培养基配方及配制方法

培养基配方及配制方法 Ting Bao was revised on January 6, 20021

培养基配方

1 斜面菌种保存培养基

培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）

称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。

麦芽汁琼脂培养基

麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至

55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次。取过滤后的清液，加%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。

2 基菌落总数检测

平板计数琼脂培养基

将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。

3志贺氏菌检测

GN增菌液

成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。

制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为，分装，在115℃高压灭菌15min。

HE琼脂

成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。

制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。

注1：此培养基不能高温灭菌。

注2：甲液的配置：

硫代硫酸钠：34g，柠檬酸铁钠：4g，蒸馏水：100ml。

注3：乙液的配置：

去氧胆酸钠：10g，蒸馏水：100ml。

注4：Andrade指示剂的配置：

酸性复红：0.5g，1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml，蒸馏水：

100ml。

将酸性复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1~2ml。

SS琼脂

3.3.1 基础培养基：

成分：牛肉膏：5g，胨：5g，三号胆盐：3.5g，琼脂：17g，蒸馏水：1000ml。

制法：将牛肉膏蛋白胨，三号胆盐加入到400ml蒸馏水中，将琼脂加入到600ml蒸馏水中，煮沸使其溶解，然后液混合，于121℃下灭菌15min，保存备用。

3.3.2 完全培养基

成分：基础培养基：1000ml，乳糖：10g，柠檬酸钠：8.5g，硫代硫酸钠：8.5g，10%柠檬酸铁溶液：10ml，1%中性红溶液：，%煌绿溶液：。

制法：加热融化基础培养基，按比例加入处染料以外的所有成分，搅拌均匀，调，加入中性红溶液和煌绿溶液，混合均匀后浇平板。注1：配制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱48h内使用。

注2：煌绿溶液配好后，应在10日内使用。

注3：可以购买SS琼脂的干燥培养基。

麦康凯琼脂

成分：蛋白胨：17g，胨：3g，猪胆盐（牛、羊胆盐）：5g，氯化钠：5g，琼脂：17g，蒸馏水：1000ml，乳糖：10g，%结晶紫水溶液：10ml，%中性红水溶液：5ml。

制法：将蛋白胨、胨、猪胆盐、氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，调，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，将两液混合均匀，于121℃下灭菌15min备用。

临用时加热融化琼脂，趁热加入乳糖，等冷却到50~55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，搅拌均匀后浇平板。

注：结晶紫和中性红水溶液配好后，须经高压灭菌。

伊红美蓝琼脂（EMB）

成分：蛋白胨：10g，乳糖：10g，磷酸氢二钾：2g，琼脂17g，2%伊红Y溶液：20ml，%美蓝溶液：10ml，蒸馏水1000ml，。

制法：将蛋白胨、磷酸盐、琼脂溶解于蒸馏水中，调pH，于121℃下灭菌15min备用。

临用时加热融化琼脂，并加入乳糖，冷却至50~55℃时加入伊红和美蓝溶液，混合均匀后浇平板。

三精铁琼脂

成分：蛋白胨：20g，牛肉膏：5g，乳糖：10g，蔗糖：10g，葡萄糖：1g，氯化钠：5g，六水硫酸亚铁铵：0.2g，硫代硫酸钠：

0.2g，琼脂：12g，酚红：0.025g，蒸馏水：1000ml，。

制法：将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中，调pH，然后加入琼脂，加热溶解，加入%酚红水溶液，摇匀，分装时量多一点，于121℃下灭菌15min，搁高层斜面备用。

葡萄糖半固体发酵管

成分：蛋白胨：1g，牛肉膏：0.3g，氯化钠：0.5g，%溴甲酚紫酒精溶液：，葡萄糖：1g，琼脂：0.3g，蒸馏水：100ml，。

制法：将蛋白胨，牛肉膏，氯化钠加入水中，调pH后，加入琼脂，煮沸溶解，再加入指示剂和葡萄糖。分装，于121℃下灭菌15min，备用。

半固体管

成分：蛋白胨：1g，牛肉膏：0.3g，氯化钠：0.5g，琼脂：~0.4g，蒸馏水：100ml，。

制法：将上述成分溶于水中，加热煮沸，并调pH后分装小试管，121℃高压灭菌15min，直立凝固备用。

尿素琼脂

成分：蛋白胨：1g，氯化钠：5g，葡萄糖1g，磷酸二氢钾：2g，%酚红溶液：3ml，琼脂：20g，蒸馏水：1000ml，20%尿素：100ml，±。

制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，调pH，加入琼脂后加热使其溶化并分装小瓶，121℃高压灭菌15min，冷却至50~55℃后，加入经过滤灭菌的尿素溶液，最终尿素浓度为2%，最终的pH应为±。