酶法提取纯化海带多糖的工艺

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称取 ５．００ ｇ 海带， 加入到一定 ｐＨ 值的水溶液中， 水浴提取， 提取完毕后抽滤， 取部分滤液稀释后按 １．４．１ 方法测定并计算该条件下多糖的浸出率。 １．３．２ 酶法除蛋白
在 ｐＨ 值 ５．０ 的多糖提取液中加入酶底比为 １．２ ％
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１０２ ２００７．Ｖｏｌ．２８．Ｎｏ．１０
食品研究与开发
海带： 产自威海北部海域。木瓜蛋白酶： 酶活力 １５ 万 Ｕ／ｇ， 广西南宁。 １．２ 仪器与设备
仪器： 凯氏定氮仪， 消化仪， 紫外可见分光光度计， 精密 ｐＨ 计， 恒温水浴锅。
试剂： 无水乙醇， 浓硫酸， 氢氧化钠， 硫酸钾， 硫酸 铜， 苯酚等均为分析纯。 １．３ 方法 １．３．１ 热水浸提法
食品工艺
食品研究与开发
２００７．Ｖｏｌ．２８．Ｎｏ．１０ １０１
酶法提取纯化海带多糖的工艺
张慧玲， 任秀莲 ＊， 魏琦峰， 许港璞， 魏思捷 （ 哈尔滨工业大学（ 威海） 海洋学院， 山东 威海 ２６４２０９）
摘 要： 研究从海带中提取多糖的工艺条件， 探讨不同因素对浸出率的影响规律并在此基础上进行正交试验选出优 化的因素组合。试验结果表明： 最佳浸出条件为 ｐＨ 值 ２．０、温度 ６５ ℃、液固比 ４０∶１、提取时间 ３ ｈ， 在该条件下粗多糖 的浸出率为 ８．０９４ ％。在提取过程中加入酶， 结果多糖的提取率增加到 １３．１７ ％， 同时提取液中蛋白的去 除率达到 ６５．５ ％。可见， 酶法辅助提取明显提高了海带多糖的提取率。 关键词： 海带多糖； 浸出率； 木瓜蛋白酶
图 ２ 所示。
在 １．３．１ 的提取过程中加入木瓜蛋白酶， 以提高多
糖的浸出率同时去除提取液中的蛋白质。
１．４ 试验参数的设定与计算
１．４．１ 分析方法
硫酸－ 苯酚法测定海带多糖的含量［５］。凯氏定氮法
测定粗多糖中蛋白质的含量［６］。
１．４．２ 多糖浸出率 η的计算
海带多糖的浸出率
η（ ％）
＝
粗多糖的量 海带样品的质量
食品工艺
的木瓜蛋白酶， ７０ ℃水浴酶解 ２ ｈ， 沸水浴 ５ ｍｉｎ 灭酶， ５０∶１ 液固比的水溶液中， 并依次在 ３０ ℃、５０ ℃、６５ ℃、
醇沉， 水溶。按 １．４．１ 方法测定溶液中蛋白质含量。
７５ ℃、８５ ℃、９０ ℃、１００ ℃水浴中提取 ５ ｈ。试验结果如
１．３．３ 酶辅助提取法
ＥＸＴＲＡＣＴＩＯＮ ＡＮＤ ＰＵＲＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＰＲＯＣＥＳＳ ＯＦ ＰＯＬＹＳＡＣＣＨＡＲＩＤＥＳ ＦＲＯＭ ＬＡＭＩＮＡＲＩＡ ＪＡＰＯＮＩＣＡ ＡＲＥＳＣＨ ＢＹ ＥＮＺＹＭＥ ＴＥＳＴ
ＺＨＡＮＧ Ｈｕｉ－ ｌｉｎｇ， ＲＥＮ Ｘｉｕ－ ｌｉａｎ＊， ＷＥＩ Ｑｉ－ ｆｅｎｇ， ＸＵ Ｇａｎｇ－ ｐｕ， ＷＥＩ Ｓｉ－ ｊｉｅ （ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｏｃｅａｎ， Ｈａｒｂｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｗｅｉｈａｉ ２６４２０９， Ｓｈａｎｄｏｎｇ， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｌａｍｉｎａｒｉａ Ｊａｐｏｎｉｃａ Ａｒｅｓｃｈ （ＬＪＡ） ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆ－ ｆｅｒｅｎｔ ｆａｃｔｏｒｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｏｎ ｔｈｉｓ ｂａ－ ｓｉｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ： ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ｒｅａｃｔ ｐＨ ａｔ ２．０ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｔ ６５ ℃， ｌｅａｃｈｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗａｓ ｕｐ ｔｏ ８．０９４ ％ ｂｙ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ３ ｈ ａｔ ４０∶１． Ｔｈｅ ｌｅａｃｈｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ－ ｃｒｅａｓｅｄ ｔｏ １３．１７ ％ ｂｙ ａｄｄｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｕｐ ｔｏ ６５．５ ％． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ｗａｓ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｌｅａｃｈｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： Ｌａｍｉｎａｒｉａ Ｊａｐｏｎｉｃａ Ａｒｅｓｃｈ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ； ｌｅａｃｈｉｎｇ ｒａｔｅ； ｐａｐａｙａ ｐｒｏｔｅａｓｅ
海带是褐藻门海带目的一种大型海藻。它的大部 分生物活性与其主要成分多糖有密切关系。近年来， 海 带多糖在医学和药用价值的研究方面取得了很大进 展， 不仅能在多个层面、多条途径对免疫系统发挥调节 作用， 而且具有抗病毒、抗 肿瘤、抗菌、抗疲劳等作用。 但不同海域中海带生活环境不同， 其体内所蕴藏的多 糖活性成分也有所差别。而威海北部海域海带的研究 鲜见报道。
基金项目： 哈尔滨工业大学（ 威海） 校基金（ Ｂ２００５０３） 作者简介： 张慧玲（ １９８２－ ） ， 女（ 汉） ， 硕士研究生， 主 要 从 事 天 然 产 物 的开发与研究。 ＊ 通讯作者： 任秀莲（ １９６３－ ） ， 女， 博士， 副教授， 研究生导师。
的提取工艺。
１ 材料与方法 １．１ 材料
海 带 多 糖 的 提 取 工 艺 较 多［１－ ４］， 如 热 水 浸 提 法 、碱 浸 提 法 、酸 浸 提 法 、超 声 辅 助 浸 提 法 、微 波 浸 提 法 、酶 浸提法等。由于木瓜蛋白酶具有蛋白酶 、酯酶的活性 和 较 广 泛 的 特 异 性 ， 对 动 植 物 蛋 白 、多 肽 、酯 、酰 胺 等 有 较 强 的 水 解 能 力 而 受 到 人 们 的 关 注 。本 文 采 用 热 水 浸提及酶辅助提取法研究威海北部海域海带中多糖