重庆某地仔猪免疫蓝耳病活疫苗的最适剂量筛选

高致病性猪蓝耳病以怀孕母猪的繁殖障碍 （流 产、死胎、木乃伊胎）及各年龄段猪特别是仔猪的呼 吸道疾病为主要特征，现已成为规模化猪场的主要 疾病之一。2006 年夏秋季节，我国发生不明原因的猪 “高热病”，2007 年 1 月，最终确定猪“高热病”的主要 病原为变异的猪蓝耳病病毒，并定名为高致病性猪蓝
（上接第 26 页） 3 配方验证
利用已经建立的 Excel 原始工作表（如图 2），也 可以对正在使用的配方或过往配方进行验证，检验 其营养指标是否符合《猪饲养标准》（NY/T 65-2004） 的规定。例如，现行配方如下：玉米 68.00%、小麦麸 15.00%、大豆粕 6.80%、菜籽粕 6.00%、鱼粉 2.00%、 碳酸钙 1.00%、磷酸氢钙 0.20%、L-赖氨酸盐酸盐 0.26%、食盐 0.30%、抗氧化剂 0.02%、防霉剂 0.10%、 氯化胆碱 0.10%、维生素预混料 0.02%、微量元素预 混料 0.20%，在 Excel 原始工作表中 B4 到 B21 栏输 入以上数据，则自动生成 E23 至 M23 栏的营养成分 计算值以及 N23 的配方价格。
将 E23 至 M23 栏的营养成分计算值与 E24 至 M24 栏的猪饲养标准值进行比较，就可直观地看出 现行配方的营养指标是否满足 《猪饲养标准》（NY/T 65-2004）的要求。就本例而言，现行配方的消化能偏 低，其余营养指标略高于标准。然而，与图 11 配方结 果报告比较，现行配方每吨配合饲料的成本多了 90 元。
关键词：高致病性猪蓝耳病；活疫苗；免疫抗体；检测；仔猪
Screening of Optimum Dosage of PRRS Vacine on Piglets in Chongqing
HU Changjin1，CHEN Yong1，CHENG Shaowei2，et al. （1.Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Rongchang County，Chongqing Rongchang 402460；
摘要：本试验采用 1、2、4 头份免疫剂量对重庆市荣昌县不同地区的仔猪进行 PRRS 免疫，然后在 免疫后 28 d 和 60 d 分别采取血清用 ELISA 检测免疫抗体水平。 结果显示：免疫 4 头份的抗体阳性率 最高，为 100%；其次为 2 头份免疫，抗体阳性率为 91.67%；而 1 头份免疫的抗体阳性率仅为 50%。 进 一步测定抗体滴度，发现 2 头份、4 头份剂量在 28 d 和 60 d 的抗体效果差异性不显著。 综合考虑，注 射 2 头份高致病性猪蓝耳病活疫苗的免疫效果最佳。
2014·11 期·总第 291 期
试验研究
重庆某地仔猪免疫蓝耳病活疫苗
的最适剂量筛选
胡昌金 1，陈 勇 1，段 兵 1，唐臣学 1，程绍伟 2，范才良1* （1.重庆市荣昌县畜牧兽医局，重庆 荣昌 402460；2.西南大学荣昌校区动物医学系，重庆 荣昌 402460）
中图分类号：S858.282.52 文献标识码：B 文章编号：1001-8964（2014）11-0027-04
38-43. [2] 中国饲料成分及营养价值表（续）[J].中国饲料，2011
（22）：32-42. [3] 中华人民共和国农业部.NY/T 65-2004 猪饲养标
准[S]. 2004.
28
2014·11 期·总第 291 期
试验研究
表1
试验分组
畜主姓名
刘军富（清升） 邓万伟（远觉） 尹正文（远觉） 滕德成（远觉）
利用 Excel 自带的“规划求解”功能，设计最低成 本的配合饲料配方和验证现行配方，具有简单、快 捷、准确、方便等特点，电子表格中的数据排列灵活 多变，可自行设置。非常适用于各种中小型饲料厂、 规模养猪场进行饲料配方的优化设计。■ 参考文献： [1] 中国饲料成分及营养价值表[J].中国饲料，2011（21）：
高致病性猪蓝耳病病毒（PRRSV）是变异率较高 的病毒。当前我国猪群中流行的 PRRSV 流行株呈 现 多 样 化 趋 势 ，不 同 毒 株 之 间 出 现 基 因 重 组 ，活 疫 苗 毒 株 与 流 行 毒 株 重 组 ，一 个 猪 场 、一 个 猪 群 同 时 存在经典蓝耳病病毒与高致病性蓝耳病病毒 （HPPRRSV），并同属于美洲型。2010 年在韩国与俄罗斯 等国先后发生欧洲型 PRRSV 流行，在香港特区的猪 场中也分离到欧洲型 PRRSV 毒株，说明我国猪群也 面临着欧洲型 PRRSV 的严重威胁，应引起高度重 视。
本试验用不同头份高致病性猪蓝耳病活疫苗对 仔猪进行免疫注射，然后用 ELISA 试验检测抗体水 平，从而筛选出最适免疫剂量，为制订仔猪的免疫程 序提供参考。
1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 主要药品及耗材。高致病性猪蓝耳病活疫苗 JXA1-R 株 （中牧实业股份有限公司成都药械厂生 产，批号：1305044-2）；猪繁殖与呼吸综合征病毒 ELISA 抗体检测试剂盒 （重庆业为基生物科技有限公司生 产，批号：20130619005）；pH 值为 7.2 的磷酸盐 PBS 溶液。枪头、EP 管、帽子、手套，失离子水，500～1000mL 试剂瓶、封膜、吸水滤纸、标记笔。 1.1.2 主要仪器。离心机、8 道可调节移液器、生化培 养箱、纯水仪、单道可调节移液器、酶标仪、电子天平 等。 1.2 试验方法 1.2.1 确定试验动物。2013 年 9 月，选择荣昌县清升 镇 5 个、远觉镇 8 个小型养殖场符合免疫条件的 30 日龄左右的仔猪，每窝随机抽取 3 头检查血清中的 母源抗体含量。把母源抗体全为阴性和临床检查健 康的仔猪作为试验对象。按照荣昌县猪瘟、蓝耳病、 口蹄疫三针同时免疫的操作方式进行免疫注射，免 疫后佩戴耳标并作好记录。 1.2.2 试验分组。见表 1。 1.2.3 采血并分离血清。分别在注射疫苗后 28、60 d， 对被免仔猪进行前腔静脉采血、分离血清，统一编号
2.Veterinary Medicine Department，Rongchang Campus of Southwest University， Chongqing Rongchang 402460，China）
Abstract： In this experiment， the antibody level of piglet in different farm immunized with PRRSV live vaccine （1 dose，2 dose and 4 dose） were detected by method of enzyme-linked im－ muno sorbent assay （ELISA） at 28 days and 60 days after immunization. The results demonstrated that the highest antibody positive rate （100%） was found in 4 dose group，followed by 2 dose （an－ tibody positive rate was 91.67%） and 1 dose （50%）. There wasn′t significant difference between im－ mune dosage of 2 and 4 with PRRSV live vaccine at 28 days and 60 days later. The experimental result indicated that the optimum immune dosage of PRRSV live vaccine was 2 doage.
27
试验研究
2014·11 期·总第 291 期
耳病，现已作为我国生猪强制免疫的病种之一[1-2]。其 流 行 特 点 ：一 是 流 行 快 ，发 病 广 ，危 害 重 ，多 途 径 传 播，临床表现复杂化，常由流产型向混合感染高热型 转变；二是仔猪和育肥猪死亡率呈上升趋势；三是隐 性带毒感染日趋普遍，主要表现为食欲下降、生产性 能降低；四是继发或混合感染呈上升趋势；五是该病 起初多发于 6～8 月，现在已经没有明显的季节之分， 常年发病，呼吸道是该病的主要感染途径，应激因素 可引起发病加剧。
36、37 73、74
注：血清号 1～37 号为免疫后 28 d 的血清样，38～74 号为免 疫后 60 d 的血清样。
送至实验室保存、备检。各血清样本见表 2。 1.2.4 用 ELISA 方法检测免疫效果。首先对 74 个样 本进行抗体检测，筛选出阳性血清，然后在所有阳性 血清中按 1、2、4 头份随机抽样各 5 份进行血清倍比 稀释，再次做 ELISA 血清检测，观察免疫后的相对抗
体滴度。检测方法：一个血清稀释板全部加入 25 μL pH 值为 7.2 的磷酸盐 PBS 溶液，然后分别在第一孔 加入被检血清 25 μL，混匀，取出 25 μL 稀释的血清 放入第二孔，依次稀释，最后 25 μL 弃之。
血清倍比稀释情况如下：1 头份按 1、2、4 倍稀释 共 15 个样，随机抽样的编号为：16、29、43、57、70；2 头份按 1、2、4、8 倍稀释共 20 个样，随机抽样的编号 为：6、12、30、48、62；4 头份按 1、2、4、8、16 倍稀释共 25 个样，随机抽样的编号为：2、40、54、63、67。 2 试验结果 2.1 阳性血清筛选 结果见表 3。由表 3 的吸光度 可知 7 个为阴性，其中 1 头份 6 个，2 头份 1 个；其他 全为阳性。 2.2 免疫后相对抗体滴度的检测 由表 4 的吸光度 可知：1 头份 1 倍稀释的有 3 个阳性、2 个阴性，2 倍 稀释、4 倍稀释的都为阴性；2 头份 1、2 倍稀释的全 为阳性，4 倍稀释的有 3 个为阳性、2 个为阴性，8 倍 稀释的全部为阴性；4 头份 1、2 倍稀释的全为阳性，4 倍稀释的有 4 个为阳性、1 个为阴性，8、16 倍稀释的 全部为阴性。 2.3 生物学统计结果 由表 5 分析得出：注射高致 病性猪蓝耳病活疫苗 1 头份与 2 头份之间的免疫效 果差异显著，注射 2 头份与 4 头份之间的差异性不 显著。
Key words：PRRS；Live vaccine；Immunization antibody；Detection；Piglet
收 稿 日 期 ：2014-09-10 作 者 简 介 ：胡 昌 金 （1975-），男 ，重 庆 荣 昌 人 ，助 理 兽 医 师 ， 现从事动物疫病预防控制工作。 * 通 讯 作 者 ：范 才 良 （1967-），男 ，四 川 隆 昌 人 ， 高 级 兽 医 师，现从事临床兽医、预防兽医、中草药研发方面的工作。 E-mail：rongchg@tom.com
32、33 69、70
2 头份编号 4、5、6wenku.baidu.com7
41、42、43、44 15、16、17、18 52、53、54、55
26、27、28 63、64、65
34、35 71、72
4 头份编号 8、9、10、11 45、46、47、48 19、20、21、22 56、57、58、59 29、30、31 66、67、68
合计
合计（头）
11 11 9 6 37
1 头份 3 3 3 2 11
免疫剂量 2 头份 4 4 3 2 13
注：以上养殖户都是自繁自养的小型猪场。
4 头份 4 4 3 2 13
表2
样本编号
畜主姓名 刘军富 邓万伟 尹正文 滕德成
1 头份编号 1、2、3
38、39、40 12、13、14 49、50、51 23、24、25 60、61、62
为计算方便，本例只列出了 18 种原料，而实际 生产中使用的原料还很多，可按照上述方法列表。 另外，部分中小型饲料厂和规模养猪场使用的是商 业复合预混料产品，包含氨基酸、维生素、微量元 素、载体和稀释剂等，故在建立 Excel 原始工作表 时 ，应 列 出 其 所 含 的 粗 蛋 白 质 、钙 、磷 、氨 基 酸 等 含 量指标。 4 小结