实验五 海带多糖的提取及测定

实验五海带多糖的提取及含量测定（3学时）

1、实验目的及原理

海带是褐藻门植物，海带多糖是海带药用价值的最集中体现，海带多糖的种类很多。本实验的主要目的是掌握海带多糖的提取及测定方法。对海带多糖的提取方法有很多，碱提取法是其中重要的一种。多糖中的己糖能与苯酚-硫酸试剂发生显色反应，颜色的深浅与己糖含量成正比。颜色的深浅可通过分光光度计测定，因此，可建立不同浓度的标准己糖与吸光度间的呈线性关系，绘制标准曲线，测定样品的吸光度值，再从表中曲线中查到样品中多糖的含量。

2、实验基本内容和要求

（1）掌握碱提取法提取海带多糖

（2）掌握利用绘制标准曲线方法测定多糖含量

3、实验所用仪器设备和试剂

（1）基本仪器：分光光度计，离心机

（2）实验材料及试剂：干海带

1 %碳酸钠溶液：称取15g无水碳酸钠加入1500ml蒸馏水

95%乙醇溶液，氯化钙溶液(2g/100ml)，1.0ml 6%的苯酚溶液，98%浓硫酸

标准糖溶液：用岩藻糖和半乳糖fuc/gal(3:1)作为标准糖，取其混合物

0.1g，其中0.075g的岩藻糖，0.025g的半乳糖，将其溶解

到1000ml的水中，制成0.1mg/ml的标准溶液。梯度稀释，

用蒸馏水稀释分别配成，0,0.02,0.04,0.06,0.08,0.1mg/ml。

4、实验步骤

4.1海带多糖的提取

（1）购买海带后,用自来水将其洗净,晒干，研磨，过60目----80目的筛,收

集备用。称取制备好的2g海带粉,置于烧杯中,加入28ml刚配好的碳酸钠溶液。

（2）在50℃水浴中水浴,趁热用棉纶网进行吊滤,并不断用热水冲洗保持温度,

获得的吊滤液于5000r/min离心15min,保留上清液。上清液经减压浓缩(40℃)后,加入三倍体积95%乙醇,沉淀过夜。离心后获得海带粗多糖。

4.2海带多糖的测定

（1）将标准糖配成0.1mg/ml溶液

（2）取少量标准糖溶液，用蒸馏水稀释到2.0ml，向其中加入1.0ml 6%的苯酚溶液，振荡器混匀，再加入浓硫酸5.0ml，振荡混匀。静置5min，沸水浴

15min，冷却至室温后于490nm比色测定吸光度，

（3）将测得的吸光度填写到下表中：

（4）根据A值，制作糖含量标准曲线，对比多糖提取的海带多糖的A值，求得糖含量。