布鲁氏菌病虎红平板凝集试验的影响因素及注意事项
布氏菌病虎红平板凝集试验抗原 新兽药证书
布氏菌病虎红平板凝集试验抗原新兽药证书一、概述布氏菌病是一种由布氏菌引起的家畜和野生动物传染病，也可传染给人类。
布氏菌病的传播对动物养殖业和食品安全造成了严重威胁，因此对布氏菌进行有效的检测和防控至关重要。
其中，虎红平板凝集试验是一种常用的血清学检测方法，对布氏菌病的诊断具有重要意义。
二、布氏菌病虎红平板凝集试验抗原1. 抗原来源布氏菌病虎红平板凝集试验抗原主要来源于已知含有布氏菌的动物血清，如牛、羊、猪等。
这些血清样本需要通过严格的筛选和处理，以确保抗原的纯度和稳定性。
2. 制备方法虎红平板凝集试验抗原的制备需要严格按照相关技术规范进行操作。
首先需要从携带布氏菌的动物中提取血清样本，然后通过离心、超滤等手段去除杂质和细菌。
经过适当的稀释和加工处理，最终得到用于虎红平板凝集试验的抗原制剂。
3. 抗原质量控制为了确保抗原的稳定性和活性，需要对抗原制剂进行严格的质量控制。
包括对抗原的存储条件、保存期限、抗原效价等指标进行监测和管理，以确保虎红平板凝集试验的准确性和可靠性。
三、新兽药证书1. 申请流程布氏菌病虎红平板凝集试验抗原作为兽药的一种，需要获得新兽药证书才能在市场上合法销售和使用。
申请新兽药证书需要遵循相关政策和法规，提交包括临床试验报告、生产工艺流程、质量控制方案等材料，并经过相关部门的审批和认证。
2. 证书标注一旦获得新兽药证书，抗原制剂需要在包装、说明书等相关资料上标注证书编号、有效期限等信息。
这些信息对药品的合法性和可追溯性具有重要意义，也为用户提供了使用保障。
3. 证书更新新兽药证书的有效期通常较短，一旦过期就需要重新申请并通过审批，获得更新证书。
抗原生产企业需要及时关注证书的有效期限，提前做好证书更新工作，以保障产品的合法生产和销售。
四、结论布氏菌病虎红平板凝集试验抗原的制备和管理对于布氏菌病的检测和防控具有重要意义。
严格控制抗原的质量和规范生产流程、及时申请和更新新兽药证书，是保障抗原生产质量和市场合法的关键步骤。
布氏杆菌虎红平板鉴定标准
布氏杆菌虎红平板鉴定标准
1.组织学反应：在布氏杆菌虎红平板上，布氏杆菌形成脆性小、雪花状的针状晶体，对于凝集性和卷曲性的布氏杆菌则呈现丝状晶体。
2.生理生化特性：布氏杆菌可以产生氧化酶，而其他非布氏杆
菌不能产生氧化酶。
此外，布氏杆菌不会发酵葡萄糖。
3.形态特征：布氏杆菌为革兰氏阴性菌，呈细长的杆状或弯曲
形状，在显微镜下观察时，呈现为微小的长条状或弯曲状。
4.生长繁殖条件：布氏杆菌是一种厌氧菌，在缺氧条件下可以
进行繁殖和生长，生长适温为35-37℃。
5.其它特性：布氏杆菌产生黑素，能够在环境中存活较长时间，并能抵抗常规消毒剂的影响。
布病检测的实验室质量控制
布病检测的实验室质量控制摘要】目的：分析布病检测过程中的注意事项及结果质量控制。
方法：通过血清学诊断里面的虎红平板凝集试验和试管凝集试验来检测。
结果：实验室检测质量控制主要通过室内、室间质量控制来保证。
室内质量控制主要包括人员、环境、仪器设施、方法和标准等方面的控制；实验室间的质量控制主要通过能力验证来实现。
结论：布病检测的每一个环节都是非常重要的，互相影响、互相制约，对其结果的影响非常大。
【关键词】质量控制；虎红平板凝集试验；试管凝集试验【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）09-0253-01布鲁氏菌是革兰氏阴性小杆菌，易感染牛、羊、猪等家畜。
人类与病畜接触或食用病畜肉、乳及乳制品后，也可引起感染，得布鲁氏菌病。
布病是由布鲁氏菌属细菌侵入人、动物机体内引起的人畜共患的急性传染病，严重影响了人的身体健康。
我们基层疾控中心实验室常用虎红平板凝集试验和试管凝集试验来进行分析。
检测主要通过室内质控和室间质控来实施。
室内质控主要包括人员、环境、仪器设施、方法和标准等方面来控制；室间质控主要通过上级部门质控考核来实现。
室内质量控制：（1）人员的要求：检验人员不仅要有专业知识和熟练的技术，还须通过相应的培训持证上岗。
（2）设施和环境条件：实验室的检测的设施以及环境应满足相关技术规范和标准的要求。
（3）设备和标准物质：所有仪器设备必须建立档案，专人管理，并定期对其进行检定、校准和维护；标准物质须在有资质（国家技术监督局批准）的地方购买。
（4）实验室应优先选择国家标准、再使用行业标准、地方标准等，确保使用标准是最新有效的版本。
（5）实验耗材对检测结果的影响非常大，为满足检测的要求，应从购买、使用、储存等环节都要按规定加以严格控制。
在满足以上这些条件后，就可以开始进行样品的分析了，样品分析主要通过分析前、分析中、分析后三个环节来实施，三个环节都是非常重要，相互影响，相互制约，缺一不可的。
影响动物布氏杆菌病试管凝集试验的因素分析
影响动物布氏杆菌病试管凝集试验的因素分析布氏杆菌病是一种由布氏杆菌引起的传染病，主要通过家畜和野生动物传播给人类。
对于动物布氏杆菌病的检测，试管凝集试验是一种常用的方法之一。
试管凝集试验的结果受到许多因素的影响，因此需要对这些因素进行分析，以保证试验结果的准确性和可靠性。
试管凝集试验是一种利用免疫沉淀现象来检测抗原-抗体反应的方法，通过观察试管中的凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。
对于动物布氏杆菌病的检测，通常使用的是血清样品，该样品中含有动物体内产生的抗体。
试验结果受到许多因素的影响，包括试验操作的规范性、试剂的质量和稀释度、样品的质量以及环境条件等。
下面将对这些因素进行分析。
试验操作的规范性是影响试管凝集试验结果的重要因素之一。
试验操作人员需要严格按照操作流程进行操作，避免操作中出现任何偏差。
在加样品和试剂的过程中，需要确保每一步的操作都准确无误，避免对试验结果产生影响。
操作中的卫生条件也需要得到充分保障，避免外界微生物的干扰，影响试验结果的准确性。
试剂的质量和稀释度也对试管凝集试验的结果产生重要影响。
试剂的质量直接影响着试验的准确性和可靠性，因此需要选择高质量的试剂进行试验。
试剂的稀释度也需要根据具体情况进行调整，以确保试验结果在合适的范围内。
试验中使用的试剂需要经常检验其稳定性，避免因为试剂变质而影响试验结果。
样品的质量也是影响试管凝集试验结果的重要因素之一。
样品中抗体或抗原的含量直接关系着试验结果的准确性，因此需要对样品的质量进行充分的检查和评估。
在收集样品的过程中，需要避免污染和破损，以确保样品的完整性和纯度。
在存储样品的过程中，需要注意样品的保存条件，避免由于保存不当而导致样品质量下降，影响试验结果的准确性。
环境条件也会影响试管凝集试验的结果。
试验过程中的温度、湿度、光照等环境因素都可能影响试验结果，因此需要对试验环境中的这些因素进行充分的控制。
通常情况下，试验室会对这些环境因素进行严格的控制，以确保试验结果的准确性和可靠性。
抗凝剂对动物布鲁菌病虎红平板凝集试验的影响
抗凝剂对动物布鲁菌病虎红平板凝集试验的影响张智鹏【摘要】为探讨含抗凝剂样品对动物布鲁菌病虎红平板凝集试验的影响,采集猪、牛、羊等不同动物的血液各10份,经柠檬酸钠、EDTA、肝素钠等抗凝剂处理后与对应的自然凝固、立即离心获得的样品分别进行虎红平板凝集试验和试管凝集试验,比较两种试验结果的差异.结果显示,经抗凝剂处理后的血浆样品虎红平板凝集试验结果均为阳性,试管凝集试验均为阴性,而自然凝固的血清样品两个试验结果均为阴性,不同处理方式造成的虎红平板凝集试验结果差异现象不受动物种类的影响.抗凝剂对虎红平板凝集试验影响非常显著,对试管凝集试验无影响.因此,临床上用虎红平板凝集试验进行动物布鲁菌病筛查时,不能使用含有抗凝剂的血液样品,否则会出现严重的非特异性凝集现象.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2017(038)011【总页数】5页(P132-136)【关键词】布鲁菌病;抗凝剂;虎红平板凝集试验;试管凝集试验【作者】张智鹏【作者单位】汉中市动物疾病预防控制中心,陕西汉中 723000【正文语种】中文【中图分类】S852.614;S854.43布鲁菌病(Brucellosis)简称布病，是由布鲁菌引起的人畜共患传染病[1-2]，不仅可造成易感动物流产、不孕、关节炎、睾丸炎等，降低种畜利用价值，并长期带菌，成为危险的传染源，还可通过直接或间接接触向人际间传播，引起人关节和肌肉疼痛、肝脾肿大、睾丸炎、附睾炎、孕妇流产、不孕等症状，严重者可丧失劳动能力[3-5]。
世界动物卫生组织(OIE)将布鲁菌病列为必须的传染病，我国将其列为二类动物疫病。
虎红平板凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(SAT)是布病监测及诊断使用最广泛的两种检验方法[6]，被列入我国《动物布鲁菌病诊断技术》[7],成为法定的检验方法。
在实际检测过程中，虎红平板凝集试验常作为动物布病的田间筛查，结果阳性的样品再用试管凝集试验进行定性确诊[8-9]。
虎红平板凝集试验(检测布病初筛试验)—人畜检测法一样
虎红平板凝集试验(检测布病初筛试验)—人畜检测法相同虎红平板凝集试验介绍：虎红平板凝集试验是用来诊断布氏杆菌病。
布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的人畜共患的急、慢性传染病。
因接触病畜或食用受染牛奶或奶制品而感染。
潜伏期1～3周，临床特点是缓慢起病，长期发热、多汗、虚弱、全身痛和关节痛，急性期症状多在3～6月内消退。
虎红平板凝集试验正常值：阴性虎红平板凝集试验临床意义：异常结果：阳性(50%)凝集：诊断布氏杆菌病符合率为95.92%。
需检测人群：感染,常发热,多汗,虚弱,全身痛者虎红平板凝集试验注意事项：不适合人群：没有检查前：使用前应充分摇匀样本，出现污染或有摇不散的凝块时不得使用检查时：抗原和血清应在室温中放置30～60分钟后，再进行试验虎红平板凝集试验检查过程：1 材料准备1.1 试剂:抗原、标准阳性血清、阴性血清。
1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。
1.3 洁净的玻璃板，其上划上4cm 2 的方格。
1.4 吸管或分装器，适于滴加0.03ml。
1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。
2 操作方法2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应的血清0.03ml。
2.2 再受检血清旁滴加抗原0.03ml。
2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。
2.4 每次试验应设阴、阳性对照。
3 结果判定在阴阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。
受检血清在4 分钟内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性（+），无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性（-）。
注：对出现阳性反应的动物须进一步作补体结合试验，或其他辅助诊断试验（试管凝集试验）。
布鲁氏菌病虎红平板凝集试验抗原系用抗原性良好的布鲁氏菌菌株，接种于适宜培养基培养，收获菌体，经加热灭活，离心后用虎红染液染色，悬浮于乳酸缓冲液中制成。
反应强度的判定标准“-”无凝集，呈均匀粉红色。
“+”稍能查到凝集，稍有卷边形成，凝集物间液体呈红色。
“++”形成明显卷边，凝集块间液体稍清亮。
影响动物布氏杆菌病试管凝集试验的因素分析
影响动物布氏杆菌病试管凝集试验的因素分析动物布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的一种传染病，病菌可以通过血液、精液、胎盘等途径传播到健康动物体内，导致严重的生殖系统疾病。
为了有效地预防和控制动物布氏杆菌病，兽医师通常会采用试管凝集试验（SAT）等方法进行病原菌的检测。
然而，在进行试管凝集试验时，存在许多因素可能会对结果产生影响，因此需要对这些因素进行分析和控制。
试验前的准备工作在进行试管凝集试验之前，需要进行一系列准备工作。
首先，需要选择适当的抗原和血清。
抗原的选择应该与病菌的来源和生物学特性相符。
血清则应该是来自病原菌携带者或疫苗接种过的动物。
其次，需要对所使用的试剂和设备进行严格的质量控制。
试管、移液器、离心机等设备应该经过洗涤和消毒处理，并且要确保试剂的过期日期没有过期。
最后，还需要准备好明确的试验方案，包括试管的安排、相应的荧光素等试剂的加入量以及温度等条件的控制。
影响试验结果的因素试管凝集试验的结果可能会受到许多因素的影响，下面就是一些常见的因素。
1. 血清和抗原的质量：血清和抗原的质量是影响试验结果的重要因素。
如果血清或抗原的质量不好，就会导致试验结果的误差。
因此，在选择试验用品时，应该选择品质稳定的商品。
2. 操作不当：实验员的实验操作能力对试验结果也有很大的影响。
如果实验员没有严格遵守试验流程，或者粗心大意，那么可能会出现实验中断或错误操作，从而影响试验结果。
3. 试管、移液器的清洁度：试管和移液器等设备的清洁度对试验结果也有影响。
如果设备不干净或清洁度不够，那么会引入外来的污染物，从而导致试验结果失准。
4. 单克隆和多克隆抗体的选择：在进行试管凝集试验之前，需要选择合适的抗体。
单克隆抗体和多克隆抗体的选择也会影响试验结果。
为了控制试管凝集试验的结果，可以采用以下方法降低因素的影响。
1. 严格控制实验员操作规范：试验操作应该按照规定的流程进行，实验员在进行实验前应该通过工作手册等书本资料详细的跟踪和操作专家的示范操作，以便避免实验操作的错误。
布鲁氏菌病虎红平板凝集试验的影响因素及注意事项
动物生产 382020.10摘要：本文对布鲁氏菌病虎红平板凝集试验中的影响因素及应注意的事项进行了较全面的分析和总结，以提高试验的准确性，为本病的进一步确诊和疫情分析提供科学依据。
关键词：布鲁氏菌病；虎红平板凝集试验；影响因素；注意事项目前，布鲁氏菌抗体检测仍是我国布病诊断最常用、最主要的检测方法。
其中虎红平板凝集试验（RBPT）具有试验试剂成本低廉、操作简便、快速、检出率高等优势，被广泛应用于布病的大规模筛查，同时由于本方法不需要特殊的试验设备，更适于基层实验室和现场试验。
现将RBPT中的影响检测结果的因素及应注意的问题进行简要分析。
1 RBPT的影响因素1.1 RBPT抗原RBPT抗原的质量是影响布病血清学试验结果准确性的关键性因素之一，不同厂家的抗原对同一批血清样本的检测结果存在不同程度的差异，如果RBPT的假阳性率过高，不仅造成工作量加大，也会造成不必要的经济损失。
1.2 血清血清质量也是影响布病血清学试验结果准确性的重要因素之一，而采集的时间与分离方式直接影响血清的质量。
用于RBPT 的血清最好是新鲜、清亮透明、无溶血、防止细菌污染，并且避免反复冻融。
纤维蛋白原能与虎红抗原产生非特异性凝集反应，而且纤维蛋白原含量越高凝集反应发生的越快、越强。
因此，如果待检血清中含有纤维蛋白原也会出现RBPT假阳性结果，严重影响检测结果的准确性。
1.3 温度试验时，RBPT抗原与被检样品的温度、环境温度对试验结果的准确性也有很大影响。
RBPT用的抗原需要恢复至室温（22±4℃），并且使用前要充分混合均匀。
血清与温度和时间成反比关系，放置血清的时间越短，温度越低，假阳性率越高。
由此可见，在一定温度范围内，温度越高，血清学反应进行的越快。
本试验要求在室温下进行，因此，在试验前要注意观察环境温度是否适合进行本试验。
1.4 药物血清中的药物浓度也会干扰检测结果的准确性，在经过治疗后或治疗期间血清凝集不明显。
影响动物布氏杆菌病试管凝集试验的因素分析
影响动物布氏杆菌病试管凝集试验的因素分析
动物布氏杆菌病试管凝集试验是一种常用的诊断方法，用于检测布氏杆菌病的感染。
试管凝集试验的结果受多种因素的影响，这些因素包括抗原和抗体的质量、试管凝集试验
的操作技术、试管凝集试验的读取和解读、样本的处理等。
抗原和抗体的质量是试管凝集试验结果的关键因素。
如果抗原或抗体质量不好，可能
会导致试管凝集试验的假阳性或假阴性结果。
在试管凝集试验中应该选择高质量的抗原和
抗体，并对其质量进行监测和质量控制。
试管凝集试验的操作技术也会影响结果的准确性。
试管凝集试验过程中的温度、pH值、试管的摇动速度和时间等操作条件都需要严格控制。
如果这些操作条件不符合要求或控制
不好，可能会影响试管凝集试验的准确性。
试管凝集试验的读取和解读也是影响结果的因素。
试管凝集试验一般通过肉眼观察凝
集反应的强度和形态来判断结果。
由于试管凝集试验结果的解读是主观的，可能存在观察
者之间的差异。
在进行试管凝集试验时，应该由经验丰富的操作人员进行观察和解读，并
进行质量控制。
样本的处理也会影响试管凝集试验的结果。
样本的处理包括样本的采集、保存和运输
等环节。
如果样本处理不当，可能会导致试管凝集试验的假阳性或假阴性结果。
在进行试
管凝集试验前，应该对样本的处理进行标准化，确保样本的质量。
物理因素和温度对布病凝集实验的影响
物理因素和温度对布病凝集实验的影响摘要】目的：观察温度和时间对布病虎红平板凝集实验（RBPT）的影响。
方法：将现采集的710份疑似布病患者的血清分别置于温室(19—25)度、平均（35+1）度恒温培养箱和（55-1）度水浴箱中，在放置不同的时间（0.5h、1h、2h、8h和24h）后，分别进行BPT实验，同时对每份血清进行试管凝集实验（SAT）,观察并进行记录实验结果。
结果：血清与温度和时间成反比例关系，放置血清的时间越短，温度越低，假阳性率越高。
结论：血清学检测可排除温度和时间等物理因素对患者造成的假阳性率，为临床提供可靠的检验依据。
【关键词】布病凝集实验温度物理因素【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）04-0377-02布氏杆菌病由布氏杆菌引起的人畜共患传染病，流行于内蒙古、吉林、黑龙江、新疆、西藏等牧区，主要传染源为患病的牛羊猪等病畜，病原菌主要通过体表和粘膜进入体内，临床表现为夜间或凌晨大汗淋漓，关节疼痛主要累及较大的关节，呈游走性疼痛。
睾丸炎是男性患者的常见表现，有肝脾淋巴结肿大，易发展为慢性。
无症状型感染见于肉食包装工人、兽医，这些人可检测出高效价的布氏杆菌血清抗体；急性布氏杆菌病潜伏期5—10天，起病急，发热，体温在38到40度，伴畏寒；多汗；肌肉酸痛，约半数有肝脾肿大。
现就对静脉采集的700多份布病疑似病例血清做布病抗体检测。
布病的检测方法有两种：虎红平板凝集实验（RBPT）和试管凝集实验（SAT）。
试管凝集实验的判定标准以1:100为阳性。
疑似病例的血清经不同时间和温度的处理后，再进行虎红平板凝集实验，从而降低假阳性率。
虽然RBPT具有方法简便、快捷，易于操作和结果便于观察且漏检率极低的优点，但易于出现假阳性率，故临床上需要借助SAT实验来进行确认。
现对基层所采集的710份样品进行检验，以分析物理因素和温度对布病凝集实验的影响。
1 监测对象和方法1.1 监测对象对采集的710份样品进行检验，患者均为忻州、代县、繁峙及偏远山区与牛羊密切接触者。
影响动物布氏杆菌病试管凝集试验的因素分析
影响动物布氏杆菌病试管凝集试验的因素分析动物布氏杆菌病是一种由布鲁氏菌属细菌引起的传染病，该疾病不仅在家畜中广泛存在，而且还会影响人类健康。
为了有效地控制疾病，试管凝集试验成为了诊断布氏杆菌病的重要方法之一。
然而，在实际操作中，试管凝集试验结果受到很多因素的影响，以下将对这些因素进行分析。
1. 抗原的优选抗原选择是影响试管凝集试验结果最重要的因素之一。
布鲁氏菌属的不同菌株具有不同抗原性，抗原的优选需要充分考虑菌株的种属、分离部位、分离地点等因素。
如对于布鲁氏菌属常见的几个种属，对应的典型菌株应当使用稳定的抗原。
2. 试剂的质量除了抗原的优选外，试管凝集试验中的其他试剂，如盐酸盐和红细胞等试剂的使用质量也会直接影响试验结果。
因此，在进行试验前应当进行充分的试剂质量控制和标准化操作。
3. 操作技术的水平试管凝集试验的操作技术也是影响试验结果的重要因素之一。
如抗原制备的方法、盐酸盐质量的标准化、加样技巧是否准确、时间控制等等。
因此，熟练掌握操作技术能够有效减少实验误差，提高实验的可靠性。
4. 环境条件因素试管凝集试验的环境温度、湿度以及实验室空气的质量等因素，会影响试验结果。
例如，在凝集试验过程中，水分的蒸发和温度过高都会影响试验结果的准确性，因此需要制定恰当的环境条件要求。
5. 患者感染程度因素患者感染程度也是影响试管凝集试验结果的因素之一。
临床病例中，病人处于不同感染期会直接影响交叉反应、特异性等指标，进而影响结果的判定。
因此，对于不同阶段的病人，需要选择合适的试验指标及质量标准，以优化实验结果。
综上，试管凝集试验是一种常用且广泛应用的技术，但是实验过程中需要全面考虑系统的各种因素。
通过对如上的因素进行分析，可以更好地优化实验的操作流程，提高诊断效率和准确性。
影响动物布氏杆菌病试管凝集试验的因素分析
影响动物布氏杆菌病试管凝集试验的因素分析
动物布氏杆菌病是一种由布氏杆菌感染引起的疾病，对动物的健康和家畜业的发展都会造成严重的影响。
试管凝集试验是当前最常用的检测动物布氏杆菌病的方法之一，但因为不同因素的影响可能导致试验结果的误差，因此需要对影响因素进行详细的分析和研究。
首先，在试管凝集试验中，抗原悬液和试剂的配制方法会影响试验结果的准确性。
抗原悬液的浓度和纯度应当是试验成功的关键。
高浓度的抗原悬液会导致假阳性结果，而低浓度则可能导致假阴性结果。
另外，抗原悬液的纯度也会对试验结果的准确性造成影响，如果悬液中存在其他蛋白质或病原体，可能会影响试验结果的可靠性。
其次，试剂的质量和储存方式也会对试验结果造成影响。
试剂的质量应当符合规格要求，必须在干燥、阴凉的地方储存，并且不长时间放置。
试剂老化或受污染可能会出现错误结果，因此必须谨慎选择。
此外，样品取样和处理以及试验操作人员对试验的技能水平也可能对试验结果产生重要影响。
取样时，必须确保样品的新鲜性及准确性，并根据不同的动物种类采取不同的采样部位。
试验操作人员必须严格遵守操作规程，按照标准流程进行操作，并且拥有足够的实验技能和经验。
最后，环境因素也会影响试验的结果，例如湿度、温度和光线等。
试验环境应当控制在适宜的条件下，尽可能减少环境因素对试验结果的干扰。
综上所述，试管凝集试验是一种可靠的检测动物布氏杆菌病的方法，但其结果的准确性受到多种因素的影响。
在进行试验前，必须考虑并控制好不同的因素，以确保试验结果的准确性和可靠性。
探究影响布鲁氏菌病抗体检测的因素
X u m u s h o u y i本文主要探究影响布鲁氏菌病抗体检测的因素。
以布鲁氏菌病抗体检测方法为出发点，分析采血管、标本放置时间、试验温度、前带现象均会对布鲁氏菌抗体检测造成一定影响，出现假阳性情况。
并以此为基础提出样本准备、操作方法、评定结果的对策，以期为相关工作者提供参考。
一、布鲁氏菌病抗体检测方法!、布鲁氏菌病主要是通过布鲁氏菌所引起的传染病，具有人兽共患特点，世界动物卫生组织将其归纳为"类动物疫病之中，我国将其列入到二级动物疫病。
猪、牛、羊最易感染此病，犬与#$多种家禽、家畜、野生动物易感性有所不同，主要是侵害生殖系统，易引发不孕、流产等。
近几年中，布鲁氏菌病阳性率逐渐升高，已成为重点防范病种。
%、本次主要使用虎红平板凝集试验。
由于培养布鲁氏菌营养条件苛刻，时间漫长，因此诊断布鲁氏菌病主要依据血清学诊断标准。
原理是依据相应抗体可在体外产生特异性结合，并展现出可见反应，通过已知抗原进行未知抗体检测。
因为在酸性条件下抑制&'(活性，主要对&')类凝集抗体进行检查，具有良好特异性，与二巯基乙醇试验、补体结合试验等吻合率较高。
虎红平板凝集试验具有价格便宜、灵敏度高、操作便捷、检测速度快，更加适合普查群体布鲁氏菌病，也是国际贸易中猪、牛、羊布鲁氏菌病指定检测试验。
二、布鲁氏菌病抗体检测影响因素*、采血管影响。
在布鲁氏菌抗体检测中，首先将标本放置在采血管中，以此进行后续检测。
而不同采血管对于抗体检测结果具有一定影响。
经研究表明，选择乡镇牛羊各+,头检测布鲁氏菌病抗体，使用负压采血管在羊颈静脉与牛尾静脉采血共%管，采血管一个是普通采血管，另一个则含有肝素钠抗凝剂，以以每分钟%-$$转的速度离心.,分钟，取上清液检测。
结果表明，在虎红平板凝集试验中，普通采血管检测结果均为阴性，而含抗凝剂的采血管试验结果则为阳性，在不同抗凝条件下，同一血液样品的实验结果产生两种不同结果。
虎红平板凝集试验检测布鲁氏菌病的效果评价
虎红平板凝集试验检测布鲁氏菌病的效果评价
陈秀青 邹国华 吴亦琴
【摘要】 目的 以试管凝集试验（SAT）为金标准，对比分析虎红平板凝集试验（RBT）检测布鲁氏菌病 的效果，探讨在基层检测中用 RBT 检测布鲁氏菌病取代 SAT 的可能性。方法 选择了宜兴市 2020 年布鲁 氏菌病监测点 289 份监测人员血清，用 RBT 和 SAT 两种方法同时进行检测。以 SAT 检测结果为金标准， 评价 RBT 检测效果。结果 与金标准（SAT）检验结果比较，RBT 检测的灵敏度为 100%，无假阴性；特异 度为 91.48%，假阳性率为 8.52%。Kappa=0.585，表明 RBT 与金标准（SAT）检测结果具有中高度一致性， 但二者相关性分析，差异有统计学意义（P<0.05），说明两种试验方法相关性较差，临床上 RBT 不能取 代 SAT。结论 RBT 影响因素多，假阳性率高，需结合 SAT 检测方法对布鲁氏菌病进行检测判断。 【关键词】 布鲁氏菌病；虎红平板凝集试验；试管凝集试验；对比检测 中图分类号 S852.61 文献标识码 A 文章编号 1671-0223(2021)06-037-03
作者单位：214206 江苏省宜兴市疾病预防控制中心
1 资料与方法
1.1 研究资料 宜兴市 2020 年布病监测点 289 份监测人员（主
要从事兽医、牲畜饲养、交易、宰杀、皮毛加工、 羊肉分割等）血清。 1.2 试剂
布病虎红抗原、布病试管凝集抗原（购自青岛 中创汇科生物科技有限公司）。 1.3 检测方法 1.3.1 RBT ①将玻片标记好序号，用移液枪吸取 30μL 待检血清滴加到玻片上；②将虎红平板凝集 抗原平衡到室温（20 ～ 25℃），然后吸取 30μL 滴 加到玻片上的待检血清中；③轻轻摇晃玻片，使混
布鲁氏菌试管凝集试验
试管凝集试验
1897年莱特氏等(Wright)与其同 事发现患该病的病人血清与马尔 他细菌的培养物产生了凝集现象， 遂称之为莱特氏凝集反应，成了 迄今常用的血清学诊断方法之一。
设备及试剂
试管凝集抗原 被检血清 0.5%的石碳酸生理盐水 吸管 试管 试管架 孵箱
操作步骤
血清学试验的对照
由于参加血清学试验的成分和试验过程中可能 出现的影响因素很多，所以需要在正式试验的 同时，在与正式试验完全一致的条件下分别对 抗原，抗体等各种成分做对照检查。这些对照 检查和对照试验对观察和分析试验结果是绝对 必要的。另外，诊断制品一定要在有效期内使 用。
谢谢
前带现象产生的原因 ① 胶体粒子学说：血清稀释度低所含的胶体粒子 多，它影响抗原抗体的结合，而稀释度高的则含 胶体粒子少，所以出现凝集。 ② 不完全抗体学说：血清中因存在不完全抗体竞 争抗原，所以在低稀释度的管中不凝集。 ③ 抗原抗体比例失调，也就是抗体过剩或血清内 含有过多防腐剂，严重污染可造成前带现象的产 生，封闭抗原的干扰。
作凝集反应时，有个别血清会出现前带现象，即 稀释度低的血清管内(或血清量多的格)不发生凝 集，而稀释度高的管内(或血清量少的格)出现凝 集，这叫做前带现象。如果某血清在平板凝集反 应中出现了前带现象，那么做试管反应时应多做 几个管，多采用几个稀释度。 氯化钠的含量增高对血清反应有明显的影响，盐 的浓度越高，反应的敏感性提高，因此在兽医界 为了克服凝集反应中的阻抑抗体的干扰，对羊血 清采用高渗盐水作凝集反应，一般浓度在 10~12%，切记一般人血清不能用高渗盐水。
被检血清的稀释:一般情况下,每份血清用5支小试 管,第一管加入2.3毫升石碳酸生理盐水,第二管不 加，第三、四、五管各加入0.5毫升.用1毫升吸 管吸取被检血清0.2毫升,加入第一管中,混匀。混 匀后, 以该吸管吸取第一管中血清加入第二和第 三管各0.5毫升，以该吸管将第三管混匀，并吸 取0.5毫升加入第四管,依次稀释到第五管,混匀后 从第五管吸出0.5毫升弃去.如此稀释后,从第二管 起血清稀释度分别为1:12.5 1:25 1:50 1:100
虎红平板凝集试验原理
虎红平板凝集试验原理
虎红平板凝集试验是一种常用的实验方法，用于检测血液中的凝血功能。
该试验通过观察血浆在平板上的凝集情况来判断凝血功能的正常与否，对于诊断血液病变和评估凝血功能起着重要作用。
在进行虎红平板凝集试验时，首先需要准备好所需的实验材料，包括平板、虎红试剂和患者血浆。
接着，将平板放置在水平面上，滴加适量的虎红试剂在平板上形成一层薄膜。
然后，将患者血浆滴加到虎红试剂上，轻轻摇晃平板使血浆均匀分布。
在一定时间内观察血浆的凝集情况，可以根据凝集程度来判断凝血功能的好坏。
虎红平板凝集试验的原理是基于凝血蛋白在凝集过程中的相互作用。
当血浆中存在凝血功能异常时，凝血蛋白之间的相互作用会受到影响，导致凝集的速度和程度发生改变。
通过观察血浆在平板上的凝集情况，可以判断血浆中凝血功能的正常与否，进而指导临床诊断和治疗。
虎红平板凝集试验在临床中广泛应用于各种凝血功能异常的检测和评估。
通过该试验可以快速、准确地了解患者的凝血功能状态，为临床诊断和治疗提供重要参考。
同时，虎红平板凝集试验具有操作简便、结果可靠的特点，成为临床常用的凝血功能检测方法之一。
总的来说，虎红平板凝集试验是一种简便、可靠的凝血功能检测方法，通过观察血浆在平板上的凝集情况可以判断凝血功能的正常与
否。
该试验在临床诊断和治疗中具有重要意义，对于及时发现和处理凝血功能异常具有重要价值。
希望通过本文的介绍，读者能够更加了解虎红平板凝集试验的原理和应用，从而更好地应用于临床实践中。
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布鲁氏菌病虎红平板凝集试验的影响因素及注意事项
作者：刘坤洋
来源：《新农业》2020年第10期
摘要：本文对布鲁氏菌病虎红平板凝集试验中的影响因素及应注意的事项进行了较全面的分析和总结，以提高试验的准确性，为本病的进一步确诊和疫情分析提供科学依据。
关键词：布鲁氏菌病;虎红平板凝集试验;影响因素;注意事项
目前，布鲁氏菌抗体检测仍是我国布病诊断最常用、最主要的检测方法。
其中虎红平板凝集试验（RBPT）具有试验试剂成本低廉、操作简便、快速、检出率高等优势，被广泛应用于布病的大规模筛查，同时由于本方法不需要特殊的试验设备，更适于基层实验室和现场试验。
现将RBPT中的影响检测结果的因素及应注意的问题进行简要分析。
1 RBPT的影响因素
1.1 RBPT抗原
RBPT抗原的质量是影响布病血清学试验结果准确性的关键性因素之一，不同厂家的抗原对同一批血清样本的检测结果存在不同程度的差异，如果RBPT的假阳性率过高，不仅造成工作量加大，也会造成不必要的经济损失。
1.2 血清
血清质量也是影响布病血清学试验结果准确性的重要因素之一，而采集的时间与分离方式直接影响血清的质量。
用于RBPT的血清最好是新鲜、清亮透明、无溶血、防止细菌污染，并且避免反复冻融。
纤维蛋白原能与虎红抗原产生非特异性凝集反应，而且纤维蛋白原含量越高凝集反应发生的越快、越强。
因此，如果待检血清中含有纤维蛋白原也会出现RBPT假阳性结果，严重影响检测结果的准确性。
1.3 温度
试验时，RBPT抗原与被检样品的温度、环境温度对试验结果的准确性也有很大影响。
RBPT用的抗原需要恢复至室温（22±4℃），并且使用前要充分混合均匀。
血清与温度和时间成反比关系，放置血清的时间越短，温度越低，假阳性率越高。
由此可见，在一定温度范围
内，温度越高，血清学反应进行的越快。
本试验要求在室温下进行，因此，在试验前要注意觀察环境温度是否适合进行本试验。
1.4 药物
血清中的药物浓度也会干扰检测结果的准确性，在经过治疗后或治疗期间血清凝集不明显。
因此，在血液样品采集前除了要查明动物的免疫背景，还要查清动物的患病及治疗情况，以免出现误诊、漏诊现象。
1.5 试验操作
RBPT虽然操作简便，但在试验过程中操作是否规范、抗原及血清加入的量是否准确并混匀、结果判定的时间是否准确等因素也会影响试验结果的准确性。
2 注意事项
2.1 对照的设立
每次试验时必须设立标准阴性、阳性血清对照，用以判断试验是否成立。
同时在试验前应使用弱阳性对照血清确定试验条件的敏感性。
2.2 试剂的保存及使用
RBPT抗原应用OIE标准血清校准过的血清进行最后标化，于4℃暗处保存，避免冻结和污染。
试验时使用的抗原应与用0.5%石碳酸生理盐水1/45稀释的OIE标准阳性血清出现清晰的阳性反应，而不与1/55稀释的血清反应。
为了避免RBPT抗原被污染，降低温度变化对抗原灵敏度的影响，可以每次试验前只取出足够本次试验用的抗原量。
2.3 血清
采集的血液样本在分离血清之前，避免长时间晃动以及与冰袋接触，以免发生溶血。
为了分离到合格的血清样本，最好在早晨喂料前或停食后6小时进行采血，将装有血液的注射器或采血管摆成斜面，以促进血清更好的析出。
除特殊要求外，用于血清学试验时采集血液样本时不要加抗凝剂，以免影响对检测结果做出正确的判定。
血清样品在使用前一定要上下颠倒混匀，对于冰冻保存的血清样品应充分融化后再进行试验。
2.4 试验操作
虽然RBPT操作易于掌握，结果判定直观，但在试验过程中所用抗原和血清量都很少，试验时加入的量一定要准确。
抗原与血清混合均匀后室温轻微摇晃4分钟后立即判定结果，若抗原抗体反应超过4分钟后也会产生假阳性结果。
3 讨论
RBPT作为快速、准确筛查布鲁氏菌病特异性抗体的简便方法，不仅反应敏感稳定，同时由于抗原的pH为3.65±0.05，可抑制引起非特异性反应的IgM、增强特异性IgG的活性，也具有较好的特异性。
但在试验操作过程中要严格按照标准的操作规程进行，注意影响试验的各种因素，降低各种因素对试验结果准确性的影响。