CD4绝对计数的原理、方法和质量控制

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流式细胞仪11-FACSCanto Clinical 四色免洗淋巴细胞亚群的绝对计数

流式细胞仪11-FACSCanto Clinical 四色免洗淋巴细胞亚群的绝对计数

FACSCanto Clinical 四色免洗淋巴细胞亚群的绝对计数【实验原理】:用已知总数的荧光微球Beads 作标准内参,加入血中,再加入荧光抗体,应用流式细胞仪中的获取和分析软件,就可以得出血中CD3、CD4,CD8、B 、NK 细胞的绝对数。

【主要试剂】:(1) 抗体:CD3/CD8/CD45 /CD4;CD3/CD16+56/CD45 /CD19四色荧光抗体。

(2)Trucount tube (内含数量已知的Beads )。

(3)FACS Lysing Solution (溶血素)(10×,使用前用蒸馏水稀释成1×)。

【实验步骤】:1、 取两支TruCount Tube ,编号A 和B ;2、 用反向加样法在Tube 中加入50ul 充分混匀的抗凝全血,注意血不要碰到试管底部的微球(Beads )。

3、 取20ul CD3/CD8/CD45/CD4抗体加入到A 管中、取20ul CD3/CD16+56/CD45/CD19标记的抗体加入B 中,注意:不要碰到血。

涡旋混匀,室温避光放置15-20min 。

4、 取出加入450ul 1×FACS 溶血素,充分混匀,避光放置15min 。

5、 24小时内上机用FACSCanto Clinical 软件获取2500个淋巴细胞进行检测,上机前应充分混匀。

;【注意事项】:1、 样本使用EDTA 抗凝全血,室温放置,24小时内处理,处理前充分混匀。

2、 取血时要采用反向加样法,即加样枪吸取血样时,打到第二档,放时打到第一档,保证血量的准确,减少误差。

3、 染色和溶血步骤应在室温避光进行,并充分混匀过程中,尽量防止血样的飞溅,以免血样留在管壁上。

4、 本实验为免洗试剂,操作简单,减少细胞的丢失提高工作效率和计数精确度。

5、TruCOUNT 管2-25°C 保存,从冰箱取出后,应恢复室温再打开封条,保证TruCOUNT 管包装袋密闭,袋内干燥剂变成粉红色时,TruCOUNT 管应弃去不用。

一种新的CD4细胞计数方法(上海汇中)

一种新的CD4细胞计数方法(上海汇中)
COULTER COULTER BD BIO-RAD 试剂盒 - - - - BD 22 - - - BIO-RAD 34 13 - - 本试剂盒 11 11 24 -
1. 2.
四种结果的平均检测误差均小于50个/μl 本试剂盒检测误差小于三种仪器之间的检测误差
质控方法
流式细胞法为金标准法,且有相应质控品。 同一血样检测结果与流式细胞法的相关性考 核客观可行。
流式细胞原理
非CD4 细胞
CD4 细胞
荧光标记CD4 单克隆抗体
《CD4检测技术回顾》 HIV 论坛 CD4 工作组工作报告 第二届世界艾滋病大会 泰国 曼谷 2004年7月 检测技术 FACScount Guava CyFlow PointCARE Dynabeads 国家 美国 美国 德国 美国 挪威 操作方式 自动 自动 自动 自动 人工 工作原理 简易流式 简易流式 简易流式 简易流式 磁珠收集
等在内的10000多例临床应用。
1502人CD4细胞计数与体检结果的分析
正常范围 平均值 年龄(岁) <450 38 >450 36 白细胞(个/ul) 4000~10000 <450 5268 >450 6084 淋巴细胞(个/ul) 800~4000 <450 1670 >450 212t;450 36

体 玻 片
特异细胞
包被载玻片
特异结合反应
细胞化学染色
显微镜记数
CD4抗体
CD4细胞
其他细胞
CD4细胞
CD4细胞
+全血
CD4 抗原
淋洗
CD4 抗原
染色
普通光学显微镜
单核细胞
单核细胞
单核细胞

CD4+和CD8+T淋巴细胞检测技术规范

CD4+和CD8+T淋巴细胞检测技术规范

CD4+和CD8+T淋巴细胞检测技术规范1 范围本章规定了CD4+和CD8+T淋巴细胞检测的意义、实验室要求、检测方法、结果报告及质量控制要求。

适用于从事相关检测的各级艾滋病实验室。

2 规范性引用文件《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》(中华人民共和国卫生行业标准,WS293-2008)《国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册(第二版)》(人民卫生出版社,2007年12月)《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南(试行)》(中国疾病预防控制中心,2006年2月)《病原微生物实验室生物安全管理条例》(中华人民共和国国务院令第424号,2004年11月12日)3 CD4+ 和CD8+T淋巴细胞检测的意义3.1 HIV感染临床分期CD4+T淋巴细胞数量可评价HIV感染者免疫状况,辅助临床进行疾病分期。

我国《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》(中华人民共和国卫生行业标准,WS293-2008)将CD4+T淋巴细胞值作为成人及15岁(含15岁)以上青少年HIV/AIDS 临床分期标准的主要依据之一。

3.2HIV感染儿童免疫抑制分级和治疗辅助指标CD4+T淋巴细胞百分数可以作为儿童免疫抑制分级指标,可以作为儿童临床治疗分期和辅助条件。

3.3 疾病进展监测《国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册(第二版)》推荐对无症状HIV感染者及CD4+T淋巴细胞计数高的感染者每六个月进行一次CD4+ T淋巴细胞计数检测,以评估疾病进展,判断预后状况。

3.4 机会性感染的风险评估机会性感染是艾滋病患者死亡的主要原因,CD4+T淋巴细胞可评估HIV感染者机会性感染的风险,辅助判断是否进行预防性治疗(如当CD4+ T淋巴细胞<200/μl时,应给予抗肺孢子菌肺炎的预防性治疗。

3.5 抗病毒治疗适应症选择及疗效评价《国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册(第二版)》将CD4+T淋巴细胞数量作为是否开始抗病毒治疗的重要实验室指标之一,并规定治疗后定期检测CD4+T淋巴细胞数量,判断免疫系统恢复情况。

九、流式细胞仪原理及应用、CD4绝对计数的原理、方法和质量控制

九、流式细胞仪原理及应用、CD4绝对计数的原理、方法和质量控制

免疫聚合磁珠 Dynabeads (利用光镜和免 疫荧光染色) 细胞球 Cytosphere (利用计数板和光镜)

Dynabeads技术计数CD4细胞

原理

用抗CD4单克隆抗体(mAbs)包被的磁化粒子捕获与分 离全血中CD4T淋巴细胞 将125ml新鲜血液,放入EDTA管,加350mlPBS,再加 入25ml mAbs磁化悬浮粒子,在摇床(Dynal Mechnical Rotator) 上置室温10分钟混和,以便去掉血液中的单核 细胞。磁化粒子用专门的磁性浓度计分离,并用PBS 洗涤2次,加入50ml Lysing溶液,着色,用 epifluorescent显微镜计数。
功能特点
(1)多参数定量分析每一个细胞; (2)细胞分选; 高纯度:99%以上; 可分析小于1/10000比例的稀有细胞群; 单细胞克隆等。
(3)高通量(分析分选). 分析150,000个/ 秒 分选100,000个/秒
●流式细胞仪内部结构
▲光学系统 激光光源 光收集系统 ▲液流系统 流动室 液流驱动系统 ▲电子系统 光电转换 数据处理系统 ▲细胞分选系统


CD4+T细胞(Th细胞)绝对计数持续减少
CD8+T细胞(Ts细胞)增高,到疾病晚期时下降 T细胞亚群比例倒臵,CD4/ CD8 <1.0 CD4+细胞功能受损

外周血中CD4+T淋巴细胞的数量是HIV感染疾病分期、 预测疾病进程、制定抗病毒治疗和预防机会性感染方 案以及评价治疗效果的实验室标准指标。
光信号
FSC SSC FL1 FL2 FL3
电信号
对数 线性 线性 线性 对数
脉冲处理,模数转换
(面积,峰高,宽度)

艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测及质量保

艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测及质量保

艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测及质量保证指南A Guideline for CD4+ T Lymphocyte Counting and QualityAssurance in People Living with HIV/AIDS中国疾病预防控制中心2013年08月本指南由中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心艾滋病参比实验室组织有关专家撰写,由中国疾病预防控制中心批准执行。

编写主持人:蒋岩主要编写人员:肖瑶徐建青尚红仲人前蒋岩汪宁钟平李敬云邱志峰姚均潘品良邢文革邱茂锋编写单位:中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心参编单位:复旦大学公共卫生中心中国医科大学附属第一医院上海第二军医大学长征医院上海疾病预防控制中心中国人民解放军军事医学科学院北京协和医院顾问:世界卫生组织,Seguy Nicole,Zhang Lan中美艾滋病项目,Ou, Chin-Yih,Bulterys, Marc前言随着我国艾滋病病毒感染者及艾滋病病人抗病毒治疗和检测咨询工作的深入开展,对CD4+T淋巴细胞的检测需求日益增加。

截至2012年,全国已经有超过400台各型流式细胞仪和CD4+T淋巴细胞计数仪,服务于艾滋病病毒感染者和艾滋病病人,这些仪器在艾滋病防治工作中发挥着重要作用。

为了满足基层CD4+T淋巴细胞检测技术需求,保证检测质量,中国CDC于2006年颁布了《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南》(试行,以下简称《指南》),为保证实验室质量发挥了重要作用。

近几年,相关领域技术方法取得了很多新发展,同时在《指南》使用过程中也发现了一些问题,为此,以我国艾滋病防治现行政策和相关技术标准为依据,参考世界卫生组织、美国、加拿大和澳大利亚等国家的现行指南,对我国现行《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南》(试行)进行了修订。

本次《指南》(试行)修改,重点补充了检测方法,细化了质控要求。

外周血T淋巴细胞亚群绝对计数中CD4计数在菌阴结核及肺外结核病诊断中的意义

外周血T淋巴细胞亚群绝对计数中CD4计数在菌阴结核及肺外结核病诊断中的意义

外周血T淋巴细胞亚群绝对计数中CD4计数在菌阴结核及肺外结核病诊断中的意义2018年全球结核病控制报告结核病流行最新情况。

全球每年新发结核病患者超过1000万例。

有近170万例患者死亡。

我国仍为全球30个结核病高负担国家之一。

目前根据2017年11月9日国家卫生计生委最新发布《肺结核诊断》新标准WS288-2017已于2018年5月1日正式施行。

对肺结核诊断明确了诊断标准。

而菌阴肺结核及肺外结核的诊断较困难。

据估算,我国菌阴肺结核患者约占肺结核患者的70%。

菌阴肺结核患者因缺乏特异性临床表现仅依赖免疫学相关检查(血结核抗体、PPD试验、血γ-干扰素释放试验)及排除其他肺疾病,临床医生给予临床诊断易造成误诊、漏诊。

因结核病是细胞免疫低下所致的疾病。

担负细胞免疫功能的细胞主要是T淋巴细胞。

这是一种在胸腺内发育成熟的淋巴细胞。

主要针对被抗原入侵的宿主细胞。

它可以对侵入人体的细菌、病毒和病原微生物直接发挥免疫杀伤作用。

其作用方式是效应T细胞与宿主细胞紧密接触,通过抗原识别递呈等,发生效应产生淋巴因子,淋巴因子引导吞噬细胞和T细胞分化并共同参与清除抗原物质。

还有部分T细胞还可以形成记忆细胞,记忆T细胞可以清除再次入侵的同类抗原物质形成过敏反应。

T细胞亚群的检测是细胞免疫检测的最新指标之一。

随着抗T细胞单克隆抗体的问世及各种检测方法的建立。

T淋巴细胞亚群检测已经在基础医学及临床医学研究中得到广泛应用。

T淋巴细胞亚群包括CD4-T、CD8-T等细胞。

细胞免疫中,CD4-T淋巴细胞是T淋巴细胞亚群中的一项,是人体免疫系统中最重要的免疫细胞。

CD4代表T辅助细胞,CD8代表T抑制细胞和杀伤细胞。

CD4+T淋巴细胞是免疫反应的中心细胞。

正常人CD4+T淋巴细胞约占总的T细胞的65%。

故CD4+T淋巴细胞计数可以作为直接检测细胞免疫功能的方法。

另有研究说明CD4+T细胞还参与被感染细胞的凋亡。

抗原特异的溶细胞性CD4+T细胞杀灭吞噬了结核杆菌的巨噬细胞,其中对细胞的溶解会导致细菌的扩散,但是释放出的细菌又会被机体中的其他巨噬细胞吞噬,这样形成恶性循环。

1.流式细胞仪原理及其在CD4检测中 的的应用

1.流式细胞仪原理及其在CD4检测中 的的应用

光学系统
两种信号,6个参数
FSC SSC
散射光信号
FL1 FL2 FL3 FL4
荧光信号
光学系统
SSC
Incident Light Source
FSC
• FSC(前向角散射光) 代表细胞大小
• SSC(侧向角散射光) 代表细胞粒度
人外周全血经过红细胞裂解后
光学系统
携带有不同荧光染料的细胞通过激光激发,产生 不同的荧光信号
SSC Time FL1 Time FL2 Time FL3
Time
Parameter SSC FL1 FL2 FL3
Levels 150–999 Volts
认识流式细胞仪——总结
FL2 SSC FL1 Time FSC Time
Data Proce ssor
FSC SSC FL1
Time
Time
Platelets
T
B
பைடு நூலகம்
N K
Granulocytes
Monocytes
(Macrophages)
T Helper
T Cytotoxic
Basophils Neutrophils Eosinophils (Mast Cells)
CD分子-白细胞分化抗原
白细胞在分化成熟过程中 ,不同的发育阶段和不同 亚类的白细胞出现或消失 的表面标记,这是区分白 细胞的重要标志。1986年 世界卫生组织命名委员会 建议应用CD系列来统一命 名白细胞分化抗原
选)
检测平台——BD FACSCalibur
•单激光(488nm)
•三色
•五通道
机(可选)
检测试剂——BD FACSCalibur

流式细胞仪原理及应用、CD4绝对计数的原理、方法和质量控制

流式细胞仪原理及应用、CD4绝对计数的原理、方法和质量控制

• 功能特点
(1)多参数定量分析每一个细胞;
(2)细胞分选; 高纯度:99%以上; 可分析小于1/10000比例的稀有细胞群; 单细胞克隆等。
(3)高通量(分析分选). 分析150,000个/ 秒 分选100,000个/秒
的功能。 CD4+T淋巴细胞是HIV感染最主要的靶细胞。
HIV通过多种直接和间接的病理机制导致CD4+T细胞数量的缺失,最 终引起感染者免疫功能缺陷。
HIV及其包膜蛋白的直接细胞致病作用 感染细胞-未感染细胞形成合胞体 程序性细胞死亡 自身免疫机制 特异性细胞毒T细胞对HIV感染细胞的破坏作用
CD4 T cells/ml
Infection
Seroconversion
1000
500 200
0 2-6 weeks
Flu-like Disease
HAART
Death
CD4 T cell depletion
mean of 10 years
Asymptomatic phase
Symptom-atic
CD4<200/ul和/或出现艾滋病指针性症状(如卡氏肺囊虫肺炎等)时,就可定义为 进入艾滋病期。如表中A3,B3,C1-3期。
判断HIV感染者发生临床合并症的可能性并进行预防
CD4计数(/ul)
任意值 <200 <100 <75 <50
主要机会性感染的预防
结核(皮试阳性) PCP
弓形体病(抗体阳性) MAC
CD4绝对计数的原理、方法和质量控制
张子宁 卫生部艾滋病免疫学重点实验室
HIV感染中CD4+、CD8+T细胞测定的临床意义

cd4指标

cd4指标

cd4指标CD4指标是指人体免疫系统中的一种特殊细胞,也就是CD4+T细胞,是免疫系统中最重要的细胞之一。

CD4指标能够识别、诱导和调节其他免疫细胞,包括B细胞和CD8+T细胞,并且对于身体对于各种病原体的抵御能力至关重要。

那么,CD4指标的相关检测是如何进行的呢?首先,来谈一下CD4指标的意义和检测目的。

CD4指标可以用来评估病毒性疾病感染的严重程度,例如艾滋病、乙肝、丙肝等。

通过对CD4指标的监测,可以更精准地判断病人是否需要接受治疗,或者是调整治疗方案。

并且,在治疗期间,CD4指标的监测也能够帮助医生了解治疗效果及其对免疫系统的影响。

目前,CD4指标的检测主要有两种方法:流式细胞术和免疫酶标法。

流式细胞术是一种通过荧光标记和流式细胞仪技术进行检测的方法。

通过将血液样品处理好后,加入多种标记荧光抗体,并用流式细胞仪对样品进行检测,可以快速、准确地得到CD4指标的检测结果。

这种方法检测出的CD4指标数据波动较小、稳定性较高,准确性也相对较高。

免疫酶标法是一种通过化学反应进行检测的方法。

将患者的血液样品加入试剂盒中,根据试剂盒的说明进行处理后,利用酶标仪进行检测。

这种方法的检测结果比较容易受到其他因素干扰,例如阳性反应率偏高、检测结果受到治疗干预的影响等,但相对使用的设备简单。

无论是哪种检测方法,都需要患者进行准确、规范的样品采集和标本处理。

此外,在进行CD4指标检测时,还需要注意正确的计算和解读数据,并结合其他指标进行综合判断。

总之,CD4指标是评估免疫系统功能的重要标志,检测方法准确而迅速,是临床医生进行疾病诊断、疗效监测的重要工具之一。

cd4+相对计数方法

cd4+相对计数方法

cd4+相对计数方法
CD4+细胞是一种免疫细胞,它在免疫系统中起着重要作用。

CD4+细胞的相对计数是用来评估患者免疫系统功能的一种方法。


临床实践中,有几种常见的方法用于测量CD4+细胞的相对计数。

首先,流式细胞术是一种常用的测量CD4+细胞相对计数的方法。

这种方法利用荧光标记的抗体结合到细胞表面的CD4抗原上,然后
通过流式细胞仪来测量标记细胞的数量。

这种方法可以快速准确地
测量CD4+细胞的相对计数,因此在临床诊断中被广泛应用。

其次,免疫荧光显微镜也可以用来测量CD4+细胞的相对计数。

这种方法通过将荧光标记的抗体与细胞样本结合,然后在荧光显微
镜下观察和计数标记的细胞。

虽然这种方法比流式细胞术更为费时
费力,但在一些实验室条件有限的情况下仍然是一种有效的选择。

此外,还有一种常见的方法是利用全血细胞计数仪来测量CD4+
细胞的相对计数。

这种方法通过对血液样本进行自动化处理和分析,可以快速地得出CD4+细胞的相对计数结果。

虽然这种方法相对简单
快捷,但在一些特殊情况下可能会受到其他血液细胞的干扰。

总的来说,测量CD4+细胞的相对计数是评估免疫系统功能的重要手段,而以上提到的方法只是其中的几种常见选择。

在临床实践中,医生会根据具体情况选择合适的方法来进行测量,以确保得到准确可靠的结果。

CD4+T淋巴细胞绝对计数检测在孕妇胎儿畸形筛查中的应用

CD4+T淋巴细胞绝对计数检测在孕妇胎儿畸形筛查中的应用

CD4+T淋巴细胞绝对计数检测在孕妇胎儿畸形筛查中的应用随着医学技术的不断进步,孕妇产前筛查已经成为孕期保健的重要环节之一。

产前筛查的目的是为了早期发现孕妇患有某些可遗传的遗传病和胎儿畸形,及时进行干预和治疗,有效降低孕妇和胎儿的风险。

近年来,科学家们发现CD4+T淋巴细胞绝对计数检测在孕妇胎儿畸形筛查中具有良好的应用价值,能够为孕妇提供更全面的胎儿健康信息。

本文将从CD4+T淋巴细胞绝对计数检测的原理、临床应用以及在孕妇胎儿畸形筛查中的意义等方面进行探讨。

一、CD4+T淋巴细胞绝对计数检测的原理CD4+T淋巴细胞是免疫系统中的一种重要细胞,它们在机体的免疫应答中发挥着重要作用。

CD4+T细胞可以帮助B细胞产生抗体,也可以协助CD8+T细胞杀伤感染性病原体。

CD4+T细胞的数量和功能异常与许多疾病的发生和发展密切相关。

CD4+T细胞绝对计数是指在一定体积的全血中,CD4+T细胞的绝对数量。

CD4+T细胞绝对计数检测是通过流式细胞仪等现代生物检测技术进行的,能够快速、准确地测定CD4+T细胞的数量,为医生提供了重要的诊断依据。

1. 诊断和监测艾滋病病毒感染:CD4+T细胞是HIV感染及艾滋病发病过程中的一个重要指标。

艾滋病病毒通过攻击CD4+T细胞来破坏机体的免疫系统,导致患者免疫功能丧失。

CD4+T细胞绝对计数检测可以帮助医生监测HIV感染者的免疫功能状态,指导治疗方案的制定。

2. 评价免疫功能状态:CD4+T细胞数量的增减与机体免疫功能状态密切相关,CD4+T细胞绝对计数检测可以帮助医生评价患者的免疫功能状态,为临床诊断和治疗提供重要参考。

3. 治疗效果监测:对于一些免疫相关性疾病,如风湿性关节炎、自身免疫性疾病等,CD4+T细胞绝对计数检测可以帮助医生及时监测治疗效果,指导治疗方案的调整。

近年来,研究发现CD4+T细胞在孕妇胎儿畸形筛查中具有较好的应用价值。

一方面,孕期胎儿发育过程中,CD4+T细胞数量的变化能够反映胎儿的免疫状态和发育情况;孕妇自身的免疫功能状态也会直接影响胎儿的健康。

CD4T淋巴细胞检测质量保证指南

CD4T淋巴细胞检测质量保证指南

第一章总则1.1 意义准确可靠的CD4+T淋巴细胞检测是评价HIV感染者免疫状况,预测判断疾病进程、评价抗病毒药物治疗效果和估测预后的重要指标;世界卫生组织(WHO)和欧美等国家均推荐,艾滋病病毒(HIV)感染者每3-6个月监测一次CD4+T淋巴细胞水平,并以该指标作为开始预防间质性浆细胞肺炎和其它机会性感染,以及作为开始抗逆转录病毒治疗的主要指标。

依照世界卫生组织和美国CDC成年人和未成年人AIDS病例中HIV感染和病例监测分类系统定义,CD4+T淋巴细胞水平也作为判断HIV相关临床病程的标准。

我国“国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册”中也将CD4+T淋巴细胞CD4<200/mm3做为开始抗病毒治疗的标准。

因而保证CD4+T淋巴细胞检测质量是非常重要的。

《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南》对保证CD4+T淋巴细胞检测质量有重要的指导意义。

1.2目的指导我国从事HIV感染者和AIDS患者CD4+T淋巴细胞检测工作的实验室人员,规范CD4+T 淋巴细胞检测方法和程序,完善实验室质量保证与质量控制,提高检测的准确性。

1.3 适用范围适用于我国采用单平台法检测艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞的所有实验室。

1.4 缩略语HIV/AIDS: 艾滋病病毒感染者和艾滋病患者;HIV:艾滋病病毒; AIDS:艾滋病; SOP:标准操作程序; FCM:流式细胞术;SPT:单平台技术;ID:患者编号;PMT:光电倍增管; PT:能力验证第二章实验室环境与设施2.1CD4+T 淋巴细胞检测实验室设施理想的CD4+T淋巴细胞检测实验室应该有专用实验室。

如果空间有限,CD4+T淋巴细胞检测可以与HIV检测的筛查和确认实验室共享一个空间。

本指南推荐的是理想的CD4+T淋巴细胞检测实验室的空间安排。

样品接收、处理在一单独房间,样品检测、分析和报告在另一单独房间。

该类实验室应符合国家生物安全二级 (BSL-2)实验室的有关规定。

CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测规范

CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测规范

CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测规范1、方法目前用于CD4+和CD8+ T淋巴细胞计数的检测方法分为自动检测方法和手工操作法。

自动检测方法包括流式细胞仪(主要有多平台三级程序法和单平台一步法)和专门的细胞计数仪,手工操作法包括几种手工操作试验,需要显微镜或酶联免疫试验设备。

2、实验资料的记录2.1实验应及时、准确地记录结果。

2.2实验记录中应包括以下内容:日期、操作者、所有样品、实验内容、过程(步骤)、结果及有无事故等。

2.3整个实验室的实验资料要统一有专人负责,按固定格式记录在案。

2.4计算机生成的实验结果,存档备案;定期拷贝计算机结果文档,备案保存。

3、结果报告3.1按照实验结果填写CD4+和CD8+ T淋巴细胞检测报告单,检测人员签字。

3.2根据CD命名标准报告数据,用一个简短的描述解释命名的意义。

注意:CD4+T细胞是指辅助性T细胞。

正确的报告CD4+ T细胞应该是那些CD4+ 和CD3+ 双阳性的细胞。

同样地,CD8+ T细胞是T-suppressor/cytotoxic细胞,为CD3+ 和CD8+ 双阳性的细胞。

在CD4+ 和CD8+ 的判定中重要的是排除其它细胞(非T细胞)的干扰。

3.3以全部淋巴细胞的百分比报告数据,并且修正门内淋巴细胞纯度。

例如,如果淋巴细胞纯度是94%,而CD3值为70%,可以通过0.7除以0.94乘以100得到74%,修正CD3的值。

3.4为检测免疫亚群而取血的同时,用该血样作自动测定全血细胞(CBC)计数白细胞(WBC)及分类测定,报告淋巴细胞亚群绝对数值。

3.4.1用淋巴细胞的总数(来自于WBC及分类)乘以淋巴细胞亚群的百分率(从流式细胞仪的数据中得到),计算绝对数值。

3.4.2如可能,应报告计数的百分率和绝对值。

3.5单平台一步法由计算机软件直接出结果并打印出报告单,报告单的内容包括如下结果:CD45+ Abs Cnt;CD3+ Abs Cnt;CD3+ CD4+ %T Lym;CD3+CD4+ Abs Cnt;CD3+CD8+ %T Lym;CD3+CD8+ Abs Cnt;Th/Ts及其正常参考值范围(BD公司建立的正常参考值范围见表3),检测人员签字。

t淋巴细胞亚群检测 标准

t淋巴细胞亚群检测 标准

t淋巴细胞亚群检测标准一、样本采集1.采样时间:在早晨未接受任何其他处理之前,空腹状态下进行。

2.采样量:2-3ml外周血3.采样方式:静脉采血,使用EDTA抗凝管4.样本处理:采血后立即轻轻摇动抗凝管,使血液与抗凝剂充分混合,避免形成血块。

5.样本保存:采集后的样本应立即送检,或在4℃下冷藏保存,但不得超过48小时。

二、检测方法1.检测原理:采用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)进行T 淋巴细胞亚群的检测。

通过荧光标记的单克隆抗体特异性识别淋巴细胞表面的标志物,将T淋巴细胞分为CD4+和CD8+两个亚群。

2.检测流程:a)预处理样本:将EDTA抗凝的全血样本进行涡旋混合,使红细胞和白细胞充分裂解。

b)抗体标记:向预处理后的样本中加入荧光标记的单克隆抗体,孵育一定时间后洗涤并固定细胞。

c)流式细胞术检测:将标记好的样本通过流式细胞仪进行检测,获取每个淋巴细胞的荧光信号。

d)数据处理与分析:使用软件对获取的荧光信号进行数据处理和分析,得到CD4+和CD8+两个亚群的细胞比例。

三、正常参考值根据正常参考值数据库的数据,正常成年人外周血中T淋巴细胞亚群的正常参考值范围如下:CD4+T细胞:40%-65%CD8+T细胞:20%-40%四、T细胞亚群的识别和计数1.CD4+T细胞的识别:通过流式细胞术检测样本中表达CD4分子的T细胞,以识别CD4+T细胞。

2.CD8+T细胞的识别:通过流式细胞术检测样本中表达CD8分子的T细胞,以识别CD8+T细胞。

3.计数方法:采用绝对计数方法,计算每微升血液中CD4+和CD8+T细胞的个数。

每微升血液中含有多少个淋巴细胞,其中有多少个是CD4+或CD8+T细胞。

五、质量控制1.仪器校准:使用流式细胞仪前必须对仪器进行校准,确保数据的准确性和可重复性。

2.试剂质量控制:采用高质量的抗体试剂和荧光标准品,确保检测结果的可靠性。

同时,对抗体试剂进行质量检测和控制,以确保其特异性和灵敏度。

CD4+T淋巴细胞绝对计数检测在孕妇胎儿畸形筛查中的应用

CD4+T淋巴细胞绝对计数检测在孕妇胎儿畸形筛查中的应用

CD4+T淋巴细胞绝对计数检测在孕妇胎儿畸形筛查中的应用【摘要】CD4+T淋巴细胞在免疫系统中扮演着重要角色,其绝对计数可反映免疫功能状态。

本文旨在探讨CD4+T淋巴细胞绝对计数检测在孕妇胎儿畸形筛查中的应用。

通过介绍CD4+T淋巴细胞的生物学特征和检测技术,说明其在孕妇胎儿畸形筛查中的重要性。

结合临床研究结果分析,验证CD4+T淋巴细胞绝对计数在孕妇胎儿畸形筛查中的有效性。

最终得出结论:CD4+T淋巴细胞绝对计数检测可作为孕妇胎儿畸形筛查的有效方法,并展望未来研究方向。

通过本研究,有望为孕妇和胎儿的健康提供更准确的筛查手段,为临床医学实践提供重要参考。

【关键词】CD4+T淋巴细胞、绝对计数检测、孕妇、胎儿、畸形筛查、生物学特征、技术、重要性、应用、临床研究、结果分析、有效方法、未来研究方向1. 引言1.1 背景介绍CD4+T淋巴细胞是免疫系统中的重要成分,主要起着调节免疫应答的作用。

它们在免疫系统中发挥着至关重要的作用,帮助人体对抗感染和疾病。

CD4+T淋巴细胞数量的准确检测对于评估免疫功能及疾病状态具有重要意义。

随着科技的不断进步,CD4+T淋巴细胞绝对计数检测技术逐渐成熟,已经被广泛应用于临床实践中。

这种检测方法可以通过流式细胞术等高级技术,快速准确地检测出CD4+T淋巴细胞的绝对数量,为临床诊断和治疗提供重要依据。

在孕妇胎儿畸形筛查方面,CD4+T淋巴细胞绝对计数检测也具有重要意义。

孕妇的免疫状态对胎儿的发育和健康有着直接影响,而CD4+T淋巴细胞数量的变化可能反映出孕妇的免疫功能状态。

通过检测孕妇血液中CD4+T淋巴细胞的绝对数量,可以评估孕妇的免疫功能状态,为胎儿畸形的早期诊断提供重要依据。

本文将探讨CD4+T淋巴细胞绝对计数检测在孕妇胎儿畸形筛查中的应用,并分析其临床研究结果,以期为孕妇和胎儿的健康提供更有效的保障。

1.2 研究目的研究目的:本文旨在探讨CD4+T淋巴细胞绝对计数检测在孕妇胎儿畸形筛查中的应用,通过分析CD4+T淋巴细胞的生物学特征、绝对计数检测技术以及胎儿畸形筛查的重要性,探讨该方法在临床实践中的有效性和可行性,为提高孕妇胎儿畸形筛查的准确性和早期诊断率提供科学依据。

CD4技术跟踪及质量控

CD4技术跟踪及质量控

CD4技术跟踪及质量控----建议方案一、实验室方面:1.流式细胞仪的厂家及型号:如BECKMAN COULTRE EPICS XL2.实验室有无电压稳定设备:如UPS3.实验室温度,有无空调,有无每天的温度记录;4.实验人员的保护设备,如防护口罩、防护衣、手套及生物安全柜等5.标本处理的保护设备及回收;6.实验人员的技术水平:比如培训情况、质量控制方面的知识及理论知识7.有无实验室各种操作的SOP,如CD4检测的SOP、仪器维护及质量控制的SOP 等8.实验室管理人员及复核人员对该项目的熟悉程度;9.血样接收及CD4结果的档案及上报系统是否完善;10.问题的登记及解决办法的记录是否齐全,问题解决前后有无平行对照。

二、仪器使用:1.抗体的厂家和正在使用的抗体的效期;2.采集软件及分析软件:如EPICS XL可用XL 2.0 、XL 3.0、EXPO 32 、EXPO 32 ADC采集;3.荧光微球的种类、厂家及效期;4.是否保证每天做机子的质量控制,有无可查的Levey-Jenning图;如果不在质量控制范围的处理办法及记录;5.有无每天的开机关机记录,及每天的正、负压记录,是否正压在+23±2,负压在-17±2的范围内;6.有无每天仪器的清洗记录,可以在每天的存档文件中查阅;7.有无每天的仪器工作状态、工作时间及工作温度记录8.有无每天的质控品的记录:包括质控品的厂家、效期、质量控制曲线,如果不在质量控制范围的处理办法及记录;三、血样评估:1.采血前一周内被采血者是否存在影响机体免疫功能的疾病及使用过影响免疫功能的药物;2.采血的时间,是在一天的那段时间,是否空腹,对于一个患者多次采血是否都在一天的同一段时间;3.采血的方法、抗凝剂、采血的量,采血后是否充分摇匀;4.抗凝管的厂家、批号及效期;5.采血后的血样保存方法、运输及保存时间;6.接收样本的时间,是否的规定的时间内,接收到的样本情况,有无记录,对怀疑凝血的标本是否进行分群评价,有无记录可查;7.采血人员的培训情况及资格,有无可查的证据;8.采血、血样保存、运输的SOP文件及工作人员的遵守情况,是否严格执行。

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仪器的选择
1、中央级、省级、研究所、高校、医院:流式细胞 仪( FACSCalibur、Coulter)
2、地区级及示范区:专门的流式细胞计数仪 ( FACSCount、Guava)
3、现场及乡镇卫生院:(手工方法:如 Dynabeads)
4、除此之外,在不具备CD4检测的实验室,WHO 建议用总淋巴细胞来代替。(当总淋巴细胞小于 1000/ul时,强烈预示CD4细胞小于200 /ul。
HIV感染后CD4+、CD8+T细胞变化
❖ CD4+T细胞(Th细胞)绝对计数持续减少 ❖ CD8+T细胞(Ts细胞)增高,到疾病晚期时下
降 ❖ T细胞亚群比例倒置,CD4/ CD8 <1.0 ❖ CD4+细胞功能受损
❖ 外周血中CD4+T淋巴细胞的数量是HIV感染疾病分 期、预测疾病进程、制定抗病毒治疗和预防机会性感 染方案以及评价治疗效果的实验室标准指标。
MAC CMV(抗体阳性或血培养)隐球菌
病组织胞浆菌病球孢子菌病
《艾滋病诊断与治疗指导方案》(试行,2002年)
确定抗HIV药物治疗开展的时机及进行疗效评价
病程
CD4+T淋巴细 胞
病毒载量
建议
症状期
任何值
任何值
治疗
无症状期
CD4+T细胞 <200/mm3
任何值
治疗
无症状期
CD4+T细胞 >200/mm3,
B3
C3
CD4<200/ul和/或出现艾滋病指针性症状(如卡氏肺囊虫肺 炎等)时,就可定义为进入艾滋病期。如表中A3,B3,C1-3 期。
判断HIV感染者发生临床合并症的可能性并进行预防
CD4计数(/ul) 主要机会性感染的预防
任意值 <200 <100 <75
<50
结核(皮试阳性) PCP
弓形体病(抗体阳性)
的维持具有枢纽的功能。 ❖ CD4+T淋巴细胞是HIV感染最主要的靶细胞。
❖ HIV通过多种直接和间接的病理机制导致CD4+T细 胞数量的缺失,最终引起感染者免疫功能缺陷。
HIV及其包膜蛋白的直接细胞致病作用 感染细胞-未感染细胞形成合胞体 程序性细胞死亡 自身免疫机制 特异性细胞毒T细胞对HIV感染细胞的破坏作用
成人及青少年艾滋病分期标准(CDC,美国,1993年)
临床阶段
CD4+T细胞 A 无症状或急性HIV感 染或持续性全身淋巴结 肿大
B 出现症状, 不是A或C
C 艾滋病指针性症 状
>500/ul (≥29%)
A1
200-499/ul (14-28%)
A2
<200/ul (<14%)
A3
B1
C1
B2
C2
CD4绝对计数的原理、方法和 质量控制
HIV感染中CD4+、CD8+T细胞测定的临床意义
淋巴细胞
B淋巴细胞 CD19+
T淋巴细胞 CD3+
NK细胞 CD3-CD16+56+
T辅助/诱导细胞 CD3+CD4+
T抑制/细胞毒性细胞 CD3+CD8+
❖ 淋巴细胞在免疫应答中起核心作用。 ❖ CD4+T淋巴细胞对细胞免疫和体液免疫平衡
- 丙球蛋白缺乏症 - 胸腺发育不全 (DiGeorge氏综合症) - 严重的联合免疫缺陷
CD4+ T细胞计数的方法
非FCM 技术
优点
-简单 -低廉
缺点
-低通量 -难于质控
FCM 技术
优点
-自动化方法 -可靠性高(变异系数低) -精密度、准确度和可重复性高 -高通量 -金标准技术
缺点
-设备昂贵 -试剂昂贵 - 需要熟练技术人员操作
价格:3美元/人份
流式细胞术(flow cytometry, FCM)
流式细胞仪
BD-Calibur
BD FACSVantage
对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选
●FCM的特点
保持细胞及细胞器或微粒的结构及功 能不被破坏
从分子水平获取多种信号 对细胞进行定量分析或纯化分选
功能特点
(1)多参数定量分析每一个细胞;
(2)细胞分选; 高纯度:99%以上; 可分析小于1/10000比例的稀有细胞群; 单细胞克隆等。
(3)高通量(分析分选). 分析150,000个/ 秒 分选100,000个/秒
●流式细胞仪内部结构
▲光学系统 激光光源 光收集系统
▲液流系统 流动室
液流驱动系统 ▲电子系统
Infection Seroconversion
HAART
CD4 T cell depletion
1000
Death
CD4 T cells/ml
500
200 0 2-6 weeks
Flu-like Disease
mean of 10 years
Asymptomatic phase
Symptomatic phase AIDS
但 <350/mm3
>30000(bDNA) 或>55000(RTPCR)
建议治疗。另外还要根据 CD4+T细胞下降率和患者 的愿望
无症状期
CD4+T细胞 >350/mm3
<30000(bDNA) 或<55000(RTPCR)
建议延迟治疗观察。未经治 疗者3年发展至AIDS<15%.
《艾滋病诊断与治疗指导方案》(试行,2002年)
CD4细胞数(个/ul)
VL log copies/ml
350
333
300
309
250
266
200
150
165
100
50
0 d0
4w
ห้องสมุดไป่ตู้
12w
24w
治疗时间
HAART治疗6个月10例患者CD4细胞平均数变化
6
5
4
3
2
1
0
d0
4w
12w
24w
10例患者治疗期间平均VL的变化情况
提示
虽然CD4+T细胞计数是监测HIV病程的评价工具,但是 单独的CD4+T细胞数减少不是HIV感染的诊断检验。其它的 免疫缺陷状况也可以有辅助性T-淋巴细胞数量减少的结果:
非流式细胞技术
免疫聚合磁珠 Dynabeads (利用光镜和免 疫荧光染色)
细胞球 Cytosphere (利用计数板和光镜)
Dynabeads技术计数CD4细胞
原理
用抗CD4单克隆抗体(mAbs)包被的磁化粒子捕获与分 离全血中CD4T淋巴细胞
方法
将125ml新鲜血液,放入EDTA管,加350mlPBS,再加 入25ml mAbs磁化悬浮粒子,在摇床(Dynal Mechnical Rotator) 上置室温10分钟混和,以便去掉血液中的单核 细胞。磁化粒子用专门的磁性浓度计分离,并用PBS 洗涤2次,加入50ml Lysing溶液,着色,用 epifluorescent显微镜计数。
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