ddPCR肿瘤早期筛查检测报告-10
肿瘤登记报告
• 按国际疾病分类第十版（ICD-10） 所规定的全部恶性肿瘤（C00 C97）和中枢神经系统良性肿瘤
（D32.0 - D33.9）和（D42 – D43.9） ,所有发病和死亡个案均 为登记报告对象。
二、报告对象
• 1.凡在门诊、病房或通过健康体检、疾病普查 等方式发现的，经临床或病理、X线、CT等检查 确诊的当年新发病例，均应填写居民肿瘤病例 报告卡。
• 2.对肿瘤复发和转移病例，若原发漏报，应予 补报，并需核对原发部位及首次诊断日期。
• 3.若同一患者先后出现两次原发癌，需分别填 报。
三、报告单位
• 各级各类医疗机构均为肿瘤报告责任单位， 包括省部属医院、教学医院、部队医院、 专科医院（肿瘤、结核、传染、妇幼、儿 童医院）、企业职工医院、乡镇卫生院、 社区卫生服务中心、村卫生室、社区卫生 服务站。
肿瘤编码四步法-1
• 第一步：看懂肿瘤报告诊断文字 –需分清 • 是恶性还是良性？ • 是原位癌还是交界恶性？ • 是实体瘤还是血液淋巴系统肿 瘤
肿瘤编码四步法-2
• 第二步：根据诊断部位或名称寻找 ICD-10与ICD-O-3 解剖部位编码 –部分肝癌、黑色素瘤、间皮瘤和 淋巴瘤、白血病等可直接寻找疾 病名称编码 –除特别说明外一般ICD-10与 ICD-O-3的解剖部位编码是一致
村卫生所或社区卫生服务站
• 村卫生所或社区卫生服务站医生每月 应主动收集确认本村或社区中新发或 已死亡的肿瘤病例，并负责填写《肿 瘤报告卡》 和《肿瘤登记册》，于每 月5日前（国定假日顺延）上报上级乡 镇卫生院或社区卫生服务中心。
五、肿瘤命名与编码 编码结构
C __ __.__C__ __.__M-__ __ __ __/__ __ D __ __.__C__ __.__M-__ __ __ __/__ __ I ① ②.③II ①②.③III-① ② ③ ④/⑤ ⑥
Bio-rad-微滴式数字PCR技术原理及质量控制
吴非 | Ph.D Bio-Rad APM
PCR技术的演化
1st
2nd
3rd
常规PCR 定性
Life science research
定量PCR 相对定量
数字PCR 绝对定量
微滴式数字（ddPCR）技术原理和优势
01
无需标准曲线的绝对定量 （肿瘤分子标志物的定量检测）
Life science research
4
QX200 Droplet Digital PCR实验流程
1. 生成微滴
2. “油包水” PCR
3. 读取微滴
Droplet Generator or
Bulk PCR Thermal Cycler
Droplet Reader
每次运行生成通量：8或96个样本体系
阳性微滴
阴性微滴
Life science research
定量原理：泊松分布
如果平均每个微滴中靶标分子数（Copies per droplet, CPD）较大（>0.1）；
一些微滴中出现2个或更多靶标分子（靶标数>阳 性微滴数）；
需要如何对靶标分子进行定量？
# of droplets 0 1000 3000 5000
Life science research
CV(%)
0
1
2
3
4
5
Relative contribution of partitioning error and suCbVsaamcrpolsinsgeenrtriroer dtoyndadmPiCc Rranegrreor
Life science research
肿瘤治疗疗效常用的评价观察指标
客观缓解率是指肿瘤体积缩小达到预先规定值的患者比例 。它反映了治疗对肿瘤的直接效果。
患者自我报告结局评价标准
健康状况
通过患者自我报告的健康状况，可以了解治疗对 患者生活质量的影响。健康状况改善通常表示治 疗对患者有益。
疲劳程度
疲劳是肿瘤患者常见的症状之一，通过评估患者 的疲劳程度可以了解治疗对患者的影响。疲劳减 轻表示治疗对患者有益。
从治疗开始至疾病复发或进展的时间。
总生存期（OS）
从治疗开始至死亡的时间。
02
RECIST评价标准
靶病灶的评价
01
02
03
靶病灶的基线测量
在开始治疗之前，对所有 靶病灶进行精确的测量， 包括大小和数量，作为基 线水平。
靶病灶的治疗反应
根据治疗期间靶病灶的变 化，将治疗反应分为四类 ：完全缓解、部分缓解、 疾病稳定和疾病进展。
肿瘤标志物水平与肿瘤大小、浸润深度及淋巴结转移情况等 病理学指标相关，可反映肿瘤负荷大小。
肿瘤标志物水平升高提示肿瘤负荷增加，病情恶化，反之则 提示病情缓解。
血清肿瘤标志物与患者预后的相关性
肿瘤标志物水平与患者预后密切相 关，高水平表达往往提示预后不良 。
VS
通过监测血清肿瘤标志物水平的变 化，可评估治疗效果和预测患者预 后。
PET-CT检查评价
总结词
PET-CT检查是一种功能与解剖影像相结合 的检查方法，可评价肿瘤的生长代谢情况 和治疗效果。
详细描述
PET-CT检查通过示踪剂正电子发射断层扫 描技术，能够反映肿瘤内部的细胞代谢情 况。对于恶性肿瘤，PET-CT检查可显示肿 瘤的糖代谢异常增高。通过治疗后复查 PET-CT检查，可观察肿瘤细胞的代谢变化 情况，从而对治疗效果进行评估。
ARMS PCR and ddPCR
ddPCR&ARMS-PCR
ARMS-PCR点突变的检出率依 赖于反应条件的优化和防止引 物与靶DNA错配时可能发生的 错配延伸，这可通过调整实验 条件如：引物、靶DNA、Taq 酶的浓度和反应温度等来提高 特异性
！错配不可以是t:t，这样 即使错配也能很有效地延伸， 引物末端与模板最好选用a:a, a:g错配，其他需要摸索条件
技术应用
已知突变基因或者基因多态性进行检测
ARMS&Agar
TNF gene -308G>A polymorphism
凝胶电泳检测
ARMS&Taqman
扩增结果为：“野生”模板阻碍,“突变”引物 放大；或“突变”模板阻碍,“野生”引物放大。
ARMS&qPCR
实时荧光定量PCR
ARMS引物设计
ddPCR技术应用
上海张江转化医学研发中心
1、微滴式数字PCR（ddPCR)-肿瘤早期检测（康乃尔卡） (6600元)
2、微滴式数字PCR(ddPCR)-肿瘤早期筛查通过5mL血液一 次性检测 14种肿瘤、常见的11个肿瘤基因、60余个突变 位点，实现了癌症的超早期监测甚至细胞阶段发现肿瘤的 发生状况
软件自动分析数据，并以多种方 式显示检测结果
Readout:copies/ul Dynamicrange: 1~10,000copies/well (~330ng human gDNA)
肿瘤基因检测的解读流程
从临床进入基因检测流程是入口，检测结果结合临床信息进行合理解读是出口，这一入一出之间需经历检测前临床咨询部分、实验室部分、信息分析部分、临床解读部分共四个环节。
其中的第四部分临床解读部分即是根据检测结果、患者信息、医生共识综合判断，临床和遗传咨询有效衔接、充分沟通，最终出具临床解读报告。
在做成临床解读报告之前，首先需要将解读的各个环节进行明确，包括解读的步骤流程，解读的技术细节。
这样才有可能真正的做到解读的规范化，使解读过程有据可依，有章可循，才能出具一份好的临床解读报告，基因检测才能更好的服务患者和临床医生。
从大的框架讲，基因检测数据解读可分为三个步骤：原始数据→分析数据、基于数据库的解读→与患者个体表征/临床病例结合的解读。
1、读懂原始数据将测序的原始序列数据（FASTQ）去除接头及低质量序列，经BWA软件比对至GRCh37/38（NCBI版本）或hg19/hg38（UCSC版本）人类基因组参考序列上，Picard 去除重复序列，使用GATK检测SNV与Indel变异，使用ANNOVAR进行变异注释。
最后获得一份.vcf文件（图1）。
Func.refGene：变异所处参考基因的功能区（exonic，intronic，UTR3，UTR5，splicing，upstream，downstream，intergenic）（此处的exonic特指外显子编码氨基酸区，不包括外显子的UTR区）Gene.refGene：变异所处参考基因名称（如果是基因间，则是两侧的基因）GeneDetail.refGene：非外显子区处于特定转录本中的具体位置（如果是基因间，则是距离两侧的基因的距离）ExonicFunc.refGene：外显子区的变异类型（frameshift insertion，frameshiftdeletion，stopgain，stoploss，nonframeshift insertion，nonframeshiftdeletion，synonymous SNV，nonsynonymous SNV），如果这一栏是一个“.”的话，就说明该变异不在外显子区AAChange.refGene：氨基酸水平的改变（同一个基因可能具有多个转录本，氨基酸改变的位置在不同的转录本中有可能不一样）经注释后的vcf文件还会包含如下信息：CLINSIG：该变异在ClinVar数据库中的临床意义（Benign，Likely benign，Uncertain significance，Likelypathogenic，Pathogenic，Drug-response）CLINDBN：该变异所引起的疾病名称CLINACC：该变异的登记号和版本号（VariantAccession and Versions）CLINSDB：该变异所引起疾病所在数据库名称CLINSDB：该变异所引起疾病所在数据库中的IDPopFreqMax：该变异人群中的最大等位基因频率1000_All：该变异在千人基因组计划数据库中的人群等位基因频率1000_AFR：该变异在千人基因组计划数据库中非洲人群的等位基因频率1000_AMR：该变异在千人基因组计划数据库中美国人群的等位基因频率1000_EAS：该变异在千人基因组计划数据库中东亚人群的等位基因频率1000_EUR：该变异在千人基因组计划数据库中欧洲人群的等位基因频率1000_SAS：该变异在千人基因组计划数据库中南亚人群的等位基因频率Snp138：该变异在dbSNP数据库中的IDCosmic70：该变异在癌症体细胞突变数据库COSMIC中的IDESP6500siv2_ALL：该变异在美国国家心肺血液研究所的ESP6500数据库中的人群等位基因频率ESP6500siv2_AA：该变异在美国国家心肺血液研究所的ESP6500数据库中的非洲裔人群等位基因频率ESP6500siv2_EA：该变异在美国国家心肺血液研究所的ESP6500数据库中的欧洲裔人群等位基因频率ExAC_All：该变异在ExAC数据库中的人群等位基因频率ExAC_AFR：该变异在ExAC数据库中非洲人群的等位基因频率ExAC_AMR：该变异在ExAC数据库中美国人群的等位基因频率ExAC_EAS：该变异在ExAC数据库中东亚人群的等位基因频率ExAC_FIN：该变异在ExAC数据库中芬兰人群的等位基因频率ExAC_NFE：该变异在ExAC数据库中非芬兰欧洲人群的等位基因频率ExAC_OTH：该变异在ExAC数据库中除已指定人群之外的人群等位基因频率ExAC_SAS：该变异在ExAC数据库中南亚人群的等位基因频率CG46：该变异在CG46数据库中的人群等位基因频率。
最新：病理免疫组化报告单-乳腺肿瘤(完整版)
乳腺导管上皮增生性病变
1.普通型导管上皮增生阳性：ER，PR，高分子量角蛋白(CK5/6，CK14，CK17和34βE12)，肌上皮标志物(P63，SMMHC，calponin，SMA，S-100，CD10)
2.导管上皮不典型增生或低级别导管内癌阳性：ER，PR，肌上皮标志物(P63，SMMHC，calponin，SMA，S-100，CD10)阴性：高分子量角蛋白(CK5/6，CK14，CK17和34βE12)
3.高级别导管内癌阳性：ER，PR，肌上皮标志物(P63，SMMHC，calponin，SMA，S-100，CD10)，CK5/6(部分)，CK14(部分)阴性：高分子量角蛋白(CK5/6，CK14，CK17和34βE12)
4.大汗腺化生细胞阳性：肌上皮标志物(P63，SMMHC，calponin，SMA，S-100，CD10)阴性：ER，PR，高分子量角蛋白(CK5/6，CK14，CK17和34βE12)
5.柱状细胞变-柱状细胞增生和平坦上皮不典型性阳性：ER，PR，肌上皮标志物(P63，SMMHC，calponin，SMA，S-100，CD10)阴性：CK5/6，CK14
一、乳腺乳头状病变
1.伴有导管上皮高度增生的乳头状瘤阳性：ER，PR，肌上皮标志物(P63，SMMHC，calponin，SMA，S-100，CD10)，高分子量角蛋白(CK5/6，CK14，CK17和34βE12)
2.不典型乳头状瘤或起源于导管内乳头状瘤的导管内癌阳性：：ER，PR，导管周肌上皮标志物(P63，SMMHC，calponin，SMA，S-100，CD10)阴性：高分子量角蛋白(CK5/6，CK14，CK17和34βE12)，乳头内肌上皮标志物(P63，SMMHC，calponin，SMA，S-100，CD10)
内镜与肿瘤标志物对早期胃癌诊断的研究进展
内镜与肿瘤标志物对早期胃癌诊断的研究进展孙思远，付敏，邹晨镇江市第一人民医院（江苏大学附属人民医院）普外科，江苏镇江212002摘要：胃癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，早期诊断在胃癌的治疗及预后中起重要作用。
目前早期胃癌的诊断主要依靠内镜和肿瘤标志物，内镜诊断技术主要包括白光内镜成像、窄带成像、链接彩色成像和蓝激光成像以及人工智能等而除了传统肿瘤标志物，部分新兴的肿瘤标志物如胃蛋白酶原和液体活检技术也为胃癌的早期诊断提供了帮助。
在临床中，通常需联合应用多种不同诊断技术以提高早期胃癌的诊断准确率。
关键词：胃癌，早期；诊断技术；内镜技术；肿瘤标志物doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.28.024中图分类号：R735.2 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2023）28-0095-04胃癌是消化道系统最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在全球恶性肿瘤发病率中位于第五位，死亡率居第三位，东亚地区胃癌发病率为东欧地区的近2倍［1］。
早期胃癌的定义最早由日本内窥镜协会于1962年提出，并于1965年完善，是指病变局限于胃黏膜层或黏膜下层，且不论有无淋巴结转移。
大部分早期胃癌经规范治疗后可以达到根治的效果，有效改善患者的生存质量。
日本研究显示，早期胃癌患者的5、10年生存率超过90%；而在西方的研究中，5年生存率与日本的数据存在一定差异，为68%~92%［2］。
早期胃癌起病较为隐匿，其诊断较进展期胃癌困难。
因此，如何更加准确地诊断早期胃癌并进行有效治疗尤为重要［3］。
目前早期胃癌的诊断主要分为两大方向，一是以东亚地区为代表的依赖于内镜技术的病理活检诊断，二是以欧美为代表的检测肿瘤标志物的间接诊断。
本研究对目前诊断早期胃癌的技术进展进行综述。
1 内镜诊断由于内镜下可直视病灶，且可以对病灶取材进行病理活检，内镜诊断已逐渐成为胃癌的主流诊断方式。
近年来，由于内镜技术的发展与普及，胃癌的早期诊断有了很大进步，病死率也有一定下降［4］。
小鼠癌症检测实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握小鼠癌症模型建立的方法；2. 熟悉小鼠癌症检测的相关技术；3. 分析小鼠癌症模型的病理特征，为癌症的早期诊断和治疗提供依据。
二、实验原理癌症是一种常见的恶性肿瘤，其发生与基因突变、DNA损伤修复、细胞周期调控等多种因素有关。
本实验采用化学物质诱导小鼠建立癌症模型，通过观察小鼠的病理变化，检测相关肿瘤标志物，以评估癌症的发生和进展。
三、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠；2. 试剂：苯并芘（BaP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞角蛋白19（CK19）抗体、免疫组化试剂盒；3. 仪器：显微镜、凝胶成像系统、酶标仪等。
四、实验方法1. 建立小鼠癌症模型（1）将C57BL/6小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只；（2）实验组小鼠每天给予苯并芘（BaP）溶液灌胃，对照组给予等体积生理盐水；（3）连续灌胃30天后，观察小鼠的生存状态，选取癌症发生的小鼠进行后续实验。
2. 小鼠病理学检测（1）取实验组小鼠的肿瘤组织，进行石蜡包埋、切片；（2）利用显微镜观察肿瘤组织的形态学变化；（3）利用免疫组化技术检测肿瘤组织中TNF-α和CK19的表达情况。
3. 肿瘤标志物检测（1）收集实验组小鼠的血清，进行肿瘤标志物检测；（2）利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中TNF-α和CK19的含量。
五、实验结果1. 小鼠病理学检测结果显微镜观察发现，实验组小鼠的肿瘤组织呈现出明显的异型性、浸润性生长，与对照组相比，实验组小鼠的肿瘤组织具有更高的肿瘤分期。
2. 免疫组化检测结果实验组小鼠的肿瘤组织中TNF-α和CK19的表达水平均显著高于对照组，提示TNF-α和CK19可能参与小鼠癌症的发生和发展。
3. 肿瘤标志物检测结果ELISA检测结果显示，实验组小鼠的血清中TNF-α和CK19含量均显著高于对照组，提示TNF-α和CK19可作为小鼠癌症的早期诊断指标。
六、实验讨论本实验成功建立了小鼠癌症模型，并通过病理学、免疫组化和肿瘤标志物检测等方法，证实了TNF-α和CK19在癌症发生和发展过程中的重要作用。
肿瘤报告卡填写规范
*
发病登记： 内容/项目
食管胃连接处、未分化腺癌
贰
壹
叁
*
C34肺（支气管和肺） ——TOPO
*
*
肺（支气管和肺） ——常见Morp
*
*
C16胃癌 ——TOPO
*
*
胃癌 ——常见Morp
C22肝和肝内胆管癌 ——常见TOPO
*
*
肝癌 _常见Morp
*
*
C15食管 _Topo
*
*
食管癌 _常见Morp
*
*
C50乳腺癌 _Topo
一般填写要求
一、登记卡片的正确填写和要求
*
要求基本项目填写齐全，尽量详细
要求肿瘤登记信息准确，数据真实可靠、不弄虚作假
要求肿瘤上报及时
字迹工整
填卡人为首诊医生
*
xxx肿瘤病例报告卡
*
编 号_______________ ICD编码__________ 门诊号______________ 住院号______________ 身份证号 口口口口口口口口口口口口口口口口口口 患者姓名___________ 性别__________ 实足年龄__________岁 出生年月——年——月——日 民族____________________ 职 业 (具体工种、性质)______________ 工作单位_____________________ 正式户口 详细地址_______________ 区、县_____________ 街道、乡________________ 诊 断（解剖学部位）_____________________________ 病理学类型及分化程度_________________________ (如是继发性肿瘤请尽可能注明原发部位) 诊断日期______年____月____日 报告单位____________________报告医师__________报告时间_______年_____月_____日 死亡日期________年_____月_____日 死亡原因________________________________
恶性肿瘤ICD10
基于恶性肿瘤ICD10编码数据，可 以对医院的整体服务质量进行评价 ，包括床位使用率、平均住院日等 方面。
流行病学研究
疾病分布研究
利用恶性肿瘤ICD10编码数据， 可以研究恶性肿瘤在不同地区、
不同人群的分布情况。
疾病流行趋势研究
通过对恶性肿瘤ICD10编码数据 的长期追踪，可以研究恶性肿瘤
教育资源
提供相关教材、软件、网络课程等资 源，方便学员学习和复习。
培训效果评估与改进
评估方式
通过考试、实操考核等方式对学员的学 习成果进行评估，同时收集学员的反馈 意见。
VS
改进措施
根据评估结果和反馈意见，对培训内容、 方式等进行调整和优化，提高培训效果和 质量。
THANKS
谢谢您的观看
3
编码审核与复核
建立编码审核机制，对编码进行复核，确保编码 的准确性。
国际交流与合作
国际会议与研讨
定期举办国际恶性肿瘤ICD10编码会议和研讨，分享经验，共同 探讨解决编码问题。
合作研究
开展国际合作研究，共同研发更先进的编码技术和方法，提高编码 的准确性。
建立国际编码数据库
建立国际恶性肿瘤ICD10编码数据库，共享编码数据，促进国际交 流与合作。
转移性肿瘤应根据其原发部位进行编 码，并在附加信息中注明转移部位。
03
恶性肿瘤ICD10在医疗管理中 的应用
病案管理
病案首页填写
恶性肿瘤ICD10编码用于 病案首页的填写，确保疾 病信息的准确性和完整性 。
病案检索
通过恶性肿瘤ICD10编码 ，可以快速检索和整理相 关病例，提高病案管理的 效率。
国际应用与发展
国际应用
恶性肿瘤ICD10被世界卫生组织（WHO）推荐并广泛应用于 全球范围内的疾病统计和监测，为各国制定公共卫生政策提 供数据支持。
肿瘤患者IL10升高的诊断及监测方法研究
肿瘤患者IL10升高的诊断及监测方法研究引言：肿瘤是一种常见的恶性疾病，其发展过程中，会产生一系列的细胞因子和分子，其中包括白细胞介素10（Interleukin-10, IL-10）。
IL-10是一种具有免疫调节功能的细胞因子，它在肿瘤形成和发展中起着重要作用。
因此，准确监测和诊断肿瘤患者IL-10水平的变化对肿瘤的诊断和治疗具有重要意义。
一、肿瘤患者IL-10升高的临床意义IL-10是一种具有重要的免疫调制功能的细胞因子，它具有抑制炎症反应和增强肿瘤免疫逃逸的作用。
在肿瘤过程中，肿瘤细胞和肿瘤微环境中的免疫细胞产生大量的IL-10，这种大量的IL-10会抑制免疫细胞对肿瘤细胞的攻击，并促进肿瘤的生长和扩散。
因此，肿瘤患者IL-10升高可能意味着肿瘤的发展进展，也可能是肿瘤免疫疗法效果不佳的重要标志。
二、肿瘤患者IL-10升高的诊断方法1. 血清IL-10水平检测：通过采集患者的血液样本，利用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）等技术检测血清中的IL-10水平。
高血清IL-10水平可能与肿瘤的存在和进展相关。
然而，需要注意的是，IL-10水平的升高也可能与其他疾病，如慢性炎症和自身免疫性疾病等相关。
2. 组织中IL-10的表达：通过手术获得肿瘤组织或癌症周围组织，利用免疫组化等技术检测组织中IL-10的表达情况。
IL-10的组织表达可以协助肿瘤的诊断，并提供肿瘤治疗的参考。
此外，IL-10的组织表达还可以作为预测肿瘤预后的重要指标。
三、肿瘤患者IL-10升高的监测方法1. 定期监测IL-10水平：对已经确诊为肿瘤的患者，可以定期监测其血清IL-10水平的变化。
通过不断地观察IL-10水平的变化情况，可以更准确地评估肿瘤的发展和治疗效果。
然而，需要注意的是，仅仅依靠血清IL-10水平的监测并不能完全代表肿瘤的发展情况，还需要结合其他临床指标进行综合评估。
肿瘤分子诊断-科普版
肿瘤的分子诊断
器官水平
组织水平
细胞水平
分子水平
肿瘤体积
细胞类型
蛋白标记物
基因变化
分子检测技术
• DNA测序技术 一代（Sanger） 二代（Illumina） 三代（SMRT, Nanopore）
• 基因芯片 • PCR
实时定量PCR，ddPCR • 循环肿瘤DNA（ctDNA）
遗传性全癌种基因检测 BRCA1、BRCA2
血液 血液
林奇综合征（Lynch）：MLH1, MSH2, MSH6, PMS2, EPCAM；
家族性腺瘤性息肉病（FAP）：APC；
家族性幼年型息肉综合征：SMAD4, BMPR1A；
遗传性结直肠癌；
血液
结 直 肠 癌 遗 传 易 感 基因筛 APC, ATM, AXIN2, BMPR1A, CDH1, CHEK2, EPCAM, GALNT12, MLH1,
肿瘤靶向治疗
肿瘤 发生 过程 中的 生理 活动 和相 应的 靶向 药物
临床常用靶向药物及相关基因
四、肿瘤个体化治疗标准化指南
• NCCN (National Comprehensive Cancer Network) • FDA (Food and Drug Administration) • NCI (National Cancer Institute) • CAP (College of American Pathologists) • ASCO (American Society of Clinical Oncology) • WHO (World Health Organization)
全
数字PCR技术在临床诊断中的应用进展
数字PCR技术在临床诊断中的应用进展杨德平;刘维薇【摘要】数字PCR(dPCR)作为核酸检测和定量的新方法,在病原微生物检测、肿瘤相关基因检测、产前诊断等方面应用日益广泛.该文就其在HBV DNA、HIV DNA、表皮生长因子受体(EGFR)突变、异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变、胎儿游离DNA等检测中的研究进展作一综述.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2016(034)010【总页数】3页(P785-787)【关键词】数字PCR;病原微生物;肿瘤相关基因;产前诊断【作者】杨德平;刘维薇【作者单位】上海市第十人民医院检验科,上海200072;上海市浦东新区周浦医院检验科,上海201318;上海市第十人民医院检验科,上海200072;上海市皮肤病医院检验科,上海200070【正文语种】中文【中图分类】R446随着分子生物学技术的不断发展，核酸定量技术更新换代，从传统的定量PCR(quantitative PCR, qPCR)逐渐发展到数字PCR(digital PCR, dPCR)。
dPCR通过稀释使大多数反应中不含或只含有1个靶分子，再通过传统的PCR扩增，探测到荧光信号则记为阳性反应；没有探测到荧光信号的视为阴性反应，再进行泊松(Poisson)分布分析得到结果，该系统能定量估算出起始模板浓度[1]。
dPCR比qPCR具有明显的优势，其能够不依赖标准曲线而实现绝对核酸定量[2]，通过更多的PCR扩增产物提高精确度，对抑制剂具有较高耐受性，能够分析复杂混合物，能实现极微量核酸样本检测、复杂背景下稀有突变检测和表达量微小差异鉴定等。
数字PCR的类型包括列阵数字PCR、BEAMing数字PCR和微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)等，其中ddPCR应用最广泛，该系统要求在传统PCR扩增前把测试样本分割成成千上万的水包油微滴，分割后每个微滴成为1个独自的PCR反应，而代替了传统的多孔板。
肿瘤早筛报告解读流程课件
右叶甲状腺小结节
血管
主动脉轻度硬化样变
彩超
肝脏
脾脏 胆囊
右叶：上界6肋间，前后径11.5cm，肋下长-cm 左叶：长度6.8cm，厚度5.7cm
厚度3.1cm，肋下-cm
6.3*2.2 cm，壁厚0.3cm，胆总管内径0.5cm
模板 血细胞
甲功五项
中性粒细胞百分比：71.3↑（50-71） 甲状腺过氧化物酶自身抗体：18.26↑（1-16）
尿液分析
①维生素C：+2 ②隐血：+1
尿沉渣定量
①上皮细胞：17.8↑（0.1-17.2） ②黏液丝：阳性 ③上皮细胞(高倍视野)：3.20↑（0.1-2.89）
超声
肝脏 乳房 甲状腺
脂肪肝
3 个平行 PCR 检测的内参基因(ACTB)CP 值均＜40，证明检测有效；可进一步判读 septin9
全面健康管理肿方瘤风案险提一示 模板
本次血浆中检测出肿瘤特有 RB1 基因突变。该基因有如下相 关肿瘤风险：
RB1 基因突变在肿瘤中的发生率
上图数字对应肿瘤：1 肺癌；2 肝癌；3 胰腺癌；4 胃癌；5 食道癌；6 肾癌；7 甲 状腺癌；8 结直肠癌；9 膀胱癌；10 黑色素瘤；11 胆管癌； 12 淋巴瘤；13 脑胶质瘤；14 急性髓性白血病；15 卵巢癌； 16 子宫内膜癌；17 乳腺癌；18 宫颈癌
肿瘤早筛报告解读流程
8
报告导读
图形说明 2
横坐标1-18代表检测18种肿瘤，纵坐标代表基因在肿瘤中发生率。 举例说明： AFF3基因（样本中AFF3无突变） 该基因在COSMIC数据库中与三个肿瘤有相关性，分别是食道癌、结直肠癌、膀胱癌， 突变比率为食道癌3%（每100个食道癌患者中有3个人检测到AFF3突变） ，结直肠癌 4% （每100个结直肠癌患者中有4个人检测到AFF3突变） ，膀胱癌（每100个膀胱癌患 者中有9个人检测到AFF3突变） 9%。