斑马鱼模型在中医药研究中的应用
网络药理学和斑马鱼模型在中药药效物质及作用机制研究中的应用进展
山东科学ＳＨＡＮＤＯＮＧＳＣＩＥＮＣＥ第３７卷第２期２０２４年４月出版Ｖｏｌ.３７Ｎｏ.２Ａｐｒ.２０２４收稿日期:２０２４￣０１￣２０基金项目:山东省重点研发计划(重大科技创新工程)(２０２１ＣＸＧＣ１０５０７ꎬ２０２２ＣＸＧＣ０２０５１５)ꎻ山东省中央引导地方科技发展资金项目(ＹＤＺＸ２０２２１６４)作者简介:刘可春(１９６４ )ꎬ男ꎬ博士ꎬ研究员ꎬ研究方向为药物筛选㊁药物早期成药性评价及新产品研发ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｌｉｕｋｅｃｈｕｎ２０００＠１６３.ｃｏｍꎬTel:150****9568网络药理学和斑马鱼模型在中药药效物质及作用机制研究中的应用进展刘可春ꎬ王勇澄ꎬ臧晓涵ꎬ夏青ꎬ张云ꎬ张姗姗ꎬ孙晨(齐鲁工业大学(山东省科学院)山东省科学院生物研究所山东省人类疾病斑马鱼模型与药物筛选工程技术研究中心ꎬ山东济南２５００１４)摘要:网络药理学高度契合中药多成分㊁多靶点的整体观和系统论思想ꎬ在中药现代化过程中迅速发展ꎮ实验验证是网络药理学的关键研究内容之一ꎮ斑马鱼模型具有完整的药物代谢系统㊁复杂的体内环境和靶点㊁通路调控机制ꎬ且利用该模型开展实验具有用药量少㊁高通量㊁周期短等优势ꎮ近年来ꎬ网络药理学预测结合斑马鱼模型实验验证的研究模式ꎬ在阐明中药药效物质及作用机制方面得到广泛应用ꎮ本文对网络药理学和斑马鱼模型综合应用的进展及发展趋势进行综述ꎬ以期为该方法在阐明中药功效现代科学内涵中的应用提供参考ꎮ关键词:网络药理学ꎻ斑马鱼ꎻ中药ꎻ药效物质ꎻ机制ꎻ质量标志物中图分类号:Ｒ２８５.５㊀㊀㊀文献标志码:Ａ㊀㊀㊀文章编号:１００２￣４０２６(２０２４)０２￣００２９￣０７开放科学(资源服务)标志码(ＯＳＩＤ):ＡｄｖａｎｃｅｍｅｎｔｓｉｎｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌｉｎｇｆｏｒｓｔｕｄｙｉｎｇｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ ｓｅｆｆｅｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｃｔｉｏｎＬＩＵＫｅｃｈｕｎꎬＷＡＮＧＹｏｎｇｃｈｅｎｇꎬＺＡＮＧＸｉａｏｈａｎꎬＸＩＡＱｉｎｇꎬＺＨＡＮＧＹｕｎꎬＺＨＡＮＧＳｈａｎｓｈａｎꎬＳＵＮＣｈｅｎ(ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＺｅｂｒａｆｉｓｈＭｏｄｅｌｆｏｒＨｕｍａｎＤｉｓｅａｓｅｓａｎｄＤｒｕｇＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅꎬＢｉｏｌｏｇｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅꎬＱｉｌｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ(ＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ)ꎬＪｉｎａｎ２５００１４ꎬＣｈｉｎａ)ＡｂｓｔｒａｃｔʒＮｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬｗｈｉｃｈｉｓｈｉｇｈｌｙｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｈｅｈｏｌｉｓｔｉｃａｎｄｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ(ＴＣＭ)ｗｉｔｈｉｔｓｍｕｌｔｉｐｌｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓａｎｄｔａｒｇｅｔｓꎬｈａｓｒａｐｉｄｌｙｄｅｖｅｌｏｐｅｄｉｎｔｈｅｍｏｄｅｒｎｉｚａｔｉｏｎｏｆＴＣＭ.Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｋｅｙｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｒｅｓｅａｒｃｈ.Ｔｈｅｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌｈａｓａｃｏｍｐｌｅｔｅｓｙｓｔｅｍｏｆｄｒｕｇｍｅｔａｂｏｌｉｓｍꎬａｓｗｅｌｌａｓａｃｏｍｐｌｅｘｉｎｖｉｖｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｎｄｔａｒｇｅｔａｎｄｐａｔｈｗａｙｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ.Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｔｈａｔｕｔｉｌｉｚｅｔｈｉｓｍｏｄｅｌｈａｖｅｔｈｅａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｌｏｗｄｒｕｇｄｏｓａｇｅꎬｈｉｇｈｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔꎬａｎｄｓｈｏｒｔｃｙｃｌｅｔｉｍｅ.ＩｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓꎬｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｍｏｄｅｔｈａｔｃｏｍｂｉｎｅｓｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｗｉｔｈｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｖａｌｉｄａｔｉｏｎｕｓｉｎｇｔｈｅｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌｈａｓｂｅｅｎｗｉｄｅｌｙａｐｐｌｉｅｄｔｏｅｌｕｃｉｄａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｃｔｉｏｎｏｆＴＣＭ.ＴｈｉｓｓｔｕｄｙｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｔｒｅｎｄｓｉｎｔｈｅｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌｉｎｇꎬａｉｍｉｎｇｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｉｒａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｅｌｕｃｉｄａｔｉｎｇｔｈｅｍｏｄｅｒｎｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆＴＣＭ.ＫｅｙｗｏｒｄｓʒｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎻｚｅｂｒａｆｉｓｈꎻｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅꎻｅｆｆｅｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓꎻｍｅｃｈａｎｉｓｍꎻｑｕａｌｉｔｙｍａｒｋｅｒｓ㊀㊀中医药是中华民族与疾病斗争的智慧结晶ꎬ具有一套独特的科学思想和理论体系ꎮ自中药现代化以来ꎬ我国中药产业快速发展ꎬ达到万亿规模ꎬ且仍具有巨大潜力[１]ꎮ但是ꎬ大多数中药药效物质不清㊁作用机制不明ꎬ严重制约中药产业高质量发展[２]ꎮ近二十年ꎬ针对这一瓶颈问题ꎬ我国学者引入多种现代先进技术ꎬ创新性地建立了一系列具有中医药特色的研究思路和方法[３￣６]ꎮ网络药理学(ｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ)是以系统生物学和多向药理学为理论基础的学科ꎬ通过构建网络分析中药－成分－靶点－病证之间的关系ꎬ解析疾病与中药相关的生物网络ꎬ发掘疾病复杂生物系统与中药复杂化学体系的内在网络关联ꎬ高度契合中药多成分㊁多靶点整体调节的作用特点[７]ꎮ目前ꎬ网络药理学已广泛应用于发现中药关键靶点㊁挖掘中药功效物质㊁解析中药成分协同作用和方剂调节机制等ꎮ利用网络药理学研究中药药效物质及作用机制的基本思路是首先构建中药成分及疾病靶点库ꎬ利用蛋白互作分析建立生物分子网络ꎻ再开展生物信息学分析ꎬ进行ＧＯ分类富集和ＫＥＧＧ通路富集ꎻ最后进行实验验证ꎮ虽然利用网络药理学方法能够从海量的数据中快速获取中药关键化学成分和靶点信息ꎬ但对关键信息的实验验证仍工作量巨大ꎮ近年来ꎬ网络药理学与斑马鱼等高通量评价模型的联合应用已成为热点研究内容之一ꎮ斑马鱼与人类基因的同源性高达８７％ꎬ利用该模型开展实验验证具有用药量少㊁准确率高㊁实验周期短㊁透明易观察㊁成本低㊁整体性等优势[８]ꎮ本文综述了网络药理学预测联合斑马鱼实验验证在中药药效物质㊁作用机制㊁质量标志物㊁炮制机理等研究中的应用进展ꎬ旨在为阐明中药功效现代科学内涵提供技术参考ꎮ１㊀网络药理学联合斑马鱼模型在中药药效物质研究中的应用中药发挥药效必有其物质基础ꎮ但是ꎬ中药具有多成分㊁多靶点㊁多途径的特点ꎬ其化学成分体系极其复杂ꎬ为解析药效物质带来极大挑战[９]ꎮ网络药理学的整体性㊁系统性和注重药物间相互作用的特点与中医药学的基本特点相吻合ꎬ符合中医药对疾病本质的认识[１０]ꎮ建立中药有效成分库是开展网络药理学研究的首要步骤ꎬ也是利用网络药理学方法解析中药药效物质直接作用和协同起效的关键ꎮ目前ꎬ通常采用数据库检索或液质联用技术鉴定两种方式建立中药有效成分库ꎬ根据网络药理学预测结果ꎬ利用斑马鱼模型进行活性验证(图１)ꎮ图１㊀网络药理学联合斑马鱼模型在中药药效物质研究中的应用示例图Ｆｉｇ.１㊀ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｅｆｆｅｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ１.１㊀利用数据库检索建立中药有效成分库随着研究数据的不断积累ꎬ中药数据库发挥着越来越重要的作用ꎮ多数常用中药均已采用传统分离或液质鉴定的方法从不同程度上解析了其化学成分组成ꎬ并收录在ＴＣＭＳＰ(ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｓｙｓｔｅｍｓｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｄａｔａｂａｓｅ)㊁ＴＣＭＩＰ(中医药整合药理学研究平台ꎬｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ￣ｂａｓｅｄｒｅｓｅａｒｃｈｐｌａｔｆｏｒｍｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ)㊁ＥＴＣＭ(ｔｈｅｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ)㊁ＴＣＭＳＩＤ(ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｄａｔａｂａｓｅ)㊁ＣＨＥＭ￣ＴＣＭ等数据库中ꎮ除了化合物名称ꎬ上述数据库还提供了化合物的分子量(ＭＷ)㊁口服生物利用度(ＯＢ)㊁类药性(ＤＬ)㊁血脑屏障渗透性(ＢＢＢ)㊁肠上皮渗透性(Ｃａｃｏ￣２)㊁ＡｌｏｇＰ㊁负表面积(ＦＡＳＡ￣)和氢键供体/受体(Ｈｄｏｎ/Ｈａｃｃ)等信息ꎬ为利用网络药理学研究中药及复方提供了重要的潜在有效成分信息ꎮ在网络药理学实验中ꎬ通常以ＯＢȡ３０％和ＤＬȡ１.８为条件从上述数据库中筛选化合物建立潜在有效成分库ꎬ构建成分－靶点－疾病网络ꎬ根据成分与靶点的连接度值ꎬ筛选在网络中具有重要调节作用的化合物ꎬ进一步利用斑马鱼模型验证其活性ꎮＺｈｏｎｇ等[１１]利用该方法从ＴＣＭＳＰ中筛选了中药复方二至丸中的１６２个化合物ꎬ以其中７２个成分构建了成分－靶点－疾病网络ꎬ发现槲皮苷㊁烟碱㊁芩黄素等度值排名前１５的化合物在网络中具有重要调节作用ꎬ分别利用硬骨荧光标记的转基因斑马鱼和茜素红染色野生型斑马鱼两种方法验证了槲皮苷能够显著提升斑马鱼骨密度ꎮＦｕ等[１２]采用同样的方法ꎬ通过网络预测结合斑马鱼模型ꎬ验证了从巴戟天筛选出两种蒽醌㊁一种环烯醚萜和两种多糖具有抗骨质疏松活性ꎮＬｉｕ等[１３]首先利用斑马鱼模型证实了鱼腥草提取物的胚胎毒性ꎬ进而从ＴＣＭＳＰ数据库中搜集到鱼腥草可能含有的１８９个成分ꎬ其中ＯＢȡ３０％和ＤＬȡ１.８的有５１个化合物ꎬ网络分析显示毒性成分可能为齐墩果酸㊁木酚素和马兜铃内酰胺ＡＩＩꎮＸｕｅ等[１４]以ＯＢȡ３０％和ＤＬȡ１.８为筛选条件ꎬ从ＴＣＭＳＰ数据库中仅得到７种化合物ꎬ作者通过查阅文献补充了１２种潜在的活性成分ꎬ共以１９种成分建立了成分－靶点－疾病网络ꎬ根据度值发现油酸等６个化合物是活性最高的化合物ꎬ并用斑马鱼模型验证了二氢槲皮素㊁丁香酚㊁油酸和肉桂醛抗心肌缺血再灌注损伤活性ꎮＬｉ等[１５]综合网络药理学和骨质疏松㊁阿尔茨海默病２种斑马鱼模型从肉苁蓉中筛选到２２个治疗骨质疏松症和阿尔茨海默病的双药效成分ꎬ为筛选中药中的多效化合物提供了技术参考ꎮ可以看出ꎬＴＣＭＳＰ是构建潜在有效成分库常用的数据库ꎬ该数据库包含５００多种常用中药ꎬ３万多种化学成分及其药物代谢动力学㊁药物化学㊁药物对应靶点信息ꎬ提供了化合物的１２项性质参数ꎬ还包括其在各种数据中的ＩＤ号ꎬ以方便数据库间查找ꎬ同时还提供了对应的靶点㊁关联的疾病及中药来源ꎮ此外还有ＴＣＭＩＤ平台ꎬ提供了较为详细的化合物性质ꎬ特别是核磁参数ꎬ但对靶点信息及来源重要信息提供较少ꎬ该数据库主要针对分子化合物的对接及化学结构对蛋白结合的影响等[１６]ꎮ上述数据库为快速获取中药潜在药效成分提供了便利条件ꎬ但是数据库更新相对较滞后ꎬ对一些化学成分尚不十分明确的中药适用性较差[１７]ꎮ１.２㊀利用液质联用技术建立中药有效成分库液质联用技术已广泛应用于快速获取中药化学成分信息ꎬ并可通过多重反应监测技术㊁峰面积归一化法等实现快速定量分析ꎮ在开展网络药理学研究时ꎬ通常以中药全成分或含量排名靠前的化合物为基础ꎬ依据ＯＢ值和ＤＬ值筛选化合物建立成分－靶点－疾病网络ꎬ根据度值排序筛选潜在药效化合物ꎬ并进一步利用斑马鱼模型验证化合物活性ꎮＺｈｏｕ等[１８]首先利用２种斑马鱼模型证实普尔纳具有明显的抗炎作用ꎬ然后采用液质联用(ＬＣ￣ＭＳ)结合广泛靶向代谢组学方法ꎬ从普尔纳中鉴定了１８５个成分ꎬ以相对含量大约１％的２０个化合物开展了网络药理学ꎬ根据网络分析获得了３ꎬ７￣ｄｉ￣Ｏ￣ｍｅｔｈｙｌｑｕｅｒｃｅｔｉｎ等排名前１０的化合物ꎬ最后利用斑马鱼模型验证了其中６个化合物具有显著抗炎活性ꎮＹａｎｇ等[１９]利用ＨＰＬＣ￣Ｑ￣ＴＯＦ￣ＭＳ(高效液相色谱－四级杆－反行时间高分辨质谱)从茯神中鉴定了３６个化合物ꎬ利用氯化钡诱导的斑马鱼心律失常发现茯神可以改善心脏充血㊁缩短ＳＶ￣ＢＡ(静脉窦与动脉球)距离㊁缓解心肌细胞凋亡ꎬ结合网络药理学筛选出茯苓酸㊁齐墩果酸等１１种抗心律失常活性成分ꎮＺｈａｎｇ等[２０]采用液质联用结合数据库检索ꎬ从当归－川芎药对中选取２４个潜在活性成分建立了成分－靶点－疾病网络ꎬ利用斑马鱼证实当归－川芎药对具有抗血栓㊁抗炎㊁抗氧化和促血管生成作用ꎬ并进一步发现欧当归内酯Ａ为主要抗血栓活性成分ꎬ咖啡酸和阿魏酸为主要抗炎活性成分ꎬ阿魏酸㊁ｃｉｓ￣ｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ欧当归内酯Ａ为主要抗氧化活性成分ꎬ阿魏酸是主要的促血管生成活性成分ꎮ相比于利用数据库检索建立潜在有效成分数据库ꎬ液质联用技术能够更真实地反映中药或复方中含有的化合物ꎬ从而能够更准确地开展网络药理学研究ꎮ入血成分是最直接的药效物质ꎮ但是ꎬ入血成分通常较难获得实体化合物ꎮ随着分离技术的进步ꎬ结合斑马鱼实验ꎬ未来有望从体内角度建立更真实体内调控网络ꎬ并实现体内直接药效物质的活性验证ꎮ２㊀网络药理学联合斑马鱼模型在中药作用机制研究中的应用阐明作用机制是理解中药药效现代科学内涵的关键内容ꎮ网络药理学结合斑马鱼模型研究中药作用机制的思路主要是通过网络药理学预测中药作用靶点及信号通路ꎬ利用斑马鱼模型结合实时荧光定量ＰＣＲ(ＲＴ￣ｑＰＣＲ)㊁Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ㊁组学等技术验证其作用机制(图２)ꎮＷａｎｇ等[２１]利用网络药理学预测出六味地黄丸抗白癜风的潜在作用靶点和信号通路之后ꎬ利用斑马鱼模型发现六味地黄丸升高过氧化氢酶(ＣＡＴ)和超氧化物歧化酶(ＳＯＤ)水平ꎬ降低活性氧自由基(ＲＯＳ)和丙二醛(ＭＤＡ)含量ꎬ结合Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术发现六味地黄丸提高了黑色素生成相关蛋白质的表达水平ꎬ结合ＲＴ￣ｑＰＣＲ技术发现六味地黄丸可以上调Ｎｒｆ２和ＨＯ￣１基因表达水平ꎬ认为六味地黄丸通过调节氧化应激因子和Ｎｒｆ２/ＨＯ￣１信号通路发挥抗白癜风作用ꎮＬｉｕ等[２２]通过网络药理学预测出清风藤及其生物碱可能通过靶向ＭＡＰＫ１４㊁ＣＡＳＰ３㊁ＣＸＣＬ８㊁ＩＬ￣１β㊁ＩＬ６㊁ＰＴＧＳ２㊁ＴＮＦ￣α㊁ＥＳＲ１和ＭＭＰ９等靶点ꎬ调节ＴＮＦ㊁ＰＩ３Ｋ￣Ａｋｔ㊁Ｔ细胞受体㊁破骨细胞分化等信号通路发挥抗骨质疏松活性ꎬ进一步结合ｑＲＴ￣ＰＣＲ技术检测斑马鱼中这些关键靶点的ｍＲＮＡ表达水平ꎬ验证了网络药理学推测出的作用机制ꎮ另有学者通过网络药理学预测出中药作用靶点ꎬ并进一步利用抑制剂或激动剂等处理斑马鱼ꎬ从而验证中药作用机制ꎮ例如ꎬＨｕ等[２３]通过网络药理学发现复方丹参滴丸通过调节ＶＥＧＦ/ＶＥＧＦＲ和ＰＩ３Ｋ/ＡＫＴ通路治疗冠心病ꎬ利用斑马鱼模型验证了复方丹参滴丸的促血管生成活性ꎬ并发现复方丹参滴丸缓解了ＶＥＧＦ受体抑制剂造成的斑马鱼血管损伤ꎬＰＩ３Ｋ和ＡＫＴ抑制剂降低了复方丹参滴丸在斑马鱼中的促血管生成作用ꎬ认为复方丹参滴丸可能通过调节ＶＥＧＦ/ＶＥＧＦＲ和ＰＩ３Ｋ/ＡＫＴ信号通路发挥促血管生成作用ꎮＣｈｅｎ等[２４]利用网络药理学预测出真武汤对心肌的保护作用与ｓＧＣ￣ｃＧＭＰ￣ＰＫＧ信号通路的激活有关ꎬ利用斑马鱼模型发现能阻断该信号通路的ｓＧＣ抑制剂可以使真武汤的心肌保护作用消失ꎮ斑马鱼体外发育ꎬ发育迅速ꎬ且斑马鱼基因编辑手段较成熟ꎮ今后有望通过斑马鱼靶基因敲除㊁敲降㊁过表达等手段更加深入地验证网络药理学预测的靶点及分子机制ꎮ图２㊀网络药理学联合斑马鱼模型在中药作用机制研究中的应用示例图Ｆｉｇ.２㊀ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｃｔｉｏｎｏｆＴＣＭ３㊀网络药理学联合斑马鱼模型在中药质量标志物研究中的应用中药质量是中药临床疗效的保障ꎬ是中药产业发展的生命线[２５]ꎮ影响中药质量的因素极其复杂ꎬ品种㊁生长环境㊁采收运输㊁用药部位㊁炮制方式和配伍等因素会导致中药药效差异[２６]ꎮ刘昌孝院士提出 质量标志物 的概念ꎬ其核心理念是反映中药治疗疾病本质特征ꎬ建立中药专属的质量评价标准[３]ꎮ中药质量标志物确认的核心原则为有效㊁特有㊁传递与溯源㊁可测和处方配伍 五要素 ꎮ基于网络药理学识别中药质量标志物的研究策略主要是构建可视化候选质量标志物网络ꎬ通过中药成分㊁靶点和通路之间的网络关系为中药质量标志物的挖掘和分析提供依据[２７]ꎮ罗林等[２８]通过ＵＰＬＣ￣Ｑ￣ＴＯＦ￣ＭＳ和网络药理学技术确定了驱虫斑鸠菊注射液抗白癜风的药效物质ꎬ优选出芹菜素㊁金圣草黄素㊁丁香脂素和紫铆花素等质量标志物ꎬ利用斑马鱼模型发现驱虫斑鸠菊注射液毒性低ꎬ能增强酪氨酸酶活性ꎬ促进黑色素生成ꎬ从而发挥抗白癜风的作用ꎮＷｅｉ等[２９]建立了心可舒片ＨＰＬＣ指纹图谱与斑马鱼心率恢复率的谱效关系模型ꎬ确定了丹参素㊁丹酚酸Ｂ㊁丹酚酸Ａ㊁葛根素和大豆苷元为心可舒片抗心律失常的质量标志物ꎮＤｏｎｇ等[３０]利用基于ＵＨＰＬＣ￣ＱＥ￣Ｏｒｂｉｔｒａｐ￣ＭＳ(超高效液相色谱－四级杆－静电场轨道肼高分辨质谱法)的非靶向代谢组学筛选出西洋参抗心力衰竭的潜在药效物质ꎬ构建斑马鱼心力衰竭模型验证西洋参潜在药效物质的活性ꎬ通过网络药理学和分子对接技术预测了西洋参抗心力衰竭的作用机制ꎬ最后利用ＲＴ￣ｑＰＣＲ技术在斑马鱼中验证西洋参潜在药效物质关键靶点的基因表达水平ꎬ发现苹果酸㊁奎宁酸㊁人参皂苷Ｒｇ３㊁人参皂苷Ｒｇ５㊁人参皂苷Ｒｇ６和拟人参皂苷Ｆ１１是西洋参抗心力衰竭的质量标志物ꎮＳｈｉ等[３１]采用ＨＰＬＣ￣Ｑ￣ＴＯＦ￣ＭＳ检测栀子中的化合物ꎬ通过代谢组学和灰色关联度分析鉴定了栀子抗血栓活性的关键化合物ꎬ然后利用斑马鱼对这些化合物进行了抗血栓活性评价ꎬ最后利用网络药理学探索这些化合物的靶点和信号通路ꎬ发现京尼平苷㊁柠檬酸和奎宁酸是栀子发挥抗血栓作用的质量标志物ꎮ在中药质量标志物研究中ꎬ可以利用网络药理学筛选中药潜在药效物质以及预测作用靶点与信号通路ꎬ并用斑马鱼模型验证ꎮ４㊀网络药理学联合斑马鱼模型在中药炮制的应用中药多源于自然界的植物㊁动物㊁矿物ꎬ药用部位含有一定的药用部分ꎬ但也常带有一些非药用部分影响疗效ꎬ并且不同药用部位药效有异ꎮ而原药材在发挥治疗作用的同时ꎬ也可能出现一些不良反应ꎬ这就需要通过炮制调整药性ꎬ增利除弊ꎬ减毒增效ꎬ以满足临床治疗要求[３２]ꎮ网络药理学结合斑马鱼模型的研究模式为解决中药炮制增效减毒机理提供了帮助ꎮ例如ꎬ肖建鹏[３３]通过不同批次的女贞子㊁酒女贞子的ＨＰＬＣ指纹图谱发现女贞子酒制后所含化学成分的种类和含量均发生了变化ꎬ采用ＵＰＬＣ￣Ｑ￣Ｏｒｂｉｔｒａｐ￣ＭＳ技术定性分析女贞子酒蒸前后含有的化学成分ꎬ发现红景天苷㊁羟基酪醇㊁酪醇和齐墩果酸等２０个化合物与女贞子酒蒸相关ꎬ通过网络药理学和分子对接预测出酒女贞子主要通过调节ＴＧＦ￣ｂｅｔａ信号通路治疗铁超载骨质疏松ꎬ并用斑马鱼模型发现酒女贞子治疗铁超载骨质疏松作用强于女贞子ꎬ证实了酒蒸炮制具有增效的作用ꎮ５㊀讨论与展望网络药理学从复杂生物网络的角度阐释中药－成分－靶点－病证之间的关系ꎬ与中医药整体观㊁系统论思想不谋而合[３４]ꎮ斑马鱼模型具有完整的药物代谢系统㊁复杂的体内环境和靶点㊁通路调控机制ꎬ且利用该模型开展实验具有用药量少㊁高通量㊁周期短等优势ꎮ近年来ꎬ网络药理学预测结合斑马鱼模型实验验证的研究模式ꎬ在阐明中药药效物质及作用机制方面得到广泛应用ꎬ高效地阐明了一系列中药㊁复方等的关键活性成分ꎬ以及其调控的作用靶点和信号通路ꎬ促进了中药的现代化发展ꎮ但是ꎬ在二者的联合应用中ꎬ斑马鱼实验通常仅用于潜在药效成分的活性评价ꎬ以及ＰＰＩ网络分析或信号通路中关键靶点编码基因表达水平的检测ꎮ随着人工智能㊁多组学及基因编辑等技术的快速发展ꎬ网络药理学预测和斑马鱼模型实验验证有望进一步深度结合ꎮ中药成分和疾病潜在靶点的准确性ꎬ是决定网络药理学实验结果可信性的关键内容ꎮ目前ꎬ网络药理学方法严重依赖数据库ꎬ通常采用ＴＣＭＳＰ等数据库预测中药成分靶点ꎬ从ＧｅｎｅＣａｒｄｓ等数据库中搜寻疾病靶点ꎮ然而ꎬ不同数据库中的靶点信息存在较大的差别ꎮ转录组㊁代谢组㊁蛋白组等组学技术已成熟应用于斑马鱼模型ꎮ可以利用组学技术寻找中药干预斑马鱼疾病模型前后的差异基因㊁蛋白和代谢物ꎬ建立中药干预疾病过程中切实调控的靶点库ꎬ用于网络药理学研究ꎮ然而ꎬ如何建立中药成分与真实调控靶点之间的关联性ꎬ是该方法需要解决的关键问题ꎮ随着分子对接和人工智能的发展ꎬ通过大数据分析和深度学习ꎬ构建不同特征化学结构与疾病靶点相结合的预测模型ꎬ建立中药化学成分与体内真实调控靶点的相关性ꎬ能够大幅提升网络药理学预测结果的准确性ꎮ此外ꎬ斑马鱼体型小㊁胚胎发育快速ꎬ综合运用基因编辑㊁转基因㊁基因沉默㊁小ＲＮＡ定向干扰等遗传学手段ꎬ建立与关键靶点基因相关的转基因㊁过表达㊁敲降等斑马鱼ꎬ深度验证作用机制ꎬ并结合表型组学－活体荧光表征－超微结构智能扫描等综合策略ꎬ验证关键药效成分对靶点及下游信号通路的调控作用ꎮ总之ꎬ网络药理学和斑马鱼模型在中药药效物质及作用机制研究中已得到广泛应用ꎬ且具有进一步深度结合的潜力ꎮ通过与人工智能㊁多组学及基因编辑等技术的交叉融合ꎬ有望助力阐明中药功效现代科学内涵ꎬ促进产业高质量发展ꎮ参考文献:[１]李天斯.新医改背景下ＹＤ制药集团营销策略研究[Ｄ].北京:北京建筑大学ꎬ２０２０.[２]马飞.中药标准化融通国际资源链[Ｎ].医药经济报ꎬ２０２３￣０７￣２４(１).[３]刘昌孝ꎬ陈士林ꎬ肖小河ꎬ等.中药质量标志物(Ｑ￣Ｍａｒｋｅｒ):中药产品质量控制的新概念[Ｊ].中草药ꎬ２０１６ꎬ４７(９):１４４３￣１４５７.ＤＯＩ:１０.７５０１/ｊ.ｉｓｓｎ.０２５３￣２６７０.２０１６.０９.００１.[４]蔡少青ꎬ王璇ꎬ尚明英ꎬ等.中药 显效理论 或有助于阐释并弘扬中药特色优势[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０１５ꎬ４０(１７):３４３５￣３４４３.ＤＯＩ:１０.４２６８/ｃｊｃｍｍ２０１５１７２０.[５]曾克武ꎬ姜勇ꎬ王晶ꎬ等.中药化学生物学: 中药化学 与 生物学 交叉形成的新兴学科[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０１９ꎬ４４(５):８４９￣８６０.ＤＯＩ:１０.１９５４０/ｊ.ｃｎｋｉ.ｃｊｃｍｍ.２０１９０２２２.０１１.[６]王喜军.中药药效物质基础研究的系统方法学:中医方证代谢组学[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０１５ꎬ４０(１):１３￣１７.ＤＯＩ:１０.４２６８/ｃｊｃｍｍ２０１５０１０３.[７]肖沐紫ꎬ王思齐ꎬ贾壮壮ꎬ等.基于网络药理学及实验验证探讨补肾定眩汤治疗高血压的作用机制[Ｊ].中国疗养医学ꎬ２０２４ꎬ３３(２):２５￣３１.ＤＯＩ:１０.１３５１７/ｊ.ｃｎｋｉ.ｃｃｍ.２０２４.０２.００５.[８]王成金ꎬ吕琳ꎬ张玉琳ꎬ等.斑马鱼中高通量毒性测试方法研究进展和应用现状[Ｊ].生态毒理学报ꎬ２０２３ꎬ１８(６):６０￣６７. [９]李蕙质ꎬ周小玲ꎬ杨玉杰ꎬ等.数据挖掘算法在中药方剂研究中的应用现状[Ｊ].中国药房ꎬ２０２４ꎬ３５(１):１１２￣１１８. [１０]刘志华ꎬ孙晓波.网络药理学:中医药现代化的新机遇[Ｊ].药学学报ꎬ２０１７ꎬ４７(６):６９６￣７０３.ＤＯＩ:１０.１６４３８/ｊ.０５１３￣４８７０.２０１２.０６.００１.[１１]ＺＨＯＮＧＺＧꎬＬＩＹＹꎬＣＨＥＮＹꎬｅｔａｌ.Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇａｎｄｅｘｐｌｏｒｉｎｇｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｅｒｚｈｉｐｉｌｌｉｎｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓｂａｓｅｄｏｎｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄｚｅｂｒａｆｉｓｈｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ[Ｊ].ＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎꎬＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＴｈｅｒａｐｙꎬ２０２１ꎬ１５:８１７￣８２７.ＤＯＩ:１０.２１４７/ＤＤＤＴ.Ｓ２９３４５５.[１２]ＦＵＳＱꎬＷＡＮＧＺＹꎬＪＩＡＮＧＺＭꎬｅｔａｌ.ＩｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌａｎｄｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｔｏｅｘｐｌｏｒｅｐｏｓｓｉｂｌｅａｃｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＭｏｒｉｎｄａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓｆｏｒｔｒｅａｔｉｎｇｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ[Ｊ].Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ２０２０ꎬ１７(５):ｅ２００００５６.ＤＯＩ:１０.１００２/ｃｂｄｖ.２０２００００５６.[１３]ＬＩＵＹＦꎬＹＡＮＧＧＤꎬＹＡＮＧＣＱꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＨｏｕｔｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａｅｍｂｒｙｏｔｏｘｉｃｉｔｙｗａｓｅｘｐｌｏｒｅｄｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｏｄｅｌａｎｄｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ[Ｊ].Ｔｏｘｉｎｓꎬ２０２３ꎬ１５(１):７３.ＤＯＩ:１０.３３９０/ｔｏｘｉｎｓ１５０１００７３.[１４]ＸＵＥＴꎬＸＵＥＹꎬＦＡＮＧＹＹꎬｅｔａｌ.Ｅｘｐｌｏｒｉｎｇｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ￣ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｉｎｎａｍｏｎｂｙｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇꎬａｎｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｖａｌｉｄａｔｉｏｎ[Ｊ].ＣｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌａｎｄＭａｔｈｅｍａｔｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｅｄｉｃｉｎｅꎬ２０２３ꎬ２０２３:１０６６０５７.ＤＯＩ:１０.１１５５/２０２３/１０６６０５７.[１５]ＬＩＹＱꎬＣＨＥＮＹꎬＦＡＮＧＪＹꎬｅｔａｌ.Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｕａｌ￣ｅｆｆｅｃｔｓｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＣｉｓｔａｎｃｈｅｔｕｂｕｌｏｓａｆｏｒｔｒｅａｔｉｎｇｂｏｔｈＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓａｎｄＡｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓＤｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２０２０ꎬ２５４:１１２７６４.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｊｅｐ.２０２０.１１２７６４.[１６]ＡＬＥＪＡＮＤＲＯＰꎬＣＯＮＳＴＡＮＴＩＮＥＳＣＵＦ.Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓｉｎｔｈｅｏｌｄｅｒａｄｕｌｔ:Ａｎｕｐｄａｔｅ[Ｊ].ＲｈｅｕｍａｔｉｃＤｉｓｅａｓｅｓＣｌｉｎｉｃｓｏｆＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａꎬ２０１８ꎬ４４(３):４３７￣４５１.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｒｄｃ.２０１８.０３.００４.[１７]宋阔魁ꎬ毕天ꎬ展晓日ꎬ等.网络药理学指导下的中药有效成分发现策略[Ｊ].世界科学技术－中医药现代化ꎬ２０１４ꎬ１６(１):２７￣３１.[１８]ＺＨＯＵＣＹꎬＣＨＥＮＪꎬＺＨＡＮＧＨＺꎬｅｔａｌ.Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｆｉｌｅａｎｄａｎｔｉ￣ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＡｒｔｅｍｉｓｉａｖｅｓｔｉｔａＷａｌｌ.ｅｘＢｅｓｓｅｒｖｉａｔａｒｇｅｔｅｄｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓꎬｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌꎬａｎｄｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２０２３ꎬ３０２:１１５９３２.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｊｅｐ.２０２２.１１５９３２.[１９]ＹＡＮＧＮＪꎬＬＩＵＹＲꎬＴＡＮＧＺＳꎬｅｔａｌ.ＰｏｒｉａｃｕｍＲａｄｉｘｐｉｎｉｒｅｓｃｕｅｓＢａｒｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅ￣ｉｎｄｕｃｅｄａｒｒｈｙｔｈｍｉａｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｃＧＭＰ￣ＰＫＧｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎｖｏｌｖｉｎｇＡＤＯＲＡ１ｉｎｚｅｂｒａｆｉｓｈ[Ｊ].ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２０２１ꎬ１２:６８８７４６.ＤＯＩ:１０.３３８９/ｆｐｈａｒ.２０２１.６８８７４６.[２０]ＺＨＡＮＧＭＱꎬＬＩＰＨꎬＺＨＡＮＧＳＳꎬｅｔａｌ.ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｈｅＤａｎｇｇｕｉ￣Ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇｈｅｒｂｐａｉｒｏｎｔｒｅａｔｉｎｇｔｈｒｏｍｂｕｓｔｈｒｏｕｇｈｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌｓ[Ｊ].ＡＣＳＯｍｅｇａꎬ２０２１ꎬ６(２２):１４６７７￣１４６９１.ＤＯＩ:１０.１０２１/ａｃｓｏｍｅｇａ.１ｃ０１８４７.[２１]ＷＡＮＧＤＤꎬＹＡＮＧＹꎬＨＥＮＧＥＲＪＩＡＧꎬｅｔａｌ.ＥｘｐｌｏｒｉｎｇｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＬｉｕｗｅｉＤｉｈｕａｎｇｆｏｒｍｕｌａｆｏｒｐｒｏｍｏｔｉｎｇｍｅｌａｎｉｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｊｕｖｅｎｉｌｅｚｅｂｒａｆｉｓｈｂａｓｅｄｏｎｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇ[Ｊ].Ｈｅｌｉｙｏｎꎬ２０２３ꎬ９(１１):ｅ２１７４４.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｈｅｌｉｙｏｎ.２０２３.ｅ２１７４４.[２２]ＬＩＵＷＪꎬＪＩＡＮＧＺＭꎬＣＨＥＮＹꎬｅｔａｌ.ＮｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｐｐｒｏａｃｈｔｏｅｌｕｃｉｄａｔｅｐｏｓｓｉｂｌｅａｃｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＳｉｎｏｍｅｎｉｉＣａｕｌｉｓｆｏｒｔｒｅａｔｉｎｇｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２０２０ꎬ２５７:１１２８７１.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｊｅｐ.２０２０.１１２８７１. [２３]ＨＵＹＸꎬＹＯＵＨＭꎬＲＥＮＣＺꎬｅｔａｌ.ＰｒｏａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄＤａｎｓｈｅｎｄｒｉｐｐｉｎｇｐｉｌｌｓｉｎｚｅｂｒａｆｉｓｈ[Ｊ].ＢＭＣＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＴｈｅｒａｐｉｅｓꎬ２０２２ꎬ２２(１):１１２.ＤＯＩ:１０.１１８６/ｓ１２９０６￣０２２￣０３５８９￣ｙ.[２４]ＣＨＥＮＬＱꎬＺＨＯＵＸＨꎬＤＥＮＧＹＪꎬｅｔａｌ.ＺｈｅｎｗｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓｃａｒｄｉａｃｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙｔｈｒｏｕｇｈａｃｔｉｖａｔｉｎｇｓＧＣ(ｓｏｌｕｂｌｅｇｕａｎｙｌａｔｅｃｙｃｌａｓｅ)￣ｃＧＭＰ(ｃｙｃｌｉｃｇｕａｎｏｓｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ)￣ＰＫＧ(ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＧ)ｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２０２３ꎬ３００:１１５７０５.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｊｅｐ.２０２２.１１５７０５.[２５]张铁军ꎬ白钢ꎬ刘昌孝.中药质量标志物的概念㊁核心理论与研究方法[Ｊ].药学学报ꎬ２０１９ꎬ５４(２):１８７￣１９６.ＤＯＩ:１０.１６４３８/ｊ.０５１３￣４８７０.２０１８￣０９１２.[２６]刘昌孝.基于中药质量标志物的中药质量追溯系统建设[Ｊ].中草药ꎬ２０１７ꎬ４８(１８):３６６９￣３６７６.ＤＯＩ:１０.７５０１/ｊ.ｉｓｓｎ.０２５３￣２６７０.２０１７.１８.００１.[２７]唐加龙ꎬ周莉ꎬ孙祖越ꎬ等.网络药理学在中医药治疗自身免疫性疾病中的应用[Ｊ].中国药理学通报ꎬ２０２１ꎬ３７(３):３２３￣３２７.ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００１￣１９７８.２０２１.０３.００６.[２８]罗林ꎬ张晏源ꎬ王程ꎬ等.基于ＵＰＬＣ￣Ｑ￣ＴＯＦ￣ＭＳ联合网络药理学探讨驱虫斑鸠菊注射液诱导黑色素积累的作用机制[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０２３ꎬ４８(６):１６０６￣１６１９.ＤＯＩ:１０.１９５４０/ｊ.ｃｎｋｉ.ｃｊｃｍｍ.２０２２１２０１.７０３.[２９]ＷＥＩＹＨꎬＮＩＥＬꎬＧＡＯＬＬꎬｅｔａｌ.ＡｎｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｓｔｒａｔｅｇｙｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙａｎｄｑｕａｎｔｉｆｙｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｍａｒｋｅｒｓｏｆＸｉｎｋｅｓｈｕＴａｂｌｅｔｓｂａｓｅｄｏｎｓｐｅｃｔｒｕｍ￣ｅｆｆｅｃｔｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐꎬｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬｐｌａｓｍａｐｈａｒｍａｃｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈ[Ｊ].ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２０２２ꎬ１３:８９９０３８.ＤＯＩ:１０.３３８９/ｆｐｈａｒ.２０２２.８９９０３８.[３０]ＤＯＮＧＲꎬＺＨＡＮＧＹＧꎬＣＨＥＮＳＪꎬｅｔａｌ.ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｋｅｙｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｍａｒｋｅｒｓｏｆＡｍｅｒｉｃａｎｇｉｎｓｅｎｇａｇａｉｎｓｔｈｅａｒｔｆａｉｌｕｒｅｂａｓｅｄｏｎｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓａｎｄｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌ[Ｊ].ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２０２２ꎬ１３:９０９０８４.ＤＯＩ:１０.３３８９/ｆｐｈａｒ.２０２２.９０９０８４.[３１]ＳＨＩＹＰꎬＺＨＡＮＧＹＧꎬＬＩＨＮꎬｅｔａｌ.ＤｉｓｃｏｖｅｒｙａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃｃｈｅｍｉｃａｌｍａｒｋｅｒｓｉｎＧａｒｄｅｎｉａＦｒｕｃｔｕｓｂｙｈｅｒｂａｌｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓａｎｄｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２０２０ꎬ２５３:１１２６７９.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｊｅｐ.２０２０.１１２６７９.[３２]吕维红.中药炮制与临床疗效的关系[Ｊ].中国城乡企业卫生ꎬ２００６ꎬ２１(１):６１￣６３.ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００３￣５０５２.２００６.０１.０４１.[３３]肖建鹏.基于网络药理学和ＰＫ￣ＰＤ结合模型阐释酒女贞子抗骨质疏松增效机理[Ｄ].镇江:江苏大学ꎬ２０２２.[３４]陈春妮.基于代谢组学和网络药理学技术探讨黄芩总黄酮改善阿尔茨海默症的作用机制[Ｄ].太原:山西大学ꎬ２０２３.。
斑马鱼在中药研究中的应用_田丽莉
斑马鱼在中药研究中的应用田丽莉，朱国福*（上海中医药大学中药学院，上海201203）［摘要］斑马鱼模型作为一个整体的动物模型，其体积小、高通量、费用低、周期短，且实验结果可靠，在药物研究领域广泛应用。
中药是一个复杂的系统，其有效成分及作用机制是中药现代化发展的研究热点之一，随着先进技术和方法的不断改进，斑马鱼在中药研究中的应用逐渐深入，并且已经在活性筛选、毒理、代谢研究等方面表现出优越性。
该文主要介绍了近年来斑马鱼在中药研究中应用的概况，以期能为中药基础研究提供新的思路和方法。
［关键词］中药；斑马鱼；活性筛选；毒理；代谢［收稿日期］2014-06-13［通信作者］*朱国福，教授，E-mail ：gfz1998@ ［作者简介］田丽莉，博士研究生，E-mail ：lily777@ Application of zebra fishes in studies on traditional Chinese medicinesTIAN Li-li ，ZHU Guo-fu *（School of Chinese Pharmacy ，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine ，Shanghai 201203，China ）［Abstract ］The zebra fish model ，as an integral animal model ，features small volume ，high throughput ，low cost ，short cycle and reliable experimental results ，thus has been widely used in medical studies.Traditional Chinese medicines （TCM ）constitute a com-plex system ，their active ingredients and action mechanisms are among study hotspots in during the development of modern TCMs.Along with the constant improvement of advanced technologies and methods ，zebra fishes have been increasingly applied in studies on TCMs and shown advantages in active screening ，and toxicity and metabolism studies.In this paper ，TCM studies by using zebra fishes in recent years are summarized to provide new ideas and methods for basic studies on TCMs.［Key words ］traditional Chinese medicine （TCM ）；zebra fish ；active screening ；toxicity ；metabolismdoi ：10．4268/cjcmm20150509以实验鱼类进行研究已成为当今药学研究，特别是药物筛选的热门手段［1］。
采用模式生物斑马鱼评价三种中药成分的急性毒性
斑马鱼由南京大学模式生物研究所提供，购回后
先适应性饲养 １ ｗ左右 ，自然死亡率小于 ０５ ，实验 ．％
前一天禁食。取成 体斑 马鱼分 别置 于含 有 ３ ５ ｍ ０～ ０ Ｌ 溶液 的瓶 中 ，保 持 瓶 中溶 液 温 度 恒 定 在 ２ ℃ （± ５
基金项 目：财政部 ２０ ０７年度公益性行业科研 专项 （ ｏ ０ ７ ７０ ） Ｎ ：２ ００ ０ ８
采 用模 式 生物斑 马鱼 评 价 三种 中药成 分 的 急性 毒 性
舒
江苏南京
斌 一，韦英 杰 ，张 陆 勇１ Ａ，江振 洲
２ ００ ；２ １０ ９ ．南京 工业 大学江苏省药物研究所 ，
（ ．中国药科大学新药筛选 中心 ，江苏南京 １
２０ ０ ；３ １０ ９ ．江苏省 中医药研究 院 ，江苏南京
３ ５
２１ ００往
云南 中 医学 院学报
第３ ３卷
ｌ ，随机分为空白对照 ，溶剂对照及各药物浓度给 ￣ Ｃ） 药组 ，每组含 １ 。分别 给予纯净水 ，含 ０５ Ｍ ５条 ．％Ｄ ． ｓ Ｏ的纯净水或含不 同浓度药物的纯净水。
象 的优 良试 验材 料 。 由于 在 毒 性 实 验 上 的应 用 优
势 ，国际标准 化组 织 在 上世 纪 ８ Ｏ年 代 推荐 斑 马 鱼 为毒性 试验 的标准实 验用 鱼 ，其 急性毒 性实 验 已成 为检测水 体污染 的重 要手段 之一 。斑 马鱼也被 经济
合作 开发组织 的指导 手册列 为 了健康毒 性和 环境毒
１ 资料与 方法
１ １ 主 要 试 剂 ．
雷公藤 甲素 （ｒ ｔｌｅ ，中 国 医 学 科 学 院 协 ｔｐｏｄ ） ｉ ｉ 和 医科 大 学 皮 肤 病 研 究 所 （ 苏 ，南 京 ） 惠 赠 ， 江 纯度大 于 ９ ％ ．大黄素 （ｍ ｄｎ ，瑞 雷植 化制 剂 ８ ｅ ｏｉ） 厂 提供 ，含量 ９ ％．苦参 碱 （ ａｉｅ ，江 苏天 晟 ８ ｍ ｔｎ ） ｒ 药业 有 限公 司产 品 ，含量 ９ ％ ．Ｄ Ｓ ８ Ｍ Ｏ为 Ｓ ｍ 公 ｉ ａ ｇ 司产 品 （ 国 ） 美 。超 纯 水 取 自 Ｍｌｐｒ ｉｉ ｅ超纯 水 机 。 ｌｏ 分别 称取 一定量 的 ３种化合 物 ，充分 溶解 于 Ｄ Ｏ ＭＳ 中 ，再按 ０ ５ 比例稀 释 于超 纯水 中 。 ．％
斑马鱼模型动物的应用与前景
斑马鱼模型动物的应用与前景斑马鱼是一种小型热带淡水鱼类，常见于水族箱中。
而近些年来，斑马鱼模型在动物研究领域中被广泛应用。
斑马鱼模型是指将斑马鱼作为实验模型，通过人工操控、基因编辑等方法，研究其生命现象和机制，并应用到医学、药物研发、神经研究、毒理学、转化医学等领域。
一、斑马鱼模型在医学领域中的应用在医学领域中，斑马鱼模型被广泛运用到疾病模型的建立和药物筛选上。
其相较于哺乳动物模型具有价格低廉、生长迅速、繁殖能力强、体型小、幼鱼可透明等优势。
可以通过基因编辑技术将人体疾病相关的基因改变植入斑马鱼模型，从而模拟人体疾病。
如甲状腺激素缺乏症、舌咽神经痛等。
另外，通过药物筛选，可以快速选择出具有治疗作用的药物，为后期的药物研发提供重要的参考。
二、斑马鱼模型在神经研究领域中的应用斑马鱼模型还可以应用到神经研究领域中。
斑马鱼的中枢神经系统结构简单，同时具有高度透明性，可以直接观察到神经系统的发育和变化。
因此，斑马鱼模型被广泛应用到神经元的迁移、突触形成、神经细胞凋亡等神经发育研究上。
以突触发育为例，斑马鱼模型的发育周期较短，可以在较短的时间内观察到突触发育的变化，从而为更深入的神经系统研究提供基础。
三、斑马鱼模型在毒理学研究中的应用近些年来，毒理学研究中，对于环境污染物和化学物质的评估，始终是一个难点。
而且，对于大多数化学物质分析，动物实验又过于昂贵、耗时且对动物损伤较大。
因此，斑马鱼模型的应用被引入到毒理学研究中，成为一种有效、可预测且实用的模型。
其以短期、高通量的特点得到毒理学研究领域的广泛关注。
斑马鱼胚胎在短时间内就能产生反应，快速评估化学物质的毒性，从而增强毒性评估的先进性和准确性。
四、斑马鱼模型在转化医学中的应用斑马鱼模型具有高度的相关性，同时不受哺乳动物模型的限制，因此可以应用到转化医学领域中。
转化医学的概念是将基础研究和临床研究紧密结合，将实验室的研究成果快速转化为临床诊疗效应的新型医疗领域。
斑马鱼模型在药物筛选和毒理学研究中的应用
斑马鱼模型在药物筛选和毒理学研究中的应用斑马鱼是一种普遍存在于淡水水域的小型鱼类，因其身上的黑白相间斑纹而得名。
近年来，斑马鱼模型在生命科学领域中得到广泛应用。
其中，其在药物筛选和毒理学研究中的应用备受关注和重视。
一、斑马鱼模型在药物筛选中的应用斑马鱼种群繁殖速度快、生命周期短，而其胚胎发育过程也非常短暂。
这些特点使得斑马鱼成为一种非常理想的药物筛选模型。
在药物筛选过程中，科学家常常会将化合物加入到斑马鱼的培养基中，然后观察其对斑马鱼发育和生长的影响。
斑马鱼的胚胎发育是一种非常重要的药物筛选指标。
在斑马鱼的胚胎发育过程中，可以通过观察斑马鱼的胚胎发育情况来判断一种化合物对斑马鱼的毒性，以及其对斑马鱼的发育是否有影响。
这种方法被称为斑马鱼毒性筛选法，已成为一种非常流行的毒理学研究手段。
斑马鱼模型在药物筛选和毒理学研究中的应用也促进了“三Rs”原则的实施。
即，减少动物实验、替代动物试验和改善动物试验条件。
斑马鱼模型的使用可以大大减少对实验动物的使用量，从而降低了实验过程中对动物的伤害和死亡率。
二、斑马鱼模型在毒理学研究中的应用斑马鱼模型在毒理学研究中的应用非常广泛，其毒性检测大多数都是通过斑马鱼生长、鉴别、生殖和神经发育等方面的影响来评估的。
1. 斑马鱼模型在生殖毒性检测中的应用斑马鱼的繁殖速度快，产卵量也比较大，因此非常适合用于生殖毒性实验。
生殖毒性测试是检测化学物质对生殖能力和生殖组织的影响的实验。
该实验可以观察斑马鱼繁殖场景是否正常，如是否输卵管或睾丸出现异常等。
2. 斑马鱼模型在鉴别毒性提示中的应用鉴别毒性提示是指生物体在受到某些毒性物质作用后，出现一些生理或行为异常的现象。
通过观察斑马鱼是否出现尾部畸形、脊柱曲度等症状，可以知道这种化学物质是否有鉴别毒性提示。
3. 斑马鱼模型在神经毒性检测中的应用斑马鱼在神经系统研究中也起着重要作用。
斑马鱼胚胎发育过程中，神经系统的形成是非常显著的。
因此，斑马鱼胚胎对于神经毒性物质的敏感度很高。
斑马鱼在药理学实验教学中的应用研究
斑马鱼在药理学实验教学中的应用研究作者：孙文龙宋新华来源：《教育教学论坛》2020年第47期[摘要]我国已经进入慢病时代，医药学专业需要加强与慢病相关的医药学人才的培养。
但是现行医药学相关专业慢病药物的相关药理学实验开设极少，同时使用传统的模式生物如小鼠等存在诸多缺陷。
针对慢病药物开设相关的药理学实验和引入新的模型生物势在必行。
模式生物斑马鱼用于慢病药物药理研究具有诸多优势，可以用于开设多种慢病药物的药理学实验课。
文章系统论证了慢病药物药理学实验开设的必要性和所存在的问题，并把斑马鱼作为模式生物用于慢病药物药理学实验，阐述了引入斑马鱼实验的必要性和优势，进行了慢病药物药理学实验设计，分析了斑马鱼在慢病药物药理学实验教学中暴露出来的问题，并提出了解决方案，为今后更好地开展相关实验教学工作提供经验和依据。
[关键词]药理学实验;斑马鱼;慢病[基金项目]2018-2020年山东理工大学实验研究项目“斑马鱼繁殖、胚胎观察、酒精肝诱导系列试验”[作者简介]孙文龙（1988—），男，黑龙江大兴安岭人，工学博士，山东理工大学生命科学学院讲师，主要从事天然药物抗糖脂代谢类疾病机制研究;宋新华（1975—），女，山东淄博人，理学硕士，山东理工大学生命科学学院副教授，主要从事生物教学方法研究。
[中图分类号] R96;G642 [文献标识码] A [文章编号] 1674-9324（2020）47-0-03 [收稿日期] 2020-07-23医药行业关系着广大人民群众的生存和生活质量，是一个永不落幕的朝阳产业。
高校一系列专业如药学、医学、制药工程等为医药行业培养着一批又一批有志青年。
医药行业的发展始终需要符合人民健康需求，需要随着时代特征不断变换发展侧重点，医药学相关专业课程也需要符合医药行业发展。
慢性非传染性疾病（慢病）已经成为威胁我国人民生命健康的首要疾病，其治疗费用超过我国卫生总支出的70%，慢病相关领域已经成为医药行业中心领域之一，所以顺应时代需要，开设慢病相关药理学实验项目已经迫在眉睫。
斑马鱼模型在研究人类疾病中的应用
斑马鱼模型在研究人类疾病中的应用斑马鱼，一种来自东南亚的淡水鱼，具有生殖力强、繁殖周期短、生长快等特点，近年来被广泛地用于研究生物医学问题。
由于斑马鱼与人类的生物学相似度高，可以模拟人类疾病，成为了一种理想的模型生物。
本文将从斑马鱼模型的优点、应用领域和研究进展三个方面阐述其在研究人类疾病中的应用。
一、斑马鱼模型的优点1. 生长速度快：斑马鱼从胚胎分化到成鱼，只需要三个月左右时间，相比之下哺乳动物的生命周期要长得多。
这使得斑马鱼成为研究生物学问题的一种快速方法。
2. 透明度高：与哺乳动物不同，斑马鱼在硬膜内腔中胚胎发育过程可以直接观察到，使得研究者可以轻松地观察斑马鱼器官和各个系统的发育情况，也可以观察到被注射进斑马鱼的细胞和分子形态。
3. 基因编辑容易：斑马鱼的基因编辑可以通过诱导外源基因或者利用现有的基因编辑技术来实现，这使得研究者可以在斑马鱼中轻松地编辑和观察各种基因的表达。
4. 与人类同源性高：斑马鱼的DNA序列与哺乳动物的DNA序列有很大的相似之处，例如约有70%的斑马鱼基因可以在人类中找到相关的基因，这意味着研究者可以通过斑马鱼模型来模拟人类疾病。
二、斑马鱼模型在哪些领域中应用广泛1. 肿瘤研究：斑马鱼在肿瘤研究中的应用很广泛，研究人员可以利用肿瘤生长发育的分子机制，进行肿瘤抑制和防治等相关研究。
在肿瘤细胞内，斑马鱼的繁殖速度非常快，能够进行大规模的实验和筛选。
2. 生殖生物学研究：斑马鱼在生殖生物学研究中的应用也非常广泛。
在该领域，斑马鱼的特点为生殖速度快、产卵量大、卵胚发育迅速，研究者可以通过观察斑马鱼的胚胎发育过程，探索人类胚胎发育的分子机制。
3. 神经生物学研究：斑马鱼的神经生物学研究可以通过科学家对其神经系统基因编辑来进一步探讨人类神经系统疾病的研究。
此外，在工业品污染、化学物品毒性等研究领域中，斑马鱼也具有重要意义。
4. 染色体研究：基因编辑技术可以用来研究损失或增加染色体信息对健康和疾病的影响。
斑马鱼在生命科学中的应用
斑马鱼在生命科学中的应用斑马鱼，在普通人的眼中可能只是一种普普通通的小鱼。
但在生命科学领域，斑马鱼的作用却是越来越重要的。
自从20世纪80年代初斑马鱼被科学家们发现可以用来作为实验室动物以来，它就成为了生命科学领域中的又一把"神器"。
1. 斑马鱼在基因研究中的应用斑马鱼是一种小型鱼类，它们的生命周期相对短，一般只有3-4个月，而且繁殖力强，每次产卵数可达到200-300粒。
这一点与小鼠相似，小鼠的这些特性使它成为了许多基因实验的最佳模型。
同样的，在斑马鱼身上，科学家们也可以毫不费力地轻松显示和分类出不同基因变化对生理功能的影响，从而研究基因在机体各个方面的作用。
2. 斑马鱼在药物研究中的应用除了基因研究外，斑马鱼在药物研究中的应用也是十分突出的。
药物毒性的研究是药物研发过程的第一步。
通过斑马鱼模型，科学家们可以得到大量的数据，来分析药物的毒性和药效，从而更好地评估药物是否可行。
此外，斑马鱼在药物筛查中也扮演着重要角色。
它们的快速生长和繁殖能力，使得斑马鱼可以很快地检验许多候选药物的有效性和安全性，并对药物的吸收、分布、代谢和排泄进行细致的研究，从而减少了药物研发的时间和成本。
3. 斑马鱼在癌症研究中的应用斑马鱼在癌症研究中同样为生命科学领域的科学家们提供了更佳的解决方案。
例如，科学家们可以将人体胰腺癌细胞注入斑马鱼中，利用胰腺癌细胞在斑马鱼的体内的生长情况以及对身体器官的影响来验证一种治疗方法，从而洞察治疗方法的有效性。
由于胰腺癌的模型很难在小鼠身上成功建立，因此斑马鱼成为了更为适合的研究对象。
4. 斑马鱼在神经系统研究中的应用斑马鱼还为神经系统研究提供了更为广阔的视野。
因为斑马鱼的神经系统与人类的神经系统相似，而且比其他生物的神经系统更为易于视觉观察，所以它成为了神经科学领域中极为重要的实验模型。
研究人员已经成功地使用斑马鱼模型研究了包括帕金森氏症、脊髓肌肉萎缩症在内的多个神经退行性疾病，并得出了一些大胆而且有效的解释结果。
基于斑马鱼模型的中药代谢研究思路与方法
基于斑马鱼模型的中药代谢研究思路与方法
基于斑马鱼模型的中药代谢研究可以按照以下思路和方法进行：
1. 中药制剂的准备：选择合适的中药制剂，并按照常规方法准备好用于斑马鱼投药实验的中药溶液。
2. 斑马鱼实验：选取成年健康的斑马鱼，将其随机分为实验组和对照组。
实验组斑马鱼接受给药处理，对照组斑马鱼接受相同的处理但不给药。
给药方式可以是饲料添加剂或稀释后的中药溶液。
3. 中药代谢分析：收集给药后一定时间内斑马鱼的生物样本，如血液、组织或粪便等。
可以采用质谱、液相色谱等分析方法，对样本进行代谢物组成分析。
4. 代谢物鉴定：通过与已知的中药代谢物或标准物质的对比，利用质谱图谱和色谱保留时间等特征，鉴定出中药在斑马鱼体内产生的代谢物。
5. 代谢动力学研究：通过测定不同时间点的代谢物浓度变化，计算代谢物的半衰期、药代动力学参数等，进一步了解中药在斑马鱼体内的代谢过程和消除速度。
6. 生物活性评估：利用斑马鱼模型进行生物活性评估，观察中药代谢物对斑马鱼的影响，如发育、行为、生殖能力等方面的变化。
以上是基于斑马鱼模型的中药代谢研究的一般思路和方法，具体操作可能还需要根据具体的实验目的和中药特性进行调整和优化。
斑马鱼模型在生物学研究中的应用及其优势探讨
斑马鱼模型在生物学研究中的应用及其优势探讨斑马鱼是著名的水生模式动物，是现代遗传学研究和药物筛选的重要研究对象。
斑马鱼在神经科学、人类疾病模型研究、发育生物学等领域具有广泛的应用前景。
本文将从斑马鱼的特点、应用优势、疾病模型和药物筛选等几个方面探讨其在生物学研究中的重要意义。
一、斑马鱼的特点与应用优势斑马鱼生活在水中，其透明的胚胎和小型身材使得对研究者和研究器材的要求较低，同时斑马鱼在短时间内就能完成胚胎发育，且有着高度的繁殖力。
这些都是斑马鱼成为生物学研究模型的重要原因。
此外，斑马鱼是雌雄异体，受精卵可以在几个小时之内形成、孵化和成熟。
在早期的幼鱼期，斑马鱼逐渐获得了自主进食和游动的能力，这使得研究者可以进行克隆和基因敲除等研究。
另外，斑马鱼是脊椎动物，其组织结构、器官发生和功能与人类相似，可以为人类疾病模型研究提供重要参考。
同时，斑马鱼也是免疫系统不成熟的动物，不需要复杂的抗体制备过程，也没有人体实验中的道德问题。
这些特点使得斑马鱼在生物学研究中有着广泛的应用前景。
二、斑马鱼在疾病模型研究中的应用1. 神经科学领域斑马鱼的神经系统结构与哺乳动物基本相同，其胚胎发育期间神经发育迅速，易于观察和记录。
在神经科学领域，斑马鱼主要被用于研究神经元的生理学和形态学，对于神经胶质疾病模型的研究也具有重要意义。
斑马鱼在多种神经系统疾病模型研究中都有着广泛的应用，例如阿尔茨海默病、帕金森氏病、儿童脑性瘫痪等。
2. 单基因病模型研究斑马鱼天然群体基因表达具有显著的变异性，这对于遗传性疾病的研究非常重要。
例如，在斑马鱼中研究了囊性纤维化和肾脏病等遗传疾病的模型，这对于开发针对该类疾病的治疗方案非常有帮助。
三、斑马鱼在药物筛选中的应用斑马鱼的快速发育和透明的胚胎，使其成为药物筛选的重要研究对象。
例如，在感染性疾病研究中，研究者在斑马鱼体内研究了多种细菌感染模型，研究药物的抗菌能力和毒副作用。
此外，斑马鱼体积较小，药物剂量需求较低，节约了研究资源，并能够加速药物发现和研发。
斑马鱼在生命科学研究中的应用
斑马鱼在生命科学研究中的应用斑马鱼是一种小型的热带淡水鱼类，它在生命科学研究中有着广泛的应用。
作为模式生物，这种鱼类可用于研究各种生物过程的机制，包括发育、再生和感染等。
在本文中，我们将探讨斑马鱼在生命科学研究中的应用及其重要性。
一、斑马鱼的基本特征和优点斑马鱼在生物学界是一个备受瞩目的模式生物。
这种鱼类的大小约为3.5厘米，一般寿命为2-3年。
它的简单型态和发育机理使得斑马鱼成为生命科学领域的重要研究对象。
此外，斑马鱼的优点还包括：1. 短周期快速成熟：斑马鱼的生殖周期短，每年可以产卵多次，而且发育迅速，只需要2-3天就可以孵化。
这个特性可以为研究人员提供大量的实验数据。
2. 生殖方式丰富：斑马鱼的生殖方式又泳动复杂和单纯的交配两种方式，这两种方式的存在又许多研究的方向。
3. 透明且可观察性强：斑马鱼在早期发育阶段为透明，这样质子在显微镜下容易被观察。
此外，它的胚胎发育过程短，只需两天就可以完成。
4. 基因治疗研究利器：斑马鱼拥有大量与人类同源的基因，可用于研究与人类相关的疾病和药物疗法。
5. 容易饲养: 斑马鱼简单易饲养，成本低，数量多。
二、斑马鱼在研究发育和遗传方面的应用斑马鱼因其胚胎发育阶段的透明，被广泛用于发育研究。
斑马鱼的早期胚胎非常透明，这使得它们的神经发育可以被轻松观察。
科学家们可以将神经标记物标记到斑马鱼的内皮细胞和神经系统细胞中，以观察它们的运动情况。
这种研究方法在研究神经退化疾病以及癌症等疾病方面有着重要的应用价值。
斑马鱼还可用于研究遗传学。
由于斑马鱼基因与人类基因非常相似，因此它们被广泛用于研究基因组的相互作用和表达。
举个例子，研究人员可以将人类基因序列植入斑马鱼基因组中，以研究人类基因的功能及其与其他基因和环境之间的相互作用。
这种方法被称为转基因鱼。
三、斑马鱼在药物发现和治疗研究中的应用斑马鱼可用于新药发现和针对性药物治疗研究。
在此方面具体的例子包括斑马鱼在研究新型抗生素和癌症治疗药物方面的应用。
斑马鱼模型在疾病研究中的应用
斑马鱼模型在疾病研究中的应用斑马鱼是一种常见的热带淡水鱼类，其身体呈流线型，有五彩斑纹，被誉为水族箱的明星。
但是，你有没有想过，这个看似平凡的小鱼，却有着非凡的魅力？实际上，斑马鱼模型已被广泛应用于疾病研究中。
它的生命周期短、维护费用低、繁殖能力强，并且与人类的基因共享高达80%的相似性，这些特点使得斑马鱼成为理想的生物模型。
一、斑马鱼模型在基因研究中的应用斑马鱼作为生物模型，最重要的用途莫过于在基因研究中的应用了。
近年来，在斑马鱼模型中，已经发现了许多与人类疾病相关的基因。
首先，斑马鱼作为脊椎动物模型，在基因表达上有着非常高的相似性。
因此，通过基因编辑技术，科学家可以在斑马鱼中模拟许多人类疾病，以便更好地了解疾病的发生机制。
不仅如此，斑马鱼还能够帮助科学家发现新的疾病基因。
科学家可以通过研究斑马鱼基因变异体，探寻与人类疾病相关的基因，并通过相关技术获得具有足够强度的证据，最终随着研究的深入，成功挖掘出了许多新的疾病基因。
二、斑马鱼模型在药物研究中的应用除了基因研究，斑马鱼更是被应用于药物研究中。
在药物研发初期，科学家可以利用斑马鱼模型，在体内进行大规模的药物筛选，快速发现具有潜在药效的分子。
相比较于传统的小鼠模型，斑马鱼模型可以更快速、更便捷地从全身水平研究生物相应变化。
并且，其周期短，更加节省时间和成本。
不仅如此，相比小鼠模型，斑马鱼模型的规模更为适宜，并且各个器官和肝脏的代谢率等参数也更容易掌握。
因此，对于小分子药物、化学物质的机理研究，斑马鱼模型也具有不可替代的优势。
三、斑马鱼模型在心血管研究中的应用除了前两点，斑马鱼模型还被广泛地应用于心血管研究中。
在这个领域中，斑马鱼模型的可塑性非常高，研究人员可以通过基因编辑技术，模拟出许多不同类型的心血管疾病，例如心肌病、心脏瓣膜疾病等等。
此外，斑马鱼模型还能够帮助科学家模拟人类心血管系统中的血管生成、血流动力学等生理过程 - 通过光学方法，科学家可以实时观察斑马鱼体内血流的变化，并对其进行非常详细的研究和分析，最终为心血管疾病的研究提供了有益的参考。
斑马鱼在生物医学中作为模式动物之应用
斑马鱼在生物医学中作为模式动物之应用斑马鱼（Danio rerio）作为一种模式动物，在生物医学研究中发挥着重要的作用。
它们具有许多优点，如短期繁殖周期、透明的胚胎和可观察的器官，使得科学家能够进行详细而精确的实验观察。
在生物医学研究中，斑马鱼被广泛应用于遗传学、发育生物学、药物筛选和疾病模型等领域，为人类健康和疾病治疗提供了重要的启示。
斑马鱼作为一个模式动物，其繁殖周期短，雌性一般每周可产卵一次，每次产卵数量可达几十甚至上百粒，从受精到发育成鱼只需约48小时。
这一特性使得科学家能够快速观察和研究斑马鱼胚胎的发育过程。
胚胎发育期间，其透明度高，科学家能够通过显微镜观察到各个器官的形成，甚至可以实时观察到血液的流动。
这种透明度为科学家们提供了一个非常有利的观察和研究动物发育过程的平台。
斑马鱼在生物医学研究中的另一个重要应用领域是遗传学。
由于斑马鱼的基因组与人类的基因组高度保守，约有70%的人类基因在斑马鱼中也能找到对应的基因。
这使得科学家能够通过基因转导技术，将人类基因转入斑马鱼中，研究这些基因的功能和影响。
通过观察转基因斑马鱼的表型变化，科学家能够深入理解这些基因在发育、生理和疾病中的作用。
此外，斑马鱼的基因组较小，使得基因敲除、基因转导等研究技术更加方便和高效。
斑马鱼作为药物筛选的模式动物也发挥着重要作用。
科学家们利用斑马鱼的胚胎透明度和快速生长的特点，将其用于对药物的毒性和药效进行初步筛选。
通过观察药物对斑马鱼胚胎的影响，科学家能够初步评估药物的安全性和效果。
此外，斑马鱼的胚胎在短时间内能够吸收药物，使得科学家能够迅速获得结果。
这种药物筛选的方法节省时间和成本，并在一定程度上替代了对小鼠等动物的使用，为药物研发提供了效率和可靠性。
斑马鱼作为疾病模型动物的应用也非常重要。
科学家们利用斑马鱼基因组的保守性，成功开发了多种疾病模型。
例如，斑马鱼可用于研究心血管疾病、神经系统疾病、肌肉疾病和肿瘤等多种疾病。
基于模式生物斑马鱼创立中药壮骨效应评价新模型的思路与方法
中药 为 一 个 复 杂 的科 学 体 系 ，化 学 成 分 复 杂 ，
通过 多途径 、 多环节作 用于多靶点 产生整体调节而 发挥作 用 ， 整体观思 想是 中药研究 的一大特点 。模 式 生物是指在人们研 究生命现象 过程 中长期 、 反 复 作 为研究材料 的物种 ， 从 这 个 物 种 研 究 中得 出 的许 多生命活动规律 往往代表 了许 多物种共 同的规 律 。 其 中斑 马鱼 （ Ｚ ｅ ｂ ｒ ａ ｆ ｉ ｓ ｈ ） 较其它模式 生物具备完 整的 器官 、 系统及 酶系 ， 是进行药物高 通量筛选 、 药理 毒 理研 究 等 的理 想 模 型 。采 用 模 式 生 物 斑 马 鱼 建 立 壮 骨 效 应 评 价 新 模 型 ，有 望 实 现 体 现 中药 整 体 观 的 ， 兼具体 内、 体外模型优势 的 ， 高效 、 灵敏地评价 中药 壮 骨 效应 的 目标 。
ｋ★ 通讯 作者 ： 韦英杰， 副研 究员， 主要研 究方 向： 中药物质基础与质量控制研究 ； 贾晓斌 ， 研 究员， 主要研 究方向 ： 方剂物质基础与现代 中药制剂创
－
新研 究以及 中药 Ａ ＤＭＥ ／ Ｔ ｏ ｘ 技 术平台及其在 中药研究 中应用。
［ Ｗｏ ｒ ｌ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ￣ Ｍｏ ｄ ｅ ｒ ｎ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆＴ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｏ ｉ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ａ ｎ ｄＭａ ｔ ｅ ｎ ａ Ｍｅ ｄ ｗ ａ ］ １ ９ ６
大 ，活 性 筛 选 效 率 低 ；现 有 细 胞 模 型 作 用 环 节 单
一
增加 ， 一 般 的实验 室Байду номын сангаас具备 条件 。二是 化合物 的数 量 问题 。 由于 中药成分复 杂 ， 很难分离 到能满足体
采用模式生物斑马鱼评价三种中药成分的急性毒性
采用模式生物斑马鱼评价三种中药成分的急性毒性舒斌;韦英杰;张陆勇;江振洲【期刊名称】《云南中医学院学报》【年(卷),期】2010(033)001【摘要】目的:以模式生物斑马鱼为实验对象,观察3种中药有效成份雷公藤甲素、大黄素和苦参碱的急性毒性.方法:将药物添加到鱼只生活的水中为给药方式,观察给药后24h鱼只的死亡情况,以此为判断待测药物毒性大小的依据,并用Bliss法计算各药物对斑马鱼的半数致死浓度(LC50).结果:雷公藤甲素、苦参碱和大黄素对于斑马鱼的LC50值依次为5.02×10-3、113.2和1.18×103μg,/mL,毒性大小顺序与文献报道基本一致.结论:以斑马鱼作为初步评价药物毒性的模型可用于中药成分毒性的快速筛选和评价.【总页数】3页(P35-37)【作者】舒斌;韦英杰;张陆勇;江振洲【作者单位】中国药科大学新药筛选中心,江苏南京,210009;南京工业大学江苏省药物研究所,江苏南京,210009;江苏省中医药研究院,江苏南京,210028;中国药科大学新药筛选中心,江苏南京,210009;中国药科大学江苏省药效研究与评价服务中心,江苏南京,210009【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.基于模式生物斑马鱼创立中药壮骨效应评价新模型的思路与方法 [J], 韦英杰;王长梅;詹扬;贾晓斌2.采用模式生物斑马鱼评价药物抗骨质疏松的研究 [J], 薛长松;张立秋;武子敬3.基于斑马鱼模式生物的中药主要成分抑制血管生成的活性筛选 [J], 周玲晓;彭维兵;付先军;刘可春;王振国4.模式生物斑马鱼在中药活性筛选和毒性评价中的应用进展与展望 [J], 李懿;刘夏进;宿树兰;余黎;朱悦;钱大玮;赵明;段金廒5.三种中药活性成分对吗啡依赖斑马鱼脑中dre-miR-723-5p表达的影响 [J], 朱晨;林汝堃;区炳雄;陈志杰;罗超华;莫志贤;李璟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于斑马鱼模型的疾病模型建立和药物研发
基于斑马鱼模型的疾病模型建立和药物研发针对不同疾病，如何建立科学合理的疾病模型，进而进行药物研发，一直是生物医药领域的研究热点。
在模型建立方面，斑马鱼作为一种小型、繁殖快、供体量大的模式生物，越来越受到关注。
本文将介绍利用斑马鱼模型建立疾病模型及相关药物研发的进展。
一、斑马鱼模型在生物医学领域的应用斑马鱼，体型小、生长快，且生命周期短，繁殖能力强，成为珍贵的实验模型生物。
相比于大规模实验所需的多种仪器和设备，斑马鱼实验更为便捷和高效。
此外，斑马鱼的胚胎形态发生非常标准，且胚胎的透明度高，便于观察各种细胞和器官的形成和发育。
斑马鱼特有的优势，使得其在许多生物医学研究领域得到了广泛应用。
二、斑马鱼模型在疾病模型建立中的应用近年来，斑马鱼模型被用于众多疾病的建模，如神经系统疾病、艾滋病、心脏病、癌症等等。
利用斑马鱼建立疾病模型，其主要优势有：1. 易于成像：斑马鱼模型因胚胎透明，利用内窥镜等设备可直接观察内部器官的变化，易于进行各种形态学和生理学观察。
2. 模拟人体代谢：斑马鱼与人类的生物行为和代谢过程十分相似，特别是与人类骨骼、心血管、神经系统、免疫系统等的相似性，使得其成为一种理想的模型生物。
3. 繁殖能力高：斑马鱼繁殖快、体积小、代谢率高，可大大提高疾病模型的成本效益比。
一些疾病，如人类的阿尔茨海默病，保持该疾病的发展需要嵌入复杂的基因和环境因素，这些因素在外部环境中不容易控制，但在斑马鱼胚胎中进行遗传操纵，则可实现对疾病的更精确的控制。
斑马鱼模型的发展，为提高疾病研究效率、加速新药研发提供了长足进步。
三、药物研发的关键应用在基于斑马鱼模型建立的疾病模型中，药物研发是非常关键的一步。
在过去的一段时间内，斑马鱼中许多治疗人类疾病的药物发现都获得了重要的成就。
与其他体内发育较慢的动物相比，斑马鱼会快速暴露药物的作用及其毒性。
其次，斑马鱼模型适用于大规模药物筛选和药物研发。
药目上千，而对人类疾病治疗有前景的仅有百分之一左右，这使得药物发现的速度和成本非常重要。
斑马鱼模型在基础医学和疾病研究中的应用
斑马鱼模型在基础医学和疾病研究中的应用斑马鱼（zebrafish）作为一种小型淡水鱼，在科学研究中扮演着重要的角色。
它们具有快速生长、透明胚胎和相对低廉的养殖成本等优点，使得它们成为生物学家们探究基础医学和疾病研究的理想模型。
在近年来的研究中，斑马鱼被广泛应用于药物筛选和研究中。
因为斑马鱼与哺乳动物有着相似的生态环境和哺乳动物的遗传特征，它们的药理学性质和疾病模型具有高度可靠性。
此外，斑马鱼拥有极高的生殖能力，且每胎产卵数量多，已成为药物筛选和疾病治疗研究的神器。
其中，斑马鱼模型在基础医学研究中的应用也备受重视。
研究人员们可以通过操纵斑马鱼的基因组，来研究基因与发育、生长、行为和环境因素之间的关系。
此外，利用斑马鱼胚胎的透明度，科学家们还可以直接观察到疾病的发展过程，这为疾病的早期预测和治疗提供了很大便利。
举个例子，斑马鱼模型在肥胖研究中的应用，为这一领域的研究者们开启了新的突破口。
通过斑马鱼模型，研究人员可以研究肥胖与心血管疾病、糖尿病等相关疾病之间的关系，这些都是全球范围内日益严重的常见疾病。
通过对斑马鱼模型进行肥胖相关基因的研究，科学家们可以揭示肥胖相关发生机制，并为肥胖相关疾病的研究提供更多的线索。
斑马鱼模型还广泛用于癌症研究中。
很多癌症都是由基因突变引起的，斑马鱼模型可以帮助研究人员理解这些突变的发生机制，进而开发出更加精确的治疗方案。
例如，通过操纵斑马鱼胚胎的基因组，研究人员可以快速筛选出抗肿瘤的新药，为开发更有效的抗肿瘤药物提供了技术支持。
斑马鱼模型在心血管疾病研究中的应用也备受瞩目。
心血管疾病是全球范围内的最大杀手之一，不仅疾病前期难以察觉，而且治疗方式相对单一。
而斑马鱼模型则可以通过模拟人类心血管疾病相关基因的突变和表达，以便研究心脏疾病及心血管相关的药物筛选。
总而言之，斑马鱼模型的应用从基础医学研究到疾病治疗，均有广泛的应用前景，为人们提供了更加全面深入的研究模型。
未来，我们有理由相信，基于斑马鱼模型的研究将会进一步深入，为人类健康事业提供更多的技术支持和科学依据。
药学研究中动物模型的选择与应用
药学研究中动物模型的选择与应用药学研究中，动物模型是不可或缺的重要工具之一。
通过合适的动物模型，研究人员可以更好地理解和评估药物的有效性、毒副作用以及药物在不同病理条件下的行为。
本文将介绍药学研究中动物模型的选择与应用，旨在为研究人员提供指导和参考。
动物模型的选择原则选择适当的动物模型是药学研究中至关重要的一步。
以下是一些常见的动物模型选择原则：1. 动物特征与人类相似度为了更好地预测和评估药物在人类身上的效果，动物模型应具备与人类相似或接近的特征。
这包括动物和人类在解剖结构、生理功能和遗传信息等方面的共性。
例如，在心脏病研究中，小鼠常被选作模型，因为其心脏结构和功能与人类有相似之处。
2. 疾病模型的准确性药学研究通常需要基于某种特定的疾病模型进行。
因此，所选动物模型应能够准确地反映目标疾病的发展和表现。
例如，在癌症治疗研究中，使用合适的癌症细胞移植模型可以更好地评估药物对肿瘤生长和转移的影响。
3. 可重复性和可操作性动物模型应具备可重复性和可操作性，以满足科学实验要求。
即使是最理想的动物模型，在实验过程中也可能出现误差和个体差异。
因此，所选动物模型应保证实验结果的可靠性，并便于进行操作和控制。
4. 倫理問題與合規要求在选择动物模型时，需要考虑到相关倫理問題和合規要求。
对于某些需要使用大量动物且有争议性的实验，例如转基因动物实验，应遵循相关的道德规范，并取得必要的许可和审批。
常见的动物模型在药学研究中，有许多常见的动物模型被广泛应用。
下面列举了几个常见的例子：1. 小鼠（Mouse）小鼠是最常用的动物模型之一，在多个领域都有广泛应用。
小鼠具有很高的遗传相似性、生育力强以及容易进行基因编辑等优点。
它们广泛应用于癌症、心血管、代谢性疾病等领域的药学研究。
2. 斑马鱼（Zebrafish）斑马鱼是近年来越来越受欢迎的模式生物之一。
它们拥有透明胚胎、快速发育和大批量生成等特点，适合进行高通量筛选以及显微成像分析。
五子衍宗丸的药效挖掘及斑马鱼实验验证
五子衍宗丸的药效挖掘及斑马鱼实验验证赵晨１ꎬ杨怡雯２ꎬ王洪平１ꎬ彭平１ꎬ尹琼１ꎬ肖婷婷１ꎬ徐懿乔２(１.北京同仁堂股份有限公司科学研究所ꎬ北京１０００７９ꎻ２.杭州环特生物科技股份有限公司ꎬ浙江杭州３１００５１)摘要:目的㊀研究药物与疾病的关联并利用斑马鱼模型加以验证ꎬ挖掘五子衍宗丸潜在的适应证ꎮ方法㊀收集五子衍宗丸活性成分及靶点ꎬ通过组织特异性和药物－疾病通路关联分析确定研究方向ꎬ基于模式生物斑马鱼进行活体试验验证ꎮ结果㊀收集五子衍宗丸相关靶点１４４１个ꎬ靶点作用部位可能与神经系统㊁生殖㊁代谢㊁癌症以及肾脏功能等相关ꎮ药物－疾病通路关联分析表明ꎬ阿尔茨海默病和糖尿病为五子衍宗丸潜在研究方向ꎮ斑马鱼降糖药效试验表明ꎬ五子衍宗丸可以降低斑马鱼葡萄糖水平并改善糖尿病神经病变ꎮ防治阿尔茨海默病药效试验表明ꎬ五子衍宗丸可以改善斑马鱼反应能力ꎬ恢复运动功能ꎬ可能与抑制乙酰胆碱酯酶活性有关ꎮ结论㊀将计算二次开发的方法和生物验证相结合ꎬ发现五子衍宗丸对糖尿病及阿尔茨海默病有一定的治疗效果ꎬ为五子衍宗丸的二次开发提供了参考ꎮ关键词:五子衍宗丸ꎻ斑马鱼ꎻ糖尿病ꎻ活性成分ꎻ阿尔茨海默病中图分类号:Ｒ２８５.５㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２４)０３－０２２７－００６ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２４.０３.００４ＥｆｆｉｃａｃｙｍｉｎｉｎｇａｎｄｚｅｂｒａｆｉｓｈｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｆｆｉｃａｃｙｏｆＷｕｚｉＹａｎｚｏｎｇＰｉｌｌＺＨＡＯＣｈｅｎ１ꎬＹＡＮＧＹｉｗｅｎ２ꎬＷＡＮＧＨｏｎｇｐｉｎｇ１ꎬＰＥＮＧＰｉｎｇ１ꎬＹＩＮＱｉｏｎｇ１ꎬＸＩＡＯＴｉｎｇｔｉｎｇ１ꎬＸＵＹｉｑｉａｏ２(１.ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅꎬＢｅｉｊｉｎｇＴｏｎｇｒｅｎｔａｎｇＣｏ.ꎬＬｔｄ.ꎬＢｅｉｊｉｎｇ１０００７９ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＨａｎｇｚｈｏｕＨｕｎｔｅｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｃ.ꎬＨａｎｇｚｈｏｕ３１００５１ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｄｒｕｇｓａｎｄｄｉｓｅａｓｅｓａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＷｕｚｉＹａｎｚｏｎｇＰｉｌｌｂｙｕｓｉｎｇｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＴｈｅａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓａｎｄｔａｒｇｅｔｓｏｆＷｕｚｉＹａｎｚｏｎｇＰｉｌｌｗｅｒｅｃｏｌ￣ｌｅｃｔｅｄꎬａｎｄｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｄｉｒｅｃｔｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｉｓｓｕｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄｄｒｕｇ－ｄｉｓｅａｓｅｐａｔｈｗａｙａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ.Ｉｎｖｉｖｏｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｗｅｒｅｃｏｎｄｕｃｔｅｄｂａｓｅｄｏｎｍｏｄｅｌｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｚｅｂｒａｆｉｓｈ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀１４４１ｔａｒｇｅｔｓｒｅｌａｔｅｄｔｏＷｕｚｉＹａｎｚｏｎｇＰｉｌｌｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ.Ｔｈｅｔａｒｇｅｔｓｉｔｅｓｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍꎬｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎꎬｍｅｔａｂｏｌｉｓｍꎬｃａｎｃｅｒꎬｋｉｄｎｅｙｆｕｎｃｔｉｏｎꎬｅｔｃ.Ｔｈｅｃｏｒｒｅ￣ｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｒｕｇ－ｄｉｓｅａｓｅｐａｔｈｗａｙｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅａｎｄｄｉａｂｅｔｅｓｗｅｒｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｒｅｓｅａｒｃｈｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓｆｏｒＷｕｚｉＹａｎｚｏｎｇＰｉｌｌ.ＴｈｅｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃｅｆｆｉｃａｃｙｔｅｓｔｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＷｕｚｉＹａｎｚｏｎｇＰｉｌｌｃｏｕｌｄｒｅｄｕｃｅｔｈｅｇｌｕｃｏｓｅｌｅｖｅｌｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ.ＥｆｆｉｃａｃｙｔｅｓｔｆｏｒｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＷｕｚｉＹａｎｚｏｎｇＰｉｌｌｃａｎｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈａｎｄｒｅｓｔｏｒｅｍｏｔｏｒｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎꎬｗｈｉｃｈｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＣｏｍｂｉｎｉｎｇｔｈｅｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌｓｅｃｏｎｄａｒｙｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓｗｉｔｈｔｈｅｚｅｂｒａｆｉｓｈａｃｔｉｖｉｔｙｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔꎬｉｔｉｓｆｏｕｎｄｔｈａｔＷｕｚｉＹａｎｚｏｎｇＰｉｌｌｈａｓｃｅｒｔａｉｎｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｎｄｉａｂｅｔｅｓａｎｄＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅꎬｗｈｉｃｈｐｒｏｖｉｄｅｓｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄａｒｙｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＷｕｚｉＹａｎｚｏｎｇＰｉｌｌ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＷｕｚｉＹａｎｚｏｎｇＰｉｌｌꎻＺｅｂｒａｆｉｓｈꎻＤｉａｂｅｔｅｓꎻＡｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓꎻＡｌｚｈｅｉｍｅｒᶄｓｄｉｓｅａｓｅ㊀㊀五子衍宗丸由枸杞子㊁菟丝子㊁覆盆子㊁五味子㊁车前子组成[１]ꎬ为中医补肾固精助肾阳的经典方ꎮ五子衍宗丸本为补肾填精所设ꎬ在中医辨证论治观与 异病同治 思想的指导下ꎬ凡是肾虚精亏之证均可采用五子衍宗丸治疗[２]ꎮ斑马鱼既具有细胞等体外实验用药量少㊁实验㊀基金项目:北京市科技计划(Ｎｏ.Ｚ２０１１００００５４２０００５)作者简介:赵晨ꎬ女ꎬ硕士ꎬ助理研究员ꎬ研究方向:中药新药研发ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｚｈａｏ＿ｃｈｅｎｃ＠１６３.ｃｏｍ费用低㊁周期短㊁高通量等特点ꎬ又具备整体动物实验可观察多个器官㊁评价药效学㊁药动学以及可评价代谢物活性等优势[３]ꎮ目前基于已知疾病机制而建立的斑马鱼模型在生物医学的诸多领域快速发展ꎬ也应用于心血管疾病㊁神经系统疾病㊁糖尿病㊁视网膜疾病㊁感染性疾病㊁骨质疏松等诸多临床常见病ꎬ并在抗癌㊁抗血栓与止血等领域得到应用[４]ꎮ本研究应用计算二次开发的方法和生物验证相结合ꎬ研究药物与疾病的关联并利用斑马鱼模型加以验证ꎬ挖掘五子衍宗丸潜在的适应证ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀仪器㊀ＡＺ１００电动聚焦连续变倍荧光显微镜(Ｎｉｋｏｎ公司)ꎻＡＣＣＵ－ＣＨＥＫＰｅｒｆｏｒｍａ血糖仪(罗氏诊断产品有限公司)ꎻＴＧ１６Ｇ高速离心机(上海依赫生物科技有限公司)ꎻＺｅｂｒａＬａｂ３.１１行为分析仪(ＶｉｅｗＰｏｉｎｔ公司)ꎮ１.２㊀试剂与试药㊀五子衍宗丸(同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂)ꎻ盐酸吡格列酮片(江苏德源药业股份有限公司)ꎻ磷酸西格列汀片(ＭｅｒｃｋＳｈａｒｐ＆ＤｏｈｍｅＩｔａｌｉａＳＰＡ)ꎻ纯蛋黄粉(浙江艾格生物科技股份有限公司)ꎻ血糖仪试纸(罗氏诊断产品有限公司)ꎻ葡萄糖㊁结晶氯化锂㊁甲基纤维素㊁六水氯化铝均购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司ꎻ乙酰胆碱酯酶检测试剂盒(ＡＡＴＢｉｏｑｕｅｓｔ公司)ꎮ１.３㊀动物㊀斑马鱼均饲养于２８ħ的养鱼用水中(水质:每１Ｌ反渗透水中加入２００ｍｇ速溶海盐ꎬ电导率为４５０~５５０μＳ ｃｍ－１ꎻｐＨ为６.５~８.５)ꎮ野生型ＡＢ品系斑马鱼㊁转基因运动神经元绿色荧光ＮＢＴ品系斑马鱼㊁转基因中性粒细胞荧光斑马鱼品系与外周运动神经绿色荧光斑马鱼杂交品系斑马鱼ꎬ各品系斑马鱼以自然成对交配方式进行繁殖ꎮ１.４㊀五子衍宗丸药效作用挖掘１.４.１㊀五子衍宗丸化学成分及靶点的收集㊀借助ＢＡＴＭＡＮ－ＴＣＭ平台(ｈｔｔｐ://ｂｉｏｎｅｔ.ｎｃｐｓｂ.ｏｒｇ/ｂａｔｍａｎ－ｔｃｍ/)ꎬ筛选条件为Ｓｃｏｒｅｃｕｔｏｆｆȡ２０ꎬＰ－ｖａｌｕｅｃｕｔｏｆｆ<０.０５ꎬ收集枸杞子㊁菟丝子㊁覆盆子㊁五味子㊁车前子的成分及靶点ꎮ１.４.２㊀靶点的组织特异性㊀将相关靶点导入ＤＡＶＩＤ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｄａｖｉｄ.ｎｃｉｆｃｒｆ.ｇｏｖ/ｔｏｏｌｓ.ｊｓｐ)ꎬ使用作用部位分析功能ꎬ富集靶点作用的组织[５]ꎮ１.４.３㊀药物－疾病通路关联分析㊀使用ＤＡＶＩＤ平台的ＧＡＤ＿ＤＩＳＥＡＳＥ子库㊁Ｒ:ｅｎｒｉｃｈＤＧＮ包进行疾病富集分析ꎬ选择Ｐ值小于０.０１极其显著富集的疾病作为分析的目标ꎮ选择前１０种疾病进行通路谱关联性分析ꎬ为了获得可信度较高的数据ꎬ使用ＧｅｎｅＣａｒｄｓ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｇｅｎｅｃａｒｄｓ.ｏｒｇ/)和ＤｉｓＧｅＮＥＴ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｄｉｓｇｅｎｅｔ.ｏｒｇ/)平台检索疾病并获得靶点ꎬ取两个平台的并集作为疾病靶点ꎬ使用Ｒ语言对靶点进行ＫＥＧＧ通路富集ꎮ使用Ｒ语言对五子衍宗丸的靶点进行ＫＥＧＧ通路富集ꎮ选取富集的Ｐ值不大于０.０１的通路计算药物－疾病的关联性[６]ꎮ１.５㊀斑马鱼的药效验证１.５.１㊀防治阿尔茨海默病药效试验１.５.１.１㊀模型的制备㊁分组与给药㊀采用水溶给予六水氯化铝建立斑马鱼阿尔兹海默病模型ꎮ随机分为正常组㊁模型对照组㊁阳性对照组和五子衍宗丸组ꎬ每组３０尾ꎬ给药组分别水溶暴露给予相应受试药物ꎮ阳性药为盐酸多奈哌齐(３.３３μｇ ｍＬ－１)ꎮ１.５.１.２㊀反应能力恢复以及运动功能障碍恢复评价㊀随机选取４ｄｐｆ野生型ＡＢ品系斑马鱼ꎬ２８ħ处理２４ｈ后ꎬ每个实验组随机选取１０尾斑马鱼ꎬ以光暗刺激下斑马鱼的每分钟平均运动速度的统计学分析结果评价五子衍宗丸反应能力恢复作用ꎬ以斑马鱼的运动距离的统计学分析结果评价五子衍宗丸运动功能障碍恢复作用ꎮ１.５.１.３㊀乙酰胆碱酯酶抑制作用㊀随机选取４ｄｐｆ野生型ＡＢ品系斑马鱼ꎬ２８ħ处理４８ｈ后ꎬ采用乙酰胆碱酯酶测定试剂盒ꎬ利用多功能酶标仪采集数据ꎬ以斑马鱼体内乙酰胆碱酯酶荧光值的统计学分析结果评价样品对乙酰胆碱酯酶的抑制作用ꎮ１.５.２㊀降糖药效试验１.５.２.１㊀模型的制备㊁分组与给药㊀采用白天给予１.５ｍｇ ｍＬ－１的水溶蛋黄粉溶液ꎬ晚上给予３０ｍｇ ｍＬ－１的水溶葡萄糖溶液ꎬ建立斑马鱼高血糖模型ꎮ随机分为正常组㊁模型对照组㊁阳性对照组和五子衍宗丸组ꎬ每组３０尾ꎬ给药组分别水溶暴露给予相应受试药物ꎮ血糖水平评价的阳性药为盐酸吡格列酮(２０.０μｇ ｍＬ－１)ꎬ周围神经保护功效及周围神经炎症消退功效评价的阳性药为磷酸西格列汀(３５０μｇ ｍＬ－１)ꎮ１.５.２.２㊀对葡萄糖水平的影响㊀随机选取５ｄｐｆ野生型ＡＢ品系斑马鱼ꎬ２８ħ处理４８ｈ后ꎬ用水将斑马鱼清洗３遍ꎬ用血糖仪检测斑马鱼整体葡萄糖水平ꎮ１.５.２.３㊀周围神经保护功效评价㊀随机选取５ｄｐｆ转基因运动神经元绿色荧光ＮＢＴ品系斑马鱼ꎬ２８ħ处理４ｄ后ꎬ每个实验组随机选取１０尾斑马鱼置于荧光显微镜下拍照ꎬ以斑马鱼神经荧光强度的统计学分析结果评价五子衍宗丸周围神经保护功效ꎮ１.５.２.４㊀周围神经炎症消退功效评价㊀随机选取５ｄｐｆ转基因中性粒细胞荧光斑马鱼品系与外周运动神经绿色荧光斑马鱼杂交品系斑马鱼ꎬ２８ħ处理４ｄ后ꎬ每组随机选取１０尾斑马鱼置于荧光显微镜下拍照ꎬ以斑马鱼神经周围中性粒细胞数量的统计学分析结果评价五子衍宗丸周围神经炎症消退功效ꎮ１.６㊀数据分析㊀统计学处理结果采用ｍｅａｎʃＳＥ表示ꎮ用ＳＰＳＳ２６.０软件进行统计学分析ꎬＰ<０.０５表明差异具有统计学意义ꎮ２㊀结果２.１㊀五子衍宗丸药效作用挖掘２.１.１㊀化学成分及靶点收集㊀借助ＢＡＴＭＡＮ－ＴＣＭ平台ꎬ收集枸杞子㊁菟丝子㊁覆盆子㊁五味子㊁车前子的成分及靶点ꎬ去除重复值ꎬ得到相关成分１１８个ꎬ相关靶点１４４１个ꎮ２.１.２㊀靶点的组织特异性㊀如图１所示ꎬ使用ＤＡＶＩＤ数据库组织定位功能ꎬ可知靶点作用部位可能与神经系统㊁生殖㊁代谢㊁癌症以及肾脏功能等相关ꎮ图１㊀疾病分类富集结果２.１.３㊀药物－疾病通路关联分析㊀如图２所示ꎬ使用ＤＡＶＩＤ平台的ＧＡＤ＿ＤＩＳＥＡＳＥ子库㊁Ｒ:ｅｎｒｉｃｈＤＧＮ包进行疾病富集分析ꎬ选择Ｐ值小于０.０１极其显著富集的疾病作为分析的目标ꎮ选择糖尿病等１０种疾病进行通路谱关联性分析ꎬ药物－疾病通路关联的原理为假定当药物和疾病对相同的通路都有显著的影响时ꎬ药物对该疾病可能存在着调节作用ꎬ基于这个假设来计算药物与疾病的关联性ꎮ使用ＧｅｎｅＣａｒｄｓ数据库和ＤｉｓＧｅＮＥＴ数据库平台检索疾病并获得靶点ꎬ使用Ｒ语言对靶点进行ＫＥＧＧ通路富集ꎮ使用Ｒ语言对五子衍宗丸的靶点进行ＫＥＧＧ通路富集ꎮ选取富集的Ｐ值不大于０.０１的通路计算药物－疾病的关联性ꎮ结果显示ꎬ糖尿病和阿尔茨海默病在２个平台富集均能排进前１０位ꎬ阿尔茨海默病评分为２.３７ꎬ而糖尿病评分为２.０２ꎮ确定阿尔茨海默病和糖尿病为五子衍宗丸的潜在研究方向ꎮ图２㊀ＧＡＤ＿ＤＩＳＥＡＳＥ疾病富集(Ａ)和Ｒ语言疾病富集(Ｂ)２.２㊀药效学验证２.２.１㊀防治阿尔茨海默病效果评价㊀如图３所示ꎬ六水氯化铝处理斑马鱼后ꎬ光暗刺激下斑马鱼的每分钟平均运动速度㊁斑马鱼的运动距离均下降ꎬ与模型对照组比较ꎬ阳性对照组和五子衍宗丸组可以提高斑马鱼的反应速度和运动距离ꎬ表明五子衍宗丸可以改善反应能力ꎬ恢复运动功能障碍ꎮ如图４所示ꎬ分析不同处理组斑马鱼体内乙酰胆碱酯酶荧光值ꎬ五子衍宗丸低㊁中浓度与模型对照组差异不显著ꎬ高浓度组可显著降低乙酰胆碱酯酶水平ꎬ表明五子衍宗丸可能通过抑制乙酰胆碱酯酶活性达到防治阿尔兹海默病的功效ꎮ图３㊀五子衍宗丸对斑马鱼每分钟光暗速度差值和运动距离的影响㊀注:与模型对照组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎮ图４㊀五子衍宗丸对乙酰胆碱酯酶(ＡｃｈＥ)水平的影响㊀注:与模型对照组比较ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎮ２.２.２㊀降糖效果评价㊀如表１所示ꎬ蛋黄粉和葡萄糖处理斑马鱼后ꎬ葡萄糖水平明显升高ꎬ表明造模成功ꎬ阳性对照组和五子衍宗丸组均可降低斑马鱼葡萄糖水平ꎮ糖尿病神经病变是糖尿病最常见的慢性并发症ꎬ病程１０年以上患者易出现明显的神经病变临床表现[７]ꎮ如图５所示ꎬ随机选取１０尾斑马鱼置于荧光显微镜下拍照ꎬ统计斑马鱼神经荧光强度和神经周围中性粒细胞数量ꎮ在转基因运动神经元绿色荧光ＮＢＴ品系中ꎬ模型对照组神经荧光强度降低ꎬ五子衍宗丸组神经荧光强度较模型对照组增强ꎬ表明五子衍宗丸具有保护周围神经的功效ꎮ在转基因中性粒细胞荧光斑马鱼品系与外周运动神经绿色荧光斑马鱼杂交品系中ꎬ模型对照组神经周围中性粒细胞数量增强ꎬ五子衍宗丸组神经周围中性粒细胞数量较模型对照组降低ꎬ表明五子衍宗丸具有消退周围神经炎症的功效ꎮ表１㊀五子衍宗丸对葡萄糖水平的影响(ｘʃｓꎬｎ＝１０)组别浓度/μｇ ｍＬ－１血糖水平/ｍｍｏｌ Ｌ－１正常组０.９４ʃ０.０３４∗∗∗模型对照组４.１０ʃ０.２１１盐酸吡格列酮２０.０１.８７ʃ０.１２５∗∗∗五子衍宗丸５００１.７３ʃ０.１０７∗∗㊀１０００１.６９ʃ０.０４６∗∗２０００１.５６ʃ０.０９０∗∗∗㊀注:与模型对照组比较ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎮ㊀Ａ.斑马鱼神经荧光强度典型图ꎻＢ.斑马鱼神经周围中性粒细胞典型图ꎻＣ.五子衍宗丸处理后斑马鱼神经荧光强度ꎻＤ.五子衍宗丸处理后斑马鱼神经周围中性粒细胞数量图５㊀五子衍宗丸对神经荧光强度及神经周围中性粒细胞数量的影响㊀注:与模型对照组比较ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎮ３㊀讨论与结论五子衍宗丸由枸杞子㊁菟丝子㊁覆盆子㊁五味子㊁车前子组成ꎬ五子衍宗丸本为补肾填精所设ꎬ在中医辨证论治观与 异病同治 思想的指导下ꎬ凡是肾虚精亏之证均可采用五子衍宗丸进行借鉴治疗[７]ꎮ本研究通过数据分析及其实验验证ꎬ探讨其在糖尿病和阿尔茨海默病的药效学作用ꎬ以期更好地指导临床应用ꎬ为今后进一步研究五子衍宗丸的应用提供思路ꎮ３.１㊀五子衍宗丸与糖尿病㊀临床研究报道表明ꎬ五子衍宗丸常和西药联合使用治疗糖尿病性勃起功能障碍或糖尿病肾病ꎮ糖尿病性勃起功能障碍是糖尿病常见并发症[８]ꎬ五子衍宗丸联合十一酸睾酮胶丸治疗男性２型糖尿病合并迟发性性腺功能减退症疗效显著[９]ꎮ在西医常规治疗基础上加用五子衍宗丸加味方治疗脾肾亏虚兼瘀证Ⅲ期糖尿病肾病疗效优于单纯西医常规治疗ꎬ在调整机体的功能状态ꎬ恢复机体正气等方面也有显著疗效[１０]ꎮ动物体内研究表明ꎬ五子衍宗丸加减方可以降低糖尿病大鼠的空腹血糖ꎬ促使机体恢复血糖稳态的作用ꎬ作用可能与ｍｉＲ－３７５基因调节与胰岛保护有关[１１]ꎮ五子衍宗丸能减轻Ｄ－半乳糖所致的氧化损伤ꎬ抑制糖尿病性白内障小鼠晶状体组织多元醇通路的异常活跃ꎬ从而改善糖尿病性白内障小鼠晶状体的混浊程度[１２]ꎮ五子衍宗丸有效部位或活性成分的研究表明ꎬ枸杞多糖具有降低血糖ꎬ增加胰岛素分泌的功效[１３]ꎬ菟丝子多糖能改善糖尿病大鼠糖脂代谢[１４]ꎬ覆盆子酮具有增加胰岛素分泌ꎬ降血糖效果[１５]ꎮ车前子总苷对小鼠原代胰岛细胞及ＲＩＮｍ５Ｆ胰岛瘤细胞胰岛损伤模型均具有治疗保护作用[１６]ꎮ３.２㊀五子衍宗丸与阿尔茨海默病㊀古医籍有云ꎬ 肾精不足ꎬ则志气衰ꎬ不能上通于心ꎬ故迷惑善忘也ꎮ 阿尔茨海默病是一种中枢神经退行性疾病ꎬ在中医 肾生髓ꎬ脑为髓海 的理论指导下ꎬ常采用补肾生髓法防治痴呆[１７]ꎮ采用五子衍宗颗粒治疗轻度认知障碍患者ꎬ治疗组记忆指数升高[１８]ꎮ五子衍宗液可以显著改善肾虚老年男性患者脑功能ꎬ提高其瞬时记忆及逻辑故事分节记忆[１９]ꎮ应用加味五子衍宗颗粒治疗轻度认知障碍患者ꎬ治疗组的记忆商均较治疗前明显提高ꎬ海马指数和颞角宽度较治疗前明显变小[２０]ꎮ动物体内研究表明ꎬ采用阿尔茨海默病(ＡＤ)小鼠模型ꎬ通过Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫定位航行试验ꎬ证明加味五子衍宗颗粒及其总黄酮㊁总多糖能改善ＡＤ模型小鼠的空间学习记忆能力[２１]ꎮ加味五子衍宗方及有效组分能改善东莨菪碱所致记忆获得障碍模型动物的空间学习记忆成绩ꎬ对中枢胆碱能系统损伤的学习记忆障碍有保护作用[２２]ꎮ五子衍宗丸有效部位或活性成分的研究表明ꎬ枸杞多糖能增强老年痴呆大鼠的学习和记忆功能[２３]ꎬ菟丝子总黄酮可增强神经元的可塑性和营养性ꎬ以防止神经细胞从内源性线粒体途径丢失或凋亡ꎬ进而改善内分泌衰退型痴呆小鼠的学习记忆能力[２４]ꎮ五味子醇甲可通过减轻脑组织神经元变性㊁脱失ꎬ改善突触功能等途径起到防治老年性痴呆的作用[２５]ꎮ３.３㊀斑马鱼在糖尿病及阿尔茨海默病研究中的特点㊀斑马鱼是仅次于小鼠的第二大模型生物ꎬ和哺乳动物有着相似生物结构和功能ꎬ因其具有体积小㊁养殖成本低㊁易饲养㊁发育快速㊁繁殖力强㊁便于观察等优势ꎬ广泛应用于医药研究领域[２６]ꎮ斑马鱼与代谢调控相关的主要器官ꎬ如胰腺及胰岛素敏感的外周组织与人类相似ꎬ使得斑马鱼可以作为糖代谢的研究模型[２７]ꎮ斑马鱼表现出的学习㊁睡觉㊁药物成瘾和神经保护表型也与人类相似[２８]ꎬ因此斑马鱼也是神经药物筛选的良好模式生物ꎮ本研究借助数据挖掘技术ꎬ建立了基于斑马鱼模型的 二次开发－活性评价 的方法ꎬ对五子衍宗丸降血糖和防治阿尔茨海默病的药效进行了评估ꎬ使数据挖掘与实验结合ꎬ有效节约实验时间ꎬ降低实验成本ꎮ本研究利用计算二次开发的方法和斑马鱼活体试验结合的方法ꎬ发现五子衍宗丸可能对神经系统和代谢疾病产生影响ꎮ斑马鱼降糖药效试验表明ꎬ五子衍宗丸可以降低斑马鱼葡萄糖水平并改善糖尿病神经病变ꎮ防治阿尔茨海默病药效试验表明ꎬ五子衍宗丸可以改善斑马鱼反应能力ꎬ恢复运动功能ꎬ可能与抑制乙酰胆碱酯酶活性有关ꎮ参考文献:[１]㊀国家药典委员会.中华人民共和国药典２０２０年版(一部)[Ｓ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０２０:６４１. [２]黄峰ꎬ吴德玲ꎬ李莉ꎬ等.五子衍宗丸的药理作用及临床应用研究进展[Ｊ].安徽中医药大学学报ꎬ２０２０ꎬ３９(５):８９－９２.[３]赵崇军ꎬ田敬欢ꎬ王金凤ꎬ等.斑马鱼在中药研究中的应用进展[Ｊ].中草药ꎬ２０１５ꎬ４６(１７):２６３５－２６４８. [４]王佑华ꎬ黎晌ꎬ杨彬睿ꎬ等.斑马鱼模型在中医药研究中的应用现状[Ｊ].中西医结合学报ꎬ２０１２ꎬ１０(１１):１１８９－１１９７. [５]张雯ꎬ吴宏伟ꎬ于现阔ꎬ等.基于网络药理学的瓜蒌薤白半夏汤临床精准定位及药效成分研究[Ｊ].复杂系统与复杂性科学ꎬ２０１８ꎬ１５(１):２－１０.[６]ＹＥＨꎬＹＡＮＧＬＬꎬＣＡＯＺＷꎬｅｔａｌ.Ａｐａｔｈｗａｙｐｒｏｆｉｌｅ－ｂａｓｅｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｒｕｇｒｅｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｇ[Ｊ].ＣｈｉｎＳｃｉＢｕｌｌꎬ２０１２ꎬ５７(１７):２１０６－２１１２.[７]黄峰ꎬ吴德玲ꎬ李莉ꎬ等.五子衍宗丸的药理作用及临床应用研究进展[Ｊ].安徽中医药大学学报ꎬ２０２０ꎬ３９(５):８９－９２.[８]王新宇ꎬ尹立祥ꎬ韩新颖ꎬ等.糖尿病性勃起功能障碍的中医药研究进展[Ｊ].内蒙古中医药ꎬ２０２３ꎬ４２(５):１６５－１６６. [９]曹琳ꎬ赵晓丽ꎬ谢绍锋ꎬ等.五子衍宗丸联合十一酸睾酮胶丸治疗男性２型糖尿病合并迟发性性腺功能减退症４２例[Ｊ].西部中医药ꎬ２０１９ꎬ３２(１２):７３－７６.[１０]徐婷芳.五子衍宗丸加味方治疗脾肾亏虚兼瘀证Ⅲ期糖尿病肾病的疗效研究[Ｄ].福州:福建中医药大学ꎬ２０１４.(下转第２４２页)[１８]戴浩ꎬ张晓伟ꎬ李风涛ꎬ等.酶解组合高速匀浆法提取人参总皂苷和多糖[Ｊ].保鲜与加工ꎬ２０２０ꎬ２０(３):１３７－１４５. [１９]周军ꎬ徐雷涛ꎬ熊曼ꎬ等.响应面法优化虎杖中虎杖苷和白藜芦醇的匀浆提取[Ｊ].林业工程学报ꎬ２０１７ꎬ２(３):５８－６３.[２０]郑威ꎬ江园园ꎬ于雪飞ꎬ等.响应面优化匀浆提取人参总皂苷的工艺[Ｊ].食品工业ꎬ２０１９ꎬ４０(２):２５－２９. [２１]邱文辉.裙带菜中岩藻多糖的制备工艺及其降血糖活性研究[Ｄ].杭州:浙江工业大学ꎬ２０２０.[２２]ＢＬＵＭＥＮＫＲＡＮＴＺＮꎬＡＳＢＯＥ－ＨＡＮＳＥＮＧ.Ｎｅｗｍｅｔｈｏｄｆｏｒｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｕｒｏｎｉｃａｃｉｄｓ[Ｊ].ＡｎａｌＢｉｏｃｈｅｍꎬ１９７３ꎬ５４(２):４８４－４８９.[２３]陈伟珠ꎬ方华ꎬ张怡评ꎬ等.离子色谱法测定岩藻聚糖中Ｌ－岩藻糖[Ｊ].化学分析计量ꎬ２０２０ꎬ２９(５):１９－２１. [２４]李德龙ꎬ伊丽则热 艾拜杜拉ꎬ陈冰婷ꎬ等.响应面优化药桑椹多糖超声提取工艺及其抗氧化活性研究[Ｊ].中国食品添加剂ꎬ２０２１ꎬ３２(７):１４－２２.[２５]刘恒ꎬ张秀玲ꎬ李坤ꎬ等.蕨菜多糖的提取㊁纯化㊁结构表征与抗氧化活性研究[Ｊ].食品工业科技ꎬ２０２３ꎬ４４(１７):１－１４.[２６]于靓ꎬ刘婷婷ꎬ孟冬青ꎬ等.裙带菜中不同分子质量岩藻多糖的理化成分和抗氧化性比较[Ｊ].上海师范大学学报(自然科学版)ꎬ２０２０ꎬ４９(６):６９２－６９７.[２７]ＦＩＴＴＯＮＪＨꎬＳＴＲＩＮＧＥＲＤＮꎬＫＡＲＰＩＮＩＥＣＳＳ.ＴｈｅｒａｐｉｅｓｆｒｏｍＦｕｃｏｉｄａｎ:ＡｎＵｐｄａｔｅ[Ｊ].ＭａｒＤｒｕｇｓꎬ２０１５ꎬ１３(９):５９２０－５９４６.[２８]徐元庆ꎬ王哲奇ꎬ张静ꎬ等.岩藻多糖的抗氧化功能研究进展[Ｊ].天然产物研究与开发ꎬ２０２０ꎬ３２(１０):１７８２－１７９３.[２９]孟祥云ꎬ汪永锋ꎬ杨丽霞ꎬ等.中药多糖抗氧化作用及其机制研究进展[Ｊ].中华中医药杂志ꎬ２０１８ꎬ３３(８):３５０４－３５０９.[３０]宋海燕ꎬ何文辉ꎬ张泽华ꎬ等.响应面法优化鹿角菜中岩藻多糖的超声波辅助提取工艺[Ｊ].食品与发酵工业ꎬ２０１５ꎬ４１(１２):２１２－２１８.[３１]ＬＵＯＤꎬＷＡＮＧＺꎬＮＩＥＫ.ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍＳａｒｇａｓｓｕｍｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉａｎｄｉｔｓａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｎｄａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｓ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１９ꎬ１４(１０):ｅ０２２３１９８.(收稿日期:２０２３－０９－２１)(上接第２３１页)[１１]焦子珊ꎬ郑彩莲ꎬ白素芬ꎬ等.五子衍宗丸加减方保护糖尿病大鼠胰岛及调节ｍｉＲ－３７５表达机制的研究[Ｊ].世界最新医学信息文摘ꎬ２０１７ꎬ１７(４７):１－３.[１２]朱向东ꎬ王燕.五子衍宗丸对糖尿病性白内障小鼠晶状体氧化损伤和多元醇通路的影响[Ｊ].中医研究ꎬ２０１３ꎬ２６(２):６６－６９.[１３]ＣＡＩＨＺꎬＬＩＵＦＫꎬＺＵＯＰＧꎬｅｔａｌ.ＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＡｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃＥｆｆｉｃａｃｙｏｆＬｙｃｉｕｍｂａｒｂａｒｕｍＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＴｙｐｅ２Ｄｉａｂｅｔｅｓ[Ｊ].ＭｅｄＣｈｅｍꎬ２０１５ꎬ１１(４):３８３－３９０.[１４]徐先祥ꎬ李道中ꎬ彭代银ꎬ等.菟丝子多糖改善糖尿病大鼠糖脂代谢作用[Ｊ].中国实验方剂学杂志ꎬ２０１１ꎬ１７(１８):２３２－２３４.[１５]谢欣梅ꎬ庞晓斌ꎬ李晓婷.覆盆子酮对糖尿病模型小鼠的降血糖作用及其机制研究[Ｊ].中国药学杂志ꎬ２０１２ꎬ４７(２３):１８９９－１９０４.[１６]童仁超.车前子总苷降糖㊁降压药效与作用机制研究[Ｄ].上海:上海中医药大学ꎬ２０１９.[１７]何蕾ꎬ郭锦晨ꎬ韩辉ꎬ等.龟鹿二仙胶治疗ＡＤ研究进展及其抗氧化应激的网络药理学分析:第一届肝豆状核变性国际会议摘要集[Ｃ].２０２３:１.[１８]ＷＡＮＧＸＭꎬＦＵＨꎬＬＩＵＧＸꎬｅｔａｌ.ＥｆｆｅｃｔｏｆｍｏｄｉｆｉｅｄＷｕｚｉＹａｎｚｏｎｇＧｒａｎｕｌｅｏｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｍｉｌｄｃｏｇｎｉｔｉｖｅｉｍ￣ｐａｉｒｍｅｎｔｆｒｏｍｏｘｉｄａｔｉｖｅｄａｍａｇｅａｓｐｅｃｔ[Ｊ].ＣｈｉｎＪＩｎｔｅｇｒＭｅｄꎬ２００７ꎬ１３(４):２５８－２６３.[１９]王学美ꎬ谢竹藩.补肾益精对老年脑功能的临床研究[Ｊ].中医杂志ꎬ１９９３ꎬ３４(６):３４７－３４８.[２０]王学美ꎬ富宏ꎬ宋萍ꎬ等.从神经心理学和影像学探讨加味五子衍宗颗粒对轻度认知障碍患者的影响[Ｊ].中国老年学杂志ꎬ２００４(４):２９９－３０１.[２１]富宏ꎬ王学美ꎬ刘庚信.加味五子衍宗方有效部位对β－淀粉样肽致大鼠行为学改变的影响[Ｊ].中国实验方剂学杂志ꎬ２００９ꎬ１５(６):４４－４７.[２２]褚松龄ꎬ刘庚信ꎬ王学美.加味五子衍宗方及其有效组分对记忆障碍小鼠空间行为的影响[Ｊ].中国中西医结合急救杂志ꎬ２００５(５):２７１－２７４.[２３]董雨ꎬ单铁强ꎬ马景红ꎬ等.枸杞多糖对ＡＤ大鼠海马区炎症分子ＮＬＲＰ３㊁Ｃａｓｐａｓｅ－１和ＩＬ－１β的影响[Ｊ].职业与健康ꎬ２０２１ꎬ３７(９):１１８９－１１９２.[２４]彭申明ꎬ陈勤ꎬ陈逸青ꎬ等.菟丝子总黄酮对内分泌衰退痴呆模型小鼠学习记忆功能的影响及保护作用机制[Ｊ].激光生物学报ꎬ２０１４ꎬ２３(３):２１８－２２６.[２５]周妍妍ꎬ刘艳丽ꎬ董春雪ꎬ等.五味子醇甲对ＡＰＰ/ＰＳ１双转基因痴呆模型小鼠脑组织突触素㊁α－突触核蛋白表达的影响[Ｊ].中国药理学通报ꎬ２０１３ꎬ２９(８):１０７６－１０７９. [２６]彭晓丽.斑马鱼模型在中药评价中的应用进展[Ｊ].基层中医药ꎬ２０２３ꎬ２(７):１１８－１２４.[２７]ＬＡＩＡＫＷꎬＬＯＡＣＹ.Ａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐ￣ａｔｈｙ:ｓｕｍｍａｒｙａｎｄｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ[Ｊ].ＪＤｉａｂｅｔｅｓＲｅｓꎬ２０１３(２):１０６５９４.[２８]ＰＡＮＵＬＡＰꎬＳＡＬＬＩＮＥＮＶꎬＳＵＮＤＶＩＫＭꎬｅｔａｌ.Ｍｏｄｕｌａｔｏｒｙｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓｙｓｔｅｍｓａｎｄｂｅｈａｖｉｏｒ:ｔｏｗａｒｄｓｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌｓｏｆｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅｓ[Ｊ].Ｚｅｂｒａｆｉｓｈꎬ２００６ꎬ３(２):２３５－２４７.(收稿日期:２０２３－０８－０１)。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
斑马鱼模型在中医药研究中的应用
邢学锋;马钦海;徐成贺;许文学
【期刊名称】《中国中医药现代远程教育》
【年(卷),期】2014(012)016
【摘要】目前,斑马鱼模型的使用正逐渐拓展到生命体多个系统的发育、功能和疾病的研究中,其在中医药领域的研究也越来越多:主要集中在中药毒理研究、代谢研究和重大疾病中药成分活性筛选等方面的研究,本文将就斑马鱼在筛选模型、现代生物技术与传统中医中药研究相结合的新型模式等应用情况进行探讨,以期有益于中医药事业的现代研究的迅速发展.
【总页数】3页(P154-156)
【作者】邢学锋;马钦海;徐成贺;许文学
【作者单位】南方医科大学中医药学院中药药剂实验室,广州510515;南方医科大学中医药学院中药药剂实验室,广州510515;南方医科大学中医药学院中药药剂实验室,广州510515;南方医科大学中医药学院中药药剂实验室,广州510515
【正文语种】中文
【相关文献】
1.斑马鱼模型在病毒研究中的应用 [J], 谈文盼; 卢欢倩; 王晓桐; 赵文昌; 宋丽军
2.斑马鱼模型在纳米毒理学中的研究应用与进展 [J], 钟健;朱佳瑞;何欣宇;马婧怡;李睿祺;张金波
3.模式生物斑马鱼模型在方药研究中的应用 [J], 岳勤霏;刘默;范欣生;余黎
4.斑马鱼模型在中药心血管药理学研究中的应用 [J], 秦小妹;郭帅杰;李悦;周明学
5.斑马鱼模型在中医药研究中的应用现状 [J], 王佑华;黎晌;杨彬睿;张伦青;周昕;许贝文;李铭源
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。