大容量人血小板冻干保存的初步
血小板保存
血小板保存血小板保存2011年10月06日血小板是血液重要的组成成分，参与机体凝血过程，发挥正常的止血功能，防止损伤后血液丢失,因此血小板输注在临床血液输注中也占有很大比例。
血小板采集主要有2种方法：从全血中分离制备血小板，机器采集献血者血小板（机采血小板）。
2006年8月，卫生部出台《关于限期停止有偿机采血小板的通知》，要求各地献血办不得下达指令性无偿捐献机采血小板的指标，或以发放补贴为由变相有偿机采血小板；为补充无偿机采血小板的不足，各采供血机构要充分利用已经采集的“无偿献血”血液资源，开展手工分离制备血小板工作。
目前，手工分离制备血小板的方法有富含血小板血浆法(PRP 法)和去白膜法(BC法)2种。
由于PRP法分离制备浓缩血小板时，移走富含血小板血浆后的红细胞悬液层含有大量白细胞，这些白细胞会引起诸如发热、过敏等非溶血性输血反应，此外，红细胞悬液层中由血小板和白细胞形成的微聚物也会进一步对受血者造成危害；因此BC法分离血小板的使用越来越广泛。
BC法的原理是：全血首先经重离心后分离白膜层，再将白膜层经轻离心后移走红细胞和白细胞，即得到浓缩血小板。
与PRP法制备的血小板相比，BP法制备的血小板具有白细胞残留量较低、血小板膜表面CD62p的表达率显著降低，以及提高ATP水平和低渗性休克反应能力等优点。
对血小板功能来说，BP 法制备的血小板糖分解率可降低一半，提高氧代谢率，维持二氧化碳水平，使pH保持恒定，尤其适合长期储运。
这可能是由于血小板离心时是隔着红细胞和白细胞的“生理垫”，这样的分离制备过程对血小板的损伤较低，表现为反映血小板激活指标——血小板膜表面糖蛋白分子CD62p的表达率降低。
因此，手工分离血小板，尤其是BC法制备的血小板首先可以使手工采集全血中的血小板得到充分利用，避免资源的浪费；其次，价格低廉，患者容易接受；第三，从全血中分离白膜再获得血小板，可以降低全血保存后微聚物的形成，降低受血者发生肺部、脑部栓塞的危险性，减少非溶血性输血反应的发生。
2021血小板冻干再水化的条件及其凝血功能变化范文1
2021血小板冻干再水化的条件及其凝血功能变化范文 血小板(platelet)是由骨髓巨核细胞产生并释放于血液循环中的最小细胞,在止血和凝血过程中发挥着重要的作用。
由于血小板保质期较短，临床输注需求量大，加之临床输注需求时间的不确定性，造成了血小板过期浪费和临床供不应求的两难尴尬局面。
目前国内血小板主要保存方式是22℃振荡保存，有效期为 5d。
此外血小板还可深低温冰冻保存，但这种方法的保存效果和临床疗效不确切。
冷冻干燥技术已广泛应用于各种生物材料的保存，冻干制品具有常温下保存、性能稳定、便于运输的特点。
本研究以过期血小板为原料，探索血小板冻干再水化的条件，检测其冻干再水化后凝血功能的变化，为过期血小板再利用及新鲜血小板冰冻或低温保存研究提供了依据。
1、材料与方法 1.1实验材料 1.1.1血小板来源实验组选择体检合格，一周内未服用阿司匹林等抗血小板药物的自愿献血者，用血细胞分离机单采富含血小板血浆，22℃振荡保存 5d 过期；对照组选择新鲜机采血小板。
1.1.2主要试剂和溶液海藻糖 (CH22O11·2H2O，北京经科宏达生物技术有限公司)；牛血清白蛋白(BSA，上海生工生物工程有限公司)；磷酸盐缓冲液(PBS)；血小板聚集诱导剂二磷酸腺苷(ADP，Sigma公司)；凝血酶(Sigma 公司)；胶原(Sigma 公司)；瑞斯托霉素(Sigma 公司)；CD62P-PE(Bioscience 公司)；PAC-1-FITC(BDIS 公司 )；海藻糖加载缓冲液 ( 含50mmol/L 海藻糖，100mmol/L NaCl，10mmol/L KCl，10mmol/L EGTA，pH 为 6.8)；冻干保护剂(含 20%海藻糖，1% 牛血清白蛋白，9.5mmol/L HEPES，142.5mmol/L NaCl，4.8mmol/L KCl，1mmol/L Mg-Cl2)；复水溶液为 PBS 缓冲液和蒸馏水以 3:1 比例混合制成。
海藻糖hesbsa冷冻干燥血小板的初步实验研究
海藻糖＋ＨＥＳ＋ＢＳＡ冷冻干燥血小板的初步实验研究
徐梦洁１张绍志１王波２许先国３周正１陈光明１
１浙江大学制冷与低温研究所；２解放军第一一七医院；３浙江省血液中心
摘要：冷冻干燥保存技术为血小板的长期保存提供了一种有效的解决办法。
在冷冻干燥 中，提高一次干燥温度可有效缩短冻干操作时间，减少能量消耗，提高生产效率。
为此，本 文尝试选用部分玻璃化转变温度较高的聚合物羟乙基淀粉（ＨＥＳ）作为冻干保护剂成分，结合 海藻糖、牛血清白蛋白（ＢＳＡ）对人血小板进行了冷冻干燥的实验研究。
ＤＳＣ检测表明，羟乙 基淀粉的加入可以提高保护剂溶液的玻璃化转变温度。
在试验的六组配方中，以１０％（ｗｔ／ｗｔ） 海藻糖＋３％（ｗｔ／ｗｔ）ＨＥＳ＋１％（ｗｔ／ｗｔ）ＢＳＡ相对较好，其溶液的玻璃化转变温度为－３０．６±０．１℃， 采用它冻干血小板复水后的数值恢复率达到８５％以上，非活化率达到８０％以上，但各试验 组都存在复水后血小板细胞平均体积偏大、聚集效果不佳的问题。
关键词：血小板；冷冻干燥；羟乙基淀粉；玻璃化转变温度；冻干保护剂。
各种血液制品的最佳保存条件
各种血液制品的最佳保存条件
各种血液制品的最佳保存条件如下：
1.全血：需要保存在2-6℃的专用冰箱中，在有效期内使用。
离开血库冰箱到输注结束，在常规温度中不超过4小时。
2.红细胞悬浮液：同全血。
3.浓缩红细胞和少量的红细胞：同全血。
4.洗涤红细胞：需要在2-6℃的专用冰箱内保存不超过24小时。
5.血浆：需要放入速冻机中，在零下50℃的环境中速冻半小时后，再放入零下22℃的冰柜中保存。
6.血小板：需要被放置在一个特制的保存箱内，保持温度在22±2℃左右，并且要不停地振荡摇晃，防止血小板聚集，保质期只有5天。
7.血小板的保存条件更苛刻：要在22℃的条件中震荡保存，而且保质期只有5天。
8.特殊血液制品如RH型血（熊猫血）：加入高浓度的甘油后则可在-80°的冷冻室里储存十年。
以上信息仅供参考，如有疑问或需要了解更多信息，建议咨询专业医护人员。
人红细胞冰冻干燥保存研究的进展
人红细胞冰冻干燥保存研究的进展【摘要】目前红细胞临床保存方法主要有低温（4℃）和深低温（-80℃或-196℃）保存。
4℃保存时间短，而且容易受到细菌污染；深低温保存大大延长了红细胞保存时间，但需要笨重的低温设备，而且由于保护液中含有甘油等渗透性保护剂，解冻后需要反复洗涤。
这些缺陷限制了常规红细胞保存方法在一些特殊情况，例如在战争和自然灾害条件下的应用。
相对于常规保存方法而言，冰冻干燥具有以下优势：重量大大减轻，便于运输，适合室温保存，易于再水化。
本文就冰冻干燥保存红细胞研究的进展和所面临的挑战，尤其是最近海藻糖在冰冻干燥保存过程中的应用以及其作用机制进行了综合讨论，从而为发展一种安全、简单和有效的红细胞冰冻干燥保存方法提出理论指导。
【关键词】红细胞Progress in the Study of Lyophilization of Human Red Blood Cells ―― ReviewAbstract Now the clinical preservation methods of human red blood cells mainly include hypothermic storage (4℃) and cryopreservation (-80℃ or -196℃). The preservation time of hypothermic storage of red blood cells is relatively short and it is easy to be contaminated by microbes. Cryopreservation greatly prolongs the storage time，but it needs heavy storage equipments. Because the protective solutions in cryopreservation contain glycerol，red blood cells need complicated washing in order to remove glycerol. These shortage methods limit their application to some special conditions，such as war or natural disasters. Compared with conventional preservation methods of red blood cells，lyophilization has many advantages such as less weight，convenient transportation，room temperature preservation，prone to be rehydrated. In this review，the progress and challenge in the development of lyophilization of red blood cells，especially application of trehalose and its mechanism in the lyophilization of red blood cells were systematically discussed. This review can provide some theoretic guidance for developing a safe，simple and efficient preservation approach of red blood cells by lyophilization.Key words red blood cell；lyophilization；trehalose；biomembrane红细胞是血液中含量最多的细胞，它通过其中的血红蛋白从肺部携带氧气运送到周边器官，在维持人体正常机能起着重要的作用。
-80℃冰冻保存血小板的实验探究
ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ，Ｓｅｔ ｕｐ ａｎ ｉｄｅａｌ ｓｔｏｒａｇｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｆｒｅｅｚｉｎｇ， Ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｌｏｗ—ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
ｔｏ
ｐｒｅｓｅｒｖｅ ｐｌａｔｅｌｅｔ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｕｒｇｅｎｔ
Ｗｏｒｄｓ：Ｐｌａｔｅｌｅｔ；ｆｒｏｚｅｎ
ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ；ＤＭＳＯ；Ｐ—ｓｅｌｅｃｔｉｎ
３
扉页：
ｐ士＝Ｊ
明
本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大理学院或其他教育 机构的学位或证明而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均己 在文中以明确方式标明，并表示了谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本 人承担。
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｌｏｎｇ・ｔｅｒｍ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｒｅｓｅｒｖｅ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，ｔｏ ｒｅｓｏｌｖｅ ｔｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ
ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｈｏｒｔａｇｅ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ，ｉｔ ｉｓ ｗｉｄｅｌｙ ｕｓｅｄ ｉｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｈｏｐｅ． Ｋｅｙ
箱保存。血小板的采集到冰冻在６小时内完成，对保存到期的血小板进行复苏，复苏温 度３７－４２＂Ｃ，快速复苏，然后对Ｐｉｔ、ＭＰＶ、ＰＤＷ、ＰＣＴ、Ｐ．ＬＣＲ、ＰＨ值血小板ＣＤ６２ｐ
表达、相关功能如聚集，活化功能（用血小板聚集仪测定血小板聚集功能、用流式细胞
仪ｉ贝｜ｌ定血小板的活化功能｝旨标ＣＤ６２ｐ）进行检测，然后对冰冻前后指标进行配对资料
冻干血小板保存技术研究进展
直盐匡堂２１塑生！！旦笺！Ｑ鲞笙！！趟ｐｌａｔｅｌｅｔｓｔｏｒａｇｅ：Ｔｈｅｎｅｘｔｓｔｅｐｆｏｒｗａｒｄ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００５，４５（１２）：１８３２．［１０］ＭｃＤｏｎａｌｄＣＰ，ＣｏｌｖｉｎＪ，ＳｍｉｔｈＲ，ｅｔａ１．Ａｎｏｖｅｌｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａｉｎｐｌａｔｅｌｅｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓｕｔｉｌｉｚｉｎｇｏｘｙｇｅｎｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎａｓａｍａｒｋｅｒｆｏｒｂａｃｔｅｒｉａｌｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］．ＴｒａｎｓｆｕｓＭｅｄ，２００４，１４（６）：３９１．［１１］马敏，王迅．血小板制品细菌污染检测方法的研究进展［Ｊ］．中同输血杂志，２００７，２０（４）：３４８．［１２］ｔｅＢｏｅｋｈｏｒｓｔＰＡ，ＢｅｃｋｅｒｓＥＡ，ＹｅｓＭＣ，ｅｔａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇ－ｎｉｆｉｃａｎｅｅｏｆｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｉｃｓｃｒｅｅｎｉｎｇｉｎｐｌａｔｅｌｅｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００５，４５（４）：５１４：［１３］ＢｒｅｃｈｅｒＭＥ，ＭｅａｎｓＮ，ＪｅｒｅＣＳ．ｅｔａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｆｉｌｌａｕ．ｔｏｍａｔｅｄｃｕｌｔｕｒｅｓｙｓｔｅｍｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐｌａｔｅｌｅｔｓ：ａｎａｎａｌｙｓｉｓｗｉｔｈ１５ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｎｇｏｒｇａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓ—ｆｕｓｉｏｎ，２００１，４１（４）：４７７．［１４］ＭｃＤｏｎａｌｄＣＰ，ＣｏｌｖｉｎＪ，ＲｏｂｂｉｎｓＳ，ｅｔａ１．Ｕｓｅｏｆａｓｏｌｉｄ．ｐｈａｓｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａｉｎｐｌａｔｅｌｅｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ［Ｊ］．ＴｒａｎｓｆｕｓＭｅｄ，２００５，１５（３）：１７５．［１５］ＹａｚｅｒＭＨ，ＴｒｉｕｌｚｉＤＪ．ＵｓｅｏｆａｐＨｍｅｔｅｒｆｏｒｂａｃｔｅｒｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｗｈｏｌｅｂｌｏｏｄｐｌａｔｅｌｅｔｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００５，４５（７）：１１３３．冻干血小板保存技术研究进展刘静，杜丽莉（天津市血液中心，天津３００１１０）［关键词】冻干；血小板；保存技术血小板是血液中的一种重要组成成分，输注血小板已成为治疗血小板减少症患者的重要手段。
冻干保存人红细胞的技术要点
冻干保存人红细胞的技术要点
为了减少细胞损伤，在冻干液和再水化洗涤液中需要加入稳定剂(冻干缓冲液、洗涤液中的大分子聚合物和碳水化合物)，红细胞冻干稳定剂文献报道各异，主要包括：
1、大分子聚合物，如PVP、葡聚糖、骨胶等；
2、聚阴离子化合物，如焦磷酸、磷酸化肌醇；
3、碳水化合物，如葡萄糖、蔗糖、木糖、甘露糖等；
4、磷酸盐缓冲液或钾、钠等金属离子。
其中大分子聚合物和聚阴离子化合物的选择及其分子量和在溶液中的浓度等因素，对细胞的回收率均有影响。
进一步的研究证明，PVP的玻璃化转变温度受分子量和浓度的制约，即玻璃化转变温度随分子的增大而提高，随着水分的丢失(或在冻干体系中浓度的增加)而提高，冻干和保存生物样品应在保护剂的玻璃化转变温度下进行，以减少生物活性的丢失。
再水化过程中使细胞膜不受损伤为了细胞的存活，冻干过程中细胞必须处于高渗状态，所用保养液的渗透压相当于3～5倍生理渗透压，在给人体输注前需要经过逐步洗涤。
将细胞悬液的渗透压调整到生理水平的过程中，容易出现细胞膜破裂，血红蛋白流出的现象。
冻干过程中的温度控制
红细胞的冻干首先使细胞冰冻，由液态变成固态，然后使箱体内的细胞在抽气减压、升温的同时，水分升华，逐步达到干燥的目的。
因此，冰冻、升温与真空度三者关系如何协调、控制，对冻干效果至关重要。
深低温冷冻保存血小板的最佳温度及时限
深低温冷冻保存血小板的最佳温度及时限杨振宇;李正发;付凌梅;朱祥明【摘要】背景:临床对血小板的需求量急剧增加,新鲜液态血小板无法保障临床需求,特别是特殊血型、急诊患者和偏远地区的需求.目的:探讨用5％二甲基亚砜深低温冰冻保存血小板的最佳保存温度、时限及复融后的最佳使用时间.方法:选择16个机采血小板标本,对冰冻前及在-18℃、-40℃、-80℃冰冻保存1,3,6,12个月、冻融后即刻、冻融后1,2,4h进行相关指标检测,包括血小板计数、平均血小板体积、血小板分布宽度、CD42b和CD62p表达.结果与结论:①-80℃冰冻保存6个月血小板的CD62p表达、冰冻保存12个月血小板的CD42b、CD62p表达分别与冰冻前比较差异有显著性意义(P＜0.05);②-18℃、-40℃冰冻保存6个月血小板的CD42b、CD62p表达与-80℃相比差异均有显著性意义(P＜0.05);③-80℃冰冻保存6个月复融后4 h CD42b、CD62p表达与复融后即刻相比差异有显著性意义(P ＜0.05);④结果表明5％二甲基亚砜冰冻保存血小板在越低的温度下保存越好;推荐保存条件为-80℃、6个月内;解冻后的最佳使用时间为2h内.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)033【总页数】5页(P5368-5372)【关键词】血小板;低温冰冻保存;保存温度;保存时限;二甲基亚砜;复融;CD42b;CD62p;干细胞【作者】杨振宇;李正发;付凌梅;朱祥明【作者单位】云南昆明血液中心,云南省昆明市650106;云南省第一人民医院,云南省昆明市650000;云南昆明血液中心,云南省昆明市650106;云南昆明血液中心,云南省昆明市650106【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章快速阅读：文题释义：保存时限：机采血小板常规保存时间最多为5 d，从献血员的招募、采集、检验等到供应临床需要两三天，也就是说，它的真正使用时间只有约2 d，如不能及时用于临床将造成过期浪费，因此临床上机采血小板供应比较紧张。
人多能干细胞的冷冻与保存
人多能干细胞的冷冻与保存刘鸿燕1，2，黄元华2，马燕琳21郑州大学第一附属医院，河南省郑州市450052；2海南医学院附属医院，海南省海口市570102 Cryopreservation of human pluripotent stem cellsLiu Hong-yan1, 2, Huang Yuan-hua2, Ma Yan-lin21First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, Henan Province, China; 2Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China摘要背景：人多能干细胞的出现与发展是近年来生物医学研究领域的重大突破。
但其在基础/临床研究中的广泛应用还有诸多限制，建立安全有效标准化的冷冻保存方案是人多能干细胞广泛应用面临的重大挑战。
目的：回顾人多能干细胞冷冻领域的研究进展，探索造成冷冻损伤的原因和机制及改进方式，致力于促进新的更有效的冷冻方案形成。
方法：以“人多能干细胞、人胚胎干细胞、人诱导多能干细胞、玻璃化、程序化冷冻、慢冻法、冷冻保存”为中文检索词，以“human pluripotent stem cells，human embryonic stem cell，human introduced pluripotent stem cell，vitrification，programmedcryopreservation,slow-freezing,cryopreservation”为英文检索词，应用计算机检索中国知网全文数据库、万方全文数据库、维普(VIP)期刊全文数据库、PubMed数据库有关人多能干细胞冷冻保存技术的文献，排除与研究目的无关及重复文献，保留58篇文献进一步总结分析。
血小板冻干保存的研究进展
文章编号(Article ID):1009-2137(2004)04-0542-04・综述・血小板冻干保存的研究进展周俊,刘景汉解放军总医院输血科、全军临床输血中心,北京100853摘要 冻干是保存血小板最理想的方法,能常温保存、占用空间小、重量轻和便于运输等,可解决目前血小板保存和运输方面存在的局限性问题。
然而冻干除引起血小板膜结构损伤、蛋白质变性甚至死亡之外,还可致血小板激活损伤,冻干所致的血小板激活与膜通道脂质发生相变有关。
针对损伤机制应用各种保护剂可减少冻干损伤,目前已有研究通过海藻糖的载入,在实验室成功地进行了血小板的冻干保存,冻干再水化后血小板仍具有正常生理功能和存活能力。
这些研究结果表明血小板的冻干保存可应用于将来的血库和临床输血。
本文综述了冷冻干燥对血小板损伤作用、保护剂在血小板冷干研究中的应用及血小板冻干保存的实验研究。
关键词 血小板;冻干;低温保护剂中图分类号 R457.1;R331.1文献标识码 AProgress of R esearch on Lyophilized2Preservation of Platelets———ReviewZHOU J un,L IU Ji ng2HanDepart ment of Blood Transf usion,The General Hospital of PL A and Cli nical Transf usion Center of PL A,Beiji ng100853,Chi naAbstract Lyophilization is the best preservation of platelets at present.Lyophilized platelets could be stored in circumstance temperature,small s pace and be trans ported with portability,but lyophilizing may damage plateletmembrane,denature protein and induce platelet activation.The chain of events including freezing and drying that lead to activation are related to the phase trasition of platelet membrane lipid.Application of protectants in accordance with damage mechanism of lyophilization could alleviate the damnification.Human platelets can be preserved using lyophilization successfully in the presence of trehalose in laboratory presently,that retains normal functions and activities after rehydration.These findings suggest that the application of lyophilized platelets in transfusion medicine will be carried out in future.In this paper damage effect of lyophilization on platelets,application of cryoprotectants in the platelet lyophilization and experimantal studies on platelet cryopreseration were reviewed.K ey w ords platelets preservation;lyophilization;cryoprotectantJ Ex p Hem atol2004;12(4):542-545目前用于临床的血小板保存方法主要有两种:①22℃振荡液体保存浓缩血小板,保存期5天。
人血小板的冷冻干燥保存：细胞内外保护剂的作用
关键词 生物物 理学；血小板 ；冷冻 干燥 ；海藻糖
பைடு நூலகம்
中图分类号：Ｑ ５Ｔ ０ ８ ６ ； Ｑ ２． ３ ６
文献标识码：Ａ
Ｆｒ ｅ ｅ Ｄｒ ｉ ｆ ｕ ａ ａ ｅｅｓ Ｉ ｌｕ ｎ ｅｏ ｎ ｒ ｃ ｌ ｌ ｒａ ｄ ｅ ｚ － ｙｎｇｏ ｍ ｎ Ｐｌｔ ｌｔ ： ｎｆ ｅ ｃ ｆＩ ｔ ａ ｅｌ ａ ｎ Ｈ ｕ
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人小的冻燥存细内保剂作 血板冷干保。胞外护的用
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文章编号 ：０５ －３９２ ０）２０ ３－５ ２３４ ３ （０８０－ ０３ ０
人血小板 的冷冻干燥保存 ：细胞 内外保护剂的作用
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血小板的储存条件
血小板的储存条件
血小板是血液中的一种细胞成分，它在止血和血栓形成中起着关键作用。
在外伤或血管损伤时，血小板会迅速聚集并形成血栓，以阻止出血。
因此，血小板的储存条件至关重要，以确保其功能完整并有效地发挥作用。
血小板的储存条件主要包括温度、湿度和气氛的控制。
首先，温度的控制是非常关键的。
一般来说，血小板的最佳存储温度为20-24°C。
在这个温度范围内，血小板的功能能够得到最大程度的保持。
如果温度过低或过高，血小板的功能就会受到影响，甚至引起血小板的破坏。
因此，在储存血小板时，需要确保温度的稳定性和准确性。
湿度的控制也是必不可少的。
在湿度过高的环境中，血小板容易吸湿并发生质量问题。
而在湿度过低的环境中，血小板则容易变得干燥并丧失活性。
因此，维持适宜的湿度对于血小板的储存至关重要。
一般来说，湿度应保持在50-70%之间，以确保血小板的质量和活性。
气氛的控制也是关键因素之一。
在储存血小板的容器中，需要保持适当的氧气浓度和二氧化碳浓度。
这是因为血小板需要适当的气氛来维持其功能和稳定性。
如果氧气浓度过高或过低，血小板的活性都会受到影响。
因此，维持适宜的气氛对于血小板的储存非常重要。
血小板的储存条件直接影响其功能和活性。
温度、湿度和气氛的控制是确保血小板质量和活性的关键因素。
只有在适宜的储存条件下，血小板才能保持其完整的功能，有效地发挥其在止血和血栓形成中的作用。
因此，在临床应用中，储存血小板的条件必须严格控制，以确保患者能够获得高质量的血小板治疗。
血小板采集后不同时间冷冻保存对其质量的影响
血小板采集后不同时间冷冻保存对其质量的影响2010年9月第7卷第25期?医学检验?血小板采集后不同时间冷冻保存对其质量的影响段本荣(山东省枣庄市中心血站,山东枣庄277100)【摘要】目的:观察血小板采集后不同时间冷冻保存对其质量的影响.方法:血小板采集后6h,24h.72h和96h加5%的DMSO于一80℃超低温冰箱冷冻保存.3个月后取出解冻,全自动生化细胞分析仪检测血小板计数(Plt),血小板平均体积(MPV).乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测血小板中LDH的含量,流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白CD62D的表达.结果:血小板采集后6h和24h冷冻,Plt,MPV,pH,LDH和CD62p表达与新鲜血小板无明显差异,而采集后72h和96h冷冻血小板Pit,MPV和LDH含量明显降低,而pH和CD62p表达较新鲜血小板明显升高.结论:血小板采集后长时间放置后冻存会导致血小板激活,采集后应尽快冷冻保存,以保证冰冻血小板的质量.【关键词】血小板;冷冻保存;乳酸脱氢酶;血小板膜糖蛋白CD62p【中图分类号】R446.11【文献标识码】B【文章编号】1673—7210(2010)09(a)一061—03 QualitystudyofcryopreservedplateletafterbeingcollectedindifferenttimepointDUANBenrong(ZaozhuangBloodCenter,ShandongProvince,Zaozhuang277100,China) [Abstract]0bjetive:Tostudythequalityofcryopreservedplateletafterbeingcollectedindiffe renttimepoint.Methods:Theplateletswerepreservedin一80℃ultracoldfreezerwith5%DMSOafterbeingcollectedin6,24,72and96h.The platcletswerethawedafterthreemonths.Thebloodplateletscount(Ph)andmeanplateletvol ume(MPV)weremeasuredctatedehydrogenase(LDH)wasassayedbyLDHkita ndplateletglucoproteinCD62pwasdetectedbyflowcytometry.Results:ThePltMPV,pH,LDHandCD62pofbloodplatelets howednodifferencescry—opreserved6hand24hafterplateletcollectioncomparedwithfleshbloodplatelet.However,t hebloodplateletcryopre—servedafter72hand96hshowedsignificantlyincreaseinthebiomarkersofPlt,MPV andLDH ,anddecreaseofpHandtheexpressionofCD62pcomparedwithfleshbloodplatelet.Conclusion:Theplateletcanbea ctivatedaftercollectionforalongtime.Inordertoguaranteethebloodplateletquality,theplateletshouldbecryopreserve dassoonaspossibleaftercollection.【Keywords】Bloodplatelet;Cryopreservation;Lactatedehydrogenase;PlateletglucoproteinCD62p血小板的输注在临床中是一种有效的治疗重症血小板减少症,外伤性大出血,骨髓移植及肿瘤放化疗患者等的重要方法,在某些情况下血小板不能由其他血液制品代替,因此.保证足量的血小板供应显得尤为重要.单采血小板是当前最佳的成分品种,目前主要采取的是在室温下保存血小板的办法,但是由于血小板在保存过程中容易丧失活性和微生物污染等原因,只能在常温(22±2)℃振荡条件下保存5d[1】,过了保存期的血小板由于功能丧失,感染细菌的可能性大增,往往被扔弃,造成浪费.这一保存技术的缺陷严重地制约了血小板的临床应用.探索新的血小板保存技术成为目前血液保存工作中亟待解决的问题.目前研究表明.深低温冰冻机采血小板对血小板的保存具有良好的效果I2_]】,但是,我国尚未制定冰冻机采血小板制备的统一标准,特别在时间上,有的在采集后几小时内制备,有的在新鲜机采血小板的保存期末制备为冰冻血小板.笔者旨在探讨血小板采集后不同时间冷冻保存对血小板质量的影响,为血小板冷冻保存提供理论依据.1材料与方法1.1血小板来源健康志愿者30例,他们的血小板计数不低于180xlOg/L,按照全国血液质量委员会颁布的供血者健康标准检查合格.用CobeSpectra血细胞分离机(美国产品)采集,采集时加入枸橼酸葡萄糖溶液1:10抗凝,每份血小板含量I>2.5~101/袋.1.2血小板保存与解冻分别于血小板采集后6h,24h,72h和96h冷冻保存.具体操作:在洁净的环境中采用无菌技术,取3Oml血小板悬液.加入超滤DMSO至终浓度为5%,充分震荡使血小板与冻存剂迅速混匀,置于专用PVC袋中,迅速用热合仪密封,放入一80~C超低温冰箱保存.3个月后将冻存的血小板从冰箱里取出,直接置于42oC水浴箱里至完全融化,用于以下指标的检测.1.3血液指标检测1-3.1血小板计数(P1t),血小板平均体积(MPV)检测采用全自动细胞分析仪检测.CHINAMEDICALHERALD巾国医药g报61医学检验?表13种检测方法的灵敏度,特异性比较(%)Tab.1Comparisionofsensitivity,specificityof3kindsofdetectionmethods(%13讨论梅毒是由苍白螺旋体引起的一种经典的性传播慢性感染性疾病.它可以引起全身性的感染及病变.其传播方式有经性接触传播,血液传播和母婴垂直传播3种【1l.近年来梅毒的发病率呈明显上升趋势,2008年国家卫生部公布27种法定报告的甲,乙类传染病中.梅毒发病由原来的第7位上升至第5位.梅毒的诊断依赖病史,症状,体征,暗视野显微镜检查和血清学检查.梅毒感染者血清中可产生非特异性反应素抗体和梅毒螺旋体的特异性抗体,血清学检测是实验室诊断梅毒的重要依据之一,它在梅毒的诊断,治疗及研究方面均有重要意义.TRUST是采用活化心磷脂卵磷脂胆固醇配制VDRL抗原重悬于含甲苯胺红特制溶液中与梅毒患者血清中的反应素发生粉红色凝集,因而检测出梅毒.TRUST由于其廉价,快速,方便以及其所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇,其测定效价比RPR,USR高～个滴度等特点.所以广泛用于临床住院和门诊患者的梅毒筛查;其敏感性及特异性较差,对早期梅毒,晚期梅毒及治疗后梅毒检测的敏感性低以及对神经梅毒的不敏感性,常出现假阴性而漏检,其可作为梅毒疗效观察或随访有否复发或再感染的指标嘲.TP—ELISA是随着近年梅毒螺旋体基因工程的研制成功而发展起来的一种血清学检测方法.是利用重组梅毒螺旋体的特异性抗原包被酶标板孔,并采用双抗原夹心法检测血清标本中的梅毒特异性IgM和IgG抗体,极大地提高了试验的敏感性和特异性翻,对早期和晚期梅毒都有较高的检出率.用ELISA法检测的TP抗体稳定,即使经抗梅毒治疗后,抗体仍继续存在,甚至终生存在,用仪器判读试验结果14].本实验中2010年9月第7卷第25期TP—ELISA的敏感性,特异性均很好,与TPPA的符合率高,无显着性差异0.05),该方法重复性好,结果稳定可靠.梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)是使用螺旋体毒株制成抗原,是全螺旋体纯化抗原,在抗原组成上比较全面,不易产生假阳性,特异性较高,灵敏度高.梅毒螺旋体感染后,此抗体在体内持续存在,可终身保留,检测结果不随病情发展和治疗而变化,故TPPA作为梅毒的确诊试验,对各期梅毒的检测结果都有较好的稳定性,不易出现假阳性反应.是目前公认的较好的梅毒确认方法,具有很高的敏感性和特异性[51,但是试剂较贵,以肉眼判断结果,不宜大批量检测.一般作为TRUST和TP—ELISA等初筛阳性以及潜伏期梅毒和一些非螺旋体试验阴性又高度怀疑为梅毒患者的确认试验,也可用于排除用非特异性抗体检测所致的假阳性嗍.由结果可知.临床上进行大量人员的高危人群梅毒筛查时宜采用TP—ELISA检测方法.由于其敏感性和特异性较高而且检测方法简便,假阳性率和假阴性率较低等特点易采用TP—ELISA检测方法『句对TRUST和TP—ELISA等初筛阳性以及潜伏期梅毒和一些非螺旋体试验阴性又高度怀疑为梅毒患者的确认试验采用TRUST检测方法is].在临床应用过程中积极掌握梅毒血清学检测方法的特点对梅毒的诊治可提供重要的参考依据,减少假阳性率和减少假阴性率,为梅毒及早发现,及早诊断提供明确诊断的依据.【参考文献】[1】孙芸,黎保仝.11799例普通住院患者梅毒血清学试验结果分析叨.临床检验杂志,2005,23(3):171.【2】程艳杰,王广杰,刘明,等.梅毒螺旋体特异性抗体检测方法的实验室评fir[J].中华检验医学杂志.2006,29(3):272.[3]邓晓琴,杨茂,向艳玲,等.ELISA法梅毒检测的钩状效应及其分析【J].中国输血杂志,2006,19(3):220.[4]邹黎.梅毒血清学试验几种检测方法比较[J】.实用医技杂志,2006,13 (21):3788.[5]李群,王福华.三种梅毒检测方法的比较….中华医学实践杂志,2006,5 (3):78.【6]韩国柱,邵长庚.我国梅毒瘤型和临床特点册.中华皮肤科杂志,2005,38 (5):322.(收稿日期:2010—05—11)(上接第62页)本研究结果同时表明,冰冻血小板一80℃保存是可行的,这为进一步向临床推广应用提供了有力的科学依据.冰冻血小板可以替代新鲜血小板,虽然其在冰冻过程中损失了部分血小板,但冰冻血小板膜表面黏附受体结合能力增强,促凝血活性明显提高,即刻止血效果显着/7/,可作为应急止血之需.因其延长了保存时间,可以节约有限的血资源,提高了血小板的利用率.由于血小板供者紧急情况下不易找到.单采血小板采集时间又长,临床急需时无法及时得到供应,冰冻血小板的制备无疑确保了临床急用血小板的需求.【参考文献】f1】PunsalangA,HealJM,MurphyPJ.Growthofgram—positiveandgram—negativebacteriainplateletconcentrates[J].Transfusion,1989,29(7):596—599.【2]LandiEP,RoveriEG,OzeloMC,eta1.Effectsofhighplateletconcen- trationincollectingandfreezingdryplateletsconcentratesfJ].Transfus ApherSci,2004,30(3):205-212.【3]V aleriCR,RagnoG,KhuriS.Freezinghumanplateletswith6percent64田置医药导掘CHINAMEDICALHERALD dimethylsulfoxidewithremovalofthesupernatantsolutionbeforefreez—ingandstorageat一80degreesCwithoutpostthawprocessing们.Trans—fusion,2005,45(12):1890—1898.[4]RebullaP,MorelatiF,RevelliN,eta1.Outcomesofallautomatedpro? cedurefortheselectionofeffectiveplateletsforpatientsrefractoryto randomdonorsbasedoncross-matchinglocallyavailableplateletprod一.cts[J].BrJHaematol,2004,125(1):83—89.【5]AngeliniA,DraganiA,BerardiA,eta1.Evaluationoffourdifferent methodsforplateletfreezing.Invitroandinvivostudies.V oxSang, 1992.62(3):146一l51.【6]GaoDY,NeffK,XiaoHY,eta1.Developmentofoptimaltechniquesfor cryopreservationofhumanplatelets.I.Platelctactivationduringcold storage(at22and8degreesC)andcryopreservation[J].Cryobiology,1999, 38:225—235.f7】BarnardMR,MacGregorH,RagnoG,eta1.Fresh,liquid-preserved, anderyopreservedplatelets:adhesivesulfacereceptorsandmembrane procoagulantactivity[J].Transfusion,1999,39(8):880-888.(收稿日期:2010—04—06)。
血小板制品的存储要求
血小板制品的存储要求
血小板是血液中的一种重要成分，广泛用于治疗血液病、手术、外伤等相关疾
病或情况。
为了确保血小板制品的质量和有效性，正确的存储是至关重要的。
首先，血小板制品的存储温度应控制在20℃以下，最佳储存温度为20~-30℃。
这是因为在低温下，血小板的代谢会减慢，从而延长其保存时间和功能。
其次，血小板制品应储存在冷冻设备中，例如专用的冷藏柜或冷冻箱。
这些设
备应经过验证，能够稳定地维持所需的低温环境。
此外，为了避免温度波动，以及交叉感染的风险，必须确保冷藏柜内的温度稳定，并与其他物品隔离开。
另外，血小板制品的储存容器应该是无菌、密封和耐冻的。
这样可以防止细菌
污染和血小板受损。
储存容器的选择应符合相关的医疗卫生要求，并配备良好的标签，以便追溯和管理。
此外，血小板制品在储存期间应受到轻轻地旋转或翻动，以确保血小板均匀分布，避免结块或沉淀。
然而，过于激烈的震荡或振动可能会对血小板造成损伤，因此需要在存储和搬运过程中小心处理。
最后，在存储血小板制品时，必须严格遵守相关的卫生和安全规定。
这包括洁
净的工作环境、消毒措施的实施以及正确的个人防护装备的使用。
总之，为了确保血小板制品的质量和有效性，储存条件和操作必须符合严格的
要求。
控制好存储温度，使用合适的储存容器，小心处理并遵守卫生安全规定，将有助于保护血小板制品的有效性，为患者的治疗提供可靠的血小板支持。
代谢组学方法 冻干
代谢组学方法冻干
代谢组学方法中，冻干是一种常用的处理细胞样本的方法，用于长期保存细胞样本。
以下是冻干的基本步骤：
1. 淬灭：将收集到的细胞样本在液氮中进行淬灭处理，以抑制细胞中的代谢活性。
2. 冷冻：将淬灭过的细胞样本放入-80℃的储存设备中，进行冷冻。
3. 干燥：将冷冻后的细胞样本进行真空干燥，去除细胞中的水分。
4. 保存：将干燥后的细胞样本进行密封保存，-80℃进行长期保存。
通过冻干处理，可以延长细胞样本的保存时间，并保持细胞的代谢活性。
血小板采集后不同时间冷冻保存对其质量的影响
血小板采集后不同时间冷冻保存对其质量的影响
段本荣
【期刊名称】《中国医药导报》
【年(卷),期】2010(7)25
【摘要】目的:观察血小板采集后不同时间冷冻保存对其质量的影响.方法:血小板采集后6 h,24 h.72 h和96 h加5%的DMSO于-80%超低温冰箱冷冻保存.3个月后取出解冻,全自动生化细胞分析仪检测血小板计数(Plt)、血小板平均体积(MPV).乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测血小板中LDH的含量,流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白CD62p的表达.结果:血小板采集后6 h和24 h冷冻,Ph、MPV、pH、LDH和CD62p表达与新鲜血小板无明显差异,而采集后72 h和96 h冷冻血小板Plt、MPV和LDH含量明显降低,而pH和CD62p表达较新鲜血小板明显升高.结论:血小板采集后长时间放置后冻存会导致血小板激活,采集后应尽快冷冻保存,以保证冰冻血小板的质量.
【总页数】3页(P61-62,64)
【作者】段本荣
【作者单位】山东省枣庄市中心血站,山东枣庄,277100
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11
【相关文献】
1.血样采集后不同放置时间对RBC WBC PLT计数结果的影响 [J], 张军龙
2.不同采集模式单采血小板后献血者外周血小板计数的变化情况 [J], 方春梅;阮忠
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血小板的保存操作规程
血小板的保存近年来临床对血小板的需求量越来越多，只靠临时分离制备血小板已远不能满足需要，特别是有时浓缩血小板采集和供应不平衡，造成浓缩血小板的剩余或不足，都需要对血小板进行保存。
因此浓缩血小板的保存是亟待解决的问题。
血小板性质脆弱，离体几小时就会发生变形、破裂、损伤，输注后在体内寿命会缩短。
20世纪60年代起，对如何保存血小板，并延长其体外保存时间进行了大量的研究，并取得了较好效果。
目前血小板的保存有常温保存和冰冻保存两种方法，前者可保存浓缩血小极3～5天，后者则可长期保存血小板。
一、血小板的常温保存血小板因为其本身固有的特性，目前标准的保存温度是22℃±2℃，并不断振荡保存。
22℃±2℃时血小板不易发生形态变化，而且容易保持其生理活性；而因为血小板的黏附、集聚性，振荡的目的是使大量、浓缩的血小板处于分散状态，不在体外产生集聚，以保持其输入体内的黏附、集聚功能。
需要特别注意的是：因为浓缩血小板悬浮在血浆中，血浆是细菌的良好生长繁殖基质，22℃+2℃时细菌容易生长繁殖，因此在浓缩血小板的制备和保存过程中要特别注意无菌操作，防止细菌污染。
（一）保存液目前认为ACD、CPD或CPDA-1、CPDA-2、CPDA-3仍然是保存浓缩血小板的较好保存液。
它们对血小板的活力和功能均无损害。
虽然在ACD或CPD保存液中血小板易聚集，但是解聚后血小板功能仍好。
EDTA抗凝的血小板在体内很快被脾脏扣留、破坏，且对血小板功能有损伤，不宜作血小板抗凝剂。
（二）保存温度保存温度对血小板活性影响很大，以22℃±2℃为宜。
若将其保存在(4±2) ℃8小时后，血小板发生不可逆转的微管周围带环消逝，导致从盘形到球形的变化，容易产生聚集和破坏，输人体内后寿命就会缩矩。
若保存超过24小时，则血小板损伤明显而不能输用。
造成血小板损伤的原因主要是温度较低所致。
浓缩血小板在20～24℃时，可保存3～7天。
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·论著·大容量人血小板冻干保存的初步研究王波1，张存海1，徐梦洁2，许先国3，陈光明2，张绍志2［摘要］目的为使血小板冷冻干燥保存技术用于军队临床战创伤救治，在小容量冻干保存的基础上研究大容量人血小板的冷冻干燥技术。
方法采用特制血盒作为冻干容器，以20%（w/v）海藻糖和1%（w/v）牛血清白蛋白作为冻干保护剂。
冻干样品复水后测量血小板的数值恢复率和体积分布参数，应用流式细胞仪检测血小板的凋亡率和活化率，采用二磷酸腺苷和肾上腺素检测血小板的聚集功能。
结果大容量血小板冻干复水后的数值恢复率为（66．3ʃ2．1）%，平均血小板体积较新鲜血小板有明显增加，冻干血小板的细胞凋亡率达20%左右；冻干和复水过程还造成小部分血小板被激活，其最大聚集率为新鲜血小板的50%左右。
结论大容量血小板冻干复水后的恢复率较低，形态结构、活性和功能指标均低于新鲜血小板，但基本可以满足血小板临床止血功能标准。
［关键词］血小板；冷冻干燥；大容量；聚集；流式细胞术［中图分类号］R457［文献标志码］A［文章编号］1672-271X（2012）05-0413-03Preliminary study on the preservation of large volume of human platelets by freeze-drying WANG Bo1，ZHANG Cun-hai1，XU Meng-jie2，XU Xian-guo3，CHEN Guang-ming2，ZHANG Shao-zhi2．1．In-tensive Care Unit，117Hospital of PLA，Hangzhou，Zhejiang310013，China；2．Institute of Refrigeration and Cry-ogenics，Zhejiang University，Hangzhou，Zhejiang310027，China；3．Institute of Blood Transfusion，Blood Center of Zhejiang Province，Hangzhou，Zhejiang310006，China［Abstract］Objective Towards a clinical application of the technology of freeze-drying preservation of human platelets in certain military situations，a primary study on the freeze-drying of large volume of human platelets was conducted．Methods A specially designed blood vessel was used as the lyophilization container．The human platelets were rehydrated directly after lyophiliztion．The cell recovery rate，mean platelet volume and platelet distribution width were analyzed by a blood-cell counter．The apoptosis rate and activation rate were re-corded by a flow cytometry．The aggregation function was tested with adenosine diphosphate and epinephrine．Results The recovery rate of rehydrated platelets reached（66．3ʃ2．1）%．Compared with fresh control the mean platelet volume of rehydrated platelets increased significantly．The apoptosis rate was about20%according to the analysis of the flow cytometry，and a small part of platelets were activated during the freeze-drying and re-hydration process．The maximal aggregation rate was approaching approximately50%of that of fresh control．Conclusion Freeze-drying preservation of large volume of human platelets resulted in a comparatively low cell recovery rate compared with that of small volumes，and the morphology，aggregation function was also affected，but meet the clinical requirement of coagulation on the whole．［Key words］platelet；freeze-drying；large volume；aggregation；flow cytometry血小板保存技术的局限性造成目前血小板的供应不足和浪费。
冷冻干燥法为血小板长期保存的一种有效方法［1-2］，但现阶段仍局限在小容量（≤10ml）样本，还不能于临床批量应用。
临床输血治疗一般采用血袋，容量大于现有的实验研究样本。
本研究在瓶装小容量（1ml）血小板冻干保存的基础上，尝试采用特制血盒进行大容量（100ml）血小板的冻干作者简介：王波（1962-），男，山东潍坊人，硕士，主任医师，硕士研究生导师，从事战、创伤危重病研究作者单位：1．310013浙江杭州，解放军117医院重症医学科；2．310027浙江杭州，浙江大学制冷与低温研究所；3．310006浙江杭州，浙江省血液中心输血研究所保存，并对冻干血小板复水后的数值恢复率和形态分布，以及聚集和流式等活性指标进行检测比较。
1材料与方法1．1实验材料血小板浓缩液［（1 1．5）ˑ109/ ml］来自健康献血者，浙江省血液中心提供，实验前存于22ħ中震荡过夜。
主要试剂：海藻糖（北京京科宏达生物技术有限公司）、牛血清白蛋白（上海生工生物工程公司）、血小板聚集诱导剂二磷酸腺苷（adenosine diphos-phate，ADP）和肾上腺素（Chrono-log公司）、流式试剂CD61-PerCP，Annexin V-FITC，PI染色剂和结合缓冲液（MultiSciences公司）、CD62P-PE（eBioscience 公司）、PAC-1-FITC（BDIS公司）。
主要溶液：海藻糖加载缓冲液（含50mmol/L海藻糖，100mmol/L NaCl，10mmol/L KCl，10mmol/L EGTA，10mmol/L咪唑，pH值为6．8）；冻干保护剂（含有20%海藻糖，1%牛血清白蛋白，9．5mmol/L HEPES，142．5mmol/L NaCl，4．8mmol/L KCl，1 mmol/L MgCl2）；复水溶液为以生理盐水稀释的血浆（1ʒ1）。
主要仪器：冷冻干燥机（LabConco，美国）、恒温振荡水浴（Bellco Glass，美国）、流式细胞仪（FACS-Calibur，BD，美国）、血球计数仪（CELL－DYN1700，Abbott，美国）。
特制冻干血盒为230mmˑ120mmˑ25mm的长方体，以医用塑料制作，医用无纺布（透气不透水）密封并预留溶液充注口。
1．2血小板冷冻干燥血小板浓缩液离心洗涤后重悬于海藻糖加载缓冲液中，于37ħ水浴中振荡孵化4h。
洗涤后再重悬于冻干保护剂中，调整浓度约为0．1ˑ109/ml。
将100ml血小板冻干悬浮液装入特制冻干血盒中，密封充注口。
冻干悬浮液在－60ħ中预冻4h后，迅速置于－30ħ的冻干机搁板上，抽真空进行一次干燥100h；随后搁板升温至20ħ，二次干燥持续时间40h。
干燥过程中冷阱温度维持－80ħ，真空度1Pa左右。
冻干后加入100ml复水溶液，轻轻振荡至冻干样品完全溶解后用于实验。
1．3血小板计数采用血球计数仪测量血小板浓度，血小板平均体积（mean platelet volume，MPV）和血小板分布宽度（platelet distribution width，PDW）。
计算血小板的数值恢复率（为冻干复水后的血小板数/冻干前的血小板数ˑ100%）。
1．4血小板流式实验调整血小板浓度，依次加入流式试剂按常规染色处理后，在流式细胞仪上进行分析，采用CellQuest软件计算血小板凋亡率和活化率。
另取新鲜血小板同样处理并计算。
1．5血小板聚集实验以新鲜浓缩血小板为对照组，ADP和肾上腺素为聚集诱导剂（浓度分别为20μmol/L和50μmol/L），用血球计数仪对聚集前的复水血小板悬浮液和聚集后的复水血小板进行细胞计数，计算聚集率［3］（1－聚集前悬浮液中血小板数/聚集后上清液中血小板数ˑ100%）。
1．6统计学处理采用SPSS16．0统计软件进行统计分析，检测数据以均值ʃ标准差（xʃs）表示。
采用双尾t检验分析对比，以P＜0．05为差异有统计学意义。
2结果2．1冻干复水后血小板的恢复率和形态分布冻干血小板复水后的数值恢复率为（66．3ʃ2．1）%，MPV 较新鲜血小板明显增加（P＜0．01），PDW略有增大但与新鲜血小板无显著差异（P＞0．05）。
见表1。
表1冻干复水后血小板与新鲜血小板的MPV和PDW值（n=5）分组MPV（fL）PDW（%）冻干复水后血小板12．4ʃ0．6*17．3ʃ0．7新鲜血小板9．9ʃ0．616．5ʃ0．8注：与新鲜血小板比较，*P＜0．012．2冻干复水后血小板的凋亡和活化检测采用流式细胞仪检测冻干复水后血小板的凋亡和活化结果如图1所示。
冻干复水后血小板比较新鲜血小板，部分细胞呈现Annexin V-FITC阳性，即细胞膜上出现早期凋亡的标志，未凋亡的细胞占血小板总数的（80．3ʃ6．3）%。
同时冻干复水后血小板的PAC-1表达率较低，但CD62P表达率较高，活化早期的血小板（PAC-1-FITC呈阳性）占血小板总数的（2．5ʃ1．8）%，而活化晚期的血小板（CD62P-PE呈阳性）占血小板总数的（12．8ʃ4．6）%。