15研究微生物的基本方法
微生物培养方法
微生物培养方法微生物培养是一种用于研究微生物生理生化特性、生长繁殖规律及其与环境条件的关系等的重要技术手段。
以下是一些常见的微生物培养方法:1、固体培养基培养法固体培养基是在培养液中加入凝固剂,使培养基成为凝固状态的培养基。
这种培养基具有良好的稳定性,可以防止培养液中的微生物在培养过程中流失,同时也可以使微生物在固体表面生长繁殖,方便观察和检测。
固体培养基一般用于细菌、放线菌、酵母菌等微生物的培养。
2、液体培养基培养法液体培养基是一种不添加凝固剂的培养基,使培养基呈液体状态。
液体培养基中,微生物在培养液中自由悬浮生长繁殖,可以充分接触培养液中的营养物质,有利于微生物的生长繁殖。
液体培养基一般用于工业生产中的微生物培养,如发酵工业中制备各种发酵产品。
3、半固体培养基培养法半固体培养基是在液体培养基中加入少量凝固剂,使培养基成为半凝固状态的培养基。
这种培养基可以固定培养液中的微生物,同时也可以使微生物在半固体表面生长繁殖。
半固体培养基一般用于观察微生物的运动和生长情况。
4、厌氧培养法有些微生物需要在无氧或低氧分压条件下生长繁殖,因此需要采用厌氧培养法。
厌氧培养法一般采用密闭容器或厌氧手套箱中进行,可以提供无氧或低氧环境。
在厌氧培养法中,需要使用专门的厌氧培养基和厌氧菌株,以保证微生物的生长繁殖。
5、富集培养法富集培养法是一种常用的分离高浓度微生物的方法。
该方法是通过在培养基中添加一些特殊成分,如高浓度营养物质、抑制剂等,以抑制其他微生物的生长繁殖,从而增加目标微生物的数量和浓度。
富集培养法一般用于从自然界或工业生产中分离特定种类的微生物。
微生物培养方法有很多种,每种方法都有其特定的适用范围和特点。
在实际操作中,需要根据具体情况选择合适的培养方法,以达到最佳的培养效果。
还需要注意无菌操作、环境控制等方面的技术细节,以保证微生物生长繁殖的良好环境和条件。
微生物的分离培养方法微生物的分离培养是微生物研究中常用的技术之一,它能够将目标微生物从复杂的微生物群体中分离出来,并进行纯培养。
微生物的基本操作方法
微生物的基本操作方法
微生物的基本操作方法包括以下几个方面:
1. 无菌操作:在进行微生物实验或培养时,需要保持操作环境的无菌。
操作者应注意洗手、穿戴实验服、戴手套,并在无菌工作台或无菌室内进行操作。
可用酒精灯或紫外线灯消毒操作区域,以杀灭空气中的微生物。
2. 培养基的制备:根据所需的微生物类型选择适当的培养基,并按照配方制备。
培养基通常包括基础培养基、食物源、pH调节剂和琼脂等成分。
制备时需要称取和溶解成分,并用高压蒸汽或高温灭菌来杀灭培养基中的微生物。
3. 培养器具的消毒:使用前要对培养器具进行消毒处理,常用的方法有高压蒸汽灭菌、高温灭菌、紫外线消毒等。
确保培养器具的表面和内部都不带有致病菌。
4. 菌种的接种:将所需的菌种接种到培养基上。
通常使用接种环、接种针或接种环针进行接种。
在接种时要注意无菌操作,以避免外来细菌的污染。
5. 培养条件:对于每一种微生物,根据其生长特性和要求,设置适当的培养条件。
例如,合适的温度、湿度、pH值和氧气浓度等都会影响微生物的生长。
6. 培养观察:在培养过程中,定期观察微生物的生长情况。
可以使用显微镜观察细菌或酵母菌的形态,或者通过目测观察细菌悬浊液的浑浊度和沉淀情况来判
断微生物是否生长良好。
7. 分离纯化:将培养基上生长的微生物单克隆分离纯化,得到纯系菌株。
通常可以使用藻糖水平板或琼脂斜面触点法进行分离,将不同的菌落孤立开来。
8. 培养维持:根据微生物的生长要求,每隔一段时间更换培养基、条件,以保持微生物的生长和繁殖。
同时,也需要妥善保存纯化的菌株,以备后续实验使用。
微生物学实验复习提纲
微生物学实验复习提纲微生物学实验复习提纲1.研究微生物学的基本技术有哪些(显微镜技术、无菌技术、纯种分离技术和纯种培养技术)2.光学显微镜又称“复式显微镜”,由哪两部分组成?显微镜的什么最为关键?为什么?答:由机械装置和光学系统组成物镜的性能最为关键,因为它直接影响着显微镜的分辨率3.油镜的放大倍数为多少?与其他物镜相比,油镜的使用比较特殊,需在载玻片与镜头间滴加什么?其什么作用?答:10*100 需要滴加镜油增加照明亮度和增加显微镜的分辨率4.影响显微镜分辨率的因素有哪些?(光源的波长、物镜的镜口角和镜头间介质的折射率)5.油镜使用后应怎样处理?镜油擦拭的正确方法是怎样的?答:用擦镜纸拭去镜头上的镜油,然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹,最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯6.制造接种环、接种针的金属常用铂或镍,原因是软硬适度,能经受火焰反复灼烧,又易冷却.7.培养皿的包装一般以多少套作一包比较合适?5~8套。
8.灭菌吸管的包装的注意事项:(1)吸管必须干燥;(2)在距其粗头顶端约0.5cm处,塞一小段约1.5cm 长的棉花(不能用脱脂棉)。
作用是避免外界及口中杂菌吸入管内,并防止菌液等吸入口中。
9.空的玻璃器皿一般用干热灭菌,若用湿热灭菌。
则要多用几层报纸包扎,外面最好加一层牛皮纸或铝箔。
10.接种环在用前必须烧灼灭菌,用后也应立即烧灼。
11.简单染色的原理是什么?其主要操作步骤是什么?固定的作用是什么?染色过程中应注意哪些环节?答:原理及步骤健实验课本71页。
固定作用:使细胞质凝固,使细胞固定在载玻片上12. 革兰氏染的原理及步骤是什么?革兰氏染色后的正确结果是什么颜色?答:原理见实验课本82页步骤:初染、媒染、脱色、复染结果颜色:阳性:菌体保持原有的蓝紫色阴性:洗脱后菌体变为无色,用复染剂染色后又变为复染剂颜色13.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节是什么?答:(1)涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性;(2)脱色,此环节最关键。
微生物培养及实验基本操作技术
微生物培养及实验基本操作技术一、培养基配制培养基是指人工配制的、适合于微生物生长繁殖或累积代谢产物所需的各种营养物的混合基质。
配制培养基是进行微生物检验工作的基础,甚至是任何与微生物有关工作的基础。
注意事項–灭菌锅的使用①加水盖过底部铁板—②放入东西—③关门—④調整溫度時間—⑤关紧泄压阀灭菌結束後,等压力降回零時才可打開門進入灭菌锅之物品,蓋子不可關太緊或太鬆拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套培养基中的主要成分及其作用:营养物质:N源、C源、无机盐、生长因子、水常用的N源:蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏常用的C源:糖、醇类物质(单糖:葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖双糖:蔗糖、麦芽糖、乳糖;多糖:淀粉、纤维素、菊糖;醇类:甘露醇、卫茅醇、甘油)水:用蒸馏水,不能用自来水凝固剂:琼脂、明胶、血清等抑制剂:1、作用:鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖,增加待检菌的检出率2、种类:盐类:氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾(钠)、亚硒酸钠等染色剂类:煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红胆盐类:猪(牛、羊)胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐抗菌素:青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素指示剂1、作用:用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物,产酸产碱的能力。
2、常用的指示剂:酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。
培养基的类型:●根据培养基的物理状态来区分:1、液体培养基:主要用于增菌培养、鉴别性培养2、固体培养基:用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定3、半固体培养基:观察微生物的动力,有时用来保藏菌种4、脱水(商品)培荞基:脱水培养基也称为商品培养基、预制干燥培养基。
●将各种营养成分按比例配制完全,制成脱水的干粉状,装瓶出售;使用时只需按比例加人定量的水溶化、灭菌便可。
●根据培养基的用途来区分:➢增殖培养基选择培养基鉴别培养基1、增殖培养基:在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质,以增加这种微生物的繁殖速度,逐渐淘汰其它微生物,这种培养基称为增殖培养基。
分子生物学方法鉴定微生物
分子生物学方法鉴定微生物分子生物学是分子水平上研究生物学的一门学科,可以应用于微生物的鉴定和研究。
在分子生物学中,通过分析微生物的DNA、RNA和蛋白质,可以确定微生物的物种、进化关系和功能特性。
以下将介绍一些常用的分子生物学方法来鉴定微生物。
首先,核酸提取是分子生物学研究的基础步骤。
通过核酸提取可以获得微生物样本中的DNA或RNA。
一般常用的提取方法包括酚-氯仿法、离心法、磁珠法等。
提取得到的核酸可以用于后续的PCR扩增、测序、芯片分析等。
其次,PCR扩增技术是分子生物学中最常用的方法之一、通过PCR扩增可以在微生物样本中放大特定的基因片段,并进行进一步的分析。
PCR扩增主要包括两个步骤:变性和退火,其中变性是将DNA双链解开,退火是将引物与靶序列互补结合。
通过PCR扩增可以获得大量的特定基因片段,用于进一步的测序和鉴定。
PCR扩增得到的目标基因片段可以进行多种分析方法。
其中,序列测定是一种常用的方法。
通过测定PCR扩增得到的基因片段的序列,可以确定该基因片段在数据库中的匹配度,并据此确定微生物的物种。
此外,序列测定还可以通过比对进化树的构建,研究微生物的进化关系。
此外,还可以利用PCR扩增得到的基因片段进行限制性酶切分析。
限制性酶切分析可以将PCR扩增得到的基因片段在特定的酶切位点上切割成片段,并通过凝胶电泳进行分离和检测。
通过比较不同微生物基因片段的切割模式,可以确定微生物的物种和进化关系。
除了PCR技术外,还可以利用酶切多态性(RFLP)分析来鉴定微生物。
RFLP是一种对PCR扩增得到的基因片段进行限制酶切,并通过凝胶电泳对切割产物进行分离检测的方法。
不同微生物在特定限制酶切位点的序列差异可以通过RFLP分析来鉴定。
最后,还可以使用引物扩增反应-随机扩增的多态性DNA(RAPD)技术来鉴定微生物。
RAPD技术是一种利用随机引物扩增基因组DNA的特定区域,通过凝胶电泳分析扩增产物,根据扩增产物的差异进行微生物的鉴定。
15研究微生物的基本方法
第5章研究微生物的基本方法随着现代医学及相关科学技术的发展,各学科相互交叉和渗透,医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平,许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。
医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术,准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物,并对引起感染的微生物进行耐药性监测,为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。
第一节显微镜观察由于细菌个体微小,肉眼不能看到,必须借助显微镜的放大才能看到。
一般形态和结构可用光学显微镜观察,其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。
常用显微镜有如下几种。
1.普通光学显微镜采用自然光或灯光为光源,其波长约为0.4μm。
显微镜的分辨率为波长的二分之一,即0.2μm,而肉眼可见的最小形象为0.2mm。
故用油(浸)镜放大1 000倍,能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。
普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
2.暗视野显微镜常用于观察不染色微生物形态和运动。
在普通显微镜安装暗视野聚光器后,光线不能从中间直接透入,视野呈暗色,当标本接受从聚光器边缘斜射光后可发生散射,因此可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。
3.相差显微镜相差显微镜利用相差板的光珊作用,改变直射光的光位相和振幅,将光相的差异转换为光强度差。
在相差显微镜下,当光线透过不染色标本时,由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异,可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
4.荧光显微镜荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同,主要区别在于光源、滤光片和聚光器。
目前大多数使用的是落射光装置,常用高压汞灯作为光源,可发出紫外光或蓝紫光。
滤光片有激发滤光片和吸收滤光片二种。
用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外,也可用暗视野聚光器,以加强荧光与背景的对比。
本法适用于对荧光色素染色或与荧光抗体结合的细菌的检测或鉴定。
5.电子显微镜用电子流作为光源,波长与可见光相比差几万倍,大大提高了分辨力,并用磁性电圈作为光学放大系统,放大倍数可达数万倍或几十万倍,常用于病毒颗粒和细菌超微结构的观察。
微生物培养方法
微生物培养方法微生物培养是微生物学实验中的基础技术之一,它是研究微生物生长、代谢、遗传和生理等方面的重要手段。
在微生物学实验中,正确的微生物培养方法对于获得准确的实验结果至关重要。
本文将介绍常见的微生物培养方法,希望能够为微生物学实验的进行提供一些帮助。
首先,选择合适的培养基是微生物培养的关键。
培养基的选择应根据所要培养的微生物种类及其生长特性来确定。
常见的培养基包括富集培养基、选择性培养基和差异培养基。
富集培养基适用于微生物总数较少的情况,选择性培养基可以选择性地培养某些特定的微生物,而差异培养基则可以根据微生物的代谢特性来选择。
在选择培养基时,还需要考虑到微生物的生长温度、氧气需求、酸碱度等因素。
其次,无菌操作是微生物培养过程中必不可少的环节。
无菌操作的目的是防止外源微生物的污染,保证培养物的纯度。
在无菌操作中,需要使用无菌培养器具和无菌操作台,并且要注意消毒操作的正确性和有效性。
此外,还需要注意个人卫生和实验环境的清洁,以免微生物的交叉污染。
然后,培养条件的控制也是微生物培养中需要重视的问题。
微生物的生长受到温度、pH值、氧气浓度等因素的影响,因此在培养过程中需要对这些条件进行合理的控制。
一般来说,微生物的培养温度和pH值会根据不同的微生物种类而有所差异,需要根据具体情况来确定。
此外,还需要注意培养容器的通气情况,以保证微生物的正常生长。
最后,对于不同类型的微生物,还需要采取不同的培养方法。
比如,对于厌氧微生物,需要使用无氧培养方法来提供适宜的生长条件;对于一些特殊的微生物,可能需要采用特殊的培养技术来进行培养。
因此,在进行微生物培养时,需要根据微生物的特性来选择合适的培养方法。
综上所述,微生物培养是微生物学实验中的重要环节,正确的培养方法对于实验结果的准确性至关重要。
选择合适的培养基、进行无菌操作、控制培养条件以及采取不同的培养方法都是保证微生物培养成功的关键。
希望本文所介绍的内容能够对微生物学实验工作者有所帮助,使他们能够获得准确可靠的实验结果。
培养微生物的方法
培养微生物的方法培养微生物是研究微生物生长、代谢和适应环境的重要实验手段。
培养微生物的主要目的是获得足够数量的微生物细胞进行研究,同时也可以鉴定和筛选具有特定功能的微生物菌种。
下面我将介绍几种常见的培养微生物的方法。
1. 固体培养基法固体培养基法是最常用的一种培养微生物的方法。
固体培养基由含有营养物质的琼脂或琼脂糖制成,将培养基煮沸后倒入培养皿中,待冷凝后接种微生物菌液。
接种后,在适当的温度下培养一段时间后,可以观察到微生物的菌落生长。
2. 液体培养基法液体培养基法适合需要大量微生物菌液的情况。
液体培养基中也含有营养物质,但没有琼脂固化剂。
将液体培养基倒入试管或培养瓶中后,接种微生物菌液。
接种时可以选择不同的混合方式,如悬浮接种、循环接种等。
封闭容器后,在适当的温度和条件下培养一段时间后,可以得到大量的微生物菌液。
3. 光合细菌的光合培养法光合细菌可以利用光能进行光合作用,这种微生物的培养需要提供光照条件。
光合细菌的培养一般使用含有光合作用所需的碳源和其他营养物质的液体培养基。
将光合细菌接种到培养基中后,将培养瓶置于弱光或适量光照射下,培养一段时间后可以观察到光合细菌的生长。
4. 原生动物的共培养法与愈伤组织培养法一些微生物,如原生动物和真菌,需要与其它生物一同培养才能获得充分的生长和繁殖。
原生动物的共培养法和愈伤组织培养法是常见的方法之一。
原生动物的共培养法是将原生动物与其细胞或宿主一同培养,使其获得营养和生长条件。
愈伤组织培养法是将微生物接种到含有植物细胞的培养基中,使其与细胞一同生长并进行相互作用。
5. 连续培养法连续培养法是一种将培养基和微生物一起连续供应的方法。
在连续培养中,培养基通过流动循环系统不断供应新的培养基,同时将已经生长的微生物从培养系统中排除。
这种方法可以使微生物维持在一个较稳定的状态下,适合于长时间培养和获得大量微生物的需求。
除了以上几种常见的方法外,还有许多其他培养微生物的方法,如厌氧培养法、微滴培养法、凝胶微滴培养法等。
微生物检测方法
微生物检测方法微生物检测是指对环境、食品、药品、生物制品等中的微生物进行检测和监测的过程。
微生物检测的方法多种多样,根据不同的检测对象和要求,可以选择合适的方法进行检测。
下面将介绍几种常见的微生物检测方法。
首先,传统的培养方法是一种常见的微生物检测方法。
这种方法是将样品在适宜的培养基上培养一段时间,然后观察培养基上是否有微生物生长,根据生长的数量和形态来判断样品中是否存在微生物。
这种方法简单易行,但需要较长的时间,且对于某些难以培养的微生物可能无法检测出来。
其次,PCR方法是一种快速准确的微生物检测方法。
PCR方法是利用聚合酶链式反应技术,通过扩增微生物DNA片段来进行检测。
这种方法具有高度的特异性和敏感性,可以快速准确地检测出微生物的存在和数量。
但是,PCR方法需要设备和技术的支持,成本较高,且对样品的前处理要求较高。
另外,免疫学方法也是一种常用的微生物检测方法。
这种方法是利用抗体与特定的微生物抗原结合的原理进行检测。
免疫学方法具有高度的特异性和灵敏度,可以快速准确地检测出微生物的存在和数量。
但是,免疫学方法需要较长的培养时间,且受到环境因素的影响较大。
此外,基因测序技术也是一种新兴的微生物检测方法。
这种方法是通过对微生物的基因进行测序分析,来确定微生物的种属和数量。
基因测序技术具有高度的准确性和全面性,可以对微生物进行全面的检测和分析。
但是,基因测序技术需要较长的分析时间和复杂的数据处理,且对设备和技术要求较高。
综上所述,微生物检测方法有传统的培养方法、PCR方法、免疫学方法和基因测序技术等多种选择。
在实际应用中,可以根据检测对象和要求选择合适的方法进行检测。
随着科学技术的不断发展,相信微生物检测方法会更加快速、准确、全面,为微生物监测和控制提供更好的技术支持。
微生物的实验室培养
微生物的实验室培养一、引言微生物是一类微小的生物体,广泛存在于自然界中,包括细菌、真菌、病毒等。
微生物在医学、农业、环境保护等领域具有重要的应用价值。
为了更好地研究微生物的生理、代谢、遗传等特性,需要对其进行实验室培养。
本文将介绍微生物实验室培养的基本原理、方法和应用。
二、微生物实验室培养的基本原理1.营养物质:微生物对营养物质的需求因种类而异,一般包括碳源、氮源、矿物质、维生素等。
不同微生物对营养物质的种类和浓度有不同的要求。
2.培养基:培养基是供给微生物生长繁殖的营养基质,一般包括水、碳源、氮源、矿物质等。
根据微生物对营养物质的需求,可以设计不同类型的培养基。
3.培养条件:微生物的生长繁殖受到温度、pH、氧气、湿度等环境因素的影响。
实验室培养时,需要根据微生物的生长特性,调整培养条件,以利于其生长。
4.无菌技术:微生物实验室培养过程中,需要严格遵循无菌操作规程,防止外来微生物的污染。
无菌技术包括消毒、灭菌、无菌操作等。
三、微生物实验室培养的方法1.液体培养:液体培养是将微生物接种于液体培养基中,使其在液相中生长繁殖。
液体培养适用于大量繁殖微生物,常用于生产发酵产品、制备菌种等。
2.固体培养:固体培养是将微生物接种于固体培养基中,使其在固体表面生长繁殖。
固体培养适用于观察微生物的菌落特征、分离纯化微生物等。
3.深层培养:深层培养是将微生物接种于含有固体填充物的液体培养基中,使微生物在填充物表面生长繁殖。
深层培养适用于研究微生物的生理、代谢特性等。
4.挂壁培养:挂壁培养是将微生物接种于培养瓶内壁,使其在瓶壁表面生长繁殖。
挂壁培养适用于研究微生物的附着、生长特性等。
5.模拟自然环境培养:模拟自然环境培养是将微生物接种于模拟其自然生长环境的培养基中,使其在人工环境中生长繁殖。
模拟自然环境培养适用于研究微生物在自然环境中的生长、繁殖特性等。
四、微生物实验室培养的应用1.微生物分离纯化:通过实验室培养,可以从复杂的微生物群落中分离纯化出特定的微生物种类,为后续研究提供基础。
微生物的培养方法
微生物的培养方法微生物的培养是微生物学研究中的基础实验技术之一。
通过培养,我们可以获得大量的微生物细胞进行研究、分析和应用。
微生物的培养方法可以根据不同的需求和目的采用不同的方式,下面将介绍常见的微生物培养方法。
1. 培养基的选择培养基是微生物培养中的重要组成部分。
根据微生物的需求,培养基可以分为无菌培养基、常规培养基、选择性培养基和富集培养基等。
其中,常规培养基包括营养琼脂培养基、肉汤培养基、液体培养基和固体培养基等。
选择性培养基则是通过添加抑制菌生长的抗生素、染色剂或物理因素等来选育特定菌株。
富集培养基则可利用微生物对特定营养物质的利用来富集目标微生物。
2. 纯化菌落的扩散法菌落是可见的微生物单个细胞的集合体,纯化菌落是为了获得纯种菌株而将菌落中细胞的杂交菌分离出来。
纯化菌落法包括扩散法和悬滴法等。
扩散法是将含有微生物菌落的固体培养基涂布在琼脂平板上,然后利用铁环或微量移液器挑取菌落,接种到新的琼脂培养基上进行单菌落的培养。
这种方法可以实现微生物的纯化,适用于培养不同的微生物菌株。
3. 液体培养法液体培养法是将微生物接种在液体培养基中进行大量培养。
该方法可以提供丰富的养分和大量的微生物细胞,适用于许多微生物种类的培养。
液体培养法通常使用培养瓶或培养皿,将液体培养基倒入容器中,然后接种微生物菌株。
在培养过程中,可以采用摇床或旋转培养器等设备,提供适当的温度、养分和氧气等条件,促进微生物的生长和繁殖。
4. 固体培养法固体培养法是将微生物接种在固体培养基(如琼脂)上进行培养。
它可以提供微生物在固体表面的菌落形态和特性,适用于微生物的纯化、鉴定和保存等。
固体培养法通常使用琼脂培养基,将培养基熔化后倒入培养皿中,然后将微生物接种到表面。
在培养过程中,可以调节温度、时间和培养基的成分等条件,促进微生物的生长和菌落形成。
5. 微生物保存为了长期保存微生物,可以采用冷冻法、冻干法和液氮冷冻保存法等。
冷冻法是将微生物培养物加入保护液(如甘油溶液)中,经过鉴定并制作冷冻备品后,以低温冷冻保存。
常用的微生物检验方法
常用的微生物检验方法微生物的检测,无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义。
常见的检测方法有:生长量测定法、微生物计数法、生理指标法和商业化快速微生物检测等,大家一起学习一下这二十余种常用的检测方法的的原理,应用范围和优缺点。
一、生长量测定法1、体积测量法:又称测菌丝浓度法。
原理:通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。
菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。
这种方法比较粗放,简便,快速,但需要设定一致的处理条件,否则偏差很大,由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物,结果会有一定偏差。
2、称干重法:原理:利用离心或过滤法测定。
一般干重为湿重的10-20%。
称干重发法较为烦琐,通常获取的微生物产品为菌体时,常采用这种方法,如活性干酵母,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
3、比浊法:原理:微生物的生长引起培养物混浊度的增高。
通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值,判断微生物的生长状况。
该法主要用于发酵工业菌体生长监测。
4、菌丝长度测量法:方法:对于丝状真菌和一些放线菌,可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度。
二、微生物计数法1、血球计数板法:这种方法简便,直观,快捷,但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数,并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。
2、染色计数法:为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数,而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足,人们发明了染色计数法。
3、比例计数法:将已知颗粒(如霉菌孢子或红细胞)浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合,在显微镜视野中数出各自的数目,即可得未知菌液的细胞浓度。
4、液体稀释法:对未知菌样做连续十倍系列稀释,根据估计数,从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样,接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中,经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数,然后查最大或然数表MPN(most probably number)得出菌样的含菌数,根据样品稀释倍数计算出活菌含量。
2第二章 微生物生态学研究方法
自动化、快速
可鉴定细菌有1140多 种、酵母菌267种、目前 已经可用于丝状真菌。
仅能鉴定快速生长的微生物,误差较大(pH),拥有的标准数据 库还不完善
3、生物标记物法(Biomakers )
• 生物标记物通常是微生物细胞的生化组成成分,其 总量通常与相应生物量呈正相关。 • 特定的标记物标志着特定的微生物,一些生物标记 物的组成模式(种类、数量和相对比例)可作为指纹 估价微生物群落结构。 • 首先使用一种合适的提取剂直接把生物标记物从环 境中提取出来,然后对提取物进行纯化,后用合适 的仪器加以定量测定。 优点:不需要把微生物的细胞从环境样中分离, 能克服由于培养而导致的微生物种群变化,具有 一定的客观性。
功能类群提供可靠的依据。
微生物群落结构和多样性研究方法:
• 20世纪70年代以前:传统的培养分离方法,依靠形态 学、培养特征、生理生化特性的比较进行分类鉴定和 计数,认识是不全面和有选择性的,方法的分辨水平 低。 • 在70和80年代:对微生物化学成分的分析,建立了一 些微生物分类和定量的方法(生物标记物方法),对 环境微生物群落结构及多样性的认识进入到较客观的 层次上。 在80和90年代:现代分子生物学技术以DNA为目标物, 通过rRNA基因测序技术和基因指纹图谱等方法,比较 精确地揭示了微生物种类和遗传的多样性,并给出了 关于群落结构的直观信息。
Diversity estimation based on molecular markers
实验原理
• 16S rDNA是基因组的“biomarker‖ • – 核糖体RNA是蛋白质合成必需的,16S rDNA 广泛存在于所有原核生物的基因组中。 • – 16S rDNA的序列中包括保守区和可变区。 • – 序列变化比较缓慢,与物种的形成速度相适应, 而且一般不发生水平转移。 • – GeneBank和RDPⅡ(Ribosomal DatabaseProject ) 数据库中已经登录了超过97,128个经过比对和注释 的16S rDNA序列,可供进行比对。
微生物学基本实验方法和诊断
五、鲎试验(Limulus test, LT)
鲎试验是利用鲎试剂能与微量内毒素反应形成固态 凝胶来检测内毒素的试验。 鲎试剂是鲎血液中的变形细胞溶解物(Limulus amebocytes lysate,LAT),为白色粉末,易溶于 水和生理盐水中。鲎试剂中含C因子、B因子、凝固 酶原和凝固蛋白原等几种参与级联酶反应的成分。 在一定条件下,微量的内毒素即能激活鲎试剂溶液 中的C因子,活化C因子激活B因子,活化B因子使凝 固酶原转变为凝固酶,凝固酶使凝固蛋白原转变成 凝固蛋白,最终导致凝胶的形成。
培养基的种类—按用途分类
(3)鉴别培养基:在培养基中加入特定的底物 和指示剂,即为鉴别培养基。鉴别培养基用来 作细菌的生化试验,以便鉴定细菌,因此这类 培养基是临床细菌检验常的培养基。如糖发酵 培养基、克氏双糖铁培养基(KIA)、动力-吲 哚-尿素(MIU)培养基等。
培养基的种类—按用途分类
(4)选择培养基:在培养基中加入某种化学物质 或抗生素,以抑制某些细菌种类生长,有助于需要 的细菌种类生长。此类培养基主要用于从含菌种类 (主要是正常菌群)较多的标本(如粪便)中分离 培养专性病原菌。如胆盐培养基、SS琼脂、麦康凯 琼脂、中国兰琼脂、伊红-美兰琼脂用于从粪便中 分离培养志贺菌和沙门菌;庆大霉素琼脂、碱性琼 脂用于从粪便中分离培养霍乱弧菌。 (5)特殊培养基:包括培养细菌L型的培养基,培 养厌氧菌的厌氧培养基。这类培养基用于培养营养 要求和生长条件较特殊的细菌。
细菌L型检查
(一)培养基:培养细菌L型的培养基需 具有丰富的营养和高渗生长条件。培养基 常以心脑浸液及牛肉浸液为基础,加入 1~2%蛋白胨、5%NaCl(使致高渗), pH7.6~7.8、1%琼脂,高压蒸汽灭菌后制 备成固体培养基,必要时高压蒸汽灭菌后 待至60℃左右加入20%无菌马、羊或人血 浆,制备成固体培养基。
微生态学研究方法
微生态学研究方法一、观察法。
观察法在微生态学里就像是我们用眼睛去探索微观世界的小秘密。
我们可以直接观察微生物的样子呀,它们是怎么在自己的小天地里活动的呢。
比如说在一个小水洼里,那些微生物可能像小点点一样游来游去。
我们可以用显微镜,这就像是给我们打开了一扇通往微观世界的大门。
透过显微镜,我们能看到微生物的形态,是圆圆的还是长长的,有没有小尾巴之类的。
而且我们还可以观察它们在不同环境下的变化。
就像在干净的水里和有点脏的水里,微生物的数量和种类可能就不一样呢。
我们可以记录下这些不同,这就像是在写微生物的小日记一样。
二、培养法。
培养法就像是给微生物盖小房子,让它们在里面长大。
我们得给它们准备合适的食物,就像我们人类要吃米饭、蔬菜一样,微生物也有它们爱吃的东西。
比如说有些细菌喜欢葡萄糖,那我们就在培养基里加点葡萄糖。
然后给它们合适的温度和湿度,就像我们要住在舒服的房间里一样,微生物也需要一个舒适的生长环境。
我们把微生物放到培养基里,然后等着它们慢慢长大繁殖。
这个过程就像是看着小种子发芽长大一样,特别有成就感。
有时候,我们会发现一些新的微生物,就感觉像是发现了一个小宝藏呢。
三、分子生物学方法。
这个分子生物学方法听起来就很高大上,其实也很有趣的。
我们可以通过分析微生物的基因来了解它们。
就像是看它们的基因小密码一样。
我们可以用一些特殊的技术,比如说PCR技术。
这个技术就像是一个小放大镜,能把微生物的基因放大很多很多倍,这样我们就能看清楚它们的基因是什么样的了。
通过分析基因,我们能知道微生物之间的关系,就像知道它们是不是亲戚一样。
还能知道它们有什么特殊的能力,比如说有的微生物能产生一种特殊的酶,那这个酶的基因是怎么回事呢,我们都可以通过分子生物学方法搞清楚。
四、数学模型法。
数学模型法就像是给微生物的世界画一幅地图。
我们用数学的方式来描述微生物的生长、繁殖还有它们和环境的关系。
比如说,我们可以用一个方程式来表示微生物在一定环境下数量是怎么变化的。
微生物检验的基本操作技术
1)、在固体培养基上,观察: 菌落大小、形态、颜色(色素是水溶性还是脂溶
性)、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特 征及迁移性等; 2)、在液体培养中: 表面生长情况(菌膜、环)混浊度及沉淀等; 3)、半固体培养基穿刺接种:
观察运动、扩散情况。
1.点状 2.圆形 3.丝状 4. 不规则形 5.假根状 6.纺锤 状
d.表面:有无生长、性状(膜状、环状)、菌膜厚薄及 表面特征(光滑、颗粒、皱状);
e.其他:有无特殊气味,色素。如果是糖发酵培养基则 主要观察是否产酸和有无气体。
5)、穿刺接种法(半固体接种)
多用于保存菌种、观察动力及厌氧培养等也可以 用于观察细菌的某些生化反应。 (1)如斜面接种法持好菌种管及培养基管; (2)以灭菌接种针从菌种管取菌,垂直刺入培养基的中 心(半固体或一般琼脂高层)直达近管底部(但不能 完全刺到管底),接种针应沿原路退出; (3)经培养后半固体培养基可观察到:沿穿刺线生长, 线外的培养基清亮表示细菌无动力;穿刺线模糊不清, 或沿穿刺线向外扩散生长,或整个培养基混浊表示细 菌有动力。
③ 处理和接种食品标本时,进入无菌室操作,不得随 意出入,如需要传递物品,可通过小窗传递。在无 菌室内如需要安装空调时,则应有过滤装置。
2、超净工作台
超净台的使用与保养: (1)风速保持在0.32-0.48米/秒; (2)使用前开启紫外灯照射30分钟以上; (3)让超净台预工作10-15分钟; (4)使用完毕后,用70%酒精将台面和台内四周擦拭干
(1)取菌技巧 D
1. 调整 Pipetman 刻度 (P1000 吸取 范围 200 ~ 1000μl)
2. 插上灭过菌之 Tip
(用力插紧)
微生物学研究方法
微生物学研究方法我折腾了好久微生物学研究方法,总算找到点门道。
说实话微生物学研究啊,我一开始也是瞎摸索。
就拿培养微生物来说吧,我最开始都不知道培养皿要怎么处理才能保证微生物好好生长。
我就随便把东西放进去,结果那微生物长得乱七八糟的,有的根本就没长起来。
后来我才知道,培养皿必须要先严格消毒,就像你要打扫房间,得彻彻底底地打扫干净一样,不能有一点脏东西残留,这样微生物才会有个干净的“家”。
还有显微镜观察这一块,也是让我很头疼的地方。
我试过很多次,每次看的时候样本老是模糊不清。
我开始以为是显微镜坏了呢,还傻乎乎地摆弄了半天显微镜的各种按钮。
最后才发现原来是我的样本处理得有问题,样本得均匀地涂抹在载玻片上,厚一点薄一点都不行,就像你做煎饼,面糊薄厚得恰到好处,这样才能做出完美的煎饼。
我吸取了教训,之后处理样本就特别小心,果然后来观察的时候就清晰多了。
在鉴定微生物种类的时候,我一开始也是完全没有方向。
我就知道一些简单的用革兰氏染色来区分细菌种类的方法。
但是实际做起来可没那么简单。
我老是染不好色,这个步骤的关键是要控制好色剂的量和染色的时间。
我记得有一次我染色时间太长了,结果都看不清楚了,就像你烤蛋糕,时间烤过了,蛋糕就糊了。
后来经过多次尝试,我才掌握了合适的染色时间和剂量。
在微生物学研究里,记录也是非常重要的一部分。
我有时候做着做着实验就忘了记录一些关键的数据或者步骤,导致最后结果莫名其妙的时候都不知道问题出在哪。
后来我就养成个习惯,每做一步就记录一步,哪怕是很细小的步骤也要写下来,就像写日记一样,把自己和微生物的故事详细记下来。
再说说提取微生物的DNA吧,这过程就很容易受到污染。
我试过好几种试剂盒,但有时候效果还是不好。
我想可能是我在操作的时候环境不够干净,毕竟DNA这东西很脆弱敏感。
所以要是做这个的话,环境一定要干净、实验器具都要灭好菌,就如同呵护一个弱小的婴儿一样精细才行。
要是你要开始涉足微生物学研究呢,我的建议就是一定要有耐心,很多步骤都要反复试验才能成功。
研究微生物的方法
研究微生物的方法
1. 直接观察法:通过显微镜或肉眼观察微生物的形态、大小、颜色、运动等特征。
2. 培养法:利用培养基为微生物提供适合生长的环境,使其繁殖增殖,并进行分离纯化、鉴定和检测。
3. 分子生物学技术:包括PCR、DNA测序、基因克隆和重组等技术,主要用于分析微生物的基因结构、功能和进化等方面。
4. 比较生物学方法:通过比较不同微生物的形态、解剖结构、代谢途径等特征,及其同其他生物和环境的关系,推测其分类和生态学特征。
5. 生态学研究法:通过对微生物的生境、环境因子等方面的研究,了解其分布、功能和影响等方面的特征。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
第5章研究微生物的基本方法随着现代医学及相关科学技术的发展,各学科相互交叉和渗透,医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平,许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。
医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术,准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物,并对引起感染的微生物进行耐药性监测,为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。
第一节显微镜观察由于细菌个体微小,肉眼不能看到,必须借助显微镜的放大才能看到。
一般形态和结构可用光学显微镜观察,其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。
常用显微镜有如下几种。
1.普通光学显微镜采用自然光或灯光为光源,其波长约为0.4μm。
显微镜的分辨率为波长的二分之一,即0.2μm,而肉眼可见的最小形象为0.2mm。
故用油(浸)镜放大1 000倍,能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。
普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
2.暗视野显微镜常用于观察不染色微生物形态和运动。
在普通显微镜安装暗视野聚光器后,光线不能从中间直接透入,视野呈暗色,当标本接受从聚光器边缘斜射光后可发生散射,因此可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。
3.相差显微镜相差显微镜利用相差板的光珊作用,改变直射光的光位相和振幅,将光相的差异转换为光强度差。
在相差显微镜下,当光线透过不染色标本时,由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异,可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
4.荧光显微镜荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同,主要区别在于光源、滤光片和聚光器。
目前大多数使用的是落射光装置,常用高压汞灯作为光源,可发出紫外光或蓝紫光。
滤光片有激发滤光片和吸收滤光片二种。
用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外,也可用暗视野聚光器,以加强荧光与背景的对比。
本法适用于对荧光色素染色或与荧光抗体结合的细菌的检测或鉴定。
5.电子显微镜用电子流作为光源,波长与可见光相比差几万倍,大大提高了分辨力,并用磁性电圈作为光学放大系统,放大倍数可达数万倍或几十万倍,常用于病毒颗粒和细菌超微结构的观察。
8.2制片和染色一. 非染色标本非染色标本一般可用于观察细菌形态、动力及运动情况。
细菌未染色时无色透明,在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。
有鞭毛的细菌运动活泼,无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。
梅毒苍白密螺旋体、钩端螺旋体、弯曲杆菌等的活菌各有特征鲜明的形态和运动方式,具有诊断意义。
常用的方法有压滴法、悬滴法和毛细管法等。
1.悬滴法在洁净凹玻片的凹孔四周涂上凡士林,用接种环取一环菌悬液放在盖玻片中央,再将凹玻片的凹孔对准盖玻片中央的液滴并盖上,然后迅速翻转,轻压盖玻片,使其与凹孔边缘的凡士林粘紧封闭后置高倍镜下(或暗视野)观察。
2.压滴法用接种环取一环菌悬液置于洁净玻片的中央,在菌悬液上轻轻盖上一盖玻片,注意避免产生气泡并防止菌悬液外溢,静止数秒钟后置高倍镜下明视野(或暗视野)观察。
3.毛细管法主要用于厌养菌动力的检查。
通常选用60~70mm长。
0.5~1.0mm孔径的毛细管虹吸厌养菌悬液后,用火焰将毛细管两端熔封。
并用塑胶纸将毛细管固定在载玻片上,置高倍镜下暗视野观察。
二、染色标本检查细菌标本经染色后,由于细菌与周围环境间在颜色上形成鲜明对比,故在普通光学显微镜下可清楚地观察到细菌的形态特征(如细菌的大小、形状、排列等)和某些特殊结构(如荚膜、鞭毛、芽孢等),并可根据染色反应性对细菌加以分类鉴定。
(一)细菌染色的一般程序细菌染色的一般程序是:涂片(干燥)—固定—染色(媒染)—(脱色)—(复染)。
1.涂片制备血液、分泌物、排泄物、穿刺液和液体培养物,直接在载玻片上作薄膜涂片;尸检或感染动物组织,病变局部涂抹采样的棉拭子直接涂片。
固体培养基上的菌落或菌苔的制片,先用接种环取一环生理盐水置载玻片中央,再用无菌接种环取少量的培养物在生理盐水中磨匀,涂布成1cm2大小的涂面,置室温下自然干燥或远火慢慢烘干。
2.固定目的是杀死细菌,凝固细菌蛋白及结构,便于染色;促使细菌粘附在载玻片上,避免在水洗过程中被水冲掉;改变细菌对染料的通透性,有利于菌细胞内结构的染色。
通常用火焰加热固定,将已干燥的涂片在火焰中迅速通过3次,以手背皮肤接触玻片不烫为佳。
3.染色根据检验目的不同,选择不同的染色方法进行染色。
染色时滴加染液,以复盖标本为度。
4.媒染凡能增强染料和被染物的亲和力,使染料固定于被染物及能引起细胞膜通透性改变的物质,称媒染剂。
常用的有明矾、鞣酸、金属盐和碘等,也有用加热法促进着色。
媒染剂可用于初染与复染之间,也可用于固定之后或含于固定液、染色中。
5.脱色凡能使已着色的被染物脱去颜色的化学试剂称为脱色剂。
常用乙醇、丙酮等作为脱色剂。
脱色剂可以查出细菌与染料结合的稳定程度,作为鉴别染色之用。
6.复染已脱色处理的细菌或其结构常以复染液作复染以便于观察。
复染液与初染液的颜色不同而成一鲜明对比。
复染不宜太强,以免掩盖初染的颜色。
(二)常用染色法1. 单染色法只用一种染料染色。
由于大多数细菌胞浆内含有酸性物质,可与碱性染料结合,故常用吕氏美蓝、结晶紫和稀释石碳酸复红等染液。
此法可观察细菌的大小、形态与排列,不能显示细菌的结构与染色特性。
2.复染色法用两种或两种以上不同染料可将细菌染成不同的颜色,除可观察细菌的大小、形态与排列外,还反应出细菌染色特性,具有鉴别细菌种类的价值。
常用的有革兰染色法和抗酸染色法。
(1)革兰染色:①细菌涂片经火焰固定,加结晶紫染液染1min,清水冲去染液。
②加碘液媒染 1min,水洗,甩干。
③用95%乙醇脱色,轻轻摇动约30s,至无紫色洗落为止,水洗,甩干。
④加稀释石碳酸复红或沙黄染液数滴进行复染,约30s,水洗。
⑤干后显微镜下镜检观察结果,革兰阳性菌染成紫色,革兰阴性菌为红色。
(2)抗酸染色:萋-尼 (Ziehl-Neelse)抗酸染色法:①细菌涂片经火焰固定,加石炭酸复红溶液,徐徐加热至有蒸气出现,切不可沸腾。
染液因蒸发减少时,应随时补充,防止染液蒸干。
持续染5min(奴卡菌需要加长时间),水洗,甩干。
②滴加3%盐酸乙醇脱色,不时摇动玻片至无红色脱落为止,水洗,甩干。
③加吕氏美蓝复染液数滴复染1min,水洗。
④干后显微镜下镜检观察结果,抗酸杆菌染成红色,非抗酸杆菌为蓝色。
金胺O-罗丹明B染色法:①细菌涂片固定后加第1液30~90s。
②弃去第1液后加第2液染15min。
③用第3液脱色1~2min,水洗。
④滴加第4液染30s,水洗,⑤干后置荧光显微镜下镜检观察结果在淡蓝色背景下,抗酸杆菌呈红色,其它细菌和细胞呈蓝色。
3.特殊染色法(1)鞭毛染色(改良Ryu法):①玻片的处理将新载玻片浸泡在95%乙醇中。
临用时取出,以干净纱布擦干。
②在玻片上滴蒸馏水1滴。
③挑取培养物少许,轻触蒸馏水滴顶部,仅允许极少量细菌进入水滴,不可搅动,以免鞭毛脱落。
④置35℃孵箱自然干燥,不能用火焰固定,滴加鞭毛染液染1~2 min轻轻水洗。
⑤干后显微镜镜检观察结果鞭毛和菌体呈紫色。
(2)异染颗粒染色(阿尔培托法):①细菌涂片经火焰固定,加甲液染色3~5min。
水洗。
②滴加乙液,染1min。
水洗。
③干后显微镜镜检观察结果菌体呈绿色,异染颗粒呈蓝黑色,用于白喉棒状杆菌染色。
(3)荚膜染色:①奥尔特荚膜染色法:将已固定的细菌涂片滴加3%沙黄染液,用火焰加温染色,持续3min,冷却后水洗,待干镜检。
结果:菌体呈褐色,荚膜呈黄色,此法主要用于碳疽芽胞杆菌。
②Hiss氏硫酸铜法:染液:第一液为结晶紫乙醇饱和液5ml加蒸馏水95ml 的混合液;第二液为20%硫酸铜水溶液。
方法:细菌涂片自然干燥,乙醇固定。
滴加第一液,微加热染1min。
再用第二液将涂片上的染液洗去,勿再水洗,倾去硫酸铜液,以吸水纸吸干镜检。
结果:菌体及背景呈紫色,荚膜呈鲜蓝色或不着色。
(4)芽胞染色:染液:第一液为萋-纳氏石炭酸复红液,第二液为95%乙醇,第三液为碱性美蓝液。
方法:将已固定的细菌涂片滴加第一液,微加热染5min,冷却后水洗。
用第二液脱色2min,水洗。
加第三液复染1min,水洗,待干镜检。
结果:菌体呈蓝色,芽胞呈红色。
4.负染色法背景着色而菌体本身不着色的染色为负染色法。
最常见的是墨汁负染色法,用来观察真菌及细菌荚膜等。
在标本涂片处滴加染液,混合后加上盖玻片(勿产生气泡),轻压。
在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞,转高倍镜或油镜确认,如新型隐球菌可见宽厚透亮的荚膜,背景为黑色。
5.荧光染色法经荧光素染色的细菌,或荧光素标记的荧光抗体与相应抗原的细菌、病毒结合形成的复合物,在荧光显微镜下发出荧光。
8.3 微生物接种和培养大多数细菌均可以通过人工方法培养,而衣原体和病毒的分离培养往往需要活组织、鸡胚、特殊细胞株及动物接种。
只有将微生物培养出来才能对它进行研究、鉴定和应用。
一、接种与分离方法根据待检标本的性质、培养目的和所用培养基的种类,采用不同的接种方法。
1.平板划线分离培养法对混有多种细菌的临床标本,采用划线分离和培养,使原来混杂在一起的细菌沿划线在琼脂平板表面分离,得到分散的单个菌落,以获得纯种。
临床送检的标本如痰、咽试子、泌尿生殖道的分泌物和粪便等细菌检验均需要借助琼脂平板划线分离目的菌。
平板划线分离法通常有两种方法:(1)分区划线分离法:此法常用于含菌量较多的标本如痰、泌尿生殖道的分泌物和粪便或混合细菌的分离。
先用接种环挑取标本涂布于琼脂平板1区(占培养基总面积的1/4)并作数条划线,再于2、3、4区依次划线。
每划完一个区域,均将接种环烧灼灭菌1次,冷后再划下一区域,每一区域的划线均与上一区域的划线交接1~3次。
一个成功分区划线的平板,培养后分别观察1区形成菌苔,2区菌落连成线,3区和4区可分离到单个菌落。
(2)连续划线分离法:此法常用于含菌量不多的标本或培养物中的细菌分离培养。
方法是先将接种物在琼脂平板上1/5处轻轻涂抹,然后再用接种环或拭子在平板表面曲线连续划线接种,直至划满琼脂平板表面。
2.琼脂斜面接种法主要用于菌落的移种,以获得纯种进行鉴定和保存菌种等。
用接种环(针)挑取单个菌落或培养物,从培养基斜面底部向上划一条直线,然后再从底部沿直线向上曲折连续划线,直至斜面近顶端处止。
生化鉴定培养基斜面接种,用接种针挑取待鉴定细菌的菌落,从斜面中央垂直刺入底部,抽出后在斜面上由下至上曲折划线接种。
3.穿刺接种法此法多用于半固体培养基或双糖铁、明胶等具有高层的培养基接种,半固体培养基的穿刺接种可用于观察细菌的动力。
接种时用接种针挑取菌落,由培养基中央垂直刺入至距管底0.4cm处,再沿穿刺线退出接种针。
双糖铁等有高层及斜面之分的培养基,穿刺高层部分,退出接种针后直接划线接种斜面部分。