒
• 分子量之差小于8倍，扩散系数之差小于2倍。 • 标记两种不同荧光试剂，两个独立激光器激发，两个 检测器分别检测。
三、应用
• • • • • • 1.生物分子相互作用 金环蛇毒素和乙酰胆碱受体的作用 组氨酸标记肽与金属螯合脂的作用 转铁蛋白与人转铁蛋白受体的作用 秋水仙碱与微管蛋白的作用 ……
2.活细胞相关研究 • A.细胞膜 • 磷脂双分子层4nm厚，可按二维模型处理 • 胰岛素原C-肽与人细胞膜的相互作用 • 表皮增长因子与膜结合受体的特异结合 • 神经肽在胰腺癌细胞细胞膜的结合作用
（ Fluorescence CorrBaidu Nhomakorabealation Spectroscopy ）
一、概念
• FCS通过测定溶液中微区内（fL）发光粒 子因布朗运动或化学反应而产生的荧光 涨落现象，分析荧光涨落的相关函数而 获得单个粒子（如分子）的浓度、化学 动力学参数等信息。 • 概念于20世纪70年代提出，90年代开始 发展。（计算机技术、光学检测技术、 激光共焦技术）
Rhodamine green
488nm激发
相关公式
• 微区内荧光分子数在任一时间t的变化导致荧光 强度的涨落值为：
• 用归一化自相关函数将荧光涨落与延迟时间τ 相关：
二、相关实验技术
• 激光器
• 共焦显微镜
• 高数值孔径物镜
• 1.单光子激发 • 2.双光子激发
• 3.荧光互相关光谱：
• B.胞内 • 线粒体中NADH、黄素蛋白有自发荧光 • 乳胶微球在细胞内的扩散行为 • 寡聚核苷酸在细胞核内的分子运动 • β-半乳糖酶融合蛋白在胞内的运动
3.核酸研究 • DNA PCR扩增动力学研究
• DNA单个分子构象波动
4.疾病诊断 • 结合PCR扩增或其他扩增
• HIV • HBV、HCV、SARS • 朊病毒
• 分子量之差小于8倍，扩散系数之差小于2倍。 • 标记两种不同荧光试剂，两个独立激光器激发，两个 检测器分别检测。
三、应用
• • • • • • 1.生物分子相互作用 金环蛇毒素和乙酰胆碱受体的作用 组氨酸标记肽与金属螯合脂的作用 转铁蛋白与人转铁蛋白受体的作用 秋水仙碱与微管蛋白的作用 ……
2.活细胞相关研究 • A.细胞膜 • 磷脂双分子层4nm厚，可按二维模型处理 • 胰岛素原C-肽与人细胞膜的相互作用 • 表皮增长因子与膜结合受体的特异结合 • 神经肽在胰腺癌细胞细胞膜的结合作用