布病检测方法

布病检测方法及质量控制

日内进行检查，因放置时间过长可能会导致血清效价降低。
③ 个别血清会出现前带现象，建议多做几个管，多
采用几个稀释度。
2.3 iELISA 间接酶联免疫吸附试验（iELISA）是另一种对布病抗体敏感性较高的实验。大概步骤如下，抗原包被在平板上，血清或奶样中的特异性抗体能够与抗原形成复合物。通过洗液洗涤去除未结合的抗体，当用酶标二抗孵育显色以后，可以通过index 值来判断动物是否为阳性。
方。
（3）实验室外部质控环比实验：外部的质量体系对实验室进行的能力验证。在环比实验中，实验室会收到15-20个盲样，这些盲样的滴度都已经被测定，并且都通过了稳定性与均一性实验。通过环比实验，可以评判各实验室在检测过程中所存在的问题，以便其不断改进。中国动物卫生与流行病学中心，人兽共患病监测室在2015年11月29日进行了第一次环比实验，现结果正在汇总分析当中。
通过以上标准对抗原进行质控至关重要。因为如
果没有良好质控的话，则实验中虎红抗原可能会过于敏感（产生许多假阳性），或敏感性不够（产生许多假阴性）。
当没有OIE标准血清时，需要使用国家标准血清
对抗原进行质控。国家标准血清符合OIE的要求，应由国家参考实验室提供。
2.2 SAT
• 特异性抗体可与相应
2015年环比实验样品制备
谢谢大家！！！
（3）RBT抗原质控的方法
① 当新的一批抗原到来时，要对新的抗原进行质控。简述 ②
③
④
⑤
RBT抗原质控方法如下（以OIE标准血清为例）：抗原滴度（可检测性）：将OIE ISS 标准血清用生理盐水稀释为1：25, 1：40, 1：45, 1：55 和1：100。RBT实验中当血清在1 :45稀释度时检测为阳性，1 :55为检测阴性则此项合格。如果超过了这个范围则检测度不合格。敏感性：取滴度略高于阴阳性临界值的阳性血清，并用待检抗原检测，当检测结果均为阳性时则此项合格特异性：对阴性血清（通过未感然布鲁氏菌动物的血液制备）进行检测，检测结果全为阴性则此项合格。纯度/无菌性

布鲁氏菌的血清学检测方法

布鲁氏菌的血清学检测方法布鲁氏菌病（简称布病）是一种人兽共患的传染病，世界范围内流行。

布病给人造成了大量损失和痛苦。

近年由于布病的散发病例的增多，患者多无明确接触史，临床症状又不典型，因此其实验室检测至关重要。

目前布氏菌的实验室检测主要分三类：布氏菌细菌学检测、血清学检测和分子生物学检测。

细菌学检测周期长、阳性率低、感染风险高等特点，分子生物学对仪器、人员、技术的要求较高使得这两类技术在临床诊断应用上不是很普遍，应用最多的还是布氏菌的血清学检测。

本文现就布氏菌的血清学的检测进行如下综述。

布氏菌血清学方法可以分为：凝集法、补体结合法、酶联免疫吸附试验法、荧光偏振法、胶体金层析法等。

其中凝集法是通过特异性抗体与颗粒性抗原结合产生凝集的血清学实验，现应用最多的为虎红平板凝集实验、试管凝集实验、二巯基乙醇试管凝集实验、抗人球蛋白抗体实验等。

虎红平板凝集实验（RBPA）其抗原系用抗原性良好的牛种布氏菌株在适宜培养基上培养收获菌体, 经加热灭活, 离心后用虎红染料染色, 悬浮于乳酸缓冲液（PH3.6-3.7）制成。

它能抑制非特异性反应的IgM和增强特异性IgG 的活性, 其反应敏感稳定, 特异性优于试管凝集实验。

因此PBPA在很多国家推广使用, 是我国常规的诊断方法之一。

RBPA操作简单，不需要大型精密的仪器，适合基层医疗机构和检测点应用。

因有很高的灵敏性且能在短时间内完成，RBPA常用于初筛实验。

其有很高的准确性，特别是当检测1:4稀释血清标本阳性时其诊断的特异性更高【1】。

但RBPA也有局限性，纤维蛋白原可与虎红染料发生非特异性结合形成假阳性【2】，急性病人早期，体内产生的抗体以IgM为主，RBPA可能检测为阴性。

试管凝集实验(SAT)又称莱特试验是1897年由Wright发明，其方法简便，特异性强，可半定量检布鲁氏菌抗体滴度，因此有很高的诊断价值，至今在临床上广泛使用。

我国布病诊断标准中当SAT滴度≥1：100可确诊是活动性布病。

布病检测方法布病，又称为鼠疫，是一种由鼠疫耶尔森菌引起的传染病，主要通过啮齿类动物传播给人类。

布病的早期症状包括发热、头痛、肌肉疼痛等，如果不及时治疗，可能会导致严重的并发症甚至死亡。

因此，及时准确地进行布病检测对于预防和控制疾病的传播至关重要。

本文将介绍几种常见的布病检测方法，帮助大家了解如何进行有效的检测和诊断。

1. 血清学检测方法。

血清学检测是目前常用的布病检测方法之一。

通过检测患者的血清中是否含有鼠疫耶尔森菌的特异抗体，可以确定是否感染了布病。

这种方法的优点是操作简便、结果快速，可以在短时间内得出初步诊断。

但是，血清学检测方法也存在一定的局限性，例如在感染初期可能无法检测出抗体，容易产生假阴性结果。

2. 细菌培养检测方法。

细菌培养检测是通过将患者的组织样本或体液样本进行培养，观察是否能够分离出鼠疫耶尔森菌来进行诊断的方法。

这种方法的优点是可以直接获得病原体，对于确诊布病具有重要意义。

然而，细菌培养检测需要较长的培养周期，通常需要数天甚至数周才能得出结果，且操作复杂、耗时。

3. 分子生物学检测方法。

分子生物学检测方法是近年来发展起来的一种新型检测方法，通过检测患者组织样本或体液样本中的鼠疫耶尔森菌的DNA或RNA来进行诊断。

这种方法具有高度的特异性和敏感性，能够快速准确地检测出病原体，对于布病的早期诊断具有重要意义。

然而，分子生物学检测方法需要专业的实验室设备和技术支持，成本较高，限制了其在临床上的推广应用。

4. 免疫组化检测方法。

免疫组化检测方法是通过检测患者的组织样本中是否含有鼠疫耶尔森菌的特异抗原来进行诊断的方法。

这种方法具有较高的特异性和准确性，可以帮助医生进行准确的病理诊断。

然而，免疫组化检测方法需要专业的实验室设备和技术支持，且操作复杂，不适合于临床快速诊断。

总结。

布病的及时检测对于预防和控制疾病的传播至关重要。

目前，血清学检测、细菌培养检测、分子生物学检测和免疫组化检测是常用的布病检测方法。

布鲁氏菌病血清学诊断方法及评价

论与我们的ＰＲＴ是有高度的一致性的。并且该方法的使用不仅对于早期的抗体产生高敏感，对于后期的治疗中也表现不俗。特别是在猪布病的试验检疫时，ＲＢＰＴ得出的结论是与ＳＡＴ有着高达９９．４４％的概率的，这说明对于ＲＢＰＴ的使用是￣ＬＳＡＴ更优秀的检测
要可分为三种不同的试验方法，环状、絮状以及琼脂扩散试验，
１试管凝集试验
在１８９６年我们的Ｄｕｒｈａｍ开始对于细菌凝集反应进行深入研究，试管凝集试验随着多年的积累被多次的研究和检测布鲁氏菌病的参数。试管凝集试验的又被称为为ＳＡＴ，是被大量采用的项检测手段。这种研究方法主要是对诊断布病的一种试验方式。经过多年的实验积累，ＳＡＴ被不断的采纳，因为其试验的稳定性，也是一种高敏感的一项选择。它通过相关的实验可以检测出我们血清中的存在的抗布鲁氏菌，一般主要表现为三个免疫球蛋白抗体，这三种包括ＩｇＧ，ＩｇＭ以及ＩｇＡ。通过检测这三项矿体，我们的ＳＡＴ对ＩｇＭ表现出较强的敏感性，在布鲁氏菌病的早期诊断中，我们一般在用ＳＡＴ检测是会进行多次的实验，由于检测次数的增多，我们可以发现它的凝集价也会急剧的上升，这对于我们精确的诊断有着很大的帮助，这种凝集价可以保持在一年的时间，在这之后它会有所减少。在ＳＡＴ检测中，对于家畜和人的检测是相一致的，由于操作上并不复杂，而且判断结果也比较方便，因此，采用ＳＡＴ是有较高的诊断价值的体现的，当然，我们

羊布鲁氏菌病不同血清学检测方法的比较

羊布鲁氏菌病不同血清学检测方法的比较武水珍X u m u s h o u y i 羊布鲁氏菌病又被称为布病，它是由布鲁斯杆菌感染引发的一种发热、流产、睾丸炎症、关节肿胀为主要症状的人畜共患传染性疾病，该种传染性疾病除了危害羊之外，还可以危害多种反刍动物，同时也会危害到人类的身体健康。

为了更好的防范该种传染性疾病的传播流行，都需要做好妥善的疫苗免疫接种工作和疫情的检测筛查。

在羊布鲁氏杆菌病诊断过程中常用的检测方法多种多样，主要包括了虎红平板凝集试验、试管凝集试验、酶联免疫吸附试验到等，不同的试验有着不同的操作标准，同时检测的精确性也存在一定差异。

为了进一步研究不同学生检测方法对布鲁氏杆菌病的检测效果，从流行过羊布鲁氏杆菌病的2个规模化养殖场当中采集新鲜血液200份，进行血清学检测，现将具体内容介绍如下：一、试验材料与方法1、试验材料获取本次研究从流行过羊布鲁氏杆菌病的两个规模化养殖场中采集新鲜血液200份，将其放置在4度的温箱当中进行保存。

在检测过程中主要涉及到的试剂为虎红平板凝集抗原、虎红平板凝集试验阳性血清、羊布鲁氏杆菌病抗体检测试剂盒（EILSA ）、布鲁氏杆菌试管凝集抗原、布鲁氏杆菌标准阳性血清、标准阴性血清、绵羊红细胞。

上述材料均从正规途径采集。

在试验过程中所涉及到的仪器主要包括了生化培养箱、酶标仪、全自动酶标洗板机、单多道移液器等。

2、试验方法在试验操作过程中，首先对采集到的血液进行血清分离得到的血清进行编号处理。

虎红平板凝集试验、补体结合试验、试管凝集试验的检测和判定按照布鲁氏杆菌诊断技术标准进行。

羊布鲁氏杆菌抗体检测试验，按照抗体检测试剂盒中的相关说明进行严格的操作，并进行阳性阴性判断。

二、结果分析1、不同血清检测方法200份血清样品当中的阳性率在进行血清学检测过程中，根据布鲁斯杆菌病防治技术规范的相关规定要求，对于普通平板检测为阳性，但试管凝集检测为阴性的血清，应该在试验结束30天之后，再次采集该头患病羊的新鲜血液进行一次检测，如果虎红平板凝集试验的检测结果再次为阳性，则可以判断该血清为阳性，否则判断为阴性。

布病检测工作实施方案

布病检测工作实施方案一、背景。

布病是一种由布鲁氏菌引起的人畜共患病，对人畜健康造成严重威胁。

及时、准确地进行布病检测工作对于预防和控制疾病的传播至关重要。

因此，制定科学合理的布病检测工作实施方案对于保护人畜健康具有重要意义。

二、检测目标。

1. 确定疫情情况，通过对人畜进行检测，了解疫情的分布和传播情况，为疫情防控提供科学依据。

2. 保障食品安全，对从事畜牧业和相关行业的人员进行定期检测，确保食品安全，防止疾病通过食品传播。

3. 防止疫情扩散，及时发现病例，采取隔离措施，防止疾病扩散。

三、检测方法。

1. 人员检测，定期对从事畜牧业和相关行业的人员进行血清学检测，及时发现感染者。

2. 动物检测，对家畜、野生动物等进行血清学检测，发现携带病原体的动物，及时隔离治疗或淘汰。

3. 食品检测，对从事食品加工和销售的人员进行检测，确保食品安全。

四、检测流程。

1. 采样，对需要检测的人员、动物和食品进行采样，确保样本的准确性和代表性。

2. 检测，使用血清学检测方法进行样本检测，确保检测结果的准确性和可靠性。

3. 结果分析，对检测结果进行分析，及时发现感染者和携带者。

4. 处理措施，根据检测结果，采取相应的处理措施，如隔离治疗、淘汰携带者等。

五、检测管理。

1. 建立档案，对参与检测的人员、动物和食品建立档案，做好信息管理工作。

2. 设立检测点，在重点地区设立检测点，方便对人员、动物和食品进行检测。

3. 宣传教育，加强对人员、动物饲养者和相关行业从业人员的宣传教育工作，增强其对布病检测工作的重视和配合度。

六、检测评估。

1. 定期评估，对布病检测工作进行定期评估，发现问题及时纠正。

2. 数据分析，对检测数据进行分析，了解疫情的变化趋势，为下一步防控工作提供科学依据。

七、总结。

布病检测工作实施方案的制定对于预防和控制疾病的传播具有重要意义，需要全社会的共同努力和配合。

只有通过科学合理的检测方法和完善的管理措施，才能有效预防和控制布病的传播，保障人畜健康。

牛羊布病的检测技术

牛羊布病平板凝集试验一、试验原理：该试验又称为板式孟加拉红平板凝集试验，由于所用的抗原是酸性（PH3.6--3.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgMl类抗体的凝集活性，检查出的抗体是IgG类，因此提高了该项反应的特异性。

血清的制备一、血清制备将血液采集与无抗凝的离心管中，温室静置30分钟，3000r/min l离心5--10min,吸出血清（切勿吸出红细胞成分），分装备用。

要保存的血清则分离后装入离心管与-- 2 0 ℃的冰箱内保存。

二、虎平平板凝集试验（RBPT）将玻璃板清洗干净，划成50个方格（横10x纵5），每格4cm X 4 c m.每一格下再划1cm宽的小格，各格标上被检血清号，每一横行做两份待检血清。

在各方格中加入相应的被检血清 3 0 ul,,然后再其旁加入30ul虎红平板凝集抗原，用牙签搅动被检血清和抗原使之均匀混合，形成直径约2cm的液区。

轻微摇动，置室温条件下（2 0 ℃），4min内观察结果，同时设阳性血清和阳性血清对照。

方法二、在载玻片上加抗原30UL，加入30UL被检测血清，混匀。

在5min内观察结果，轻摇载玻片，出现凝集颗粒为阳性，否则为阴性。

三、结果观察当阴性血清对照不出现凝集（—），阳性血清对照出现凝集（+），方可对代检血清进行判定。

待检血清在4min,内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性（+），无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性（—）四、注意RBPT 操作简单、反应迅速，且对试验条件要求不高，但特异性不高，易受试验温度和凝集时间等因素的影响，不易准确判定结果。

应用此法所得的阳性检出率为70%，较SAT(试管凝集试验) ELISA（酶联免疫吸附试验）低。

该方法主要用于初筛，对其阳性者，还必须经SAT检测为阳性后才能最终判定为阳性。

32.14.1-布病检测原始记录

成都市新都区疾病预防控制中心布病检测原始记录一、初筛方法：虎红平板凝集试验(RBPT)1.1操作：在玻片上加0.03mL被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03mL，摇匀或用牙签混匀，在5min内判定结果。

1.2结果判定：判定凝集程度(－至＋＋＋＋)同平板凝集反应亦可只分为(＋)阳性，(－)阴性两类。

二、确证实验：试管凝集试验(SAT)2.1操作方法：被检血清的稀释：在一般情况下，每份血清用5支小试管(口径8～10mm)，第一管加入2.3mL 石碳酸生理盐水，第二试管不加，第三、四、五管各加0.5mL，用1mL吸管吸取被检血清0.2mL，加入第一管中，混匀。

混匀后，以该吸管吸取第一管中血清加入第二管和第三管各0.5mL，再从第一管吸出0.5mL 丢弃，剩1mL。

以该吸管将第三管混匀，并吸取0.5mL加入第四管，混匀。

再从第四管吸取0.5mL，加入第五管，混匀，吸取0.5mL，弃去。

如此稀释后，从第二管到第五管血清稀释度分别为1∶12.5，1∶25，1∶50和1∶100。

加入抗原：先以0.5％石碳酸生理盐水将抗原原液作适当稀释(一般是作1∶10稀释)。

稀释后的抗原加入各稀释的血清管(第一管不加，作为血清对照)，每管加0.5mL，混匀。

加入抗原后，每管总量1mL，血清稀释度从第二管至第五管分别为1∶25，1∶50，1∶100和1∶200。

对照：阴性血清对照，血清稀释后加抗原(与被检血清对照相似)。

阳性血清对照，其血清稀释到原有滴度，再加抗原，抗原对照，适当稀释的抗原加石碳酸盐水。

判定比浊管制备：每次试验须配制比浊管作为判定的依据。

配制方法是：取本次试验用的抗原稀释液5～10mL，加入等量的0.5％碳酸盐水作倍比稀释。

全部试验管，对照管及比浊管充分振荡后置37℃温箱中20～22h，取出后放室温2h，然后以比浊管为标准判定结果。

2.2记录结果：根据各管中上层液体的清亮度记录结果。

特别是50％清亮度(＋＋)对判定结果关系较大，一定要与比浊管对比判定。

牛羊间布病的及时检测及防控措施

牛羊间布病的及时检测及防控措施首先，及时检测是及其重要的。

能够对牛羊进行布病的检测主要有两种方法：临床检测和实验室检测。

临床检测主要通过观察牛羊的临床症状和病程来判断是否患有布病。

一些典型的临床表现包括单个或多个淋巴结肿大、呼吸不畅、食欲不振、消瘦等。

如果发现牛羊有上述症状，应立即将其隔离，并及时请兽医进行详细检查，以判断是否感染了布病。

实验室检测则是通过采集牛羊的血液样本或者淋巴结标本，进行细菌培养和PCR检测，以确定是否感染了布病菌。

这种方法具有高度的准确性和可靠性，是确定牛羊是否感染布病的金标准。

一旦确定了牛羊感染了布病，就需要采取相应的防控措施。

以下是一些常用的防控措施：1.隔离：首要的措施是将感染了布病的牛羊隔离起来，与健康的牛羊分开。

这有助于阻断疾病的传播，并减少其他动物的感染风险。

2.消毒：对牛羊所在的环境进行彻底的清洁和消毒，包括饲养场、栏舍和器械等。

消毒可以杀死布病菌，降低感染的风险。

3.强化营养：给予感染了布病的牛羊充足的营养支持，包括良好的饲料、补充维生素和矿物质等。

这有助于提高牛羊的免疫力，增强其对疾病的抵抗能力。

4.疫苗接种：使用合适的布病疫苗，对牛羊进行及时的接种，可以有效预防和控制布病的传播。

疫苗接种应根据兽医的建议和具体情况进行，以确保其有效性和安全性。

5.定期监测：对养殖场的牛羊进行定期的健康监测，包括体温、体重、淋巴结和呼吸等方面的观察。

一旦发现异常情况，应立即请兽医进行检查，并采取相应的措施进行处理。

总结起来，牛羊间布病是对养殖业非常具有威胁的一种传染病，但通过及时的检测和采取适当的防控措施，可以降低其对养殖业的危害。

通过临床检测和实验室检测来确定是否感染了布病，然后隔离、消毒、强化营养、疫苗接种和定期监测等措施可以有效地预防和控制布病的传播。

布鲁氏菌病检测技术

布鲁氏菌病检测技术布鲁氏菌病检测技术1.概况布鲁氏菌病(简称布病)，是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患的传染病。

临床主要特征是母畜流产、乳腺炎、不育和各种组织(如睾丸、关节)的炎症。

人类感染布病后，病程长，反复发作，长期不愈。

布病几乎遍及世界各地。

凡有牲畜的地区都有布病流行。

据不完全统计，在160个国家和地区中就有123个国家和地区有布病发生。

我国多见于内蒙古、东北，西北等牧区。

在北方农区也有散发，常呈地地方性流行。

在不良环境，如抗生素的影响下，本菌易发生变异，通常变异形成的布鲁氏菌可在机体内长期存在。

该菌对热抵抗力不强，63℃经7～10 min可被杀死，在鲜乳中可存活2天到18个月，在冻肉中可存活14～47天，在干燥土壤和胎儿体内可分别存活37天和6个月。

对常用消毒药敏感，如0.1％升汞数分钟，1％来苏儿或2％福尔马林15 min可将其杀死。

日光下曝晒4 h 可杀死本菌。

人和多种动物对布鲁氏菌易感。

动物中羊、牛、猪的易感性最强。

母畜比公畜，成年畜比幼年畜发病多。

在母畜中，第一次妊娠母畜发病较多。

带菌动物，尤其是病畜、流产胎儿、胎衣是主要传染源。

消化道、呼吸道、生殖道是主要的感染途径，也可通过损伤的皮肤、粘膜等感染。

常呈地方性流行。

人主要通过皮肤、粘膜和呼吸道感染。

本病一年四季均可发病。

流行区在发病高峰季节(春末夏初)可呈点状暴发流行。

患病与职业有密切关系，如：兽医、畜牧工作者、屠宰工人、皮毛工等感染机会较高。

人类布鲁氏菌病的预防，首先要注意职业性感染，凡在动物养殖区、屠宰区、畜产品加工厂的工作者以及兽医、实验室工作人员等，必须严守防护制度(即穿着防护服装，做好消毒工作)，尤其在仔畜大批生产季节。

更要特别注意。

病畜乳肉食品必须灭菌后食用。

必要时可用疫苗接种，接种前应行变态反应试验。

阴性反应者才能接种。

2.实验室监测技术概述(据布鲁氏菌病防治技术规范)2.1检测方法血清学实验或细菌分离。

初筛试验选用虎红平板凝集试验(RBPT)或乳牛布病全乳环状试验(MRT)(见GB/T 18646)。

动物布病检测标准

动物布病检测标准
动物布病检测标准主要包括以下步骤：
1. 采集病料：从患病动物的血液、分泌物、器官和组织中采集病料。

2. 制作涂片：将采集的病料制成涂片，可以使用玻片或塑料片。

3. 染色镜检：将涂片进行染色处理，然后在显微镜下观察，查找布鲁氏杆菌。

4. 血清学试验：采用特异性抗体对病料中的布鲁氏杆菌进行检测。

5. 细菌分离培养：将病料接种在选择性培养基上，分离培养布鲁氏杆菌。

6. 鉴定试验：对分离培养的细菌进行生化试验、噬菌体试验、血清学试验等，以确定其是否为布鲁氏杆菌。

需要注意的是，在进行动物布病检测时，应遵循相关的生物安全防护措施，以避免感染和传播。

同时，检测结果应结合临床症状、流行病学调查和病理学检查结果进行综合分析，确定最终的诊断。

布鲁氏菌病血清学检测方法优缺点对比

布鲁氏菌病血清学检测方法优缺点对比王　刚1，范伟兴2，刘　坤2，田丽华3，温建新1（1. 青岛农业大学动物医学院，山东青岛　266109；2. 中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛　266032；3. 青岛西海岸新区动物疫病预防与控制中心，山东青岛　266400）摘　要：布鲁氏菌病（简称布病）严重危害畜牧养殖业安全和人类健康，而有效的检测方法能够为布病的预防、检测和净化提供技术支持。

目前针对布病的血清学检测方法主要包括：布病虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）、全乳环状实验（MRT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光偏振测定法（FPA）、补体结合试验（CFT）以及琼脂扩散试验（NH-GD）等。

不同的血清学检测方法各有优缺点：RBT操作简便，敏感性较高，但环境会对检测结果产生一定影响；ELISA敏感性较高，可一次性检测多个样本，但对仪器要求较高；FPA短时间内能够检测大量样品，操作简单，特异性和敏感性与ELISA相似，但需要专业的荧光偏振仪器；SAT特异性较强，但敏感性不高，操作步骤繁琐；CFT的特异性和敏感性都高于SAT，但试验较为繁琐，耗时长；MRT一般只用于牛奶样本检测，无需采血，特异性强，但对牛奶的质量有一定要求；NH-GD对疫苗免疫样本和野毒感染样本具有鉴别诊断能力，但抗原纯度要求高。

因此，RBT、MRT、ELISA、FAP和NH-GD更适合用于布病初筛，而SAT和CFT更加适用于布病复核。

未来应探索更多的血清学检测方法，如荧光微球法、半抗原鉴别诊断方法等，以便为布病检测提供更优选择。

关键词：布鲁氏菌病；血清学；检测方法；优缺点对比中图分类号：S851.3 文献标识码：A 文章编号：1005-944X（2021）05-0072-04DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2021.05.016Comparison on the Serological Detection Methods for BrucellosisWang Gang1，Fan Weixing2，Liu Kun2，Tian Lihua3，Wen Jianxin1（1. School of Veterinary Medicine，Qingdao Agricultural University，Qingdao，Shandong　266109，China；2. China Animal Health and Epidemiology Center，Qingdao，Shandong　266032，China；3. Qingdao West-Coast Economic New Area Center for Animal Disease Prevention and Control，Qingdao，Shandong　266400，China）Abstract：The animal husbandry safety and human health have been seriously endangered by brucellosis，against which，the prevention，detection and purification could be technically supported by an effective detection method. Current serological detection methods mainly include rose-bengal plate agglutination test（RBT），standard-tube agglutination test（SAT），whole milk ring test（MRT），enzyme-linked immunosorbent test（ELISA），ﬂuorescence polarization Assay（FPA），complement ﬁxation test（CFT）and native hapten-gel diffusion test（NH-GD），which are with different advantages and disadvantages as follows：RBT is user-friendly with high sensitivity，but is subject to environment to some extent；ELISA can detect several samples at one time with high sensitivity，but advanced device will be required；FPA can detect a large number of samples in a short time with similar speciﬁcity and sensitivity as ELISA，but a speciﬁc ﬂuorescence polarization instrument will be required；SAT is with good speciﬁcity but lower sensitivity and complicated operation steps；CFT is with higher speciﬁcity and sensitivity compared to SAT，but is收稿日期：2021-02-07　修回日期：2021-02-26基金项目：山东省现代农业产业技术体系特种经济动物创新团队项目（SDAIT-21）通信作者：温建新。

布鲁菌病实验室检测

采集后应尽快将样本送往实验室进行检测，避免延误诊断和治疗。
实验室检测人员应具备相关专业知识和技能，按照标准操作程序进行检测，确保结果准确可靠。
04
实验室检测操作步骤及注意事项
试剂准备与仪器校准
准备所需试剂
包括培养基、生化鉴定试剂、染色液等，确保试剂在有效期内且储存条件符合要求。
仪器校准
临床表现与危害
临床表现
发热、多汗、乏力、关节炎、睾丸炎、淋巴结及肝脾肿大等
危害
影响劳动力和人口素质，如果治疗不及时，容易由急性转变为慢性，反复发作，迁延数年，严重影响劳动能力，甚至病灶纤维化
流行病学特点
地区分布全世界范围分布，我国多见于内蒙、东北、西北等牧区人群分布与职业有密切关系，兽医、畜牧者、屠宰工人等人群发病率高时间分布一年四季均可发病，但以春夏之际发病居多
质量管理体系文件
编制实验室质量管理体系文件，包括质量手册、程序文件、作业指导书等，以规范实验室的工作流程。
关键环节质量控制措施
01
02
03
04
样品接收与保管
建立样品接收、登记、标识、保管等流程，确保样品的完整性和可追溯性。
仪器设备管理
检测方法与标准
对实验室的仪器设备进行定期检定/校准、维护保养，确保其处于良好的工作状态。
利用特异性引物扩增布鲁氏菌的DNA片段，通过电泳等方法观察扩增
结果，检测样本中布鲁氏菌的存在。
02
实时荧光定量PCR（qPCR）
在PCR反应中加入荧光探针，实时监测荧光信号的变化，定量检测样本
中布鲁氏菌的DNA含量。
03
基因芯片技术
将大量布鲁氏菌特异性基因探针固定于芯片上，加入患者样本进行杂交

布病检测标准

动物布鲁氏菌病诊断技术GB/T18646—20021范围本标准规定了动物布鲁氏菌病的诊断技术。

本标准规定的虎红平板凝集试验、乳牛全乳环状试验适用于家畜布病田间筛选试验和乳牛场布病的监测及诊断泌乳母牛布病的初筛试验；试管凝集试验和补体结合试验适用于诊断羊种、牛种和猪种布病感染的家畜。

本标准规定的试管凝集试验不适用于犬种和绵羊副睾种布病感染家畜的检疫。

2虎红平板凝集试验2.1材料准备2.1.1抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。

2.1.2受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。

2.1.3洁净的玻璃板，其上划分成4cm2的方格。

2.1.4吸管或分装器，适于滴加0.03mL。

2.1.5牙签或火柴杆，供搅拌用。

2.2操作方法2.2.1将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应血清0.03mL。

2.2.2在受检血清旁滴加抗原0.03mL。

2.2.3用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。

2.2.4每次试验应设阴、阳性血清对照。

2.3判定2.3.1在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。

2.3.2受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(—)。

3乳牛布病全乳环状试验3.1材料准备3.1.1布病全乳环状抗原由制标单位提供，按说明书使用。

3.1.2乳样3.1.2.1受检乳样须为新鲜的全乳。

3.1.2.2采乳样时应将母畜的乳房用温水洗净、擦干，然后将乳液挤入洁净的器皿中。

3.1.2.3采集的乳样夏季时应于当日内检查；保存于2℃时，7d内仍可使用。

3.2操作方法3.2.1取乳样lml，加于灭菌凝集试验管内。

3.2.2取充分振荡混合均匀的全乳环状抗原1滴(约50ul)加人乳样中充分混匀。

3.2.3置37℃一38℃水浴中60min。

3.2.4加温后取出试管勿使振荡，立即进行判定。

3.3判定标准分为：a)强阳性反应(+++)，乳柱上层乳脂形成明显红色的环带，乳柱白色，临界分明；b)阳性反应(++)，乳脂层的环带呈红色，但不显著，乳柱略带颜色；c)弱阳性反应(+)，乳脂层的环带颜色较浅，但比乳柱颜色略深；d)疑似反应(±)，乳脂层的环带颜色不明显，与乳柱分界不清，乳柱不褪色；e)阴性反应(—)，乳柱上层无任何变化，乳柱颜色均匀。

布病监测方案

布病监测方案引言布病是一种由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病，既对人类健康造成威胁，也对动物养殖业产生严重影响。

为了及时发现和控制布病疫情，有效保障人畜健康和养殖业可持续发展，制定一套科学、全面的布病监测方案是非常重要的。

本文将介绍一种可行的布病监测方案，帮助农畜相关部门制定和实施布病的监测控制措施。

一、背景知识1.1 布病病原体布鲁氏菌是革兰氏阴性菌中的一类，可引起布病，分为不同生物型，包括A、B、C和M等。

其中A生物型通常引起畜牧业中的疫情，而B和C生物型更危险，可能感染人类。

1.2 布病传播途径布病主要通过直接接触感染动物或感染动物的分泌物、排泄物等传播。

另外，食用被感染动物的肉或乳制品也可能导致人类感染。

1.3 布病症状布病在不同动物中表现不同，常见症状包括发热、关节炎、流产、乳房肿胀等。

人类感染后可表现为不同程度的发热、关节炎、体重减轻等症状。

二、布病监测方案的制定2.1 目标设定根据布病的传播途径和症状特点，制定监测方案的目标是早期发现布病疫情，及时采取控制措施，有效保护人畜健康。

2.2 监测指标（1）动物感染率：通过对养殖场、农户和市场等场所的动物进行抽样检测，计算动物感染率，评估疫情的严重程度。

（2）动物症状发生率：定期对养殖场的动物进行观察和检测，记录动物出现症状的情况，及时发现潜在疫情。

（3）人类感染率：对与布病疫情相关的人群进行抽样调查，检测人类感染率，评估布病对人类健康的威胁。

2.3 监测方法（1）标本采集：对养殖场、农户和市场等场所的动物进行定期抽血或尿液采集，送往实验室进行布鲁氏菌的检测。

（2）病例填报：对养殖场的养殖人员进行培训，要求其及时上报布病相关症状和疫情情况。

（3）人群调查：对与布病疫情相关的人群进行问卷调查和检测，了解人类感染状况。

三、布病监测方案的执行3.1 检测实验室建立或委托专业实验室进行布鲁氏菌的检测工作，确保检测结果的准确性和可靠性。

3.2 培训工作对养殖场的养殖人员进行培训，提高其对布病症状的识别和上报能力，加强防控意识。

布病检验

试管凝集试验
评价：
• 该方法简便、易操作，适用于各实验室应用 • 该方法特异性较好，敏感性也高，因此适用于检疫和临
床诊断 • 有材料报道，人感染布氏菌后常于发烧的第一天起就开
始出现抗体，随着体温的增高效价升高，因此该方法可做为早期诊断布氏菌病的方法，也可做为判定疾病的活动期 • 该方法凝集反应的强度与布氏菌培养的阳性结果成正比，凝集价越高细菌培养的阳性就越高，和发烧呈正比，一般来说，体温高凝集价也增高 • 由于该试验有时出现前带现象和封闭现象，所以有时也出现假阴性结果，必要时和其它方法联合应用
实验室检查
病原学检查：病原的分离是确诊布病最可靠的方法
病原学检查包括布氏菌的分离培养（血培养、骨髓培养）、鉴定
特异性血清学诊断技术
• 平板凝集试验 • 虎红平板凝集试验 • 试管凝集试验 • 补体结合试验 • 抗球蛋白试验 • 含巯基化合物处理血清后凝集试验
虎红平板凝集试验
虎红平板凝集试验(RBPT)中所用的抗原是酸化性（PH=3.6~3.9）带色抗原，与被检血清作用时能抑制血清中IgM类抗体凝集活性检查出的抗体是IgG类。
试管凝集反应标准比浊管配制
管号 1 2 3 4 5
抗原稀释液（ml）
0.00
生理盐水（ml）
1.00
透明度 100%
0.25
0.75
75%
0.50
0.50
50%
0.75
0.25
25%
1.00
0.00
0%
标记
++++ +++ ++ ＋－
1. “++++”液体完全透明，菌体呈伞状沉淀或块状颗粒状沉淀，呈100%凝集；

布病检疫流程与注意事项

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布病体检流程

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