槐花中黄酮类化合物提取、分离和鉴定
槐米测定黄酮实验报告
一、实验目的1. 了解槐米中黄酮类化合物的提取和测定方法。
2. 掌握黄酮类化合物含量的测定原理及操作步骤。
3. 掌握紫外可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理黄酮类化合物是一类广泛存在于植物中的天然化合物，具有多种生物活性。
槐米中的黄酮类化合物含量较高，具有一定的药用价值。
本实验采用铝离子络合显色法测定槐米中的总黄酮含量。
该方法的原理是：利用溶液中的铝离子与黄酮类化合物中的羟基或甲氧基发生络合作用，在强酸条件下形成稳定的有色络合物。
最后，利用紫外可见分光光度计测定产物的吸光度，从而计算出黄酮类化合物的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：槐米、无水乙醇、铝离子溶液、盐酸、蒸馏水等。
2. 仪器：紫外可见分光光度计、电子天平、恒温水浴锅、移液器、容量瓶、试管等。
四、实验步骤1. 槐米样品处理：将槐米样品研磨成粉末，过筛后备用。
2. 标准曲线绘制：（1）准确称取一定量的标准品（如芦丁）0.1g，用无水乙醇溶解，定容至100mL 容量瓶中，得到浓度为100mg/L的标准溶液。
（2）分别取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL标准溶液于10mL容量瓶中，加入2mL铝离子溶液和5mL盐酸，用无水乙醇定容至刻度，摇匀。
（3）将上述溶液在特定波长下测定吸光度，以标准溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：（1）准确称取一定量的槐米样品粉末0.1g，用无水乙醇溶解，定容至100mL容量瓶中，得到样品溶液。
（2）分别取1.0mL样品溶液于10mL容量瓶中，加入2mL铝离子溶液和5mL盐酸，用无水乙醇定容至刻度，摇匀。
（3）将上述溶液在特定波长下测定吸光度。
4. 结果计算：根据标准曲线，查得样品溶液中黄酮类化合物的浓度。
根据下式计算样品中黄酮类化合物的含量：黄酮类化合物含量（mg/g）= 浓度（mg/L）× 10 × 样品质量（g） / 样品体积（mL）五、实验结果与分析1. 标准曲线：在波长510nm处，绘制标准曲线，线性范围为0.5～2.5mg/L。
槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定
槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定槐花是一种常见的中草药，其花中富含多种有效成分，其中包括芦丁。
芦丁是一种天然的黄酮类化合物，具有明显的生理活性，如抗氧化、抗炎、降血压、保护心脑血管等作用。
因此，芦丁的提取、分离与鉴定一直是研究的热点。
提取方法：1.超声波提取法超声波提取是一种利用高频声波的机械震荡作用使样品中植物成分迅速从固相进入溶液的方法。
对于槐花花中芦丁的提取，超声波提取法是一种快速、高效的方法。
具体步骤如下：(1)将干燥的槐花花朵研磨成粉末。
(2)将槐花花粉末加入乙醇水溶液中，浸泡4小时。
(3)将浸泡的样品置于超声波清洗仪中，进行超声波萃取。
(4)离心沉淀，取上清液。
(5)将上清液蒸干，然后用乙醚-乙酸乙酯(1:1)提取，得到芦丁。
2.微波辅助提取法分离方法：1.硅胶柱色谱法硅胶柱色谱法是一种利用柱填充物在不同极性条件下对化合物进行分离和纯化的方法。
对于槐花花中芦丁的分离，硅胶柱色谱法是一种常用的方法。
具体步骤如下：(1)将经过提取的芦丁用甲醇溶解。
(2)将甲醇溶液在硅胶柱上进行逐级洗脱，采用乙醚、乙醇、混合溶液等不同极性的溶剂。
(3)收集洗脱液并进行旋蒸去除溶剂。
(4)取得芦丁。
2.高效液相色谱法(2)将甲醇溶液注入高效液相色谱仪中，以C18为固定相，用水-醋酸溶液-甲醇混合物作为移动相，在一定的流速下进行分离。
(3)收集并分析分离得到的芦丁。
鉴定方法：1.红外光谱法红外光谱法是一种运用分子在红外辐射下的振动和旋转运动来研究分子结构和化学键的强有力的分析方法。
对于芦丁的鉴定，红外光谱法是一种常用的方法。
芦丁的红外光谱图谱表现为具有多种特征峰的典型光谱，如C=0伸缩振动、C-O键伸缩振动和苯环伸缩振动等。
紫外光谱法是利用物质分子中的电子跃迁所产生的吸收现象来确定物质的性质和结构的分析方法。
对于芦丁的鉴定，紫外光谱法也是一种常用的方法。
芦丁的紫外光谱图谱表现为具有两个吸收峰，分别位于286 nm和330 nm。
槐花中黄酮类物质提取工艺的研究
槐花中黄酮类物质提取工艺的研究槐花中的黄酮类物质是一种重要的天然活性成分，可以用于预防和治疗疾病，用于药物研发、化妆品研发和营养保健制品研发等方面具有重要的价值。
研究人员开展了大量有关槐花中黄酮类物质提取工艺的研究，以有效地获取槐花中的黄酮类物质，有助于发挥其有效活性成分的潜力和功能，为提高槐花中黄酮类物质的生产和使用效率提供有效的帮助。
槐花中的黄酮类物质的提取多种多样，比如溶剂提取、超声波提取、超临界流体提取、色谱提取等。
在槐花中黄酮类物质的提取中，溶剂提取是最简单的方法。
一般可以采用醇提取、水提取、水-乙醇混合提取等提取方法，选择最适合提取槐花中黄酮类物质的溶剂，以获得最佳效果。
另外，超声波提取也是目前常用的一种黄酮类物质提取方法，可以在较短时间内获得较高的提取效率，同时减少提取损失。
而超临界流体提取是一种不污染、高效的提取方法，具有温和的提取条件，使提取物质更容易释放，从而提高提取效果。
最后，还有色谱提取，是一种能够有效分离槐花中黄酮类物质的提取方法，该方法不仅可以提取活性成分有效，而且具有很高的选择性，在提取槐花中黄酮类物质方面具有重要的应用价值。
槐花中黄酮类物质提取工艺的研究，不仅可以有效提高不同提取方法的提取效率，而且还可以提高槐花的农业产值，提高槐花中黄酮类物质的产品化效率，为提高槐花中黄酮类物质的商业化应用提供有力的技术支持。
此外，还可以利用槐花中的黄酮类物质开发出新药，从而实现药物研发、化妆品研发、营养保健制品研发等方面的实用价值。
在槐花中黄酮类物质提取工艺研究方面，在过去的几十年间展开了大量的实验，其中研究超声波提取、超临界流体提取、色谱提取等技术取得了显著的进展。
未来，学者们将继续深入研究提取槐花中黄酮类物质的新技术和新方法，探索更有效的提取技术，以实现大规模的提取，并有效发挥槐花中的黄酮类物质的活性成分的潜力和功能，为药物研发、化妆品研发和营养保健制品研发等提供重要的技术支持。
槐花米中芦丁的提取与鉴定
槐花米中芦丁的提取与鉴定槐花米是槐花籽的胚芽部分，富含植物化学物质，常被用作食品、保健品和药品。
芦丁是一种重要的植物黄酮类化合物，在槐花米中也存在着。
本文主要探讨了槐花米中芦丁的提取与鉴定方法。
一、提取方法1. 酸碱水解法将槐花米粉末用75%酒精浸泡后，用钝性气体保护，加入0.1mol/L的氢氧化钠溶液，水解2小时。
水解完毕后，加入酸化剂使pH值调至5.5左右，然后提取2次，每次提取30分钟，使用乙醇使提取液达到所需的体积，完成提取过程。
2. 超声波辅助法将槐花米粉末用95%乙醇提取2次，每次提取60分钟。
取得的提取液储存在4℃条件下，超声波辅助溶解过程中，超声波功率设置为250W，处理时间为45分钟。
超声波辅助能够加速溶剂的渗透和分解，提高提取效率。
3. 超临界流体法将槐花米粉末与正己烷混合，注入超临界流体反应器中，流体选择二氧化碳，温度为90℃，压力为30Mpa。
在45分钟内处理样品，得到高品质的芦丁提取物。
二、鉴定方法1. 毛细管电泳法使用毛细管电泳法确定芦丁的含量和纯度。
在试验中，一般采用50 mM 磷酸盐缓冲液( pH=3.10 ) 为电泳缓冲液，以50 mbar 的压力施加电压，对样品进行分离和检测，将检测到的谱图与标准物质谱图进行比对，以得到样品中芦丁的含量。
2. 气相色谱法使用气相色谱法测定芦丁在槐花米中的含量。
首先，将提取物用氮气吹干至干燥，然后加入甲醇，溶解完毕后过滤。
过滤后再用甲醇调整成正常体积。
将样品注入色谱柱，沿着柱从注射口到检测器方向以一定的压力进行分离，通过检测器检测分离出来的物质。
将检测到的峰面积与已知含量的标准物质进行比较，以确定样品中芦丁的含量。
3. 紫外分光光度法使用紫外分光光度法确定芦丁的含量。
在试验中，将提取物稀释到一定浓度后，用紫外分光光度计检测其在不同波长下的吸光度值。
根据芦丁的特征峰，在290 nm处进行检测。
将检测到的吸光度值与标准物质进行比较，以确定样品中芦丁的含量。
槐花中黄酮类化合物提取、分离和鉴定
[适用对象] 中药国际交流、中药知识产权、中药制药工程、中药资源专业[实验学时]一、实验目地要求学习黄酮类化合物地提取、分离和检识，通过实验要求：（）了解沸水提取黄酮类化合物地原理和操作.（）了解由芸香苷水解制取槲皮素地方法.（）掌握黄酮类化合物地主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分地检识方法.二、实验原理由槐花中提取芸香苷地方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水和热水中地溶解度差异地特性进行提取和精制.纸色谱地分离原理是利用各种化合物在流动相和固定相中分配系数地不同而达到分离目地.文档来自于网络搜索三、仪器设备烘箱、水浴锅、铁架台，烧杯，三角烧瓶，滤纸，试管，层析槽，毛细管等.四、相关知识点槐花为豆科植物槐 .地干燥花及花蕾，主要含芸香苷（芦丁），含量高达，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖.文档来自于网络搜索芸香苷（），分子式 ，分子量，淡黄色针状结晶，178℃.难溶于冷水（﹕），略溶于热水（﹕），溶于热甲醇（﹕），冷甲醇（﹕），热乙醇（﹕），冷乙醇（﹕），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中.文档来自于网络搜索槲皮素（），分子式 ，分子量，黄色针状结晶，.314℃（分解）.溶于热乙醇（﹕），冷乙醇（﹕），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，几不溶于水.文档来自于网络搜索OO O H OH OHOHOR五、实验步骤（一）芸香苷、槲皮素和糖地纸色谱鉴定、点样：取新华一号色谱滤纸，规格 × ，在滤纸下端约 处用铅笔画一直线，间隔 分别点上下列样品或标准溶液：文档来自于网络搜索 （）糖样品溶液 （）标准葡萄糖溶液（）标准鼠李糖溶液 （）芸香苷样品甲醇溶液（）芸香苷标准品溶液 （） 槲皮素样品甲醇溶液（）槲皮素标准品溶液、展开剂：正丁醇醋酸水（﹕﹕）上层上行展开.、显色：展开完毕，将滤纸取出，记录溶剂前沿位置.待溶剂挥尽后，在（）与（）点之间剪开，分别显色.文档来自于网络搜索 （）糖地显色：喷苯胺邻苯二甲酸试剂，在105℃烘分钟，显棕色斑点.计算并比较样品和标准品地值.文档来自于网络搜索 （）黄酮化合物地显色：①可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑点.②经氨气薰后再观察.③待氨气挥尽后，喷甲醇溶液，再观察.④计算并比较样品与标准品地值.（二）芸香苷和槲皮素性质试验、酸性试验：取小试管支，每支一组，第一组每管中加入芸香苷，第二组每管中加入槲皮素，每组四管中分别加入稀氨水、碳酸氢钠水溶液、碳酸钠水溶液、氢氧化钠水溶液各，振摇后观察各管溶解情况.溶解地溶液应呈黄色.再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉淀析出或产生混浊.文档来自于网络搜索、反应：取试样置小试管中，加乙醇溶解，加α萘酚试剂滴，摇匀.倾斜试管，沿管壁徐徐注入浓硫酸约静置.观察两层溶液地界面变化，出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖地结构（糖和苷类均呈阳性反应），比较芸香苷和槲皮素地不同.文档来自于网络搜索、试验：取试样数，溶于热水中，加斐林氏试剂甲、乙等量混合液，沸水浴上加热，如产生氧化亚铜地暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其它还原性物质.充分加热作用后滤去沉淀，滤液滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以中和，再进行斐林氏试验，此时显阳性反应者表示样品为糖苷化合物.比较芸香苷和槲皮素地不同.文档来自于网络搜索、盐酸镁粉反应：取芸香苷，加乙醇，在水浴上加热溶解，加镁粉约，滴加数滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物.以同法试验槲皮素.文档来自于网络搜索如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（羟基与糖结合成苷）仍有作用，而槲皮素（黄酮醇类）不呈还原显色反应.因此可区别两者.文档来自于网络搜索、锆柠檬酸反应：取样品，加甲醇，在水浴上加热溶解，再加二氯氧锆甲醇溶液滴，凡有羟基或羟基地黄酮即呈鲜黄色.然后加柠檬酸甲醇溶液滴，有羟基地黄酮黄色不褪.比较芸香苷和槲皮素地不同.文档来自于网络搜索、三氯化铝反应：取样品溶于甲醇中，加三氯化铝甲醇溶液滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光.文档来自于网络搜索六、实验报告要求应包括原理描述、实验流程、数据记录、解决问题地能力、实验结果、实验效果及建议等.七、思考题、检识黄酮类化合物地常用化学方法有哪些？、本实验中各种色谱地原理是什么？解释化合物结构与值地关系.、试讨论苷类成分地检识程序.八、实验成绩评定方法本门实验课程考核成绩占课程总成绩地％，该实验考核成绩占实验总成绩地％.考核分实验预习、实验过程操作、实验报告等三个方面，其成绩计算为预习实验占（包括原理描述、实验流程）、实验过程操作占％（包括数据记录、解决问题地能力）、实验报告占％（包括实验结果、实验效果）.文档来自于网络搜索。
试验三槐花米黄酮苷元的提纯和鉴定
实验三槐花米黄酮昔元的提纯和鉴定槐米(Sophorae Flos)为豆科植物槐树(Sopho japonica L )的干燥花及花蕾. 夏季花开放或花蕾形成时采收，及时干燥，除去枝、梗及杂质，前者习称“槐花” 后者习称“槐米”山。
历来用作止血药物治疗痔疮、子宫出血、吐血、鼻血等症。
槐米用作药用已有2000多年历史，槐米中的主要化学成分是芦丁(亦称芸香昔Rutin)，含量可高达23.5%。
具有不可多得的治病防病作用，目前主要用于治疗毛细血管的脆性和渗透性出血，降低人体血脂和胆固醇，是治疗高血压〃心血管疾病〃胃病〃皮肤病〃糖尿病等多种疾病的良药；而且它还有抗菌和抗放射作用，可用于食品、化妆品的添加剂和着色剂；芦丁也用于药物的中间体，合成羟乙基芦丁等药物，可治疗闭塞性脑血管疾病⑵。
Kite等⑺的研究显示，槐米中以槲皮素为首元的黄酮化合物主要有4种，其中芦丁含量约占所有槲皮素甘的90%，是槐米中含量最高的黄酮昔成分.本实验的提取部分用超声提取新技术进行提取。
一、主要黄酮类成分的物理性质1.芸香昔(Rutin)芦J rutiii淡黄色针状结晶，熔点：含三分子结晶水物174〜178℃，无水物为188℃。
溶解度：不溶于乙醚、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等溶剂。
易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸呈棕黄色。
加水稀释后又析出。
2.槲皮素（quercetinOH 」OHIT jL、・、「. 公/ CHOH o为黄色结晶。
熔点：含2分子结晶水物313℃〜314℃，无水物316℃。
溶解度：乙醇：1：290，无水乙醇1：23 （沸时）。
可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、毗啶、冰醋酸。
不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。
二、实验目的1.了解超声提取的新技术；2.了解黄酮类化合物的一般性质；3.学习聚酰胺TCL法在黄酮类化合物中的应用；4.掌握有黄铜首类水解制取黄铜昔元的方法。
三、实验原理1.利用芦丁可溶于热水、难溶于冷水及易溶于碱水、难溶于酸水的性质进行提取。
黄酮类化合物—槐米中芦丁的提取分离与鉴定(天然药物化学课件)
二、槐米中芸香苷的理化性质
❖芸香苷广泛存在于植物界，已发现的含芦丁 植物至少在70种以上，其中以槐花米和荞麦 叶含量较高，可作为提取芦丁的原料。
❖芸香苷是由槲皮素3位上的羟基与芸香糖（ 葡萄糖与鼠李糖组成的双糖）脱水而成的苷 。
槲皮素
芸香苷（槲皮素-3-O-芸香糖）
实训 槐米中芸香苷及槲皮素的提取分 离检识技术
Байду номын сангаас
一、槐米中芸香苷的化学结构
【来源】豆科槐属植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾（槐米） 【生物活性】祛痰、止咳、降压、增加冠脉血流量等活性
❖ 2015版《药典》以总黄酮为指标成分对槐米或槐花进 行定性鉴定和含量测定。
❖ 要求槐花总黄酮（以芸香苷计）大于等于8.0%，槐米 总黄酮大于等于20.0%，对照品采用芸香苷。
二、槐米中芸香苷的理化性质
【溶解度】芸香苷溶解度在冷水中为1：10000，沸水中 为1：200，沸乙醇中为1：60，沸甲醇中为l：7，可溶 于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰乙酸和乙酸乙 酯中，不溶于苯、乙醚、三氯甲烷和石油醚。
❖ 芸香苷分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露 在空气中能缓缓变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧 化分解。硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的 ，故在碱性溶液中加热提取往往加入少量硼砂。
芸香苷粗提 ：碱溶酸沉法
槐花米粗粉20g 加0.4％硼砂水250ml，石灰乳调 pH8～9 煮沸30min，4层纱布滤过，反复2次
滤液
药渣
放冷，浓盐酸调pH3～4，析 晶，滤过
滤液
沉淀 室温下晾干
芸香苷粗品
注意：在加热过程中，需要随时补充失去的水分和保持pH值8～9。
比色法测定槐花药材中总黄酮含量的基本原理
比色法测定槐花药材中总黄酮含量的基本原理一、引言槐花作为一种常见的中药材，其主要成分是总黄酮。
总黄酮是一类具有广泛生物活性的化合物，具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种作用，因此对其含量的测定十分重要。
比色法是一种常用的测定总黄酮含量的方法之一，本文将从比色法的基本原理、实验步骤及注意事项等方面进行详细介绍。
二、比色法测定槐花中总黄酮含量的基本原理比色法是利用化合物与某些试剂发生反应形成有色产物，根据产物的吸收光谱对化合物进行定量测定。
在测定槐花药材中总黄酮含量时，常用铝离子试剂和盐酸试剂作为显色试剂。
1. 铝离子试剂铝离子试剂是指以铝离子为主要反应成分的显色试剂。
其基本原理是利用铝离子与总黄酮中的羟基或甲氧基发生络合作用，在强酸条件下形成稳定的有色络合物。
铝离子试剂的制备方法一般为将铝粉加入盐酸中，加热反应得到铝离子试剂。
2. 盐酸试剂盐酸试剂是指以盐酸为主要反应成分的显色试剂。
其基本原理是利用盐酸与总黄酮中的羟基或甲氧基发生缩合作用，在强酸条件下形成稳定的有色产物。
3. 比色法测定总黄酮含量在测定槐花药材中总黄酮含量时，先将槐花粉碎并提取出总黄酮。
然后，取适量提取液与铝离子试剂和盐酸试剂混合，在强酸条件下形成有色产物。
最后，利用紫外可见分光光度计测定产物的吸收光谱，并根据标准曲线计算出总黄酮的含量。
三、实验步骤及注意事项1. 实验步骤（1）将槐花粉碎并称取适量样品；（2）将样品加入95%乙醇中进行超声波提取；（3）将提取液过滤并蒸干；（4）将蒸干后的样品溶解在乙醇中；（5）取适量样品与铝离子试剂和盐酸试剂混合，在强酸条件下形成有色产物；（6）利用紫外可见分光光度计测定产物的吸收光谱，并根据标准曲线计算出总黄酮的含量。
2. 注意事项（1）样品应当精确称取，避免误差；（2）提取液的浓度应当适当，过浓或过稀都会影响测定结果；（3）铝离子试剂和盐酸试剂应当新鲜配制，以免影响显色反应；（4）在强酸条件下进行反应时，要注意安全，避免对人体造成伤害；（5）在使用紫外可见分光光度计时，要校准仪器并保持仪器干净。
槐花中黄酮类物质提取工艺的研究
槐花中黄酮类物质提取工艺的研究槐花（Sophorajaponica）是一种重要的中药原料，在中药制药、中草药研究中有着重要的地位。
它含有丰富的黄酮类物质，具有清热解毒、抗肿瘤抗病毒等药理活性。
然而，黄酮类物质的提取利用一直是研究者关注的焦点，因为该物质的提取率不高。
因此，提高槐花中黄酮类物质的提取率具有重要的研究价值。
技术原理黄酮类物质的提取主要有以下几种途径：超声波萃取、溶剂萃取、冷萃取、蒸馏法等。
比较而言，超声波萃取工艺是技术现代化、操作简便、实验结果准确、操作时间短等优点，适用于提取植物性生物活性物质，是提取黄酮类物质的理想原料。
实验方法1.槐花进行洗涤，将其干燥，浸润在90%的乙醇中，待酒精蒸发后备用；2.干燥的槐花粉碎，放入500 ml容器中，加入足够的超声波溶液，用超声震荡器震荡15分钟，超声波频率为50kHz；3.回容器，放置1.5 L滤瓶内，用中性密度拌和液滤清，收集滤渣；4.滤渣移至烧瓶内，用热水加热，恢复到100 ml，取20 ml移至离心瓶内，离心15分钟，去掉上清液；5.沉淀物放入毛细管，加入甲醇离子交换柱，洗脱，收集洗脱液。
结果与讨论实验结果显示，槐花中黄酮类物质的提取率高达80%，其中黄酮类物质含量为5.6 mg/g植物干涉品。
结果表明，超声波萃取方法可有效提高槐花中黄酮类物质的提取率。
结论超声波萃取法是一种有效的提取植物性生物活性物质的方法，具有技术现代化、操作简便、实验结果准确、操作时间短等优点。
本实验应用超声波萃取法，成功地提取槐花中黄酮类物质，提取率可达到80%。
由于超声波萃取法耗时短，简便易行，在提取植物性生物活性物质中有着广泛的应用前景，因此，未来将会有更多研究可以应用这一方法。
总结本文以槐花中黄酮类物质提取工艺的研究为题，介绍了超声波萃取法的原理和实验方法，并讨论了实验结果和趋势，得出结论：超声波萃取法是一种有效的提取植物性生物活性物质的方法，在提取植物性生物活性物质中具有广泛的应用前景。
槐花对照提取物的制备及槐花中4个黄酮类成分的含量测定
槐花对照提取物的制备及槐花中4个黄酮类成分的含量测定目的：制备槐花对照提取物，并以其为对照测定槐花中4个黄酮类成分含量。
方法：用水提法制备槐花对照提取物；采用高效液相色谱法测定其中芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷和槲皮素的含量；色谱柱为Diamonsil C18（2），流动相为甲醇-1%冰乙酸水溶液（梯度洗脱），检测波长为360 nm，柱温为30 ℃，进样量为10 μL。
以槐花对照提取物为对照测定槐花中4个成分的含量，并与以化学对照品为对照的测定结果进行比较。
结果：在所制槐花对照提取物中，4个成分的含量占86.85%；芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷和槲皮素的检测进样量线性范围分别为0.076 8～3.07、0.002 24～0.089 6、0.001 59～0.063 7、0.003 40～0.136 μg（r均≥0.999 5）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤2.30%（n=6），加样回收率分别为100.4%、96.99%、102.3%、100.9%（RSD分别为2.51%、1.58%、2.97%、3.20%，n=6）。
两种方法中4个成分的含量测定结果比较差异无统计学意义（P>0.05）。
结论：以制备的槐花对照提取物为对照建立的测定方法操作简便、重现性好，并能同时测定槐花中4个成分的含量，可用于槐花饮片的质量控制。
ABSTRACT OBJECTIVE：To prepare reference extract of Sophora japonica and used it as reference substance to determine the contents of 4 flavonoids in S. japonica. METHODS：The reference extract of S. japonica was prepared by water extraction. HPLC method was adopted to determine the contents of rutin，kaempferol-3-O-rutinoside，narcissoside and quercetin. The determination was performed on Diamonsil C18（2）column with mobile phase consisted of methanol-1% acetic acid （gradient elution）. The detection wavelength was set at 360 nm，the column temperature was 30 ℃，and sample size was 10 μL. The contents of 4 components in S. japonica were determined by using reference extract of S. japonica as reference，and compared with the results with chemical control as reference. RESULTS：In prepared reference extract of S. japonica，the contents of 4 components were 86.85%. The linear range was 0.076 8-3.07 μg for rutin，0.002 24-0.089 6 μg for kaempfer ol 3-O-rutinoside，0.001 59-0.063 7 μg for narcissoside and 0.003 40-0.136 μg for quercetin （all r≥0.999 5）. RSD of precision，stability and reproducibility tests were all ≤2.30% （n=6）. The recoveries were 100.4%，96.99%，102.3% and 100.9%（RSD were 2.51%， 1.58%， 2.97%， 3.20%，n=6），respectively. There was no statistical significance in the content determination of 4 components between 2 kinds of methods （P>0.05）. CONCLUSIONS：Using prepared reference extract of S. japonica as reference，established method is simple and reproducible，and can be used for simultaneous determination of 4 components in S. japonica and quality control of S. japonica decoction piece.KEYWORDS Sophora japonica；Reference extract；Preparation；HPLC；Flavonoids；Content determination對照提取物是三大类中药标准物质（中药化学对照品、对照药材、对照提取物）之一，为非单体成分的对照物[1-3]。
槐花中黄酮类物质提取工艺的研究
槐花中黄酮类物质提取工艺的研究
槐花中含有丰富的黄酮类物质，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性。
因此，槐花中黄酮类物质的提取工艺成为研究的热点。
目前，常用的槐花中黄酮类物质提取工艺有超声波辅助提取、膜蒸发萃取、提取浓缩冷冻干燥等。
1.超声波辅助提取：超声波辅助提取是一种高效、快速的提取方法，能够有效
提高提取率。
在超声波辅助提取过程中，高能超声波能够使物质的分子进行震荡，促进溶解和解吸，从而提高提取效率。
2.膜蒸发萃取：膜蒸发萃取是一种利用蒸发的原理进行提取的方法。
在膜蒸发
萃取过程中，通过膜的选择和控制膜的温度、压力等参数，可以有效地提取黄酮类物质。
3.提
取浓缩冷冻干燥：提取浓缩冷冻干燥是一种常用的槐花中黄酮类物质提取工艺。
在该工艺中，首先使用常规的提取方法对槐花进行提取，然后将提取液浓缩冷冻，最后通过冷冻干燥的方法将其干燥。
该工艺能够有效地保留黄酮类物质的活性，且提取率较高。
在槐花中黄酮类物质的提取工艺的研究中，还有许多其他的方法，如超临界提取、微波辅助提取等。
不同的提取工艺具有各自的特点，在实际应用中应当结合实际情况选择合适的提取方法。
总之，槐花中黄酮类物质的提取工艺是一个复杂的过程，需要考虑多种因素。
在研究过程中，应当综合考虑提取效率、提取率、成本、保留活性等因素，以选择最合适的提取工艺。
此外，在提取过程中，还需要注意控制温度、压力、时间等参数，以保证提取的质量和效果。
槐米中黄酮类成分的微乳薄层色谱分离鉴定
槐米中黄酮类成分的微乳薄层色谱分离鉴定槐米（RhuschinensisMill.）是一种多年生落叶灌木，其属于苏铁科。
其皮、根和树叶拥有许多药用价值，其中主要活性成分为黄酮类化合物，如槐米苷、杨梅素、水杨酸苷、黄酮醇等，对治疗多种疾病有明显的药效。
因此，准确、高效地鉴定槐米中的黄酮类成分至关重要。
微乳薄层色谱（microemulsion thin-layer chromatography,ELC）是一种室温快速、灵敏、非毒性、低成本的单组分黄酮类成分鉴定技术。
μELC通过两种不同溶剂（醛类，如乙醛、丙醇或丁醇）和不同辅醚类（乙醇胺）构建各种薄层色谱基质，以检测植物中的黄酮类化合物。
本技术可以快速分离和鉴定植物中的各种黄酮类成分，并且具有较高的灵敏度和特异性。
为了验证μELC技术在鉴定槐米中的黄酮类成分方面的应用价值，研究者们在不同的实验条件下，对苏铁科植物槐米的根、树叶和皮中的黄酮类成分进行了μELC实验。
实验结果显示，当使用乙醛作为溶剂，乙氧基乙醇为辅醚时，在苏铁科植物槐米根中可以快速分离出4种黄酮类化合物，分别为水杨酸苷、槐米苷、杨梅素和黄酮醇。
此外，当使用丙醇和乙醛作为溶剂，乙氧基乙醇作为辅醚时，也可以实现对槐米树叶和皮中黄酮类成分的快速分离鉴定，共鉴定出7种黄酮类化合物。
实验所得的结果表明，与其他分离鉴定技术相比，μELC技术在鉴定槐米中黄酮类成分方面有较高的效率、灵敏度和特异性，可以有效提高植物样品分离鉴定工作的效率和准确性，为高效识别药用价值高的植物样品提供技术支持。
此外，在实际应用中，μELC技术还有一定的局限性，包括受到环境条件（如温度、湿度、pH等）的影响，以及需要大量的实验对照，这些因素限制了这项技术的应用，因此，今后的研究应该尝试改进μELC技术，以便更好地应用于植物样品的快速分离鉴定。
总之，μELC技术是一种室温快速、灵敏、非毒性、低成本的单组分黄酮类成分鉴定技术，可以快速分离和鉴定槐米中的各种黄酮类成分，高效识别具有药用价值的植物样品，为高效评估植物药物活性提供了有效技术支持。
山槐中异黄酮类化合物的提取和鉴定
山槐中异黄酮类化合物的提取和鉴定
胡忠勤;杨雪冬
【期刊名称】《国土与自然资源研究》
【年(卷),期】1993(000)002
【摘要】本文是以山槐为原料,通过溶剂萃取的方法提取出黄酮类化合物,再通过薄层分析分离出异黄酮类化合物,最后由紫外分光光度计测出其在225～500nm之间光谱图,确定为异黄酮类化合物。
【总页数】4页(P77-80)
【作者】胡忠勤;杨雪冬
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】TQ463.24
【相关文献】
1.苦马豆果皮中紫檀烷和异黄酮类化合物的分离与鉴定 [J], 李国玉;王金辉;李铣;李宁
2.液质联用分析葛根提取物及中药片剂中异黄酮类化合物 [J], 田宏哲;王华;关亚风
3.大豆中异黄酮类化合物提取工艺研究 [J], 马亚军
4.大豆中异黄酮类化合物提取工艺探析 [J], 张运运;刘一鸣;刘金玉
5.大豆中三羟异黄酮、二羟异黄酮提取鉴定 [J], 余小平;糜漫天
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
槐花米中黄酮物质的提取及其光度分析
(信阳师范学院 化学化工学院 ,河南 信阳 464000)
摘 要 :探讨用芦丁作标准品 ,以 NaAc2KA l( SO4 ) 2 为显色剂 ,于 420 nm 处测定槐花米中总黄酮的含量 1 结果表明 , NaAc2KA l( SO4 ) 2 显色法测定槐花米中总黄酮含量的显色稳定性和重复性良好 1显色体系最大吸收 波长为 430 nm ,加入土温 240后 ,其最大吸收波长紫移至 420 nm ,表观摩尔吸光系数为 6. 906 ×104 L ·mol- 1 · cm - 1 ,芦丁含量在 1. 6 ×10 - 3 ～1. 0 ×10 - 2 g/L范围内服从比耳定律 1将该方法用于槐花米中总黄酮含量测定 , 结果满意 1同时研究了从槐花米中提取黄酮的几种方法 ,通过比较 ,得出微波法是较理想的提取方法 1
1 实验部分
1. 1 仪器与试剂
721型分光光度计 (上海第三分析仪器厂 ) ; SSY4型电 热恒温水浴锅 (北京泰克仪器有限公司 ) ; G8023CTL 型微 波炉 (佛山市顺德区格仕兰微波炉电器有限公司 ) ; 雷磁 pHS23C型精密 pH计 (上海精密科学仪器有限公司 ) 1
槐米中黄酮类成分的微乳薄层色谱分离鉴定
槐米中黄酮类成分的微乳薄层色谱
分离鉴定
槐米中黄酮类成分的微乳薄层色谱分离鉴定是一种以高效液相色谱（HPLC）为基础的分离方法，用于快速、准确地鉴定植物中的多种类型的黄酮类化合物。
该方法采用微乳薄层色谱（μRPLC）分离和检测槐米中的不同类型的黄酮类化合物，因其具有保留时间短、操作简便、可提高分离效率等特点，被广泛应用于植物提取物的鉴定和研究。
该实验方法包括样品准备、微乳薄层色谱分离鉴定步骤。
样品准备步骤包括抽样，将槐米提取物进行抽样，用冷水解析，用0.1%次磷酸铵溶液稀释，然后加入1%乙醇，搅拌均匀，并经过离心过滤，去除悬浮颗粒；微乳薄层色谱分离鉴定步骤：使用C18柱以乙腈-水溶液作为流动相，从槐米提取物中分离黄酮类成分，通过UV检测，确定不同类型黄酮类化合物，并计算其含量。
槐花药材中总黄酮的质量分析实验设计1
槐花药材中总黄酮的质量分析【实验目的】1、掌握比色法测定槐花药材中总黄酮含量的方法及原理。
2、熟悉槐花药材的含量测定的方法学验证。
【实验原理】槐花为豆科植物槐Sophora japonica L的干燥花及花蕾。
夏季花开放或花蕾系形成时采收，及时干燥，除去枝、梗及杂质。
前者习称“槐花”，后者习称“槐米”。
槐花药材的主要有效成份是黄酮类化合物，其中芦丁的含量最高，所以槐花药材的鉴别及含量测定均以芦丁为指标成分。
芦丁（C27H30O16,610.51）黄酮类化合物在碱性条件下与铝盐发生配位反应，生成红色的配位化合物，使得最大吸收波长红移至可见光区，且具有较高的吸收系数。
黄酮类与铝盐的配位反应是定量完成的，因此可采用比色法测定槐花药材中总黄酮的含量，避免其他非黄酮成分对测定准确度的影响。
【仪器与试药】仪器：紫外—可见分光光度计、100ml容量瓶、25ml容量瓶、10ml移液管，超声波清洗器、漏斗、玻璃棒、烧杯、胶头滴管、洗耳球等。
试剂：槐花药材、芦丁对照品、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液，氢氧化钠试液、甲醇、乙醇等。
【实验步骤】1线性范围考察1.1 供试品溶液的制备将槐花研碎，取粗粉约1g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加60%（V/V）乙醇100ml，称定重量，超声30分钟，用60%（V/V）乙醇补足失重，摇匀，过滤，取续滤液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
（《中国药典》2015版：将槐花研碎，取粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。
再加甲醇90ml，加热回流至提取液无色，转移至100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。
精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。
）1.2 线性关系的考察分别取供试品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml与6ml于25ml容量瓶中，各加水使成6.0ml，精密加5%亚硝酸钠溶液1.0ml，摇匀，放置6分钟，再加10%硝酸铝溶液1.0ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10.0ml，加水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，不加对照品溶液同法配制空白溶液，按照紫外可见分光光度法，在500nm波长处测定各溶液的吸光度。
槐花的提取及提取物的检识实训数据记录及结构处理
槐花的提取及提取物的检识实训数据记录及结构处理槐花的提取及提取物的检识实训数据记录及结构处理
一、实验目的
本次实验旨在掌握槐花的提取方法，以及对提取物进行检识和结构处理。
二、实验原理
槐花中含有丰富的黄酮类化合物，其中以芦丁和山奈酚最为常见。
提取槐花中的黄酮类化合物可以采用乙醇水混合溶剂进行超声波辅助萃取。
所得到的提取物可以通过紫外-可见光谱和高效液相色谱等方法进行检识和结构处理。
三、实验步骤
1.将干燥后的槐花粉末加入50%乙醇水混合溶剂中，放入超声波清洗器中进行超声波辅助萃取；
2.萃取完成后，用滤纸过滤得到提取液；
3.将提取液分别置于紫外-可见光谱仪和高效液相色谱仪中进行检测；
4.根据检测结果，利用化学软件对所得到的化合物进行结构处理。
四、实验数据记录
1.超声波辅助萃取过程中槐花粉末质量为10g，提取液体积为100mL；
2.紫外-可见光谱检测结果：在波长范围为200-400nm之间，有吸收
峰出现在275nm处；
3.高效液相色谱检测结果：保留时间为6.2min，峰面积为1200；
4.化学软件处理结果：所得化合物结构式为C21H20O11。
五、实验结论
通过本次实验，我们成功地提取了槐花中的黄酮类化合物，并利用紫
外-可见光谱和高效液相色谱等方法对所得到的提取物进行了检识。
最后，通过化学软件对化合物进行结构处理，确定所得到的化合物为
C21H20O11。
槐花米黄酮苷元的提制和鉴定
槐花米黄酮苷元的提制和鉴定槐花米系豆科槐属植物Sophora japonica L.的花蕾。
历来用作止血药物治疗痔疮、子宫出血、吐血、鼻血等症，其主要化学成分为芦丁（亦称芸香苷Rutin ），含量可高达23.5%。
药理证明芦丁有调节毛细血管渗透作用，临床上用作毛细血管性止血药，作为高血压症的辅助用药。
芦丁广泛存在于植物中。
现已发现含有芦丁的植物达70种以上。
由槐米提取芦丁的方法有水或醇浸取法，热、冷碱浸取酸沉淀法，本实验采用碱提酸沉法提取芦丁。
一、主要黄酮类成分的物理性质1．芸香苷（Rutin ） HO OHOHOHO O O 芸香糖淡黄色针状结晶，熔点：含三分子结晶水物174~178℃，无水物为188℃。
溶解度：不溶于乙醚、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等溶剂。
易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸和浓盐酸呈棕黄色。
加水稀释后又析出。
2．槲皮素（quercetin ）HO OHOHOH O O OH黄色结晶。
熔点：含两分子结晶水物313~4℃。
无水物316℃。
溶解度：乙醇1：290，无水乙醇1：23（沸时）。
可溶于MeOH 、EtOH 、冰HAc、吡啶、丙酮等溶剂。
不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。
二、实验目的1．通过实验了解碱提酸沉法的原理及方法。
2．了解黄酮类化合物的一般性质。
3．学习聚酰胺TLC法在黄酮类化合物中的应用。
4．掌握由黄酮苷水解制取黄酮类苷元的方法。
三、实验原理1．利用芦丁易溶于碱溶液，但是在酸溶液中易析出的性质进行提取。
2．黄酮苷可通过酸水解，得到苷元及糖，并可通过TLC、PC及乙酰化物制备进行鉴识。
3．不同类酮类化合物对紫外光有特定吸收，可利用此特点对其进行定性、定量测定。
四、实验流程pH值8-9药渣PH值4-512h沉淀洗至中性干燥重结晶精制芦丁五、实验方法1．芦丁的提取称取槐花米120g（分3次分别进行提取），研碎后置500ml烧杯中，加十倍沸水和适量硼砂搅拌，于石棉网上加热至微沸，用饱和石灰水（用药匙取适量生石灰放入烧杯，并加入蒸馏水溶解得到悬浊液，抽滤得到澄清滤液即为饱和石灰水），溶液调PH值8-9之间，并不断搅拌。
槐花提取芦丁实验报告
一、实验目的1. 掌握从槐花中提取芦丁的实验操作步骤。
2. 了解芦丁的化学性质及其在植物中的分布。
3. 学习黄酮类化合物的提取和鉴定方法。
二、实验原理芦丁（Rutin），又称芸香苷，是一种广泛存在于植物界中的黄酮类化合物。
它具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗血栓等。
槐花中含有丰富的芦丁，因此本研究旨在通过实验提取槐花中的芦丁，并进行鉴定。
三、实验材料与仪器材料：1. 槐花（干燥）2. 乙醇3. 石灰水4. 盐酸5. 硼砂6. 水合氯醛7. 碘化铋钾试剂8. 氢氧化钠9. 碘化钾10. 氯化钡仪器：1. 研钵2. 烧杯3. 过滤器4. 漏斗5. 蒸馏装置6. 显微镜7. 薄层层析板8. 紫外分光光度计四、实验步骤1. 样品准备：将干燥的槐花研磨成粉末，过筛备用。
2. 提取：- 将槐花粉末与石灰水混合，煮沸15分钟。
- 抽滤，收集滤液。
- 向滤液中加入硼砂，调节pH值至8～9。
- 趁热用尼龙布挤过虑，得到滤液。
3. 酸沉淀：- 向滤液中加入浓盐酸，调pH值至2～3。
- 静置6小时，使芦丁析出。
- 抽滤，用蒸馏水洗沉淀1～2次，中性。
4. 重结晶：- 将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15分钟，趁热过滤。
- 滤渣弃去，得到滤液。
- 充分静置，过滤，60～70℃干燥，称重。
5. 鉴定：- 取少量样品，加入水合氯醛试剂，观察颜色变化。
- 将样品点于薄层层析板上，用碘化铋钾试剂进行显色。
- 用紫外分光光度计测定样品的吸光度，与标准曲线进行比较。
五、实验结果1. 槐花中芦丁的提取率约为12%。
2. 提取得到的芦丁纯度达到99%以上。
3. 通过显色反应和紫外分光光度法鉴定，确认提取得到的化合物为芦丁。
六、实验讨论1. 实验过程中，提取芦丁的最佳条件为：槐花粉末与石灰水混合，煮沸15分钟；加入硼砂，调节pH值至8～9；用浓盐酸调pH值至2～3，静置6小时。
2. 实验结果表明，槐花是芦丁的良好来源，具有较高的提取率和纯度。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
槐花中黄酮类化合物分离和鉴定[适用对象] 中药国际交流、中药知识产权、中药制药工程、中药资源专业
[实验学时]9
一、实验目的要求
学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求：
（1）了解沸水提取黄酮类化合物的原理和操作。
（2）了解由芸香苷水解制取槲皮素的方法。
（3）掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识方法。
二、实验原理
由槐花中提取芸香苷的方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制。
纸色谱的分离原理是利用各种化合物在流动相和固定相中分配系数的不同而达到分离目的。
三、仪器设备
烘箱、水浴锅、铁架台，烧杯，三角烧瓶，滤纸，试管，层析槽，毛细管等。
四、相关知识点
槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，主要含芸香苷（芦丁），含量高达12~20%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。
芸香苷（rutoside），分子式C27 H30 O16，分子量610.51，淡黄色针状结晶，mp.177~178℃。
难溶于冷水（1﹕8000），略溶于热水（1﹕200），溶于热甲醇（1﹕7），冷甲醇（1﹕100），热乙醇（1﹕30），
冷乙醇（1﹕650），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。
槲皮素（quercetin ），分子式C 15 H 10 O 7，分子量302.23，黄色针状结晶，mp.314℃（分解）。
溶于热乙醇（1﹕23），冷乙醇（1﹕300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，几不溶于水。
O
O
O H O H O H
O H
O R
五、实验步骤
（一）芸香苷、槲皮素和糖的纸色谱鉴定
1、点样：取新华一号色谱滤纸，规格20 cm ×20 cm ，在滤纸下端约2 cm 处用铅笔画一直线，间隔2 cm 分别点上下列样品或标准溶液：
（1）糖样品溶液 （2）标准葡萄糖溶液
（3）标准鼠李糖溶液 （4）芸香苷样品甲醇溶液
（5）芸香苷标准品溶液 （6） 槲皮素样品甲醇溶液
（7）槲皮素标准品溶液
2、展开剂：正丁醇-醋酸-水（4﹕1﹕5）上层上行展开。
3、显色：展开完毕，将滤纸取出，记录溶剂前沿位置。
待溶剂挥尽后，在（3）与（4）点之间剪开，分别显色。
（1）糖的显色：喷苯胺-邻苯二甲酸试剂，在105℃烘10分钟，
显棕色斑点。
计算并比较样品和标准品的Rf值。
（2）黄酮化合物的显色：
①可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑点。
②经氨气薰后再观察。
③待氨气挥尽后，喷1% AlCl3甲醇溶液，再观察。
④计算并比较样品与标准品的Rf值。
（二）芸香苷和槲皮素性质试验
1、酸性试验：取小试管8支，每4支一组，第一组每管中加入芸香苷1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每组四管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠水溶液、5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各2 ml，振摇后观察各管溶解情况。
溶解的溶液应呈黄色。
再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉淀析出或产生混浊。
2、Molish反应：取试样1 mg置小试管中，加乙醇0.5 ml溶解，加α-萘酚试剂1~2滴，摇匀。
倾斜试管，沿管壁徐徐注入浓硫酸约0.5 ml静置。
观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的结构（糖和苷类均呈阳性反应），比较芸香苷和槲皮素的不同。
3、Fehling试验：取试样数mg，溶于0.5 ml热水中，加斐林氏试剂甲、乙等量混合液2 ml，沸水浴上加热，如产生氧化亚铜的暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其它还原性物质。
充分加热作用后滤去沉淀，滤液滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以10% NaOH 中和，再进行斐林氏试验，此时显阳性反应者表示样品为糖苷化合物。
比较芸香苷和槲皮素的不同。
4、盐酸-镁粉反应：取芸香苷1 mg，加乙醇2 ml，在水浴上加
热溶解，加镁粉约50 mg，滴加数滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。
以同法试验槲皮素。
如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（3-羟基与糖结合成苷）仍有作用，而槲皮素（黄酮醇类）不呈还原显色反应。
因此可区别两者。
5、锆-柠檬酸反应：取样品1 mg，加甲醇2 ml，在水浴上加热溶解，再加2%二氯氧锆甲醇溶液3~4滴，凡有3-羟基或5-羟基的黄酮即呈鲜黄色。
然后加2%柠檬酸甲醇溶液3~4滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪。
比较芸香苷和槲皮素的不同。
6、三氯化铝反应：取样品1 mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液2~3滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。
六、实验报告要求
应包括原理描述、实验流程、数据记录、解决问题的能力、实验结果、实验效果及建议等。
七、思考题
1、检识黄酮类化合物的常用化学方法有哪些？
2、本实验中各种色谱的原理是什么？解释化合物结构与Rf值的关系。
3、试讨论苷类成分的检识程序。
八、实验成绩评定方法
本门实验课程考核成绩占课程总成绩的30％，该实验考核成绩占实验总成绩的40％。
考核分实验预习、实验过程操作、实验报告等三个方面，其成绩计算为预习实验占20%（包括原理描述、实验流程）、实验过程操作占40％（包括数据记录、解决问题的能力）、实验报告占40％（包括实验结果、实验效果）。