【中山大学生物防治】09微生物生产和害虫生物防治

培养过程中反动数次，2~3 d后大部分形成芽孢囊，并有20%左右的芽孢和晶体脱落
时终止培养。连同麸皮培养基磨碎过筛包装。产品含活孢子50亿~100亿/g。
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2. 一步扩大培养
采用半固体浅盘发酵，以工业生产的菌粉作为种子，省略了三级扩大培养法中的 斜面菌种和种子扩大培养两个步骤。
产物浓度高；
自动化程度低，易染杂菌、
（2）发酵后可直接进行干燥、粉碎，过程简单， 产品湿润性能较差。
后处理过程节能。
液体深层次发酵
（1）生产规模大，流动性好，有利于传质、传 热、和控制；
（2）便于高效、自动化、清洁生产。
发酵后处理较难，发酵水 平受培养基组分和浓度因 素的影响。
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（一）固体发酵
亿/g。
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二、白僵菌的生产
白僵菌和绿僵菌是昆虫病原真菌中大量生产研究较多的种类，生产方法有很多共同之处。
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白僵菌致死的昆虫
绿僵菌致死的昆虫
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1. 白僵菌液体深层发酵工业
菌种 斜面菌种活化
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来自百度文库
黄浆水
（豆腐压榨水） 18 mol/L H2SO4调至pH 2
低含量（约10 000 IU/mg）Bt半成品
用HCl调pH至4.8~5.5
膜浓缩
压力≦0.6 Mpa 去水浓缩1.5~2倍
加填充料混合
加轻质碳酸钙，混合、搅拌30~45 min
喷雾干燥
进风170~210oC，出风80~90oC，喷粉450~550 L/h
高含量Bt半成品
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2. 工艺条件
菌种：选用优良菌种，并防止退化，用时移接活化，选择对数生长期接种，接种
第九章 昆虫病原微生物的增殖和生产
苏云金芽孢杆菌的生产 白僵菌的生产 斜纹夜蛾多角体病毒的增殖 昆虫病院线虫的繁殖与培养 蝗虫微孢子虫的繁殖 农用抗生素的生产
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一、苏云金芽孢杆菌的生产
生产方式
优点
缺点
固体发酵
（1）培养基含水量少、废水废渣少、环境污染
小、能耗低、设备技术较简易、投资低、 发酵温度、湿度难控制，
1. 三级扩大培养 （1）生产工艺流程
沙土管菌种→斜面菌种→液体种子扩大种子培养 →半固体浅盘培养→干燥→粉碎包装
苏云金芽孢杆菌菌体
（2）工艺条件
种子扩大培养多采用三角瓶液体震荡培养。
半固体浅盘发酵相当于发酵罐培养，培养基可因地制宜利用农副产品，如一种以麸
皮为主要基质的培养基，其质量比为：麸皮50、豆饼粉25、麦秆粉20、CaCO3 1.5、 KH2PO4 0.3、MgSO4 0.2、NaOH 1、水150。料厚1.6~3.3 cm，接种后盖灭菌纱 布。室温25~30oC。
调浆
常温干燥
低温储藏
包装
喷雾干燥
生产、储藏
成品
（芽生孢子，450亿/g）
粉碎 检验
液体深层发酵工 业生产工8艺流程
早在1960年代，我国和前苏联就曾研究过白僵菌的液体深层发酵工业生产。 Samsinakova (1966)在1 000 mL的发酵液中可获得10~15 g干重的芽生孢子。 1970年代，前苏联还有通过深层发酵直接生产白僵菌分生孢子的报道（Goral, 1973,
1975），发酵罐中可获得5×108~2×109分生孢子/mL，取决于培养基的成分和发酵条件 的控制。 Rombach （1989）进一步研究了白僵菌的深层发酵产孢，发生在产生芽生孢子和菌丝 片段的同时也能产生和冲体上或固体培养基上相似的合轴分生孢子。含有2%蔗糖和 0.5%酵母浸出物和基础盐培养液中，分生孢子最高产量为1.7×108个/mL；在2.5%蔗糖 和2.5%酵母浸出物的培养液中分生孢子最高产量为7.4×108个/mL。
1. 生产工艺流程
斜面菌种
29~31oC，斜面培养92~100 h
沙土管菌种
发酵罐
29~31oC，压力0.05~0.07 mPa；通气1:0.8~1.2(v/v) 20~40 h
发酵液预处理
加硅藻土 混合、搅拌30~45 min
板框过滤
用HCl调pH至4.5~5.5
加填充料混合
沸腾干燥
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将经灭菌处理过的半固体培养基倒在消毒过的塑料薄膜上，用质量高的工业菌粉 （含活芽孢100亿/g）按配料干重的1%抢温（80oC）接种，拌匀后用塑料薄膜 包起闷热10 m，以达到减少杂菌和催芽的目的。
然后打开塑料膜摊放在浅盘上培养。 其他步骤与三级扩大培养法相同。
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（二）深层固体发酵
浸膏2%、糖蜜4%~6%、KH2SO4 0.1%~0.2%、MgSO4 0.05%~0.1%，pH 5~6。无菌操作
常原压料水解
沉淀 弃去
二级液体种子（查贝克培养基+1.5%蛋白胨）
（26~28oC，72 h）
豆油去泡剂，按0.2%加入
NH4OH 调至pH 5
发酵
发酵罐深层培养
空气过滤器
（26~28oC，约72 h，搅拌速度200 rpm）
空压机
发酵液
填充剂（滑石粉，过筛孔径46.2 μm，按5%加入）
板框过滤或连续离心（20 000 rpm）
口温度170~210oC，中层温度65~75oC，流量450~550 L/h。
工业生产发酵培养基：我国常用的培养基成分（质量比）为：花生饼粉2.0，玉
米浆0.9、糊精0.8、蛋白胨0.1、CaCO3 0.2,、MgSO4 0.075、K2HPO4 0.007、
(NH4)2SO4 0.2、饴糖0.5、消泡剂豆油0.2。我国菌剂产品一般约含活芽孢数100
量要适当。
发酵培养及下游处理控制：接种和发酵过程应注意不能有杂菌和噬菌体感染。通
气培养的适温为30oC，不能低于28oC或高于35oC。pH在发酵时稍降，形成芽孢
时稍升。晶体脱落即可放罐。如果用离心沉淀收获或发酵直接真空干燥，应尽可
能提高菌体成熟度。如果用板框过滤法，滤液中菌数应低于0.2亿/mL。喷雾塔进
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2. 双相发酵生产
1970年代初开始，前苏联采用双相发酵技术生产球孢白僵菌，该技术是将经深层培养
的芽生孢子液倾入有麦麸、谷类等培养基的浅盘表面上，促进菌丝迅速发育，并产生
分生孢子。白僵菌的分生孢子制剂，其产品名称为Beauverin或Bocerin，含活孢子量
2×109个/g，惰性基质为高岭土（Goral, 1971, 1972）。此法生产白僵菌的培养基含玉米