食物中泛酸的测定方法
食品中各种酸的测定方法附公式
食品中各种酸的测定方法附公式酸度的测定概述食品中的酸味物质，主要是溶于水的一些有机酸和无机酸。
在果蔬及其制品中，以苹果酸，柠檬酸，酒石酸，琥珀酸和醋酸为主；在肉，鱼类食品中则以乳酸为例。
此外，还有一些无机酸，像盐酸，磷酸等。
这些酸味物质，有的是食品中的天然成分，像葡萄中的酒石酸，苹果中的苹果酸；有的是人为的加进去的，像配制型饮料中加入的柠檬酸；还有的是在发酵中产生的，像酸牛奶中的乳酸。
酸在食品中主要有以下三个方面的作用。
1、显味剂不论是哪种途径得到的酸味物质，都是食品重要的显味剂，对食品的风味有很大的影响。
其中大多数的有机酸具有很浓的水果香味，能刺激食欲，促进消化，有机酸在维持人体体液酸碱平衡方面起着重要的作用。
2、保持颜色稳定食品中的酸味物质的存在，即pH值的高低，对保持食品的颜色的稳定性，也起着一定的作用。
在水果加工过程中，如果加酸降低介质的pH值，可抑制水果的酶促褐度；选用pH6.5-7.2的沸水热烫蔬菜，能很好地保持绿色蔬菜特有的鲜绿色。
3、防腐作用酸味物质在食品中还能起到一定的防腐作用。
当食品的pH小于2.5时，一般除霉菌外，大部分微生物的生长都受到了抑制；若将醋酸的浓度控制在6%时，可有效地抑制腐败菌的生长食品中酸度测定的意义1.测定酸度可判断果蔬的成熟程度例如：如果测定出葡萄所含的有机酸中苹果酸高于酒石酸时，说明葡萄还未成熟，因为成熟的葡萄含大量的酒石酸。
不同种类的水果和蔬菜，酸的含量因成熟度、生长条件而异，一般成熟度越高，酸的含量越低。
如番茄在成熟过程中，总酸度从绿熟期的0.94%下降到完熟期的0.64%，同时糖的含量增加，糖酸比增大，具有良好的口感，故通过对酸度的测定可判断原料的成熟度。
2.可判断食品的新鲜程度例如：新鲜牛奶中的乳酸含量过高，说明牛奶已腐败变质；水果制品中有游离的半乳糖醛酸，说明受到霉烂水果的污染。
3.酸度反映了食品的质量指标食品中有机酸含量的多少，直接影响食品的风味、色泽、稳定性和品质的高低。
食品中酸度的测定
食品中酸度的测定食品中酸度的测定一、概述（一）概念※ 酸的产生与中和反应：酸性物质发生水解或电离，产生H+，使体系呈酸性；与碱反应生成水。
H3A→H2A-+ HA-2+A-3+H+H2A-+HA-2+H++NaOH→H2O+Na++A-31、总酸度：指食品中所有酸性物质的总量。
反应式中H3A、H2A-、HA-2、H+其大小可借标准碱滴定来测定，故其又称“可滴定酸度”。
2、有效酸度：指被测溶液中呈游离状态的H+的浓度，即H+活度。
反应式中H+用pH值表示，其大小可用酸度计（pH计）来测定。
pH的大小与总酸中酸的性质与数量有关，还与食品中缓冲物的质量与缓冲能力有关。
人的味觉只对H+有感觉，所以，总酸度高，口感不一定酸。
在一定的 pH下，人类对酸味的感受强度不同。
如：醋酸＞甲酸＞乳酸＞草酸＞盐酸一般食品在 pH＜3.0，难以适口；pH ＜5 为酸性食品；pH 5—6 无酸味感觉。
3、挥发酸：食品中易挥发的有机酸。
主要是醋酸和痕量的甲酸、丁酸等一些含低碳链的直链脂肪酸。
不包括可用水蒸汽蒸馏的乳酸、琥珀酸、山梨酸有CO2和SO2等。
其大小可通过蒸馏法分离，再借标准碱滴定来测定。
（二）测定酸度的意义1、对食品的色调具有指导作用2、对食品的口味的调控作用3、对食品稳定性的控制作用4、可作为食品的质量指标5、利用果蔬中有机酸含量与糖含量之比，可判定其成熟度（三）食品中酸类物质种类及来源1、无机酸：较少。
呈中性盐化合态存在于食品中2、有机酸：主要。
部分呈游离态，部分呈酸式盐。
①固有有机酸②人工加入有机酸③产生有机酸GB/T 12456－1990 食品中总酸的测定方法指示剂法滴定法电位滴定法【适用范围】指示剂法适用于果蔬制品、饮料、乳制品、酒、蜂产品、淀粉制品、谷物制品和调味品等食品中总酸的测定，不适用于深色或浑浊度大的食品；电位滴定法适用于上述各类食品中总酸的测定。
二、食品中总酸度的测定（滴定法）【原理】指示剂法以酚酞作指示剂；电位滴定法根据电位的“突跃”判断滴定终点。
4-3食品中酸类物质的测定
③ 固体样品（如干鲜果蔬及其制品）及冷冻、粘稠等制
品，先取可食部分加入定量水（冷冻制品须先解冻）， 用高速组织捣碎机捣成浆状，再称取处理样品10克 ，
加无CO2蒸馏水溶解并稀释至25ml。
（四） 测定
① 样品蒸馏 取样品 2 －3 g 或 25 ml 移到蒸馏瓶中，加 50 ml无 CO2的水和 1 ml 10％ H3PO4溶液，连接水蒸汽蒸馏装置打 开冷凝水，加热蒸馏至馏出液约 300 ml为止，于相同条件
④说明
Ⅰ样品浸渍、稀释用蒸馏水不能含有CO2 ,因为CO2溶 于水会生成酸性的H2CO3形式，影响滴定终点时酚 酞颜色变化。无CO2 的蒸馏水的制备方法为：将蒸 馏水煮沸20分钟后，用碱石灰保护冷却；或将蒸馏 水在使用前煮沸15分钟并迅速冷却备用。必要时须 经碱液抽真空处理。样品中CO2对测定也有干扰， 故对含有CO2 饮料、酒类等样品在测定之前须除去 CO2。 Ⅱ样品浸渍、稀释之用水量应根据样品中总酸含量来 慎重选择，为使误差不超过允许范围，一般要求滴 定时消耗0.1mol/LNaOH溶液不得少于5ml，最好在 10～15ml.
②食品中酸的来源
• 原料带入； •加工过程中人为加入； •生产中有意让原料产酸；
•各种添加剂带入；
•生产加工不当，贮藏、运输中污染。
小知识
人的味觉只对H 有感觉，所以，总酸度 高，口感不一定酸。 在一定的 pH下，人类对酸味的感受强 0，难以适口； pH ＜5 为酸性食品； pH 5—6 无酸味感觉。
Ⅲ若样液有颜色，则在滴定前用与样液同体积的不含CO2蒸馏水稀 释之或采用试验滴定法，即对有色样液，用适量无CO2蒸馏水稀 释，并按100ml样液加入0.3mL酚酞比例加入酚酞指示剂，用标准 NaOH滴定近终点时，取此溶液2～3ml移入盛有20mL无CO2蒸馏 水中，若实验表明还没有达到终点时，将特别稀释的样液倒回原 样液中，继续滴定直至终点出现为止。用这种在小烧杯中特别稀 释的办法，能观察几滴0.1mol/LNaOH滴液所产生的酚酞颜色差 别。
食品中泛酸的测定
管中,塞好棉塞,于121 ℃高压灭菌15 min后即为种子培养液。冷却后用接种 环 将 活 化 的 菌 株 转 种 至 2支种子培养液中,于37 ℃±1 ℃恒温培养箱中培养20h~24h。取出后3000r/min离心10min,弃 上清液,无菌操作下用已预先灭 菌 的 生 理 盐 水 淋 洗 2 次,3000r/min 离 心 10 min,弃 上 清 液。 再 加 入 3 mL灭菌生理盐水,振荡混匀,制成接种液,立即使用。
1 范围
本标准规定了食品中泛酸和泛酸钙的测定方法。 本标准第一法适用于食品中泛酸的测定,第二法适用于营养素补 充 剂 类 保 健 食 品 和 配 方 食 品 中 泛 酸 (钙 )的 测 定 。
第一法 微生物法
2 原理
泛酸是植物乳杆菌 Lactobacillusplantarum(ATCC8014)生 长 所 必 需 的 营 养 素,在 一 定 控 制 条 件 下,将植物乳杆菌液接种至含有试样液的培养液中,培养一定时间后测定透 光 率(或 吸 光 度 值),根 据 泛 酸 含 量 与 透 光 率 (或 吸 光 度 值 )的 标 准 曲 线 计 算 出 试 样 中 泛 酸 的 含 量 。
3.4 标准品
D-泛 酸 钙 (C18H32CaN2O10):纯 度 ≥99% 。
3.5 标准溶液的配制
3.5.1 泛酸标准储备溶液(40.0μg/mL):精确称取43.5 mg 预干燥至恒重的 D-泛酸钙,加水溶解并转 移至1000 mL 容量瓶中,加10 mL 乙 酸 溶 液,100 mL 乙 酸 钠 溶 液,用 水 定 容 至 刻 度。 储 存 于 棕 色 瓶 中,加入3滴~5滴甲苯,于2 ℃~4 ℃冰箱中可保存2年。 3.5.2 泛酸标准中间液(1.00μg/mL):准确吸取25.0mL 泛酸标准储备溶液置于1000mL 容量瓶中, 加入10 mL 乙酸溶液,100 mL 乙酸钠溶液,用水定容至刻度。加入3滴~5 滴 甲 苯 于 2 ℃ ~4 ℃ 冰 箱 中可保存1年。 3.5.3 泛酸标准工作溶液(20ng/mL):准确 吸 取 2.00 mL 泛 酸 标 准 中 间 溶 液 置 于 100 mL 容 量 瓶 中, 用 水 定 容 至 刻 度 ,混 匀 。 临 用 前 现 配 。
食品中总酸度的测定
食品中总酸度的测定方法一指示剂法一、实验原理根据酸碱中和原理，用碱液滴定试液中的酸，以酚酞为指示剂确定滴定终点，按碱液的消耗量计算食品中的总酸含量。
二、试剂与仪器1．试剂所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水或同等纯度的水（以下简称水），使用前须经煮沸，冷却。
0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液0.01mol/L或0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液1%酚酞指示剂溶液：1g酚酞溶于60mL 95%乙醇中，用水稀释至100mL。
2．仪器、设备试验室常用仪器及下列各项：组织捣碎机；水浴锅；研钵；冷凝管。
三、分析步骤1．试样的制备（1）液体样品不含二氧化碳的样品充分混匀。
含二氧化碳的样品按下述方法排除二氧化碳：取至少200mL充分混匀的样品，置于500mL锥形瓶中，旋摇至基本无气泡装上冷凝管，置于水浴锅中。
待水沸腾后保持10min，取出，冷却。
啤洒中的二氧化碳按GB4928规定的方法排除。
（2）固体样品去除不可食部分，取有代表性的样品至少200g，置于研钵或组织捣碎机中，加入与试样等量的水，研碎或捣碎，混匀。
面包应取其中心部分，充分混匀，直接供制备试液。
（3）固液体样品按样品的固、液体比例至少取200g，去除不可食部分，用研钵或组织捣碎机研碎或捣碎，混匀。
2.试液的制备取25～50g试样，精确至0.001g，置于250mL容量瓶中，用水稀释至刻度，含固体的样品至少放置30min（摇动２～３次）。
用快速滤纸或脱脂棉过滤，收集滤液于250mL锥形瓶中备用。
总酸度低于0.7g/kg的液体样品，混匀后可直接取样测定。
3.样品测定取25.00～50.00mL试液，使之含0.035～0.070g酸，置于150mL烧杯中。
加40～60mL水及0.2mL1%酚酞指示剂，用0.1mol／Ｌ氢氧化钠标准滴定溶液（如样品酸度较低，可用0.01mol／Ｌ或0.05mol／Ｌ氢氧化钠标准滴定溶液）滴定至微红色30s不褪色。
记录消耗０.１mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数(V1)。
最新最全食品中总酸的测定方法
杨协成（广州）有限公司
三层文件
编号：
修定日期：
修改版本号：
实施日期：
题目：检验方法
食品中总酸的测定方法
本份页码：共2页
制定部门：品控部
页码：2－1
1、 原理
根据酸碱中和原理，用碱液滴定试液中的酸，以酚酞为指示剂，确定滴定终点，按碱液的消耗量计算食品中的总酸含量。
2、试剂
6、2如果饮料酸度过高，可先用容量瓶稀释，再取稀释试液滴定。计算公式如下：
C（V1－V2）×K×F
X＝×100…………………（2）
m
F–––试液的稀释倍数。
其它与（1）式相同。
制定
核
准
审核
2、10.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液：按GB601配制与标定。
2、20.01mol/L或0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液：将0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液稀释V100→V1000→V200（用时当天稀释）。
2、31％酚酞指示剂溶液：1g酚酞溶于60ml95％乙醇（GB679）中，用水稀释至100ml。
V1–––滴定样品时消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，ml；
V2–––空白试验时消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，ml；
K–––酸的换算系数。各种酸的换算系数分别为：无水柠檬酸0.064；
一水柠檬酸0.070；苹果酸0.067。
计算结果精确到小数点后第二位。
制定
核
准
审核
制定日期：1999／09／07
杨协成（广州）有限公司
3、仪器
3、150ml碱式滴定管。
3、2150ml锥形瓶。
3、3分析天平。
4、操作方法
4、1液体（饮料）样品取5.00~10.00ml，果浆（汁）样品用分析天平精确称取0.2000~1.000g，置于150ml锥形瓶中。加40~60ml水及0.2ml1％酚酞指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液（如样品酸度较低，可用0.01mol/L或0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液）滴定至微红色30s不褪色。记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数（V1）。
反相高效液相色谱法同时测定维生素B6、烟酰胺和泛酸钙
and calcium pentot henate in some v itamin nutr iments. T he sample was extr acted ultraso nically w ith an ext ractant co nta ining pho sphate buffer solution ( pH 3. 0) and methanol fo r 5 min and then heat ed at 65- 70 e in a w ater bath for 10 min. T he ext ract obtained was used for the H PL C analysis. T he Inertsil pH- 3 Phenyl column was used as stat ionary phase, and a mix ed solution of 0. 05 mol # L - 1 K H2 PO 4 , methanol and acetonit rile mix ed in the ratio o f 90 t o 6 to 4 by vo lume, w as used as mobile phase. U V detection w as made at the wav elength of 210 nm. Linear ity of the st andard curves betw een the values o f peak area and concentr ation o f the 3 co mpo unds was checked by reg ression ana lysis, giving values of cor relat ion co eff icient s g reater than 0. 999 9. T est for r eco very w as made by standard addition met ho d w ith a substantial sample as the matr ix, the results o f reco very w ere fo und to be 97. 4% for v itamin B6, 100. 3% fo r calcium pento thenate and 102. 4% for nico tinamide.
食品中泛酸的测定
GB 5009.210—2016
3.1.18 3.1.19 3.1.20 3.1.21 3.1.22
碱 性 磷 酸 酶 :酶 活 力 ≥23 U/g。 鸽 子 肝 脏 丙 酮 提 取 物 干 粉 (liveracetonepowder,from pigeon):酶 活 力 ≥0.1 U/g。 蛋 白 胨 :含 氮 量 ≥10% 。 酵 母 提 取 物 :含 氮 量 ≥10% 。 琼脂。
3.2 试剂配制
3.2.1 乙酸溶液(0.2 mol/L):吸取11.8 mL 冰乙酸,用水稀释至1000 mL,混匀。 3.2.2 乙酸钠溶液(0.2 mol/L):称取27.2g三水合乙酸钠,加水溶解并稀释至1000 mL,混匀。 3.2.3 盐酸溶液(1 mol/L):吸取83 mL 盐酸,加水稀释至1000 mL,混匀。 3.2.4 盐酸浸泡液:吸取100 mL 盐酸与50倍水混合。 3.2.5 氢氧化钠溶液(1 mol/L):称取40g氢氧化钠,加水溶解并稀释至1000 mL,混匀。 3.2.6 氢氧化钠溶液(0.1 mol/L):称取4g氢氧化钠,加水溶解并稀释至1000 mL,混匀。 3.2.7 Tris缓冲液:称取121.0g三羟甲基氨基甲烷溶于500 mL 水中,用冰乙酸调 pH 至 8.1±0.1,加 水至1000 mL,混匀。贮存于2 ℃~4 ℃冰箱中,可保存2周。 3.2.8 生理盐水:称取9g氯化钠,加水溶解 并 稀 释 至 1000 mL,混 匀。临 用 前 预 先 灭 菌,于 121 ℃ 高 压灭菌10 min后备用。 3.2.9 乙醇溶液(20%):量取200 mL 无水乙醇与800 mL 水混匀。 3.2.10 碳酸钠溶液(0.08 mol/L):称取8.5g碳酸钠,加水溶解并稀释至1000 mL,混匀。 3.2.11 碳酸氢钾溶液(0.02 mol/L):称取2g碳酸氢钾,加水溶解并稀释至1000 mL。混匀。 3.2.12 碱性磷酸酶溶液:称取2g碱性磷酸酶,加水溶解并稀释至100mL。临用现配,2 ℃~4 ℃冰箱 预冷。
食品中总酸的测定
《食品中总酸的测定》GB/T12456-2008本标准参照采用国际标准ISO 750--1981《水果和蔬菜制品中滴定酸度的测定》。
1、主题内容与适用范围本标准规定了使用酸碱滴定的指示剂法和电位滴定法测定食品中总酸的方法。
本标准的指示剂法适用于果蔬制品、饮料、乳制品、酒、蜂产品、淀粉制品、谷物制品和调味品等食品中总酸的测定，不适用于深色或浑浊度大的食品；电位滴定法适用于上述各类食品中总酸的测定。
2、引用标准GB 601化学试剂滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备GB 604化学试剂酸碱指示剂pH 变色域测定通用方法GB 4928 11 度、12 度优级淡色啤酒的试验方法3、指示剂法3.1原理根据酸碱中和原理,用碱液滴定试液中的酸,以酚酞为指示剂确定滴定终点,按碱液的消耗量计算食品中的总酸含量。
3.2试剂所有试剂均为分析纯;水为蒸馏水或同等纯度的水(以下简称水),使用前须经煮沸、冷却。
氢氧化钠标准滴定溶液:按GB 601 配制与标定。
或0.05mol/L 氢氧化钠标准滴定溶液:将0.1mol/L 氢氧化钠标准滴定溶液稀释V100→V1000→V200(用时当天稀释)。
酚酞溶于60mL 95％乙醇(GB 679)中,用水稀释至100mL。
3.3仪器、设备试验室常用仪器及下列各项：;;;3.4试样的制备不含二氧化碳的样品充分混匀。
含二氧化碳的样品至少称取200g 样品于500ml 烧杯中,置于电炉上加热边搅拌至微沸,保持2min,称量,用蒸馏水补充至煮沸前的质量。
去除不可食部分,取有代表性的样品至少200g,置于研钵或组织捣碎机中,加入与试样等量的水,研碎或捣碎,混匀。
面包应取其中心部分,充分混匀,直接供制备试液。
按样品的固、液体比例至少取200g,去除不可食部分,用研钵或组织捣碎机研碎或捣碎混匀。
3.5试样的制备3.5.1 液体试样总酸含量小于或等于4g/kg 的液体试样(;大于4g/kg 的液体试样取10～50g 精确至0.001g,置于100ml 烧杯中。
食品中总酸度的测定
食品中总酸度的测定食品中总酸度的测定方法一指示剂法一、实验原理根据酸碱中和原理，用碱液滴定试液中的酸，以酚酞为指示剂确定滴定终点，按碱液的消耗量计算食品中的总酸含量。
二、试剂与仪器1．试剂所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水或同等纯度的水（以下简称水），使用前须经煮沸，冷却。
0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液0.01mol/L或0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液1%酚酞指示剂溶液：1g酚酞溶于60mL 95%乙醇中，用水稀释至100mL。
2．仪器、设备试验室常用仪器及下列各项：组织捣碎机；水浴锅；研钵；冷凝管。
三、分析步骤1．试样的制备（1）液体样品不含二氧化碳的样品充分混匀。
含二氧化碳的样品按下述方法排除二氧化碳：取至少200mL充分混匀的样品，置于500mL锥形瓶中，旋摇至基本无气泡装上冷凝管，置于水浴锅中。
待水沸腾后保持10min，取出，冷却。
啤洒中的二氧化碳按GB4928规定的方法排除。
（2）固体样品去除不可食部分，取有代表性的样品至少200g，置于研钵或组织捣碎机中，加入与试样等量的水，研碎或捣碎，混匀。
面包应取其中心部分，充分混匀，直接供制备试液。
（3）固液体样品按样品的固、液体比例至少取200g，去除不可食部分，用研钵或组织捣碎机研碎或捣碎，混匀。
2.试液的制备取25～50g试样，精确至0.001g，置于250mL容量瓶中，用水稀释至刻度，含固体的样品至少放置30min（摇动２～３次）。
用快速滤纸或脱脂棉过滤，收集滤液于250mL锥形瓶中备用。
总酸度低于0.7g/kg的液体样品，混匀后可直接取样测定。
3.样品测定取25.00～50.00mL试液，使之含0.035～0.070g酸，置于150mL烧杯中。
加40～60mL水及0.2mL1%酚酞指示剂，用0.1mol ／Ｌ氢氧化钠标准滴定溶液（如样品酸度较低，可用0.01mol／Ｌ或0.05mol／Ｌ氢氧化钠标准滴定溶液）滴定至微红色30s不褪色。
食品安全标准总酸的测定
食品安全标准总酸的测定
食品安全标准中，总酸的测定是一项重要的检测项目。
总酸是指食品中所有酸性物质的总和，包括有机酸和无机酸。
总酸的测定对于评价食品的品质、保质期以及食品的安全性具有重要意义。
总酸的测定方法有多种，如滴定法、电位滴定法、光谱法等。
其中，滴定法是最常用的一种方法。
滴定法的原理是通过滴定一定浓度的碱溶液与食品中的酸性物质发生中和反应，从而计算出食品中总酸的含量。
具体操作步骤如下：
1. 样品处理：将待测食品样品进行适当处理，如稀释、过滤等，以便于后续的测定。
2. 滴定液的准备：准备一定浓度的氢氧化钠（NaOH）或氢氧化钾（KOH）溶液作为滴定液。
3. 滴定操作：将滴定液逐滴滴入待测样品中，同时不断搅拌，直至样品的颜色发生变化。
这个颜色变化的点称为终点。
4. 结果计算：根据滴定液的浓度和消耗体积，计算出食品中总酸的含量。
需要注意的是，不同的食品其总酸的测定方法和条件可能会有所不同。
例如，果汁中的总酸通常以柠檬酸作为标准物质进行测定，而醋中的总酸则以乙酸作为标准物质进行测定。
此外，食品中的某些成分可能会干扰总酸的测定，因此在实际操作过程中需要对样品进行适当的前处理，以提高测定的准确性。
总之，食品安全标准中总酸的测定对于保证食品的品质和安全性具有重要意义。
通过对食品中总酸含量的监测，可以有效地评价食品的新鲜度、保质期以及加工工艺的合理性，从而保障消费者的健康。
食品理化检验技术 酸度的测定
pH 5—6 无酸味感觉
— 12 —
酸度的概念
一些果蔬的pH值
— 13 —
酸度的概念
一些食品的pH值
— 14 —
酸度的概念
4 牛乳酸度
外表酸度：又叫固有酸度，是指刚挤出来的新鲜牛乳本 身所具有的酸度，主要来源于鲜牛乳中酪蛋白，白蛋白、 柠檬酸盐及磷酸盐等酸性成分。外表酸度在鲜牛乳中约 占0.15~0.18%。
罐头食品
①液态制③品均混质匀化浸备的渍用试3，0样m固in相后和过液滤相或分离开心的，制取品约则取 混匀的液使相用部机分械5备0设m用备L。滤将液试于样1均00质m。L烧杯中。
— 51 —
分析步骤
试样 制备
酸度计 的校正
样液pH 的测定
— 52 —
试样制备
肉及肉制品
①取样 取有代表性的样品且根据实际情况使
用1～2个不同水的梯度进行溶解。
②非均质称化取的10试g（样精确到0.01g）绞碎试样，
水产品中牡蛎（蚝、海蛎子） 在试样中加选新取煮有沸代后表冷性却的的p水H至测1试00点m。L，摇匀，
适用范围：本法适用于所有新鲜果蔬产品，也适用于加或未加二氧 化硫、山梨酸、苯甲酸、甲酸等化学防腐剂之一的果蔬制品的测定。
注：若制品含二氧化硫、山梨酸、苯甲酸、甲酸等防腐剂，则测定 馏出液中防腐剂的量，以较正其滴定结果。
— 37 —
所需仪器
蒸 馏 装 置
— 38 —
所需试剂
1.酒石酸。 2.鞣酸。 3.氢氧化钙：澄清的饱和溶液。 4.氢氧化钙稀溶液：1体积饱和氢氧化钙溶液加4体积水。 5.NaOH标准溶液（0.1mol/L）：配制和标定方法按GB 601操作。 6.酚酞：称取1g酚酞，溶解在100mL95%（V/V）乙醇溶总酸含量小于或等于4g/kg的试样 将试样用快速滤纸过滤，收集滤液，用于测定。 （2）总酸含量大于4g/kg的试样 称取10g～50g试样，精确至0.001g，置于100mL烧杯中。用约80℃煮沸过 的水将烧杯中的内容物转移到250mL容量瓶中（总体积约150 mL）。置于 沸水浴中煮沸30min（摇动2次～3次，使试样中的有机酸全部溶解于溶液 中），取出，冷却至室温（约20℃），用煮沸过的水定容至250mL。用快 速滤纸过滤。收集滤液，用于测定。
食品中酸类物质的测定
（3）操作方法
样品处理
酸度计的校正
样液PH值的测定
样品处理
果蔬样品：将果蔬样品榨汁后，取其汁液直接 进行pH测定，对于果蔬干制品，可取适量样 品，并加数倍的无CO2蒸馏水，于水浴上加热 30分钟，再捣碎、过滤取滤液测定。
含CO2的液体样品（如碳酸饮料、啤酒等）： 同“总酸度测定”方法排除CO2后再测定。
特点：操作方便，较常用于挥发酸含量较高的样品。
调味品及不含CO2 的饮料、酒类，将样品混匀后直接取样，必要时加适量水稀释（若样品浑浊，则需过滤）
挥发酸包含游离的和结合的两部分。 (1) “选择”开关置pH档
H2O转移到1L的容量瓶中，用无CO2蒸馏水溶解并稀释到刻度，充分混合。 一般 左右，故选酚酞为指示剂。
注：用碱式滴定管，先用水洗净，检查是否漏 液，排气泡，再使用。
4.结果计算
总酸度（%） c•VKV0 100 m V1
式中：c------标准NaOH溶液的浓度，mol/L V-----滴定消耗标准NaOH溶液的体积，mL m------样品质量或体积，g或ml V0 -----样品稀释液总体积，mL; V1 -----滴定时吸取的样液体积，mL; K-------换算为主要酸的系数，即1毫摩尔氢氧化钠相
新鲜的油脂常是中性的，不含游离脂肪酸，但油 脂在存放过程中，本身含有解脂酶会分解油脂而产生 游离脂肪酸，使油脂败坏，故测定油脂酸度（以酸价 表示）可判断其新鲜度。有效度也是判断食品质量的 指标，如新鲜肉pH值为5.7~6.2，如pH值大于6.7，说 明肉已变质。
（一）酸度的概念 适用范围
本法适用于各类色浅的食品中总酸含量的测 定。
1.原理
样品经适当的处理后，加适量磷酸使结 合态挥发酸游离出来，用水蒸气蒸馏分离出总 挥发酸，经冷却、收集后，以酚酞做指示剂， 用标准碱液滴定至微红色，30 秒 不褪色为终 点，根据标准碱的消耗量计算出样品总挥发酸 含量。
食品中酸类物质的测定
功能食品亮点多
磨菇类食品 近年来，医学及营养学专家都十分推 崇蘑菇类食品(包括香菇、草菇、平菇及灵 芝等菌类)，因为大多数蘑菇均含丰富的多 糖类物质，具有免疫活性，能增强机体抵 抗力和抗癌作用。
麸皮食品
麸皮是小麦提取面粉后的副产品， 是含膳食纤维素很高的“功能食品”， 其纤维含量高达18％，蛋白质14％， 脂肪25％，有利于人体新陈代谢， 对减少便秘。痔疮、肠癌有重要作用， 并对降低胆固醇、防止动脉硬化等具 有显著
五、 乳及乳制品酸度的测定
1． 概述
外表酸度(又称固有酸度) ：鲜牛乳中的酪蛋白、白
蛋白、柠檬酸盐及磷酸盐
鲜乳中约占0.15％～0.18％(以乳酸计)。
真实酸度(又称发酵酸度)：乳酸菌作用于乳糖产生
乳酸而升高的那部分酸度
牛乳酸度有两种表示方法
①用oT表示牛乳的酸度：
滴定100mL牛乳所消耗0.1mol／L的氢氧化钠的毫升数。
（2）加100g／L磷酸溶液lmL，连接蒸气蒸馏装置，通入 水蒸气使挥发酸蒸馏出来。
（3）馏出液300mL为止。 （4）将馏出液加热至60℃～65℃，加3滴酚酞指示剂，用
0.1mol／L NaOH标准溶液滴定至微红色30s不退色即为 终点。用相同的条件做一空白试验。
4. 结果计算
ω＝ (V1－V2 )c0.06100% m
3. 酒精试验
（1）原理——根据牛乳中蛋白质遇到酒精时的凝固特性， 来判断牛乳的酸度。 （2）试剂： 68% 酒精(应调整至中性)
牛乳在不同酸度下被68%酒精凝固的牛乳蛋白质特征
牛乳酸度 /oT
21～22 22～ 24
24～26 26～ 28
28～30
牛乳蛋白质 很细的絮 细的絮片 中型的絮 大的絮片 很大的絮片
食物中泛酸的测定方法
食物中泛酸的测定方法微生物测定法1.原理泛酸对于Lactobacillus plantarum（ATCC 8014）的正常生长是一种必需的营养素，在一定生长条件下，Lactobacillus plantarum的生长与繁殖速度同样品中泛酸的含量成一定的线性关系，通过利用浊度法或光密度法测定细菌增殖的强度即可间接地检测出食物样品中泛酸的含量。
本方法最低检出限为5ng。
2.适用范围本方法参考"Official Methods of Analysis of the Association of official Analytical Chemists"、"Methods of Vitamin Analysis"以及"Methods of the Microbiological Analysis of Selected Nutrients"。
本方法适用于测定各类食物（包括天然食物及加工食物）及饲料中的泛酸含量。
3.试剂本试验用水均为蒸馏水，所用试剂均需分析纯试剂。
3.1甲苯3.2 1mol/L盐酸溶液3.3 Tris 缓冲溶液：将24.2三羟基氨基甲烷溶于150ml水中，用7.5mol/LNaOH调pH至 8.0~8.3，然后定容至200ml，贮存于4℃冰箱中，可保存2周。
3.4 7.5mol/L氢氧化钠溶液：溶150g氢氧化钠于水中，定容至500ml。
3.5 2mol/L醋酸：12ml冰醋酸用水定容至1000ml。
3.6 2mol/L醋酸钠溶液：将16.4g醋酸钠用水定容至1000ml。
3.7 2mol/L碳酸氢钾溶液：称取10.012g碳酸氢钾溶于水中，然后定容至500ml。
3.8 2%碱性磷酸酶溶液：称取2g碱性磷酸酶（Sigma公司 No.P-3877）溶于水中，然后定容至100ml。
贮存于4℃冰箱中保存。
3.9 10%鸽子肝脏提取物溶液：将所用容器在配制此试剂前一天放入4℃冰箱中过夜。
食品中总酸测定操作规程
食品中总酸的测定pH电位法1目的对公司产品的总酸含量测定制左标准操作规程，检验室操作人员按本规程操作，保证公司总酸含量检测结果的准确性。
2范围本操作规适用于所有样品总酸含量的检测。
3依据GB./T 12456-2008《食品中总酸的测泄》第二法PH电位法4原理pH电位法：根拯酸碱中和原理，用碱液滴左试样中的酸，溶液的电位发生“突跃”时，即为终点，按碱液的消耗量计算食品中的总酸含量。
5仪器和设备酸度计磁力搅拌器25mL碱式滴左管6试剂氢氧化钠标准滴定溶液（c二0.050mol/L）pH4.0缓冲溶液、pH6.86缓冲溶液、pH9.18缓冲溶液。
7分析步骤7.1 pH计的校正：1、用蒸馅水淸洗电极，用滤纸将水分吸干，将电极插入pH4.0标准缓冲溶液中；2、待读数稳左后按“圧位”键，仪器提示“Sid YES”字样，按“确认”键进入标立状态，仪器自动识别并显示当前温度下的pH值（或手动调节“左位▲”、“泄位▼”键调至标准溶液的pH值）：3、再次蒸餾水淸洗电极，用滤纸将水分吸干，将电极插入PH9.18标准缓冲溶液中：4、待读数稳世后按“斜率”键，仪器提示“StdYES”字样，按“确认”键进入标左状态，仪器自动识别并显示当前温度下的标准pH值（或手动调节“斜率▲”、“斜率▼”键调至标准溶液的pH值）；5、按“确认”键完成标定;6、用pH6.86的标准缓冲溶液验证标泄结果。
7. 2试样处理：取有代表性的样品至少200g,宜于研钵或组织捣碎机中，用研钵研碎，或用组织捣碎机捣碎，至于密 闭的容器内。
7・3分析步骤：将经过处理的试样，称取5.00g 〜lO.OOg 。
（一般泡菜类、底料、豆瓣、豆豉等取样为lO.OOg,腐乳（除 去卤液后）取样20.00g ）:呈味类、白味汤料、鸡精、淡菜、金钩等取样为5.00g ）加热煮沸，冷却至室温 后泄容，（5g 左容至100mL, 10g 左容至200mL 或250mL ）混匀，过滤，弃去初滤液。
食品中总酸度的测定
食品中总酸度的测定方法一指示剂法一、实验原理根据酸碱中和原理，用碱液滴定试液中的酸，以酚酞为指示剂确定滴定终点，按碱液的消耗量计算食品中的总酸含量。
二、试剂与仪器1．试剂所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水或同等纯度的水（以下简称水），使用前须经煮沸，冷却。
0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液0.01mol/L或0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液1%酚酞指示剂溶液：1g酚酞溶于60mL 95%乙醇中，用水稀释至100mL。
2．仪器、设备试验室常用仪器及下列各项：组织捣碎机；水浴锅；研钵；冷凝管。
三、分析步骤1．试样的制备（1）液体样品不含二氧化碳的样品充分混匀。
含二氧化碳的样品按下述方法排除二氧化碳：取至少200mL充分混匀的样品，置于500mL锥形瓶中，旋摇至基本无气泡装上冷凝管，置于水浴锅中。
待水沸腾后保持10min，取出，冷却。
啤洒中的二氧化碳按GB4928规定的方法排除。
（2）固体样品去除不可食部分，取有代表性的样品至少200g，置于研钵或组织捣碎机中，加入与试样等量的水，研碎或捣碎，混匀。
面包应取其中心部分，充分混匀，直接供制备试液。
（3）固液体样品按样品的固、液体比例至少取200g，去除不可食部分，用研钵或组织捣碎机研碎或捣碎，混匀。
2.试液的制备取25～50g试样，精确至0.001g，置于250mL容量瓶中，用水稀释至刻度，含固体的样品至少放置30min（摇动２～３次）。
用快速滤纸或脱脂棉过滤，收集滤液于250mL锥形瓶中备用。
总酸度低于0.7g/kg的液体样品，混匀后可直接取样测定。
3.样品测定取25.00～50.00mL试液，使之含0.035～0.070g酸，置于150mL烧杯中。
加40～60mL水及0.2mL1%酚酞指示剂，用0.1mol／Ｌ氢氧化钠标准滴定溶液（如样品酸度较低，可用0.01mol／Ｌ或0.05mol／Ｌ氢氧化钠标准滴定溶液）滴定至微红色30s不褪色。
记录消耗０.１mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数(V1)。
食品中总酸的测定
食品中总酸的测定嘿，咱聊聊食品中总酸的测定！这可老重要啦！食品里的总酸，那可不是个小角色。
就像一场戏里的神秘嘉宾，不弄清楚它可不行。
你想想，要是不知道食品里的总酸有多少，那吃起来心里能有底吗？就好比买了个不知道啥牌子的手机，用起来能放心吗？肯定不行啊！那咋测定食品中的总酸呢？有好多办法呢！比如说用酸碱滴定法。
这就像一场化学大冒险，可好玩啦！把食品样品弄碎了，加点水，然后用一种神奇的药水一滴一滴地滴进去。
看着颜色的变化，就像看魔术一样。
等到颜色变到刚刚好的时候，就能算出总酸有多少啦。
这多神奇啊！要是不会这个办法，那不是错过了很多好玩的事儿吗？还有一种方法叫电位滴定法。
这就像给食品做一次电疗，哈哈，开个玩笑。
其实就是用一个小小的仪器，像个小精灵一样，能测出食品里的酸到底有多少。
这个小精灵可厉害啦，它能精确到让人惊讶的地步。
要是没有它，那得费多大的劲才能知道总酸的量啊！测定总酸有啥用呢？用处可大啦！首先，可以保证食品的质量。
要是总酸太多或者太少，那食品的味道可就不对啦。
就像炒菜的时候盐放多了或者放少了，那能好吃吗？肯定不好吃啊！所以得知道总酸的量，才能做出好吃的食品。
其次，还能判断食品是不是新鲜。
有些食品放久了，总酸会发生变化。
就像一个人老了，脸上会有皱纹一样。
通过测定总酸，就能知道食品是不是还新鲜。
要是不新鲜了，可不能吃哦，会肚子疼的。
另外，测定总酸还能帮助厂家改进生产工艺。
如果发现总酸不合适，厂家就可以调整配方或者生产过程，让食品变得更好。
这就像一个裁缝，发现衣服做得不好看，就赶紧改改，让衣服变得更漂亮。
总之，食品中总酸的测定是非常重要的。
它能让我们吃得更放心，更健康。
咱可得重视这个事儿，让食品变得更美味，更安全。
测定总酸，就是给食品做一次体检，让我们知道它到底好不好。
这样我们才能吃得开心，生活得更美好。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
食物中泛酸的测定方法微生物测定法1.原理泛酸对于Lactobacillus plantarum（ATCC 8014）的正常生长是一种必需的营养素，在一定生长条件下，Lactobacillus plantarum的生长与繁殖速度同样品中泛酸的含量成一定的线性关系，通过利用浊度法或光密度法测定细菌增殖的强度即可间接地检测出食物样品中泛酸的含量。
本方法最低检出限为5ng。
2.适用范围本方法参考"Official Methods of Analysis of the Association of official Analytical Chemists"、"Methods of Vitamin Analysis"以及"Methods of the Microbiological Analysis of Selected Nutrients"。
本方法适用于测定各类食物（包括天然食物及加工食物）及饲料中的泛酸含量。
3.试剂本试验用水均为蒸馏水，所用试剂均需分析纯试剂。
3.1甲苯3.2 1mol/L盐酸溶液3.3 Tris 缓冲溶液：将24.2三羟基氨基甲烷溶于150ml水中，用7.5mol/LNaOH调pH至 8.0~8.3，然后定容至200ml，贮存于4℃冰箱中，可保存2周。
3.4 7.5mol/L氢氧化钠溶液：溶150g氢氧化钠于水中，定容至500ml。
3.5 2mol/L醋酸：12ml冰醋酸用水定容至1000ml。
3.6 2mol/L醋酸钠溶液：将16.4g醋酸钠用水定容至1000ml。
3.7 2mol/L碳酸氢钾溶液：称取10.012g碳酸氢钾溶于水中，然后定容至500ml。
3.8 2%碱性磷酸酶溶液：称取2g碱性磷酸酶（Sigma公司 No.P-3877）溶于水中，然后定容至100ml。
贮存于4℃冰箱中保存。
3.9 10%鸽子肝脏提取物溶液：将所用容器在配制此试剂前一天放入4℃冰箱中过夜。
(1) 称取30g鸽子肝脏丙酮提取物粉末（Sigma公司, No.L-8376）放入冷的研钵中，分两次加入300 ml 0.2N KHCO3, 至0℃的冰浴中研磨均匀直至呈悬浊液；(2) 将此悬浊液分别放入8支离心管中，塞紧后充分振摇，冷冻10分钟，然后3000转离心5分钟；(3) 将上清夜放入500ml 预冷的广口烧瓶中，加150g活性Dowex1-X8（Bio-Rad Laboratories, Inc., Brussels, Belgium）, 放在冰浴中震摇5分钟；将混合液倒入离心管中，3000转离心5分钟； (4) 再将上清液移入另一个冷的500ml广口烧瓶中，冷冻10分钟；(5) 重复上述(3)、(4)步骤一次；(6) 然后分装于试管中，冷冻条件下保存，用前化冻。
3.10 酸解酪蛋白液：称取50g不含维生素的酪蛋白于500ml烧杯中，加200ml 3 mol/L盐酸，于压力蒸汽消毒器内10.3×104Pa（15 lb/in2）压力下水解6小时。
将水解物转移至蒸发皿内，在沸水浴上蒸发至膏状。
加200ml水使之溶解后再蒸发至膏状，如此反复3次，以去除盐酸。
以溴酚蓝作外指示剂，用10mol/L氢氧化钠调节pH至3.5。
加20g活性炭，振摇，过滤，如果滤液不呈淡黄色或无色，可用活性炭重复处理。
滤液加水稀释至500ml，贮存于试剂瓶中，加少许甲苯于冰箱中保存。
? 酸解的目的是为了去除酪蛋白中的维生素，使基本培养基中不含待测定的维生素，但有时酸水解不一定彻底，所以一定要选用不含维生素的酪蛋白粉，这样可较好地确保酸解酪蛋白中不含生物素。
3.11 胱氨酸-色氨酸溶液：称取4g L-胱氨酸和1g L-色氨酸（或2g DL-色氨酸）于800ml水中，加热至70-80℃，逐滴加入（1+5）的盐酸，不断搅拌，直至完全溶解为止。
冷至室温，加水稀释至1000ml。
加少许甲苯于冰箱中保存。
3.12 腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶溶液：称取硫酸腺嘌呤（纯度为98%）、盐酸鸟嘌呤（生化试剂）以及尿嘧啶各0.1g于250ml烧杯中，加75ml水和2ml浓盐酸，然后加热使其完全溶解，冷却，若有沉淀产生，加盐酸数滴，再加热，如此反复，直至冷却后无沉淀产生为止，以水稀释至100ml。
加少许甲苯于冰箱中保存。
3.13 吐温80溶液：将25g吐温溶于乙醇中并定容至250ml。
3.14 维生素溶液Ⅰ：称取20mg核黄素，10mg盐酸硫胺素，0.04mg生物素，用0.02mol/L 醋酸溶液溶解并定容至1000ml。
3.15 维生素溶液Ⅱ：10mg对氨基苯甲酸，50mg尼克酸，40mg盐酸吡哆醇，溶于（1+3）的乙醇溶液，并定容至1000ml。
3.16 盐溶液A：称取25g磷酸二氢钾和25g磷酸氢二钾溶于500ml水中，加5滴浓盐酸。
3.17 盐溶液B：称取10g MgSO4 7H2O、1g KCl、0.5g MnSO4 4H2O，0.5g FeSO4 7H2O、23 ml 85% H3PO4，溶于水中并定容至500ml。
3.18 泛酸标准溶液溶液名称浓度配置方法标准储备液40μg / ml称取43.47mgD-泛酸钙（Sigma公司，No. P-2250）标准物，溶解于500ml 水中，加入10ml 0.2mol/L的醋酸，100ml 0.2mol/L醋酸钠，然后用水定容至1000ml，此时溶液的泛酸钙浓度为43.47μg / ml，相当于泛酸浓度为40μg / ml，贮存于2-4℃冰箱中。
标准中间液1.0μg / ml取25ml储备液放入500ml水中，再加入10mlmol/L的醋酸，100ml 0.2mol/L醋酸钠，然后用水定容至1000ml，在2-4℃冰箱中贮存。
标准工作液10 ng / ml取1ml中间液用水定容至100ml，在2-4℃冰箱中贮存。
3.19 基本培养基：将下列试剂混合于500ml烧杯中，加水至200ml，以溴麝香草酚蓝作外指示剂，用10mol/L氢氧化钠液调节pH至6.8，用水稀释至250ml。
酸解酪蛋白 25ml胱氨酸、色氨酸溶液 25ml腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶溶液 5ml维生素溶液Ⅰ 5ml维生素溶液Ⅱ 5ml盐溶液A 5ml盐溶液B 5ml无水葡萄糖 10g三水醋酸钠 8.3g吐温80溶液 0.25ml此培养基也可从Difco公司购得，产品号为0816-15-7。
? 由于国内的某些试剂纯度不够，所以自行配制的培养基较浑浊，严重影响到最后的浊度测定结果，因此建议使用进口培养基。
3.20 琼脂培养基：在600ml水中，加入15g蛋白胨，5g水溶性酵母提取物干粉，10g无水葡萄糖，2g无水磷酸二氢钾，100ml番茄汁，10ml吐温80，加热溶解，用40%氢氧化钠调节pH为6.5~6.8，然后定容至1000ml，每500ml液体培养基加5.0~7.5g琼脂，于121℃高压灭菌10分钟，取出后竖直试管，待冷却至室温后于冰箱2-4℃条件下保存。
3.21 生理盐水：称取9.0g氯化钠溶于1000ml水中，。
每次使用时分别到入2~4支10ml试管中，每支约加10ml，塞好棉塞，于121℃高压灭菌10分钟，备用。
3.22 0.04%溴麝香草酚蓝溶液：称取0.1g溴麝香草酚蓝于小研钵内，加1.6ml 0.1 mol/L氢氧化钠研磨，加少许水继续研磨，直至完全溶解，用水稀释至250ml。
3.23 0.04%溴甲酚绿溶液：称取0.1g溴甲酚绿于小研钵中，加1.4ml 0.1 mol/L氢氧化钠研磨，加少许水继续研磨，直至完全溶解，用水稀释至250ml。
3.24 0.1%溴酚蓝乙醇溶液：称取0.1g溴酚蓝，用乙醇溶解后，加乙醇稀释至100ml。
3.25 番茄汁：将新鲜番茄去皮、去籽，制成匀浆后，用纱布过滤数次，直至呈淡黄色透明液体，在液面上加几滴甲苯，冷冻保存。
4.仪器与设备4.1 实验室常用设备4.2 电热恒温培养箱4.3 压力蒸汽消毒器4.4 液体快速混合器4.5 离心机4.6 722分光光度计4.7 硬质玻璃试管：20mm×150mm5.菌种与培养液的制备与保存5.1 储备菌种的制备：Lactobacillus plantarum（ATCC 8014）接种于直面琼脂培养管中，在37±0.5℃恒温箱中培养16~24小时，取出后放入冰箱中保存，每隔两周至少传种一次。
在实验前一天必须传种一次。
5.2 种子培养液的制备：加2ml泛酸标准工作液和3ml基本培养基于10ml离心管中，塞好棉塞，于121℃高压灭菌10分钟，取出，冷却后于冰箱中保存。
每次制备两管，备用。
? 加入离心管中的泛酸标准液要适量，过少会影响Lactobacillus plantarum的生长，过多则不宜于洗净残余泛酸，因此会使零管中的光密度值增大，影响测定结果的准确性。
一般2-3ml 标准工作液即可。
6.操作步骤6.1 接种液的配制：使用前一天，将已在琼脂管中生长16-24小时的L. plantarum接种于种子培养液中，在37±0.5℃培养16-24小时，取出后离心10分钟（3000rpm），弃取上清液，用已灭菌的生理盐水淋洗2次，再加入3ml灭菌生理盐水，混匀后，将此液倒入已灭菌的注射器中，立即使用。
6.2 样品制备：称取适量样品，放入100ml三角瓶中，加10mlTris缓冲液，加蒸馏水30ml，混匀于121℃高压条件下水解15分钟，取出冷却至室温，定容至50ml，过滤。
? 泛酸在空气中稳定，但对于热不稳定，因此水解时间切勿过长。
取1ml样品液（5.2.1.），加入0.4ml碱性磷酸酶溶液，0.2ml肝脏提取物溶液，0.1ml 碳酸氢钠溶液，0.4ml蒸馏水，混匀后，37℃温箱中培养过夜。
加水至20ml，以溴甲酚绿为外指示剂，用冰醋酸调节pH=4.5，定容至25ml，过滤。
取适量水解液（5.2.3）于25ml具塞刻度试管中，以溴麝香草酚蓝为外指示剂，用0.1mol/L 氢氧化钠调节至pH=6.8，用水定容至某刻度。
样品试管的制备：于平行样品管中分别加入1.0、2.0、3.0、4.0 ml样品水解液（5.2.4），加水至5ml，然后再加入5ml基本液体培养基。
6.3标准管的制备每组试管中分别加入泛酸标准工作液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml（相当0.0、10.0、20.0、 30.0、 40.0、 50.0ng泛酸），加水至5ml，再加入5 ml基本液体培养基，需做三组标准曲线。
6.4灭菌：样品管与标准管均用棉塞塞好，于121℃高压灭菌10分钟。
? 灭菌时间不宜过长，否则会破坏基本培养基中的营养成分，影响Lactobacillus plantarum的生长，最好在5-10分钟内。