活性磷酸盐测定
化学实验报告 实验__磷酸盐的测定
实 验 报 告姓名： 班级： 同组人： 自评成绩： 项目 磷酸盐的测定 课程： 分析化学 学号： 一、实验目的1、掌握钼蓝法测定磷酸盐含量的方法和原理。
2、掌握分光光度计的使用方法。
二、实验原理在强酸性条件下，水样中的活性磷酸盐与钼酸铵反应，生成淡黄色的磷钼黄。
磷钼黄被氯化亚锡)(2SnCl 还原成蓝色的磷钼蓝。
蓝色深浅与活性磷酸盐含量成正比，在690nm 波长处有最大吸收值。
通过比色法可测出水样中活性磷酸盐的含量。
注意事项（1）实验用玻璃器皿应用酸洗涤，不应用含有磷的洗涤，以免玻璃表面吸附作用而造成磷酸盐的污染和样品中磷酸盐的损失。
（2）若水样有明显颜色，则应在锥形瓶里的100ml 水样中加400mg 活性炭，摇动5min ，用2～3张重叠滤纸过滤后做测定。
定性滤纸和活性炭会带进微量磷酸盐，应用同样的活性炭做空白实验。
（3）显色后应在30min 内测完溶液吸光值，30min 后溶液的颜色将逐渐变浅。
（4）若对精确度要求较高时，应增加平行实验。
三、仪器和药品 仪器：分光光度计722型或其他型号 吸管25ml 、10ml 、2.0ml 、1.0ml 具塞比色管50ml6支 容量瓶100ml .烧杯250ml 小漏斗 量筒 试剂：1.活性炭 粉末2.硫酸溶液（1:1） 在不断搅拌下，将浓硫酸沿烧杯壁缓缓倒入同体积的蒸馏水中。
3.钼酸铵溶液（10%） 称取5g 钼酸铵[]O H O Mo NH 2247644)(⋅溶解后稀释至50ml ，到其澄清液，贮存于聚乙烯瓶中。
4.氯化亚锡甘油溶液（2.5%） 称取2.5g O H SnCl 222⋅溶于100ml 甘油中，温热搅拌使其溶解。
贮存于棕色试剂瓶中。
5.钼酸铵—硫酸混合试剂 将钼酸铵与硫酸按1:3的体积比混合，避光保存于聚乙烯瓶中。
如果变蓝，须重新配制。
6.磷酸盐标准溶液KH 2PO 4标准贮备溶液：将分析纯KH 2PO 4在115℃烘干1h ，置于干燥器冷却后，称取1.3610g ，溶于蒸馏水转移至1000ml 容量瓶中稀释至刻度，混匀。
磷钼蓝分光光度法测定海水中的活性磷酸盐无机磷精选文档
磷钼蓝分光光度法测定海水中的活性磷酸盐无机磷精选文档TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-磷钼蓝分光光度法测定海水中的活性磷酸盐无机磷1 适用范围和应用领域本法引自海洋监测规范，适用于海水中活性磷酸盐的测定。
水样经 μm 滤膜过滤后贮于聚乙烯瓶中。
若样品采集后不能立即分析，则应快速冷冻至-20℃保存，样品熔化后立即分析。
2 方法原理在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄，用抗坏血酸还原为磷钼蓝后，于882 nm 波长测定吸光值。
3 试剂及其配制除非另作说明，所用试剂均为分析纯，水为二次水或等效纯水。
硫酸溶液：c (H 2SO 4)= mol/L在搅拌下将300 mL 硫酸(H 2SO 4，ρ=1.84 g/mL)缓缓加到600 mL 水中。
3.2 酒石酸锑钾-钼酸铵混合溶液钼酸铵溶液：溶解28 g 钼酸铵〔(NH 4)6Mo 7O 24·4H 2O 〕于200 mL 水中。
溶液变混浊时，应重配。
酒石酸锑钾溶液：溶解6 g 酒石酸锑钾(C 4H 4KO 7Sb·21H 2O)于200 mL 水中 ，贮于聚乙烯瓶中。
溶液变混浊时，应重配。
混合溶液:搅拌下将45 mL 钼酸铵溶液加到200 mL 硫酸溶液中，加入5 mL 酒石酸锑钾溶液，混匀。
贮于棕色玻璃瓶中。
溶液变混浊时，应重配。
抗坏血酸溶液溶解20 g 抗坏血酸(C 6H 8O 6)于200 mL 水中，盛于棕色试剂瓶或聚乙烯瓶。
在4℃避光保存，可稳定1个月。
磷酸盐标准贮备溶液：ρp = mg/mL称取1.318 g 磷酸二氢钾(KH 2PO 4)，优级纯，在110～115℃烘1～2 h)溶于10 mL 硫酸溶液及少量水中，全量转入1 000 mL 量瓶，加水至标线，混匀，加1 mL 三氯甲烷(CHCl 3)。
此溶液 mL 含 mg 磷。
置于阴凉处，可以稳定半年。
海水中可溶性磷酸盐的测定最新版.
海水中可溶性磷酸盐的测定一、术语1.海水中的磷主要以颗粒态和溶解态存在。
颗粒态磷主要为含有机磷和无机磷的生物体碎屑及某些磷酸盐矿物质颗粒；溶解态磷包括有机磷和无机磷，溶解态无机磷是正磷酸盐，主要以HPO42-和PO43-的离子形式存在。
2.海水中溶解态磷酸盐是指以孔径为0.45um醋酸纤维滤膜为界，可通过0.45um的为溶解态的磷酸盐，不通过的颗粒为颗粒态磷酸盐。
3.本实验中的活性磷酸盐指的是溶解态的可与钼酸铵试剂发生反应的正磷酸盐（无机磷），以其磷酸根中的磷原子来计量，用符号PO4-P表示，单位为umol/dm3。
二、目的要求了解用钼蓝光度比色法测定海水中磷酸盐的方法原理和实验条件。
三、方法原理本实验采用钼蓝光度比色法测定海水中可溶性磷酸盐，即在水样中加入一定量混合试剂（硫酸-钼酸铵-抗坏血酸-酒石酸锑钾）水样中可溶性磷酸盐在硫酸介质中先与钼酸铵反应形成磷钼黄杂多酸，然后与酒石酸锑钾的存在下，被抗坏血酸还原为磷钼蓝，蓝色深度与磷酸盐的含量成正比此磷钼蓝络合物的最大吸收波长为882nm，可选择800nm进行比色测定。
此法的盐误差不大于1%，故测定时不必进行盐误差校正。
四、仪器UNICO2000分光光度计；100cm3容量瓶，1支；50cm3具塞比色管，9支；1cm3移液管，4支；洗耳球1个；洗瓶，1个.五、试剂及其配制混合试剂：分别量取3mol/dm3H2SO450cm3、3%钼酸铵20cm3、5.4%抗坏血酸20cm3、0.136%酒石酸锑钾10cm3，按顺序混合，每加入一种试剂，必须混合均匀。
此试剂在使用前配制，有效期6h。
六、实验步骤：1.配制磷酸盐标准使用液，准确移取标准贮备溶液0.50cm3于100 cm3容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度线，混匀，浓度为0.040umol/cm3。
2.标准系列：分别移取磷酸盐标准使用液0.0cm3、0.50cm3、1.00cm3、2.00cm3、3.00cm3、4.00cm3于50cm3比色管中，加去离子水至50cm3，依次加入5cm3混合试剂，混匀15min后，以去离子水做参比溶液(L=5cm)，测定溶液吸光度。
实验3两种方法测定海水中活性磷酸盐(精)
一般情况下，活性磷酸盐绝大部分是溶解态无机磷(DIP)
总磷(TP)
颗粒态总磷(PP) 溶解态总磷(TDP)
溶解有机磷 (DOP)
溶解无机磷 (DIP)
方法1：目测法测定磷酸盐的浓度
测定原理：
当加入(硫酸一钼酸铵一抗坏血酸一酒石酸氧 锑钾)混合试剂于水样后，水样中的活性磷酸 盐与钼酸铵形成磷钼黄，在酒石酸氧锑钾存 在下，磷钼黄被抗坏血酸还原为磷钼蓝，根 据颜色的深浅判断磷酸盐的浓度，颜色越深， 磷酸盐浓度越高，颜色越浅，磷酸盐浓度越 低。
若磷较多，可直接测定磷钼黄，但是在 磷较少的情况下，一般都用更灵敏的钼 蓝法。
原理中的反应式
在酒石酸氧锑钾存在下，磷钼黄被抗坏血酸还 原为磷钼蓝
即在酒石酸氧锑钾存在下， 加入抗坏血酸，使磷钼 酸中的一部分Mo6+离子被还原为Mo5+，生成一种叫 做“钼蓝”的物质(磷钼黄被还原为磷钼蓝)
(NH4 )3[PMo12O40 ]
标准溶液配置：容量瓶 玻璃棒
实验试剂
硫酸溶液 钼酸铵溶液
混合试剂
抗坏血酸溶液 石酸氧锑钾溶液 磷标准溶液的作用
水样测定
1）用具塞量筒量取两份50毫升水样于50毫升比色 管中，
2）加入5毫升混合试剂，混匀，
3）10分钟后在720毫微米处用5厘米比色皿对照 蒸馏水测量吸光值A，
4)所获得的数据，对照教师提供的工作曲线，查 出所对应的浓度。记录所获得的结果。不同于方 法1。
722分光光度计(带比色皿)的使用
控制面板
数据的记录及结果的计算
1 目测法： 2分光光度计方法法：
测定步骤
（1）用具塞量筒量取50毫升水样，于50毫升比色 管中，(每一水样取两份)
紫外分光光度法测定水中活性磷酸盐的不确定度评定
２ ０ ＮＯ ． ０ ０８ ２
甄
ｄ ｅｈ ｌｙｎｏ ｔｎ ｅ ｌ ｃ ｏｇ Ｉ ｖ ｉ ｒｄ Ｔ ｎｏ ｎ ａｏ Ｈ ａ
高 新 技 术
紫外分光光度法测 定水 中活性 磷酸盐 的不确定度评定
刘 瑜 （ 福建 省海洋环境与渔业 资源监测 中心 福建 福州
表 ｌ ２ ０ 年海 湾 监测磷 酸盐 重复性 实验测定 统计结 果（ ／ ０ ７ ｍｇ Ｌ） 取经 ０４ 岬 微孔滤膜抽滤的水样 ５ ．ｍｌ ．５ ０Ｏ 测定次 ． 至 具 塞 比色 管 中 ， 入 钼 酸 铵 硫 酸溶 液 和 ＼ 加 数 目 ｌ ２ ３ ４ ５ ６ （Ｓ Ｒ Ｄ） Ｓ ｐ 酒 石酸锑 钾溶液 的混 合液 １． ｍｌ 再 加入 抗 ０ ， 坏 血酸溶 液 １． ｍｌ 混 匀显 色 ５ ｎ后于 可 Ｏ ， ｍｉ ０ ． １２ ７１ － ０ ０ ４ ０ ０ ７ ０．６ ４ ．７ ７ ．５ ４ ０ ５ ０ ０ ４ ０ ０ ６ ０．５ ．５ ９ ．５ ９ ０ ０ｌ Ｏ．４ １６ 见分光光 度计 上测定 吸光 值（ 长 ８ ｎｍ ， 波 ８２ ０ ． １２ ７ １ －２ ０ ０ ８ ０ ０ ９ ０．７ ０ ．８ ３ ．５ ３ ０ ７ ００ ５ ００ ４ ．７ ６ ． ７ｌ ０．５ ９ ０ ９ Ｏ．５ １４ Ｏ１３ ．３ 以纯水 做 参 比） 其 活性 磷 含量 与吸 光 强度 ， ０ ．２．３ ７１ ２ ０ ０ ６ ０ ０ ４ ０．２ Ｏ Ｏ ｌ ０ ０ ５ ０．２ ．２ ６ ．２ ４ ０ ６ｌ ．３ ４ ．２ ８ ０ ６ｌ ０．９ｌ ０ 成正比…。 １１ ． 标准 工作液 （ ， 的制备 ｓ） 用单标 吸管吸 取 １ Ｏ ｍｌ 准溶液（ ， ．０ 标 Ｓ） 该 容量 瓶 的校 准温 度 为 ２０℃，实验 室 到 ｌ Ｏ 容量瓶 中 ， Ｏ ｍｌ 稀释到 刻度 。再 从 中用 室温 （ ０ ±５ ℃， ２ ） 温度 变化为平 均 分布 ， 则 Ｓ ，＝ ， 单标 吸管分别吸取 Ｏ ｌ ．ｍｌ ｍｌ ｍｌ ｍ 、０ ５ 、ｌ 、２ 、 ３ 、４ 于 ５ ｍｌ ｍｌ ｍｌ ０ 具塞 比 色管中 ， 加水至 ？ ｒ ｆ ｌ ｌ ／ 三 ＿ × ：０ ｍｌ ０６ｌ ５ ｒｌ Ｏ 标线 ， ａ 混匀 ， 得到标 准工作液 （ ） Ｓ 系列 ， 式中， Ｓ 为组 测 量列 中第 Ｊ 测量 列 的 组 、ｊ 『 各浓度分别为０ ．３、０００ ．２ 、０ １０ 单 次 实验标 准偏 差（ ＲｓＤ 表 示） 、００ ０ ．６ 、０ １０ ．８ 、 以 。合并 样 ０． ４ ｍ ｇ／Ｌ。 ２０ 该 容 量 瓶 的 体 积 不 确 定 度 本标 准偏 差 的 自由 度（ｕ） 可按 下 式 计算 ：
海水—无机磷的测定—磷钼蓝萃取分光光度法
FHZDZHS0067 海水无机磷的测定磷钼蓝萃取分光光度法F-HZ-DZ-HS-0067海水—无机磷的测定—磷钼蓝萃取分光光度法1 范围本方法适用于海水中活性磷酸盐的测定。
2 原理在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄，以抗坏血酸还原为磷钼蓝，用醇类有机溶剂萃取，于波长700nm处测定吸光度。
硫化物含量大于1mg/L时，对本法有明显的影响，此时，在水样酸化后，通氮气10min，将硫化氢驱除，可消除干扰。
砷酸盐含量大于0.5mg/L时，对本法有明显影响。
通常海水中砷含量约0.003mg/L，其影响可忽略不计。
硅酸盐含量大于 1.4mg/L时，对本法有影响。
河口水和大洋深层水中硅酸盐含量常大于1.4mg/L，应进行校正。
3 试剂除非另作说明，本法所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水或等效纯水。
3.1 正已醇[CH3(CH2)5OH]。
3.2 无水乙醇(C2H5OH)。
3.3 硫酸溶液，1+2。
3.4 钼酸铵溶液：溶解28g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]于200mL水中。
溶液变混浊时，应重配。
3.5 酒石酸锑钾溶液：溶解6g酒石酸锑钾(C4H4KO7Sb·1/2H2O)于200mL水中，贮存于聚乙烯瓶中，溶液变混浊时，应重配。
3.6 混合溶液：搅拌下将45mL钼酸铵溶液加到200mL硫酸（1+2）中，加入5mL酒石酸锑钾溶液，贮存于棕色玻璃瓶中，溶液变混浊时，应重配。
3.7 抗坏血酸溶液：溶解20g抗坏血酸(C6H8O6)于200mL水中，贮于棕色试剂瓶或聚乙烯瓶。
在4℃避光保存，可稳定一个月。
3.8 磷酸盐标准溶液3.8.1 磷酸盐标准贮备溶液，0.300mg/mL-p：称取1.3181g磷酸二氢钾(KH2PO4，光谱纯，预先在110℃～115℃烘1h～2h，置于干燥器中冷却至室温)溶于10mL硫酸（1+2）中，移入1000mL 容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀。
中国海洋大学海洋化学实验
海水中溶解氧的测定一、术语：溶解氧是指溶解在海水中氧气，用符号DO 表示。
单位为。
cm 3/dm 3或mg/dm 3氧饱和度是指测得的溶解氧含量与现场水温、盐度条件下氧的饱和含量之百分比。
硫代硫酸钠溶液体积校正系数f ，表示1cm 3滴定用的硫代硫酸钠溶液相当于其浓度 C=0.01000mol/dm 3时的体积（cm 3）数。
二、方法原理：一定量水样中，加入适量氯化锰及碱性碘化钾溶液，氯化锰与氢氧化钠生成白色的氢氧化锰沉淀，不稳定，能被水中溶解氧氧化为四价锰褐色沉淀，在酸性条件下四价锰与碘离子反应，生成与氧等剂量的游离碘，以淀粉做指示剂，用硫代硫酸钠标准溶液进行滴定，反应式如下：MnCl 2+2NaOH→→Mn(OH)2↓(白)+2NaCl2Mn(OH)2↓+O 2→→2MnO(OH)2↓4Mn(OH)2↓+O 2+H 2O→→4Mn(OH)3↓2Mn(OH)3↓+6H ++2I -→→2Mn 2++I 2+6H 2OMnO(OH)2↓+4H ++2 I -→→Mn 2++I 2+3H 2OI 2+2S 2O 32-→→S 4O 62-+2I- 三、测定步骤：1、取样固定：水样加KI-NaOH 、MnCl 2溶液各1cm 3充分混合均匀，放暗处，待测。
2、硫代硫酸钠的标定：（<0.02 cm 3）移取标准碘酸钾溶液15.00 cm 3（C=1.467×10-3mol/dm 3），加 2cm 32mol/dm 3H 2SO 4溶液+0.6gKI （S ），混匀，放暗处2分钟，加50 cm 3去离子水，用硫代硫酸钠溶液滴定至浅黄色，加1 cm 30.5%淀粉溶液，此时溶液变为蓝色，继续用硫代硫酸钠溶液滴定到蓝色刚刚消失，记录滴定体积。
3、样品分析：水样固定一小时后，即可进行滴定。
打开瓶塞，小心倒出部分上清液与250 cm 3三角瓶中，加1 cm 31+1 H 2SO 4溶液，盖上瓶塞，上下颠倒数次，使沉淀溶解，转移到同一三角瓶中，立即用硫代硫酸钠溶液滴定至浅黄色，加1 cm 30.5%淀粉溶液，继续用硫代硫酸钠溶液滴定到蓝色刚刚消失。
实验七、活性磷的测定
实验七、活性磷的测定
研究性试验 以SnCl2还原法测定活性磷时，钼蓝化合物的颜 色强度受盐度的影响较大，以至于用纯水制作的工 作曲线计算结果时，形成一定的误差。 若用纯水和浓度为25%的NaCl溶液进行盐度调 节、以自然海水和淡水的含盐量（或离子含量）作 为盐度调节考虑的上、下限，请设计不同的盐度剃 度，利用SnCl2还原测定法，求出不同盐度下相应的 盐误差校正系数。
实验八、水中铁的测定
原理
亚铁离子（Fe2+）在pH为3～9的水溶液中，可与 邻菲啰啉生成极稳定的血红色的螯合阳离子，其最大 吸收波长在508nm附近。测总铁时，需要用盐酸羟胺 将Fe3+离子还原成Fe2+离子后，才能显色。不加盐酸 羟胺，被测定的只是亚铁离子。在用盐酸羟胺还原的 情况下，用本法测定的实际上是水中的Fe3+、Fe2+及 在该pH条件下能参与反应的胶态铁和配位铁离子。 以1cm比色皿测定时，最低检出限为0.03 mg/L ，线 性浓度范围为0～4.5mg/L。本方法显色迅速，加入显 色剂后立即显色，且颜色稳定。
实验七、活性磷的测定
目的要求
1. 掌握钼蓝光度比色法测定磷酸盐的方法原理及实验条件。 2. 了解水体中各种不同形态磷的分离处理过程。 3. 验证盐度对吸光值的影响（设计）。
概述
水体中的磷主要以颗粒态和溶解态存在，以孔径为0.45μm醋 酸纤维滤膜为界。不通过的为颗粒态，主要为含有机磷和无机磷 的生物体碎屑及某些磷酸盐矿物颗粒；能通过0.45μm滤膜的为 溶解态磷酸盐，包括有机磷和无机磷，其中溶解态无机磷是正磷 酸盐，主要以HPO42-和PO43-的离子形式存在。
无机磷的测定
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无机磷的测定
磷钼蓝分光光度法测定海水 中的活性磷酸盐
09海环1班 张姣 2011-11-6
无机磷&活性磷酸盐
■ 天然水和废水中含有的磷绝大多数以各种形式的磷酸盐存
在，也有有机磷的化合物。从化学形式上看，水中的磷化合物 可分以下几类。 (1)正磷酸盐，即PO43-、HPO42-、H2PO4-。 无机磷形态 (2)缩合磷酸盐，包括焦磷酸盐、偏磷酸盐、 聚合磷酸盐等，如P2O74-、P3O105-、HP3O92-、（PO3)63-等。 (3)有机磷化合物。
分析步骤
■ 绘制标准曲线
按以下步骤绘制标准曲线： ① 量取0 ml, 0.50 ml, 1.00 ml, 2.00 ml, 3.00 ml, 4.00 ml磷酸盐标准使用溶液于50ml带刻度具塞比色管中，加水 至50 ml标线，混匀。 ② 各加1.0 ml混合溶液，1.0 ml抗坏血酸溶液，混匀。显 色5 min后，注入5 cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882 nm波 长处测定其吸光值Ai。其中零浓度为标准空白吸光值A0。 ③以吸光值(Ai-A0)为纵坐标，相应的磷酸盐浓度(mg/L)为横 坐标，绘制标准曲线。
■ 海水中磷以两种化学形式存在，即有机磷和无机磷。每一
种化学形式又分为溶解和颗粒的两种形态。
■
在各种无机磷形态中，仅正磷酸盐可通过标准的磷钼蓝方 法定量地测定，而焦磷酸盐和无机磷聚合物均需要首先将其水 解为活性磷酸盐后才能测定。
■ 一般情况下,活性磷酸盐绝大部分是溶解态无机磷(DIP)，
通常指能被植物直接吸收的。
测定方法
■ 测定水中无机磷的方法是磷钼蓝分光光度法 ■ 海洋监测规范GB17378.4-2007（磷钼蓝分光光度法）
海水中超低含量活性磷酸盐的Mg(OH)2共沉淀法测定研究
盐 的分析 方 法 ， Ｍｇ ｏＨ）低 本 底 共 沉 淀 技 术［ 将 （ ： １
号 ， 试 剂 空 白 的 吸 光 度 也 同 比 例 增 加 ， 此 理 论 增 但 因
个 新 的 尚 待 开 拓 和 深 化 的 重 要 课 题 。 目前 ， 内 国
外 对磷 酸盐 测量 大都 采 用 化 学 分 光 光 度法 ， 磷 钼 即 蓝 法 ］ 。为 了提 高 磷 钼 蓝 法 的 分 析 灵 敏 度 ， 低 降 海水 中硅 和 砷 离 子 对测 试 的 干扰 ， ｒ ｅ ａ．１ Ｋａｌ ｔ １［ 建 立 了 ＭＡＧ１ Ｃ法 。ＭＡＧ１ 法 利 用 海 水 中 的 Ｍｇ Ｃ
量 盐酸溶 液 溶 解 后 ， 用磷 钼 蓝 分 光 光 度 法 测 定 。 采 虽 然 ＭＡＧＩ Ｃ法 灵 敏 度 高 ，测 定 下 限 可 达 ５ｎ ｌ ｍｏ ／ ｄ ， 该 方 法 存 在 着 分 析 耗 时 长 、 品 用 量 大 及 难 ｍ。 但 样
于 准确测 定低 于 ５ｎ ｌ ｄ ｍｏ ／ ｍ。的样 品等缺 陷［ Ｉ 引。基
维普资讯
第 ３ Ｏ卷
第 ３期
海
洋
学
报
Ｖ ｏ１ Ｏ， ＮＯ． ．３ ３
Ｍ ａ ０８ ｙ ２０
２０ ０ ８年 ５月
Ａ ＣＴＡ ｏＣＥＡ Ｎｏ Ｌｏ ＧＩ ＣＡ Ｎ Ｉ ＳＩ ＣＡ
海 水 中 超 低 含 量 活 性 磷 酸 盐 的 Ｍｇ ＯＨ） （ ２ 共 沉 淀 法 测 定 研 究
和 液 芯 波 导 毛 细 管 流 通 池 （ ｉｕｄ Ｗ ａ ｅ ｕｄ ａ — Ｌ ｑ ｉ ｖ ｇ ｉｅＣ ｐ
实验7海水中活磷酸盐的测定
H3PO4 2Mo2O5 H3PO4 10MoO3 2Mo2O5
试验仪器
测定水样：量筒或具塞量筒 具塞比
色管 滴管 自动移液管 721 or 722 分光光度计(带比色皿)
原则溶液配置：容量瓶 玻璃棒
试验试剂
硫酸溶液 钼酸铵溶液
混合试剂
抗坏血酸溶液 石酸氧锑钾溶液 磷原则溶液旳作用
控制面板
问题：测定旳是哪种离子旳显色波长？ 磷钼蓝
波长多少？ 720mm
比色皿多长？ 5cm
混合试剂加多少ml? 5
酸度范围
0.7～1.1
同一仪器旳工作曲线使用期为？ 1周左右
除Si,Fe,等措施
控制酸度，加酒石酸钾钠
测定旳波长不是固定旳？
它旳选择在于敏捷度，在哪个波优点所测数据最佳。
测定旳波长不是固定旳，它旳选择在于敏捷度，在 哪个波优点所测数据最敏感。
原理中旳反应式
活性磷酸盐与钼酸铵形成磷钼黄
7 PO43
21NH
4
12Mo7O264
பைடு நூலகம்
72H
7(NH4 )3[PMo12O40 ] (淡黄色) 36H2O
工作曲线制定环节
1）在6个50毫升具塞比色管中分别移入磷原则使用 液0，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，用蒸馏水稀 释至刻度，混匀（贮备液旳稀释）
2）加入5毫升混合试剂，混匀
3）10分钟后在720毫微米处用5厘米比色皿对照蒸馏 水测量吸光值A，未加原则使用液即为试剂空白 吸光值Ab
2、配制原则系列和测定水样时，为防止瓶口出现深 蓝色物质，当加混合试剂后应及时混匀，打开瓶塞让 瓶口旳溶液流回瓶中，盖上瓶塞，再次混匀，反复两 次，使溶液充分混匀。
植物磷元素的测定方法
测定植物样品活性无机磷酸盐1. 取样：称量样品鲜重，干重或冷冻后的重量（每个EP管取10-20mg根或茎）2.提取：向含有新鲜或冰冻样品EP管加入500纯水，85℃温育45min (干燥或粉末状样品需离心)3.Pi含量测定：储备液配置：1. 仲钼酸铵溶液配置：-将0.44g仲钼酸铵溶于97.3mL纯水-接入2.66ML（36N）浓硫酸定容至100Ml.所配溶液避光可存放几个月。
2.10%维生素C溶液配置-将1个维生素C钠盐溶于10mL纯水-该溶液需现配现用步骤在EP管中混合以下溶液（新制备的样品解离液可加入600μL仲钼酸铵溶液，100μL10%维生素C溶液及纯水）和纯水）-600μL仲钼酸铵溶液-100μL10%维生素C溶液-300μL基本溶液1样品为根：200μL纯水加+100μL提取后溶液2样品为茎：250μL纯水+50μL提取后溶液3 样品溶液已制备好：直接加50和100μL体积即可42温育1h后测820nm吸光度pho2, a Phosphate Overaccumulator, Is Caused by aNonsense Mutation in a MicroRNA399 Target Gene1[W]We recently demonstrated that microRNA399 (miR399) controls inorganic phosphate (Pi) homeostasis by regulating theexpression of UBC24 encoding a ubiquitin-conjugating E2 enzyme in Arabidopsis (Arabidopsis thaliana). Transgenic plantsoverexpressing miR399 accumulated excessive Pi in the shoots and displayed Pi toxic symptoms. In this study, we revealedthat a previously identified Pi overaccumulator, pho2, is caused by a single nucleotide mutation resulting in early terminationwithin the UBC24 gene. The level of full-length UBC24 mRNA was reduced and no UBC24 protein was detected in the pho2mutant, whereas up-regulation of miR399 by Pi deficiency was not affected. Several characteristics of Pi toxicity in the pho2mutant were similar to those in the miR399-overexpressing and UBC24 T-DNA knockout plants: both Piuptake andtranslocation of Pi from roots to shoots increased and Pi remobilization within leaves was impaired. These phenotypes of thepho2 mutation could be rescued by introduction of a wild-type copy of UBC24. Kinetic analyses revealed that greater Pi uptakein the pho2 and miR399-overexpressing plants is due to increased Vmax. The transcript level of most PHT1 Pi transporter genesas not significantly altered, except PHT1;8 whose expression was enhanced in Pi-sufficient roots of pho2 and miR399-overexpressing compared with wild-type plants. In addition, changes in the expression of several organelle-specific Pitransporters were noticed, which may be associated with the redistribution of intracellular Pi under excess Pi. Furthermore,miR399 and UBC24 were colocalized in the vascular cylinder. This observation not only provides important insight into theinteraction between miR399 and UBC24 mRNA, but also supports their systemic function in Pi translocation andremobilization.PHO2, MicroRNA399, and PHR1 Define aPhosphate-Signaling Pathway in Plants1[W][OA]Inorganic phosphate (Pi)-signaling pathways in plants are still largely unknown. The Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) pho2mutant overaccumulates Pi in leaves in Pi-replete conditions. Micrografting revealed that a pho2 root genotype is sufficient toyield leaf Pi accumulation. In pho2 mutants, Pi does not repress a set of Pi starvation-induced genes, including AtIPS1, AT4, andPi transporters Pht1;8 and Pht1;9. Map-based cloning identified PHO2 as At2g33770, an unusual E2 conjugase gene. It wasrecently shown that Pi deprivation induces mature microRNA (miRNA [miR399]) and that overexpression of miR399 inPi-replete conditions represses E2 conjugase expression and leads to high leaf Pi concentrations, thus phenocopying pho2. Weshow here that miR399 primary transcripts are also strongly induced by low Pi and rapidly repressed after addition of Pi.PHO2 transcripts change reciprocally to miR399 transcripts in Pi-deprived plants and in miR399 overexpressers. However,responses after Pi readdition and in b-glucuronidase reporter lines suggest that PHO2 expression is also regulated by Pi in amanner unrelated to miR399-mediated transcript cleavage. Expression of miR399 was strongly reduced in Pi-deprivedArabidopsis phr1 mutants, and a subset of Pi-responsive genes repressed in Pi-deprived phr1 mutants was up-regulated inPi-replete pho2 mutants. This places miR399 and PHO2 in a branch of the Pi-signaling network downstream of PHR1. Finally,putative PHO2 orthologs containing five miR399-binding sites in their 5#-untranslated regions were identified in other higherplants, and Pi-dependent miR399 expression was demonstrated in rice (Oryza sativa), suggesting a conserved regulatorymechanism.。
磷酸氢钙国标检测方法
磷酸氢钙国标检测方法摘要：一、磷酸氢钙概述二、磷酸氢钙的国标检测方法1.活性磷酸盐的抗坏血酸还原磷钼蓝法2.总磷的过硫酸钾氧化法三、磷酸氢钙含量检测的步骤四、磷酸氢钙检测的意义和应用正文：【一、磷酸氢钙概述】磷酸氢钙（CaHPO4）是一种常见的无机盐，具有良好的生物活性和广泛的应用。
它在饲料、肥料、医药等领域具有重要应用价值。
然而，磷酸氢钙的质量控制和含量检测一直是行业面临的难题。
我国对此有何国标检测方法呢？【二、磷酸氢钙的国标检测方法】我国针对磷酸氢钙的检测方法主要有以下两种：1.活性磷酸盐的抗坏血酸还原磷钼蓝法：这种方法主要通过测定活性磷酸盐的含量，从而反映出磷酸氢钙的含量。
抗坏血酸具有还原性，能将磷酸盐还原为磷，并与磷钼蓝生成蓝色络合物，通过分光光度法测定其吸光度，从而计算出磷酸氢钙的含量。
2.总磷的过硫酸钾氧化法：这种方法是通过将样品中的磷全部氧化为正磷酸盐，然后加入钼酸铵和抗坏血酸生成磷钼蓝络合物，再通过分光光度法测定其吸光度，计算出磷酸氢钙的含量。
【三、磷酸氢钙含量检测的步骤】具体检测步骤如下：1.样品处理：首先对样品进行适当的处理，如研磨、溶解等，使其符合检测要求。
2.显色反应：将处理后的样品与相应的试剂进行反应，生成显色络合物。
3.比色测定：将显色后的样品通过分光光度计进行比色测定，得到吸光度。
4.计算含量：根据吸光度以及标准曲线，计算出磷酸氢钙的含量。
【四、磷酸氢钙检测的意义和应用】磷酸氢钙检测在饲料、肥料、医药等领域具有重要意义。
准确的含量检测有助于保障产品质量和安全，防止劣质产品流入市场。
此外，通过对磷酸氢钙含量的检测，还可以指导生产过程中的原料控制、产品质量评价和产品研发等。
PO4磷酸盐测试
PO4磷酸盐测试
磷酸盐的浓度过高会产生很多负面的影响。
首先会导致多余海藻生长，使得鱼缸很不美观。
磷酸盐会阻碍或延缓珊瑚和钙质藻类的生长。
一个科学实验表明如果磷酸盐浓度高于0.05毫克/升，那么含钙海藻的生长速度会降低90%！
尽量避免用含磷酸盐量高质量差的活性炭，保持尽可能低的磷酸盐浓度。
在用磷酸盐活性炭之前应对其进行检查。
降低鱼缸内的磷酸盐浓度可以使用液体磷酸盐消除剂或高效的颗粒状磷酸盐除剂。
产品特点
由于磷酸盐浓度超过0.05毫克/升就会产生很多负面影响，所以需要检测工具来确保低浓度的磷酸盐含量。
Salifert磷酸盐检测工具可以在几秒之内测出0.015毫克/升单位差含量的磷酸盐，这使测试相当可靠并具有可读性，可以适时进行测试。
每套可使用约50次
使用方法
1, 用注射器在测试管内加10ml水
2, 加4滴PO4-1试剂,轻轻摇动10秒
3, 加1勺PO4-2,轻轻摇动30秒
4, 将打开的测试管放在色卡的白色部分，从上面比较颜色。
读出相应的值。
磷酸盐值的形式是phosphate ppm。
ppm phosphate除以3对应ppm phosphate-phosphor。
磷酸盐的水质标准
磷酸盐的水质标准磷酸盐的水质标准一、磷酸盐浓度磷酸盐浓度是衡量水质的重要指标之一。
高浓度的磷酸盐会导致水体富营养化，引发蓝藻爆发等环境问题。
因此，水质标准通常规定磷酸盐浓度不得超过一定限值。
二、pH值pH值是衡量水质酸碱性的指标。
过酸或过碱的pH值都会对水生生物和生态环境造成负面影响。
因此，水质标准通常规定pH值应当处于一定范围内。
三、悬浮物悬浮物是指水中不可沉降的固体物质，包括泥沙、有机物、矿物质等。
过高的悬浮物浓度会影响水体的透明度，造成水体缺氧，影响水生生物的生长。
因此，水质标准通常规定悬浮物浓度不得超过一定限值。
四、化学需氧量化学需氧量是指水体中能够被氧化剂氧化并消耗的有机物的量。
该指标可以反映水体中有机污染的程度，是水质污染的重要指标之一。
因此，水质标准通常规定化学需氧量应当低于一定限值。
五、生物需氧量生物需氧量是指水体中微生物分解有机物所需的氧气的量。
该指标可以反映水体中有机污染的程度，是水质污染的重要指标之一。
因此，水质标准通常规定生物需氧量应当低于一定限值。
六、活性磷酸盐活性磷酸盐是指水体中能够被微生物利用的磷酸盐。
过高的活性磷酸盐浓度会导致水体富营养化，引发蓝藻爆发等环境问题。
因此，水质标准通常规定活性磷酸盐浓度不得超过一定限值。
七、总磷总磷是指水体中所有形态的磷的总量。
磷是水体中重要的营养元素之一，过高的总磷浓度会导致水体富营养化，引发蓝藻爆发等环境问题。
因此，水质标准通常规定总磷浓度不得超过一定限值。
八、温度温度是影响水体生态系统和生物多样性的重要因素之一。
过高的温度会导致水体缺氧，影响水生生物的生长；而过低的温度则会导致水生生物活动减缓，甚至死亡。
因此，水质标准通常规定水温应当处于一定范围内。
磷酸盐测定通用方法
磷酸盐测定通用方法(GB/T 9727—1988)1 适用范围本方法规定了用萃取-磷钼蓝比色法测定磷酸盐的通用方法。
本方法适用于化学试剂中微量正磷酸盐的测定。
分光光度法或目视比色法的检测范围在乙酸丁酯中为0.2～2μg/mL(以PO4计)。
2 原理在浓度c(HNO3)为0.4～1.4mol/L硝酸溶液中，正磷酸能定量与钼酸铵作用，生成磷钼杂多酸(磷钼黄)，磷钼黄可被乙酸丁酯从1.0～1.4mol/L硝酸溶液中定量萃取，从而与干扰元素砷、硅及过量试剂钼酸铵分离。
加入氯化亚锡-抗坏血酸溶液，将磷钼黄还原为磷钼蓝。
根据磷钼蓝颜色的深浅，可用分光光度法或目测比色法测定磷酸盐的含量。
3 试剂本方法中所用杂质标准溶液，制剂及制品按GB 602、GB 603之规定配制。
实验用水应符合CB 6682中二级水的规格。
4 操作按产品标准的规定称取样品并制备试液(必要时用饱和2，4-二硝基酚指示液为指示剂调节试液的pH值)。
取10mL试液，加10mL硝酸(13%)，此时溶液的酸度c(H﹢)应为1.0～1.2mol/L。
加2mL钼酸铵溶液(100g/L)，室温下放置20min。
加入10mL乙酸丁酯，萃取；静置分层。
弃去水相，有机相用盐酸(5%)洗涤两次，每次5mL，分出水相。
在有机相中加入0.2mL氯化亚锡-抗坏血酸溶液，轻轻摇动，静置分层。
弃去水相，于有机相中加入lmL无水乙醇，混匀。
所呈蓝色与标准比对溶液比较。
标准比对溶液的制备是取含规定量的磷酸盐(PO4)标准溶液，稀释至10mL，与同体积试液同﹢时同样处理。
若用分光光度法测定，应按下述条件：测定波长为720nm，用lcm吸收池，以试剂空白为参比。
标准系列的配制：吸取含不同量的磷酸盐(P04)标准溶液，稀释至10mL,与同体积试液同时同样处理。
5 注意事项5.1 硅酸盐、砷酸盐、锗酸盐当存在硅酸盐、砷酸盐、锗酸盐时，这些盐类也能与钼酸铵发生类似的反应。
消除这种干扰的方法有：a)控制溶液的酸度当溶液的酸度c(H﹢)在0.8mol/L以上时，这些盐类不能与钼酸铵发生类似的反应。
实验7：海水中活性磷酸盐的测定-新版
混合试剂
钼酸铵溶液
抗坏血酸溶液 石酸氧锑钾溶液
磷标准溶液的作用
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工作曲线制定步骤
1）在6个50毫升具塞比色管中分别移入磷标准使用 液0，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，用蒸馏水稀 释至刻度，混匀（储备液的稀释） 2）加入5毫升混合试剂，混匀 3）10分钟后在720毫微米处用5厘米比色皿对照蒸馏 水测量吸光值A，未加标准使用液即为试剂空白 吸光值Ab 4)以吸光值(A- Ab)为纵坐标，磷浓度为横坐标做图， 即为工作曲线 9
( NH4 )3[ PMo12O40 ]
H3 PO4 2Mo2O5
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H3 PO4 10MoO3 2Mo2O5
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实验仪器
测定水样：量筒或具塞量筒 具塞比
色管 滴管 自动移液管 分光光度计(带比色皿) 721 or 722
标准溶液配置：容量瓶 玻璃棒
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实验试剂
硫酸溶液
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除微量的As、Cr、Nb等：
加入酒石酸钾钠和氟化钠可以消除其干扰，因 为量较少，所以没加氟化钠。
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722分光光度计(带比色皿)的使用
控制面板
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问题：测定的是哪种离子的显色波长？ 磷钼蓝 波长多少？ 720mm
比色皿多长？ 5cm
混合试剂加多少ml? 5
实验7：海水中活性磷酸盐的测定
一般情况下，活性磷酸盐绝大部分是溶解态无机磷(DIP)
通常指能被植物直接吸收的
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总磷(TP)
溶解态总磷(TDP) 颗粒态总磷(PP)
海水样品保存条件对活性磷酸盐测定的影响
广东化工2019年第24期·140·第46卷总第410期海水样品保存条件对活性磷酸盐测定的影响安明梅，翁洁畅，梁泰尔(海南省海洋监测预报中心，海南海口570206)Research on Effect of Storage Factors on Active Phosphate in Sea WaterAn Mingmei,Weng Jiechang,Liang Taier(Hainan Marine Monitoring and Forecasting Center,Haikou570206,China)Abstract:Phosphorus is the primary nutrient element in sea water.Active phosphate in sea water is utilized by plants,bacteria and algae in sea water.And it is a restrictive nutritive salt in sea water.Therefore,it is an important evaluation factor in marine environmental monitoring and also one of important indexes to evaluate good or bad seawater quality.Actually,different preservation conditions cause a great impact on the active phosphate contents.In this thesis,the author explores the impacts of sulfuric acid,dichloromethane and formaldehyde on active phosphate contents under the cold storage and refrigeration conditions,so as to provide the best short-term preservation technology and preservation time of active phosphate in sea water samples.Keywords:seawater；active phosphate；preservation methods；cold storage at4℃；refrigeration at-20℃；phosphorus molybdenum blue spectrophotometric method1引言磷是海水水体中主要的营养元素。
活性磷,(正磷酸盐)钼锑抗法,方法8114(溶剂或安瓿瓶)(二)
活性磷，(正磷酸盐)钼锑抗法，方法8114(溶剂或安瓿瓶)（二）样品的采集、保存与存储 (1)请用洁净的塑料瓶或玻璃瓶收集样品。
普通先用1+1盐酸溶剂清洗塑料瓶或玻璃瓶，再用去离子水清洗。
(2)不要用法商用含磷清洁剂清洗玻璃仪器，由于所含磷酸盐会污染样品。
(3)为实现最佳测试结果，应尽快对样品举行分析。
(4)假如不能立刻分析样品，将样品过滤后保存在4℃(39oF)或更低温度条件下，最长可存储48h。
(5)分析前将样品加热到室温。
精确度检查办法 (1)标准加入法(加标法)。
精确度检查所需的试剂与仪器设备：2mL安瓿瓶装磷酸盐标准溶液，500mg/L PO43-；TenSette移液枪；安瓿瓶开口器；混合量筒(3个)。
详细步骤如下。
①读取测试结果后，将装有样品的比色皿(尚未加入标准物质)留在仪器中。
②在仪器菜单中挑选标准添加程序。
③按“OK(好)”键确认标样浓度、样品体积和加标体积的默认值。
当这些值确认好后，未加标的样品读数将显示在顶端的一行。
④打开标准试剂安瓿瓶。
⑤分离向3份25mL的新奇样品中加入0.1mL、0.2mL、0.3mL标准溶液。
⑥每个加标样取10mL，分离倒在3个10mL比色皿中。
⑦从0.1mL的加标样品开头按照上述钼锑抗法测试流程依次测试3个加标样。
⑧加标测试过程结束后，按“Graph(图表)”键将显示结果。
按“Ideal Line(抱负曲线)”键将显示出样品加标与100％回收率的“抱负曲线”之间的关系。
(2)标准溶液法。
精确度检查需要10mg/L磷酸盐标准溶液。
详细步骤如下。
①用10mg/L的标准溶液代替样品，根据钼锑抗法(安瓿瓶)测试流程流程操作。
②用标准溶液所测得的数据校准标准曲线，在仪器菜单中挑选标准溶液校准程序。
③打开标准调节界面，确认接受当前标准溶液浓度。
假如用法了其他浓度的标准溶液，输入标准溶液的实际浓度，并确认用此溶液浓度校准标准曲线。
办法精确度表6.3. 18-5 办法精确度办法说明在钼锑抗办法中，在酸性介质中与钼酸盐反应，生成一种磷酸盐/复合物。
磷酸盐检测
磷酸盐检测磷酸盐检测用于测量血液中的磷酸盐的水平。
磷酸盐是一种含有矿物磷的化学物。
磷酸盐检测用于检测营养不良人群中的磷酸盐水平（营养不良人群的饮食中的营养物难以满足身体的需求）。
磷酸盐检测也可用于检查糖尿病患者发生酮症酸中毒时。
如果发生酮症酸中毒，身体会因为缺乏胰岛素（体内可以降低血糖水平的激素），而不能使用葡萄糖作为能量来源。
磷酸盐检测也用于一些消化道疾病中，比如有的疾病会干扰磷酸盐，钙和镁吸收。
磷酸盐是人体内含量最高的无机盐之一，磷在人体中具有重要生理功能，大部分以磷酸钙的形式沉积于骨骼中，是构成骨骼和牙齿的重要组成部分。
极少部分存在于血液中的磷酸盐是血液缓冲体系的重要组成部分，是许多机体反应的底物和产物，是神经系统及膜结构中磷脂的组成成分。
血清磷通常是指血清中的无机磷，它是以以无机磷酸盐的形式存在。
血清无机磷与钙的含量有一定关系，二者浓度的乘积为一项常数。
人体所需的磷主要由食物供给。
含磷较高的食物包括有奶制品、麦片、豆制品、坚果等。
血清磷升高可见于以下疾病：（1）急、慢性肾功能不全及慢性肾炎晚期；（2）甲状旁腺功能低下；（3）维生素D中毒；（4）甲状腺功能亢进；（5）肢端肥大症；（6）磷酸盐摄人过多；（7）多发性骨髓瘤；（8）骨折愈合期；（9）急性肝坏死。
血清磷降低可见于以下疾病：（1）吸收不良综合征，活性维生素D生成不足；（2）维生素D抵抗性佝偻病，Fanconi综合征，骨质软化症及糖尿病、肾小管性酸中毒；（3）甲状旁腺功能亢进；（4）使用水杨酸等药物和服用氢氧化铝；（5）正常妊娠妇女无机磷可能降低。
膳食中的磷酸盐食量过多时，能在肠道中与钙结合成难溶于水的磷酸钙，从而降低钙的吸收，这是规定膳食中钙、磷的供给量应有适宜的比例原因之一。
钙、磷比不恰当的食品，亦即缺钙或缺磷的食品，会导致从人体骨骼组织中释出钙或磷的不足部分。
持续时间长会造成发育迟缓，骨骼畸形，骨和牙齿质量不好，长期大量摄入磷酸盐可导致分甲状腺肿大、钙化性肾机能不全等。
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活性磷酸盐
（磷钼蓝法）
一、传统方法原理
水样中的活性磷酸盐采用磷钼蓝法测定。
活性磷酸盐在一定的酸性条件下可与钼酸铵作用，生成淡黄色的磷钼酸铵，但磷钼酸铵发色能力弱，在通常的磷浓度下显不出黄色来。
磷钼酸铵可被还原剂抗坏血酸还原成发色能力很强的蓝色化合物——“钼蓝”，还原后的溶液在690nm处有较大吸收，可用比色法分析。
二、仪器及设备
1．分光光度计及配套比色皿
2．具塞比色管
3．容量瓶、移液管等常规实验室设备
三、试剂及其配制
1．硫酸溶液（1:2）：在不断搅拌下将浓硫酸缓缓倒入同体积蒸馏水中，冷却后盛于试剂瓶中。
2．酒石酸锑钾：溶解6g酒石酸锑钾于200ml水中，贮于聚乙烯瓶中，溶液变混浊时，应重配。
3．钼酸铵溶液（10%）：称取5g钼酸铵固体[(NH4)6Mo7O24·4H2O]，溶解后稀释至50ml，若溶液浑浊应取其澄清液贮于聚乙烯瓶中。
4．钼酸铵—硫酸混合试剂：45ml钼酸铵溶液与200ml硫酸溶液混合，加入5ml酒石酸锑钾溶液，混匀后贮于聚乙烯瓶中，此溶液避光保存可稳定数日，如发现混浊须重新配制。
5．抗坏血酸溶液：溶解20g抗坏血酸（C6H8O6）于200mL水中，盛于棕色试剂瓶中。
此溶液4℃避光保存，可稳定1个月。
6．磷标准贮备液（0.2mg PO43--P/mL）：称取KH2PO4（AR，于115℃下烘1h）0.8790g 溶于蒸馏水中，并转入1000ml容量瓶中定容。
7．磷标准使用液（2ug PO43--P/mL）：移取1.0ml标准贮备液于100ml容量瓶中定容。
四、测定步骤
1．绘制工作曲线
①取6个25ml具塞比色管，分别加入0、0.50、1.00、1.50、2.00、2..50ml磷标准使用液，加水至标线，混匀。
②分别加入钼酸铵—硫酸混合试剂1ml，混匀后放置3min；再分别加入抗坏血酸溶液1ml，混匀后显色10min。
③用分光光度计在690nm波长处，于比色皿中对照蒸馏水测定上述溶液的吸光度E值（其中试剂空白吸光度为E0）。
④在坐标纸上，以吸光度E-E0为纵坐标，磷浓度为横坐标作图，得工作曲线。
序列号 1 2 3 4 5 6
磷标准使用液体积（ml）0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50
浓度（ugPO43--P/mL）0.00 0.04 0.08 0.12 0.16 0.20
吸光度值E E0
E-E0
2．水样的测定(双样测定，取平均值)
①取25ml水样于比色管中。
②参照标准曲线绘制过程中的步骤②、③，显色并测定该水样的吸光度值E w。
五、结果计算
由水样的测定值E w-E0查工作曲线，得该水样中活性磷酸盐的含量。
六、注意事项
1．显色后须在30min之内测定溶液的吸光度值，30min之后溶液的颜色将逐渐减退。
2．水样的含盐量对磷钼蓝的显色有影响。
对于海水样品，上述从工作曲线上查得的数值尚需乘以适当的校正系数Ks，才能获得海水样品中活性磷酸盐磷的实际浓度。
3．由于磷钼蓝的摩尔吸光系数较小，比色时采用液层厚度较大的比色皿可提高测定的精确度。