酶法提取纯化海带多糖的工艺
酶法提取纯化海带多糖的工艺
出率也随之升 高 ， 当时 间超 过 ５ｈ时 ， 多糖 的浸 出率开
始 变平缓。 同时 ， 提取时间过长容易导致 多糖 的降解 ，
因此 ， 提取 时间不宜过长 。 ２１ 液固 比的影响 ．４ ．
值对细胞壁产 生一定 的影 响 ， 在一定 ｐ Ｈ值 的作用下 ， 细胞壁疏 松易于多糖 的浸 出，从而提高 了多糖 的浸 出 率 。但是 ｐ Ｈ值太低却容易使部分 多糖 水解 。
摘
要 ： 究从海 带中提取 多糖 的工艺条件 ， 研 探讨 不 同因素对浸 出率 的影 响规律 并在此基础上进行 正交试验选 出优
化 的因素组合 。 试验结果表 明： 浸 出 最佳 条件 为 ｐ Ｈ值 ２ 、 ． 温度 ６ ℃、 固比 ４ ： 提取 时间 ３ ， ０ ５ 液 ０１ 、 在该条件 下粗 多糖 ｈ
Ｆｉ． Ｉ ｌｕ ｎｃ ｆｐ ｏ ａ ｈｎｇｒ ｔ ｆｐ ｌｓ ｃ ｈ ｒｄ ｇ１ ｎｆ ｅ ｅｏ Ｈ ｎｌ ｃ ｉ ａ ｅｏ ｏｙ ａ ｃ ａ ｉ ｅ ｅ
提取时问／ ｝ ｌ
Ｅ ｔａ ｔｏ ｍｅｈ ｘｒ ｃｉｎｔ ／ ｉ
从 图 １中可 以看 出 ：多糖 的浸 出率 随 ｐ Ｈ值 的增 大而上升 ， ｐ 当 Ｈ值达到 ４ ． ， ０时 多糖 的浸 出率达 到最 大值 ， Ｈ值继 续增 大 ，海带多糖 的浸 出率反而下 降 ， ｐ ｐ Ｈ值超过 ８ ． ， ０时 出现平 台并且浸 出率很低 。由于 ｐ Ｈ
鲜见报道 。
海带 ： 自威 海 北部 海 域 。木瓜 蛋 白酶 ： 产 酶活力
１ 万 Ｕ ｇ 广西南 宁 。 ５ ／，
１ 仪器与设备 ． ２
仪器 ： 氏定氮仪 ， 凯 消化仪 ， 紫外可见分光 光度计 ，
精密 ｐ Ｈ计 ， 恒温水浴锅 。 试剂 ： 无水 乙醇 ， 浓硫 酸 ， 氢氧化 钠 ， 酸钾 ， 酸 硫 硫
海带硫酸多糖的分离纯化研究
维素 ２ （ １ ） Ｄ ＡＥ 纤维 素 ４ （ ３Ｃ 型 、 Ｅ 一 １ ＯＨ 型 ） 来进 上海 沪 西分析 仪器 厂
上 海沪 西分析 仪器 厂
ＨＬ一３恒 流泵
Ｔ Ｈ一３ ０梯度混 和器 ｏ
行离 子交 换层 析得 到 四个组 分 。
１ ２ ４ 凝 胶 层 析 本 试 验 采 用 了 Ｓ ｐ ａｏｅ２ ．． ｅ ｈ ｒｓ Ｂ
Ｂ 一１ ８ 自动部分 收集 器 上海 沪 西分析 仪器 厂 Ｓ ０Ａ ＨＤ一３紫外 检测仪 上海 沪西 分析 仪器 厂
凝 胶 柱 层 析 。将上 述 得 到 的 ４个 组 分 ， 别进 行 分
Ｓ ｐ ａｏ ｅ２ ｅ ｈ ｒ ｓ Ｂ凝 胶 过 滤 ， 到 ４个 峰 形 流 份 。收 得
Ｘ ｗＴ—Ｓ小 型 台式 记 录仪 上海 自动化仪 表三 厂
１ 材 料 与 方 法
１１ 材料 ．
１ １１ 原 料 ． ．
根据 酶 法 提取 的最 佳 工艺 条件 ［ ６
提取 制备 海带粗 多糖 。 １ １ ２ 试 剂 Ｄ ＡＥ一 纤 维 素 ２ 、Ｄ ＡＥ一 纤 ．． Ｅ３ Ｅ 维 素 ４ （ ａｍａ １ Ｗｈ ｔ ｎ产 品） Ｓ ｐ ａｏ ｅ２ （ ｈ ｒ — 、 ｅ ｈ ｒｓ Ｂ Ｐ ａｍａ
纯 化方法 。 、
上 述优 化条 件 加入 Ｃ Ｃ 。 离 心去 除 褐 藻酸 钙后 ， ａ １， 在 滤 液 中加 入 Ｃ ＴＡＢ， 心 ， 离 收集 沉 淀 ， 过 量 的 用
Ｃ Ｃ。 ａ １ 溶液 来溶 解沉 淀 ， 离心 ， 淀 即得多 糖 。 沉 １ ２ ２ 乙醇沉 淀 法 将 季 胺 盐 沉 淀法 得 到 的 海 ． ． 带 多糖 溶于 水 ， 乙醇 ２ ％浓 度 ， 大 部分 褐 藻 加 ０ 则
海带多糖及其提取方法
ｈ ｐｃ ｆｍ ｎ ｊ ｔ ｔ ｎ ｉ ｒ ｅ ｃ ｇｂ ｏ ａ ａｄｆ ，ａｉ ａ ｕ ｎ，ａ ｉ ｉ ｎ，ａｄ ｈ ｔｅ ｓｅｔｏ ｉ ｍｕ ｅ ｄ ｓ ｎ，ａｔ ｍｏ，ｒ ｕｉ ｏｄｓｇｒ ｎ ｔ ｎｔ ｏｇｌ ｔ ｎｄａｔ ｘ ａｔ ｎ ｅ ａ ｓ ａ ｕ ｍｅ ｔ ｕ ｄ ｎ ｌ ｕ ａ ｃ ａ ｎｏ ｄ ｔｎ
Ｓｇ 肠 道 菌群 的影 响 。结 果显 示５ ０ １０ ｇｇ ＩＡ及 ０ 、００ ｕ／
多方 面 的生 物 活 性 ，如 免 疫 调 节 、抗 肿 瘤 、抗 凝 成 ，长链上有少量 Ｂ １ 链间糖苷键存在 ，物功能，如免疫 调节、抗肿瘤、降血糖 、改善血流变及循环 、调血 海带中含有丰富的海带多糖 ，迄今已经发现其 脂 、抗辐射、抗氧化、抗疲劳、抗炎及保护肝脏等 中含有三种多糖 ，它们分别是褐藻胶、褐藻糖胶及 作用。
褐藻淀粉。褐藻胶包括水不溶性的褐藻酸及各种水
溶性和水不溶性 的褐藻酸盐类，如褐藻酸钠、褐藻 酸铵、褐藻酸钙 ，是褐藻共有的一种细胞间多糖 ， 由ａ １ 一一 一， Ｌ古罗糖醛酸和 １ １ ． ． ４ ３ ， Ｄ 甘露糖醛酸为单 ．４
１ ． １免疫调节作用 海带 多糖 是一 种免 疫 调节 剂 ，可对 巨噬 细 胞 、Ｔ 细胞直接进行免疫调节。岳真等口 将海带粗 多糖经离子交换纤维素分离纯化 ，得到３ 种纯化 的 海带硫 酸多糖 ，Ｌ Ｓ １ Ｐ ．、Ｌ Ｓ３ Ｐ 一 、Ｌ Ｓ２ Ｐ ．，并采用
海带多糖的提取方法及生物活性研究
营养与健康海带多糖的提取方法及生物活性研究于 娜，张丽敏*，徐 彤（佳木斯大学 生命科学学院，黑龙江佳木斯 154000）摘 要：海带多糖是海带中重要的天然活性成分，其具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节及降血糖等作用。
本文对海带多糖不同提取方法进行比较，对海带多糖生物活性进行分析，旨在为海带多糖的进一步开发研究提供理论依据。
关键词：海带；多糖；提取方法；生物活性Study on Extraction Method and Biological Activity of Polysaccharide From Laminaria japonicaYU Na, ZHANG Limin*, XU Tong(College of Life Sciences, Jiamusi University, Jiamusi 154000, China)Abstract:Laminaria japonica polysaccharides are important natural active ingredients in Laminaria japonica, which have antioxidant, anti-tumor, immune regulation, and hypoglycemic effects. This article compares different extraction methods of Laminaria japonica polysaccharides and analyzes their biological activities, aiming to provide theoretical basis for further development and research of kelp polysaccharides.Keywords:Laminaria japonica; polysaccharides; extraction method; biological activity海带别名江白菜，为多年生冷水性大型食用藻类，藻体褐色，呈扁平带状，具有软坚散结、消肿、利水及润下消痰等功效。
多糖提取——精选推荐
传统的海带多糖的提取方法包括:热水提取法、酶提取法、碱提取法，度是而这些提取方法都存在一定的缺陷。
热水提取的方法采用的温70^-80'}C耗能多，提取时间长.工业生产需要使用的酶量大，不经济。
酶提取的方法提取的时间长，碱提取法是现在工业提取海带多糖的主要方法，但是碱提取方法会造成多糖生物活性的降低。
因此寻找合适的提取方法来降低能耗，提高海带多糖的提取率以及活性变得越来越重要。
为达到这一目的，我们现采用超声波方法来提取海带多糖，随后对其理化性质和生物学活性进行检侧，并与传统方法进行比较，以期得到海带多糖提取的最佳方法。
配制1%的碳酸钠溶液:称取15g无水碳酸钠加入1500mL水称取制备好的200g海带粉，置于不锈钢桶中，加入配好的碳酸钠溶液2. 8L,在50℃水浴5h，趁热用棉纶网进行吊滤，并不断用热冲洗保持温度，获得的吊滤液于5000r/min离心15min，保留上清液。
按体积比平均分成两份，一份上清液经减压浓缩(40 ℃)后，加入三倍体积95%乙醇，沉淀过夜。
离心后获得海带粗多糖 E.另一份上清液中加入氛化钙( 2g/1OOmL)，静置，5000r/min离心去除揭藻酸钙。
上清液经减压浓缩(40 ℃)后，加入三倍体积95%乙醉，沉淀过夜.离心后获得海带硫酸多糖F.将以上所得沉淀E, F各重新溶于水，离心除去不溶物。
上清液再加三倍体积95%乙醇，静置沉淀.生成沉淀经无水乙醇、乙醚洗涤，重新溶于蒸馏水，置于一20℃冰箱冷冻过夜，冷冻干燥得到海带杂多糖E,以及海带硫酸多糖粗品F1可溶性大豆多糖是一种从大豆中提取的多糖类化合物，主要由膳食纤维组成，而膳食纤维对治疗高血压、高血脂、心血管疾病和肥胖病等具有积极作用[1-3]。
可溶性大豆多糖还具有分散稳定性、乳化性，所以常用于酸性饮料中[4-5]。
其属于酸性多糖，结构类似于果胶，多数类型由半乳糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸，也包括鼠李糖、海藻糖、木糖、葡萄糖等。
海带硫酸化多糖的提取及纯化
海带硫酸化多糖的提取及纯化
海带硫酸化多糖的提取及纯化
对海带硫酸化多糖的水提法与酶解法进行比较,发现酶提法效果较好,粗提得率较水提法提高了85.9%,纯化后得率提高了43.6%.纯化过程中,通过正交实验得出CTAB沉淀LPS的最佳最佳优化条件为1%粗糖液:5%CTAB(V/V)为3:2,沉淀时间6 h,离心时间12 min.经单因素实验确定了树脂D315的脱色条件为:1%多糖液与树脂的体积质量比为为100:1(V/W),脱色时间6 h,pH值5.0,温度40℃.
作者：程斌宋加金赵云峰CHENG Bin SONG Jia-jin ZHAO Yun-feng 作者单位：程斌,赵云峰,CHENG Bin,ZHAO Yun-feng(曲阜师范大学生命科学学院,山东,曲阜,273165)
宋加金,SONG Jia-jin(曲阜师范大学科研处,山东,曲阜,273165)
刊名：聊城大学学报（自然科学版）英文刊名：JOURNAL OF LIAOCHENG UNIVERSITY 年，卷(期)：2009 22(2) 分类号：Q946.3 关键词：海带硫酸多糖提取纯化。
海带多糖的提取和鉴定实验方案
海带多糖的提取和鉴定实验方案化药：1104 姓名：林文生学号：110150103一、实验目的1，掌握酶法提取海带硫酸多糖的原理和操作流程；2，了解多糖物质的常规纯化方法及原理；3，熟悉多糖含量测定的常用方法和原理；4，掌握硫酸－蒽酮法测定多糖的原理及操作流程、注意事项；二、实验原理本实验综合利用细胞匀浆和纤维素酶水解，破碎海带细胞壁，释放细胞内容物，包括多糖、海藻酸以及蛋白、核酸等；随后通过海藻酸与Ca2+的结合沉淀形成不溶性海藻酸钙，以去除其中的海藻酸；继而通过CTAB与多糖络合后溶解度下降的特性，将多糖与其他成份分离；最后在盐溶液中回溶多糖，并通过乙醇沉淀法获得多糖沉淀，即为海带粗多糖。
可采用硫酸－蒽酮法测定多糖的含量三、实验材料及试剂实验材料：干海带实验试剂：纤维素酶、1mol/L氯化钙溶液、硫酸、蒽酮、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、葡萄糖、等仪器：组织匀浆机、水浴锅、台式高速离心机、分光光度计四、实验步骤1．干海带加水浸泡过夜，充分溶胀后，加入1/3体积的水，放入组织匀浆机中，粉碎成海带浆。
取约100ml海带浆，调PH值为4.5-5.0，加入0.3g纤维素酶，于50度温浴水解4-6小时，间或搅拌，促进细胞壁水解。
2..在海带浆中加入50ml水，搅拌均匀，沸水浴5min，使纤维素酶失活，冷至室温，用6层纱布过滤，收集滤液（注：1、这个时候一定不要混入海带渣，防止对后面测量结果的影响，2、过滤过程中可戴手套挤纱布，但是不要太用力使海带渣意外流出）3．向滤液中加入1/4体积1mol/L氯化钙溶液，搅拌均匀后，4层纱布过滤，去除海藻酸钙。
（这个时候过滤比较简单，因为海藻酸钙是絮状沉淀，易过滤）4．于滤液中加入1/5体积的2%CTAB与海带多糖结合沉淀，12000rpm离心5min收集CTAB-多糖沉淀物。
(1.要经过离心的两个管一定要配平，平行操作2.两个管相对放置3.离心参数设置4.记忆)5．在CTAB-多糖络合沉淀物中加入0.5ml 2mol/L氯化钾溶液，通过盐解作用，溶解释放海带多糖，然后加入2倍体积无水乙醇沉淀多糖，12000rpm离心5min。
海带多糖的提取方法综述
在用水浸泡后的海带水提取液中加入 醇沉淀，沉降澄清后，上清液可用于制取产 品 甘 露 醇 、氯化钾和碘， 而醇凝沉淀物中有 包 括 褐 藻 糖 胶 在 内 的 各 种 有 机 物 。用 乙 醇 沉淀法和十六烷氯化吡啶（ＣＰＣ）沉淀法可 以 从 醇 凝 沉 淀 物 中 分 离 提 取 褐 藻 糖 胶 。赵 兵［３］等还发明了絮凝沉淀提取海藻多糖的 方法，该方法是将含海藻多糖的浸提料液 置入反应器中，调节反应器内温度为２０～６０ ℃，ｐＨ５～８；在３００～１５００ｒ／ｍｉｎ搅拌速度下， 加入具有活性氨基与羟基的阳离子生物絮 凝剂或于水时电离出磺酸根离子的阴离 子型絮凝剂或为它们混合絮凝剂，对含海 藻多糖浸提料液进行絮凝或电场絮凝提 取，从而得到海藻多糖粗产品。 １．３ 复合酶法
超声波法提取多糖是一种很有希望的 多 糖 提 取 新 方 法 。将 超 声 波 应 用 于 对 中 药 苷类成分的提取中可以提高苷类的提出率
并 缩 短 提 取 时 间 。周 军 明 等 ［ ５ ］研 究 了 超 声 波 辅 助 提 取 褐 藻 糖 胶 的 新 工 艺 ， 以“ 硫 酸 根 ＋ 多 糖 ”质 量 分 数 作 为 产 品 的 主 要 理 化 指 标， 得到优化的提取工艺：即超声波时间６０ ｍ ｉ ｎ 、水 提 时 间 ４ ｈ 、水 提 温 度 ９ ０ ℃ 和 超 声 波 功率８ ０ ０ Ｗ。硫 酸 根 和 多 糖 质 量 分 数 分 别 达 到２２．４９％和３６．９７％。超 声 波 法 提 取 海 带 多 糖时， 超 声 时 间 不 宜 过 长 。随 着 处 理 时 间 的 延长，可能是由于超声波具有较强的机械 剪切作用，长时间的作用会使大分子的多 糖断裂，从而在后处理的过程中的损失增 大而影响多糖的提出率。
法 、酸 提 取 法 、超 声 波 微 波 提 取 法 、沉 淀 法 、复 合 酶 法 等 。
响应面法优化海带多糖的酶法提取工艺及其抗氧化研究_张换
司；其他试剂均为国产分析纯。 1.2 仪器与设备 高速万能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限 公司；80目筛：浙江上虞市五星冲压筛具厂； HZS-H水浴振荡器：哈尔滨市东联电子技术开 发有限公司；UV-1800紫外分光光度计：日本岛 津公司；AL204电子天平、FE20实验室pH计： 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；D-37520离 心机：Thermo公司；IKA RV10旋转蒸发仪、IKA HB10数显/控制加热锅：广州仪科实验室技术有限 公司；SHZ-D(Ⅱ)循环水式真空泵：河南省予华仪 器有限公司；FD-1-50真空冷冻干燥机：北京博 医康实验仪器有限公司。 1.3 方法 1.3.1 酶解提取海带多糖的流程 海带→清洗表面 泥沙→干燥(自然晾干)→粉碎(80目)→按比例加水 →调pH→加纤维素酶→恒温酶解一定时间→灭酶 (95 ℃，15 min)→离心(3000 r/min，15 min)→取上 清液→测试。 1.3.2 海带多糖的测定 采用苯酚-硫酸法 [16] 与 DNS法 [17]分别测定提取液中总糖与还原糖量。多 糖量=总糖量－还原糖量。海带多糖的得率计算 公式为：
食品科技
年 第 卷 第 期 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
提取物与应用
离心，收集沉淀为褐藻淀粉。分别将这3种沉淀复 溶于蒸馏水，冷冻干燥得到海带粗多糖。 1.3.6 海带多糖抗氧化性研究 1.3.6.1 ABTS自由基清除能力的测定 ABTS自由 基清除能力的测定采用张晓溪等人的方法 [18]。将 ABTS(7 mmol/L，5 mL)和过硫酸钾溶液(140 mmol/ L，88 μL)混合，室温避光反应12~16 h，制备 ABTS自由基储备液。使用磷酸盐缓冲液(10 mmol/ L，pH7.4)将储备液稀释至其在734 nm处吸光值为 0.70±0.02备用。将样品稀释至不同浓度梯度，取 100 μL的稀释样品溶液，加3 mL ABTS自由基溶 液，于暗处反应6 min，记录其在734 nm处的吸光 度Asample。以100 μL纯水代替样品，相同操作，记 为Ablank。 ABTS自由基相对清除率(%)=((A blank-A sample)/ Ablank)×100 1.3.6.2 铁氰化钾还原能力的测定 铁氰化钾还原 测定采用黄海兰等人的方法 [19]。将样品配制成不 同浓度梯度，移取1 mL待测样品于15 mL离心管 中，加入1 mL磷酸盐缓冲液(0.2 mmol/L，pH6.6)， 再加入1 mL质量分数1%的铁氰化钾溶液，将离心 管置于50 ℃水浴20 min后，取出，加入1 mL质量 分数10%的三氯乙酸溶液，750 r/min离心10 min， 取1 mL离心上清液，加入1 mL纯水与200 μL质量 分数为0.1%的三氯化铁溶液，振荡均匀。以纯水 为参比，记录其在700 nm处吸光度A700 nm。 2 结果与分析 2.1 单因素实验结果与分析 2.1.1 纤维素酶添加量对多糖提取的影响 称取海 带粉2.5 g，加100 mL蒸馏水(料液比1:40)，调pH为 4.0，于50 ℃、160 r/min酶解4 h，纤维素酶添加量 分别为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%， 测定离心后上清液的多糖含量。
复方海带多糖袋泡茶的研制
泡茶。 在单 因素试验 的基础上 ， 通过正 交试验 ， 得 出提取 海带多糖的最优条件 。 以感官指标 为评 价标准 ， 筛选 出口感
好、 营养成分搭 配合理 的最佳 配方。 试验结果表 明海带多糖的最佳提取 工艺为加入 海带粉 重 ４ ． ０％的复合酶 （ 纤维素 酶、果胶 酶和木瓜蛋 白酶的质量比为 １ ： １ ： １ ） ，在 ｐ Ｈ ６ ． ０ 、温度 ５ Ｏ℃条件下酶解 ３ ｈ ，在此条件 下海带 多糖的得率为 １ ４ ． ８ ０％。 复方海带多糖 降脂茶的最佳 配方为海带多糖提取 浓缩 液（ ｐ ＝ １ ． ２ ｇ ／ ｍＬ ） － ￣菊花甘草混合物 的质量 比为 ２ ： ｌ ， 其
１ ： １ ： １ ） ， ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｍ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｗ ａ ｓ ５ ０ ｏ Ｃ， ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｉ ｍ ｅ ｗ ａ ｓ ３ ｈ ａ ｎ ｄ ｐ Ｈ ｖ ａ ｌ ｕ ｅ ｗ ａ ｓ ６ ． ０ ． Ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ －
研发与工艺
ＤＯ Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ５ － ６ ５ ２ １ ． ２ ０ １ ７ ． １ ７ ． ０ １ ６
食品研究与并发
Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ａｎ ｄ Ｄｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｏ ｍｅ ｎ ｔ
Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ， Ｆ ｕ ｊ ｉ ａ ｎ Ｖ ｏ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｂ ｉ ｏ ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｉ ｒ ｎ ｇ ， Ｆ ｕ ｚ ｈ ｏ ｕ ３ ５ ０ ０ ０ ２ ， Ｆ ｕ ｊ ｉ ａ ｎ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
海带多糖提取条件的优化和脱蛋白研究
海带多糖是一种常见的天然多糖类化合物，具有广泛的应用价值，包括抗氧化、抗菌、抗病毒、降血压、降血糖等多种生物活性。
海带多糖的提取条件的优化和脱蛋白研究一直是研究热点之一。
在本文中，我们将深入探讨海带多糖提取条件的优化和脱蛋白研究的相关内容，希望能为相关研究提供一定的参考和借鉴。
一、海带多糖提取条件的优化1.1 浸提条件海带多糖的提取通常采用水煮浸提的方法，而浸提条件对海带多糖的提取率和品质影响显著。
浸提时间、温度、料液比等条件的优化对海带多糖提取至关重要。
在实验中，我们发现在温度为80摄氏度，料液比为1:20，浸提时间为2小时的条件下，海带多糖的提取率最高，且具有较好的生物活性。
1.2 超声波辅助提取超声波辅助提取是一种常用的海带多糖提取方法，其优势在于提取效率高、操作简便等。
在超声波功率为200W、提取时间为30分钟的条件下，海带多糖的提取率可达到80%以上，远高于传统浸提方法。
1.3 酶法提取酶法提取是近年来新兴的海带多糖提取方法，可以有效地提高多糖的提取率和品质。
酶法提取条件的优化需要考虑酶的种类、用量、酶解时间等因素。
经过实验比较，发现在酶解温度为50摄氏度、pH为7.0的条件下，酶法提取海带多糖效果最佳。
二、脱蛋白研究2.1 酸碱处理脱蛋白是海带多糖提取过程中的关键一环，其目的是去除海带中的蛋白质，从而提高多糖的提取率和纯度。
酸碱处理是常用的脱蛋白方法之一，通过调节海带浸提液的pH值，使蛋白质发生沉淀或溶解，从而实现脱蛋白的目的。
2.2 高温处理高温处理是另一种常用的脱蛋白方法，可以通过加热海带浸提液，使蛋白质发生变性、凝固和沉淀，从而达到脱蛋白的效果。
经过实验研究，发现在90摄氏度下加热30分钟，可获得较好的脱蛋白效果。
总结回顾海带多糖提取条件的优化和脱蛋白研究对于提高海带多糖的提取率和品质具有重要意义。
在提取条件的优化方面，浸提条件、超声波辅助提取和酶法提取都是有效的方法，但在实际操作中需要根据具体情况选择合适的方法。
复合酶法提取海带多糖的研究
沈阳农业大学学报，２００７－０４，３８（２）：２２０－２２３ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｈｅｎｙａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００７－０４，３８（２）：２２０－２２３复合酶法提取海带多糖的研究赵前程１，滕钊１，汪秋宽１，刘俊荣１，金桥１，王翀２，白鹤１（１．辽宁省水产品加工及综合利用重点开放试验室，大连水产学院食品工程系，辽宁大连１１６０２３；２．沈阳农业大学食品学院，沈阳１１０１６１）摘要：采用复合酶法（纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶，比例为２：１：１）从海带中提取３种多糖，并分析了不同加酶方式对海带多糖提取率和含量的影响。
结果表明：分步加酶法（先加纤维素酶：ｐＨ值为５．０，温度５５℃，浸提１０ｍｉｎ；然后加果胶酶：ｐＨ值为４．２，温度５０℃，浸提２ｈ；最后再加木瓜蛋白酶：ｐＨ值为６．０，温度５５℃，浸提２ｈ），比同步加酶法（ｐＨ值为５．５，温度５５℃，浸提４ｈ１０ｍｉｎ）３种海带多糖和总多糖的提取率及多糖含量都有显著地提高。
分步加酶法提取的褐藻糖胶、褐藻淀粉、褐藻胶及总多糖的提取率分别为３．４９％、２．０５％、６．００％和１１．５４％，比同步加酶法分别提高了４５．４２％、３７．５８％、２２．９５％和３１．５８％；分步加酶法提取的褐藻糖胶、褐藻淀粉及褐藻胶的含量分别为８７．１％、５９．３％和８８．６％，比同步加酶法分别提高了１１．９５％、４．７７％和５．２３％。
关键词：海带多糖；复合酶；加酶方式；提取率；多糖含量中图分类号：ＴＱ９２５．９文献标识码：Ａ文章编号：１０００－１７００（２００７）０２－０２２０－０４ＬａｍｉｎａｒｉａＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓＥｘｔｒａｃｔｉｏｎｂｙＣｏｍｐｏｕｎｄＥｎｚｙｍｅｓＺＨＡＯＱｉａｎ－ｃｈｅｎｇ１，ＴＥＮＧＺｈａｏ１，ＷＡＮＧＱｉｕ－ｋｕａｎｇ１，ＬＩＵＪｕｎ－ｒｏｎｇ１，ＪＩＮＱｉａｏ１，ＷＡＮＧＣｈｏｎｇ２，ＢＡＩＨｅ１（１．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｑｕａｔｉｃＰｒｏｄｕｃｔＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＬｉａｏｎｉｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＦｏｏｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＤａｌｉａｎＦｉｓｈｅｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＤａｌｉａｎＬｉａｏｎｉｎｇ１１６０２３，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈｅｎｙａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０１６１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｏｍｐｏｕｎｄｅｎｚｙｍｅｓｏｆｃｅｌｌｕｌｏｓｅ，ｐｅｃｔｏｌａｓｅａｎｄｐａｐａｉｎｗｉｔｈｒａｔｉｏｏｆ２：１：１ｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｉｓｏｌａｔｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｒｏｍｌａｍｉｎａｒｉａ，ａｎｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｔｗｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｗａｙｓｏｆａｄｄｉｔｉｏｎｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｅｎｚｙｍｅｓｏｎｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｒａｔｅａｎｄｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｗａｙｏｆｓｔｅｐｂｙｓｔｅｐａｄｄｉｔｉｏｎｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｅｎｚｙｍｅｓ（ｆｉｒｓｔｃｅｌｌｕ－ｌｏｓｅ，ｔｈｅｎｐｅｃｔｏｌａｓｅ，ａｎｄｆｉｎａｌｌｙｐａｐａｉｎ）ｃｏｕｌｄａｃｈｉｅｖｅｈｉｇｈｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｒａｔｅａｎｄｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔｔｈａｎｔｈａｔｏｆｏｎｅｓｔｅｐ．Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｒａｔｅｓｏｆｆｕｃｏｉｄａｎ，ｌａｍｉｎａｒｉａｎｓｔａｒｃｈ，ａｌｇｉｎａｎｄｔｏｔａｌｐｏｌｙｓａｃｃｈｏｒｉｄｅｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｗａｙｏｆｓｔｅｐｂｙｓｔｅｐｗｅｒｅ３．４９％，２．０５％，６．００％ａｎｄ１１．５４％，ｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ４５．４２％，３７．５８％，２２．９５％ａｎｄ３１．５８％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈａｔｏｆｏｎｅｓｔｅｐ．Ｍｅａｎ－ｗｈｉｌｅ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓａｌｓｏｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｆｕｃｏｉｄａｎ，ｌａｍｉｎａｒｉａｎｓｔａｒｃｈ，ａｎｄａｌｇｉｎｔｈｒｏｕｇｈｓｔｅｐｂｙｓｔｅｐｗｅｒｅ８７．１％，５９．３％ａｎｄ８８．６％，ｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ１１．９５％，４．７７％ａｎｄ５．２３％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｌａｍｉｎａｒｉａｎｐｏｌｙｓａｃｃｈｏｒｉｄｅｓ；ｃｏｍｐｏｕｎｄｅｎｚｙｍｅｓ；ｅｎｚｙｍｅａｄｄｉｔｉｏｎ；ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｒａｔｅ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈｏｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔ海带是一种具有食用和药用的大型褐藻，其含有的多糖成分具有多种生理功能［１，２］，海带中主要有３种多糖，即褐藻胶（ａｌｇｉｎ）、褐藻糖胶（ｆｕｃｏｉｄａｎ）和海带淀粉（ｌａｍｉｎａｒａｎ），褐藻胶和褐藻糖胶是细胞壁的填充物质，而海带淀粉存在于细胞质中。
提取多糖的酶解法工艺流程
提取多糖的酶解法工艺流程
一、原料准备阶段
1.原料选择
（1）选择含有多糖的原料
（2）确保原料质量
2.粉碎处理
（1）粗破碎
（2）细破碎
二、酶解处理阶段
1.酶种选择
（1）选择适合的酶种类
（2）酶活性检测
2.酶解反应
（1）酶解反应槽设备
（2）反应条件控制
3.酶解停止
（1）酶解反应时间控制
（2）酶解反应终止
三、液固分离阶段
1.混合物处理（1）搅拌混合（2）分离调节
2.滤液处理
（1）过滤
（2）滤液浓缩
四、结晶沉淀阶段
1.结晶条件控制（1）温度控制（2）搅拌速度控制
2.结晶分离
（1）结晶分离设备（2）结晶洗涤
五、干燥阶段
1.干燥方式选择（1）热风干燥（2）真空干燥
2.干燥控制
（1）干燥温度控制（2）干燥时间控制。
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图 ２ 所示。
在 １．３．１ 的提取过程中加入木瓜蛋白酶， 以提高多
糖的浸出率同时去除提取液中的蛋白质。
１．４ 试验参数的设定与计算
１．４．１ 分析方法
硫酸－ 苯酚法测定海带多糖的含量［５］。凯氏定氮法
测定粗多糖中蛋白质的含量［６］。
１．４．２ 多糖浸出率 η的计算
海带多糖的浸出率
η（ ％）
＝
粗多糖的量 海带样品的质量
基金项目： 哈尔滨工业大学（ 威海） 校基金（ Ｂ２００５０３） 作者简介： 张慧玲（ １９８２－ ） ， 女（ 汉） ， 硕士研究生， 主 要 从 事 天 然 产 物 的开发与研究。 ＊ 通讯作者： 任秀莲（ １９６３－ ） ， 女， 博士， 副教授， 研究生导师。
的提取工艺。
１ 材料与方法 １．１ 材料
食品工艺
食品研究与开发
２００７．Ｖｏｌ．２８．Ｎｏ．１０ １０１
酶法提ห้องสมุดไป่ตู้纯化海带多糖的工艺
张慧玲， 任秀莲 ＊， 魏琦峰， 许港璞， 魏思捷 （ 哈尔滨工业大学（ 威海） 海洋学院， 山东 威海 ２６４２０９）
摘 要： 研究从海带中提取多糖的工艺条件， 探讨不同因素对浸出率的影响规律并在此基础上进行正交试验选出优 化的因素组合。试验结果表明： 最佳浸出条件为 ｐＨ 值 ２．０、温度 ６５ ℃、液固比 ４０∶１、提取时间 ３ ｈ， 在该条件下粗多糖 的浸出率为 ８．０９４ ％。在提取过程中加入酶， 结果多糖的提取率增加到 １３．１７ ％， 同时提取液中蛋白的去 除率达到 ６５．５ ％。可见， 酶法辅助提取明显提高了海带多糖的提取率。 关键词： 海带多糖； 浸出率； 木瓜蛋白酶
称取 ５．００ ｇ 海带， 加入到一定 ｐＨ 值的水溶液中， 水浴提取， 提取完毕后抽滤， 取部分滤液稀释后按 １．４．１ 方法测定并计算该条件下多糖的浸出率。 １．３．２ 酶法除蛋白
在 ｐＨ 值 ５．０ 的多糖提取液中加入酶底比为 １．２ ％
１０２ ２００７．Ｖｏｌ．２８．Ｎｏ．１０
食品研究与开发
海带： 产自威海北部海域。木瓜蛋白酶： 酶活力 １５ 万 Ｕ／ｇ， 广西南宁。 １．２ 仪器与设备
仪器： 凯氏定氮仪， 消化仪， 紫外可见分光光度计， 精密 ｐＨ 计， 恒温水浴锅。
试剂： 无水乙醇， 浓硫酸， 氢氧化钠， 硫酸钾， 硫酸 铜， 苯酚等均为分析纯。 １．３ 方法 １．３．１ 热水浸提法
×１００×ρ
海带是褐藻门海带目的一种大型海藻。它的大部 分生物活性与其主要成分多糖有密切关系。近年来， 海 带多糖在医学和药用价值的研究方面取得了很大进 展， 不仅能在多个层面、多条途径对免疫系统发挥调节 作用， 而且具有抗病毒、抗 肿瘤、抗菌、抗疲劳等作用。 但不同海域中海带生活环境不同， 其体内所蕴藏的多 糖活性成分也有所差别。而威海北部海域海带的研究 鲜见报道。
食品工艺
的木瓜蛋白酶， ７０ ℃水浴酶解 ２ ｈ， 沸水浴 ５ ｍｉｎ 灭酶， ５０∶１ 液固比的水溶液中， 并依次在 ３０ ℃、５０ ℃、６５ ℃、
醇沉， 水溶。按 １．４．１ 方法测定溶液中蛋白质含量。
７５ ℃、８５ ℃、９０ ℃、１００ ℃水浴中提取 ５ ｈ。试验结果如
１．３．３ 酶辅助提取法
ＥＸＴＲＡＣＴＩＯＮ ＡＮＤ ＰＵＲＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＰＲＯＣＥＳＳ ＯＦ ＰＯＬＹＳＡＣＣＨＡＲＩＤＥＳ ＦＲＯＭ ＬＡＭＩＮＡＲＩＡ ＪＡＰＯＮＩＣＡ ＡＲＥＳＣＨ ＢＹ ＥＮＺＹＭＥ ＴＥＳＴ
ＺＨＡＮＧ Ｈｕｉ－ ｌｉｎｇ， ＲＥＮ Ｘｉｕ－ ｌｉａｎ＊， ＷＥＩ Ｑｉ－ ｆｅｎｇ， ＸＵ Ｇａｎｇ－ ｐｕ， ＷＥＩ Ｓｉ－ ｊｉｅ （ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｏｃｅａｎ， Ｈａｒｂｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｗｅｉｈａｉ ２６４２０９， Ｓｈａｎｄｏｎｇ， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｌａｍｉｎａｒｉａ Ｊａｐｏｎｉｃａ Ａｒｅｓｃｈ （ＬＪＡ） ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆ－ ｆｅｒｅｎｔ ｆａｃｔｏｒｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｏｎ ｔｈｉｓ ｂａ－ ｓｉｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ： ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ｒｅａｃｔ ｐＨ ａｔ ２．０ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｔ ６５ ℃， ｌｅａｃｈｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗａｓ ｕｐ ｔｏ ８．０９４ ％ ｂｙ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ３ ｈ ａｔ ４０∶１． Ｔｈｅ ｌｅａｃｈｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ－ ｃｒｅａｓｅｄ ｔｏ １３．１７ ％ ｂｙ ａｄｄｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｕｐ ｔｏ ６５．５ ％． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ｗａｓ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｌｅａｃｈｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： Ｌａｍｉｎａｒｉａ Ｊａｐｏｎｉｃａ Ａｒｅｓｃｈ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ； ｌｅａｃｈｉｎｇ ｒａｔｅ； ｐａｐａｙａ ｐｒｏｔｅａｓｅ