布病虎红平板凝集试验
布病的检测方法
虎红平板凝集试验(RBPT):实验原理:该试验又称为板式孟加拉红平板凝集实验。
由于所用的抗原是酸性(PH3.6—3.9)带色的抗原,该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性,检查出的抗体是IgG类,因此提高了该项反应的特异性。
器材与试剂:虎红平板凝集抗原、载玻片、移液器、枪头方法:在载玻片上加抗原30μl,加入30μl被检血清,混匀。
在5min内观察结果,轻摇载玻片,出现凝集颗粒为阳性,否则为阴性。
试管凝集试验(SAT):实验原理:布鲁氏菌侵入机体后,会刺激机体产生特异性抗体,这种抗体可与相应的布氏菌抗原发生特异性结合,在电介质作用下,就会形成肉眼可见的凝集反应,也就是用已知抗原查未知抗体。
器材与试剂:布病试管凝集抗原、生理盐水、试管、移液管、移液器、小烧杯、枪头、试管架方法:1.准备试管:取9支试管放在试管架中编号。
1号管为血清对照管,2—8号为试验管,9号为抗原对照管。
2.血清稀释:1号管加入2.3ml生理盐水,2号不加,3号—9号各加入0.5ml生理盐水。
1号管加入0.2ml被检血清,混匀后各吸0.5ml加入2、3号管。
从3号开始做倍比稀释,8号吸0.5ml弃去。
3.加入抗原:10倍稀释抗原(用烧杯,1ml抗原9ml生理盐水),从2号开始每支加0.5ml稀释后抗原,从2号开始,血清被稀释浓度为1:25、1:50、1:100、1:200、1:400、1:800、1:16004.凝集试验标准比浊管的配制(判定透明程度的依据):取5支试管,编号,取稀释后的抗原再做2倍稀释。
盐水(ml) 清亮度标记管号抗原稀释液(ml)1 0.00 1.00 100% ++++2 0.25 0.75 75% +++3 0.50 0.50 50% ++4 0.75 0.25 25% +5 1.00 0.00 0% —充分混匀,将所有试管放入温箱中37℃培养20—22小时取出,在室温下放置1—2小时后观察结果。
布氏菌病虎红平板凝集试验抗原 新兽药证书
布氏菌病虎红平板凝集试验抗原新兽药证书一、概述布氏菌病是一种由布氏菌引起的家畜和野生动物传染病,也可传染给人类。
布氏菌病的传播对动物养殖业和食品安全造成了严重威胁,因此对布氏菌进行有效的检测和防控至关重要。
其中,虎红平板凝集试验是一种常用的血清学检测方法,对布氏菌病的诊断具有重要意义。
二、布氏菌病虎红平板凝集试验抗原1. 抗原来源布氏菌病虎红平板凝集试验抗原主要来源于已知含有布氏菌的动物血清,如牛、羊、猪等。
这些血清样本需要通过严格的筛选和处理,以确保抗原的纯度和稳定性。
2. 制备方法虎红平板凝集试验抗原的制备需要严格按照相关技术规范进行操作。
首先需要从携带布氏菌的动物中提取血清样本,然后通过离心、超滤等手段去除杂质和细菌。
经过适当的稀释和加工处理,最终得到用于虎红平板凝集试验的抗原制剂。
3. 抗原质量控制为了确保抗原的稳定性和活性,需要对抗原制剂进行严格的质量控制。
包括对抗原的存储条件、保存期限、抗原效价等指标进行监测和管理,以确保虎红平板凝集试验的准确性和可靠性。
三、新兽药证书1. 申请流程布氏菌病虎红平板凝集试验抗原作为兽药的一种,需要获得新兽药证书才能在市场上合法销售和使用。
申请新兽药证书需要遵循相关政策和法规,提交包括临床试验报告、生产工艺流程、质量控制方案等材料,并经过相关部门的审批和认证。
2. 证书标注一旦获得新兽药证书,抗原制剂需要在包装、说明书等相关资料上标注证书编号、有效期限等信息。
这些信息对药品的合法性和可追溯性具有重要意义,也为用户提供了使用保障。
3. 证书更新新兽药证书的有效期通常较短,一旦过期就需要重新申请并通过审批,获得更新证书。
抗原生产企业需要及时关注证书的有效期限,提前做好证书更新工作,以保障产品的合法生产和销售。
四、结论布氏菌病虎红平板凝集试验抗原的制备和管理对于布氏菌病的检测和防控具有重要意义。
严格控制抗原的质量和规范生产流程、及时申请和更新新兽药证书,是保障抗原生产质量和市场合法的关键步骤。
虎红平板实验防控布病存在的问题及对策
虎红平板实验防控布病存在的问题及对策
魏文艳
【期刊名称】《畜牧兽医杂志》
【年(卷),期】2024(43)1
【摘要】布鲁氏菌病是一种人兽共患传染性病,过去主要在北方流行,进入2000年后随养殖业的发展,传播范围逐步扩大,现在已经波及全国。
该病是由布鲁氏菌感染引起的,一般由患病的牛、羊、猪等家畜传染给人。
家畜患布鲁氏菌病常常出现流产、不孕、空怀、繁殖成活率降低、使牲畜头数明显减少、产肉、产奶量下降。
直接影响着畜牧业的发展各农民致富。
布病的诊断以血清学诊断为主,基层常见的布病诊断方法为虎红平凝集试验,这种检测方法有价格便宜,方便等优点,但是也存在一些不足,我就不足之处说几点自己的看法,并提出改进的办法。
【总页数】2页(P140-141)
【作者】魏文艳
【作者单位】天水市动物卫生技术工作站
【正文语种】中文
【中图分类】S852.614
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虎红平板凝集试验原理
虎红平板凝集试验原理虎红平板凝集试验是一种常见的血液凝集反应试验,用于检测人体血清中的抗凝血系统抗体。
试验原理:虎红平板凝集试验基于抗原-抗体反应中的凝集现象。
在试验过程中,首先将患者的血清样本与特定抗原反应,然后观察是否发生凝集的现象。
虎红平板凝集试验常用的抗原有:人红细胞凝集素(虎红)抗原、麦芽球蛋白原、系膜性肾炎合成物等。
试验步骤:1. 准备血清样本:从患者外周血中提取血清,并对血清进行稀释。
2. 准备虎红悬液:将虎红悬液与盐水溶解,制备成适当浓度的虎红悬液。
3. 加入抗原:将稀释后的患者血清和特定抗原(如虎红)混合,使其充分反应。
4. 等待反应:将混合液放置于试验管中,静置一段时间,观察是否出现凝集。
时间可根据需要确定。
5. 观察结果:通过肉眼观察凝集的形状和程度,判断血清中是否存在抗体。
凝集原理:虎红平板凝集试验中的凝集现象与抗原-抗体反应有关。
当抗原与相应抗体结合时,会形成抗原-抗体复合物。
这些复合物会在某一特定条件下发生凝聚或聚集,形成可见的凝集物。
凝集形成的机制有两种:1. 桥联凝集:当抗原的两个单元结合了两个相应抗体的结合部位时,抗体和抗原通过互相之间的连接桥联形成长链状结构,从而形成凝集。
这种凝集现象常见于多价抗原和多价抗体反应。
2. 网络凝集:当抗体与抗原的结合位点多于两个时,抗原-抗体复合物会在适当的条件下形成结网状结构,从而发生凝集。
这种凝集常见于多聚体抗原和多价抗体反应。
虎红平板凝集试验可用于以下情况的检测:1. 抗体检测:可以用于检测某些特定抗体的存在,如抗麻疹抗体、类风湿因子等。
2. 诊断:可用于一些疾病的辅助诊断,如自身免疫性疾病、风湿性疾病等。
3. 监测疗效:可用于评估治疗效果以及疾病进展情况。
4. 预防:有些疫苗接种后可以引起产生特定抗体,虎红平板凝集试验可以用于检测疫苗接种后人体是否产生了相应的抗体,从而判断免疫效果。
总结:虎红平板凝集试验是一种通过观察抗原-抗体反应的凝集现象来检测抗体的常用方法。
布氏杆菌病虎红平板凝集操作流程
布氏杆菌病虎红平板凝集实验操作流程材料与试剂以布氏杆菌病平板凝集反应为例。
1.玻璃板、刻度吸管等。
2.布氏杆菌平板凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清。
操作方法1.取洁净玻板一块,用玻璃铅笔划成方格,并注明待检血清号码。
2.取0.2ml吸管分别吸取0.08ml、0.04ml、0.02ml和0.01ml各放入一方格内。
大规模检验时,可只做2个血清量,大动物用0.04ml和0.02ml,中小动物用0.08ml和0.04ml。
每检一个样品需换一只吸管。
3.每格内加布氏杆菌平板凝集抗原0.03ml,滴在血清附近,而不要与血清接触。
用牙签(或火柴杆)自血清量最小的一格起,将血清与抗原混匀,每份血清用一根牙签。
4.混合完毕,将玻板置凝集反应箱上均匀加温或采用别的办法适当加温,使温度达到30℃左右。
3min~5min内记录结果。
结果判定++++:出现大的凝集块,液体完全清亮透明,即100%凝集。
+++:有明显的凝集片,液体几乎完全透明,即75%凝集。
++:有可见的凝集片,液体不甚透明,即50%凝集。
+:液体混浊,有小的颗粒状物,即25%的凝集。
-:液体均匀混浊,即不凝集。
以出现++凝集的血清最高稀释倍数作为该份血清的凝集价。
大动物(牛、马、骆驼等)以0.02ml出现凝集价判为布氏杆菌病血清阳性,0.04ml出现凝集价判为可疑。
中小动物(猪、山羊、绵羊等)以0.04ml出现凝集价判为该份血清为布氏杆菌病阳性血清,0.08ml出现凝集价判为可疑。
注意事项1.每次试验必须以标准阳性血清和标准阴性血清进行对照。
2.加抗原前必须摇匀。
3.反应温度最好保证在30℃左右,3min~5min内判定。
如反应温度偏低,可适当延长判读时间。
4.如用两个血清量作试验,任何一个血清量出现凝集反应时,则需要用四个血清量重检。
5.平板凝集反应最好是用于初筛,如出现阳性或可疑反应,再用试管凝集反应进行复检,以定性。
6.平板凝集反应与试管凝集反应的关系。
虎红平板凝集试验(检测布病初筛试验)—人畜检测法一样
虎红平板凝集试验(检测布病初筛试验)—人畜检测法相同虎红平板凝集试验介绍:虎红平板凝集试验是用来诊断布氏杆菌病。
布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的人畜共患的急、慢性传染病。
因接触病畜或食用受染牛奶或奶制品而感染。
潜伏期1~3周,临床特点是缓慢起病,长期发热、多汗、虚弱、全身痛和关节痛,急性期症状多在3~6月内消退。
虎红平板凝集试验正常值:阴性虎红平板凝集试验临床意义:异常结果:阳性(50%)凝集:诊断布氏杆菌病符合率为95.92%。
需检测人群:感染,常发热,多汗,虚弱,全身痛者虎红平板凝集试验注意事项:不适合人群:没有检查前:使用前应充分摇匀样本,出现污染或有摇不散的凝块时不得使用检查时:抗原和血清应在室温中放置30~60分钟后,再进行试验虎红平板凝集试验检查过程:1 材料准备1.1 试剂:抗原、标准阳性血清、阴性血清。
1.2 受检血清应新鲜,无明显蛋白凝块,无溶血和无腐败气味。
1.3 洁净的玻璃板,其上划上4cm 2 的方格。
1.4 吸管或分装器,适于滴加0.03ml。
1.5 牙签或火柴杆,供搅拌用。
2 操作方法2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号,然后加相应的血清0.03ml。
2.2 再受检血清旁滴加抗原0.03ml。
2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。
2.4 每次试验应设阴、阳性对照。
3 结果判定在阴阳性血清对照成立的条件下,方可对被检血清进行判定。
受检血清在4 分钟内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+),无凝集现象,呈均匀粉红色者判为阴性(-)。
注:对出现阳性反应的动物须进一步作补体结合试验,或其他辅助诊断试验(试管凝集试验)。
布鲁氏菌病虎红平板凝集试验抗原系用抗原性良好的布鲁氏菌菌株,接种于适宜培养基培养,收获菌体,经加热灭活,离心后用虎红染液染色,悬浮于乳酸缓冲液中制成。
反应强度的判定标准“-”无凝集,呈均匀粉红色。
“+”稍能查到凝集,稍有卷边形成,凝集物间液体呈红色。
“++”形成明显卷边,凝集块间液体稍清亮。
虎红平板凝集试验原理
虎红平板凝集试验原理
虎红平板凝集试验是一种常用的实验方法,用于检测血液中的凝血功能。
该试验通过观察血浆在平板上的凝集情况来判断凝血功能的正常与否,对于诊断血液病变和评估凝血功能起着重要作用。
在进行虎红平板凝集试验时,首先需要准备好所需的实验材料,包括平板、虎红试剂和患者血浆。
接着,将平板放置在水平面上,滴加适量的虎红试剂在平板上形成一层薄膜。
然后,将患者血浆滴加到虎红试剂上,轻轻摇晃平板使血浆均匀分布。
在一定时间内观察血浆的凝集情况,可以根据凝集程度来判断凝血功能的好坏。
虎红平板凝集试验的原理是基于凝血蛋白在凝集过程中的相互作用。
当血浆中存在凝血功能异常时,凝血蛋白之间的相互作用会受到影响,导致凝集的速度和程度发生改变。
通过观察血浆在平板上的凝集情况,可以判断血浆中凝血功能的正常与否,进而指导临床诊断和治疗。
虎红平板凝集试验在临床中广泛应用于各种凝血功能异常的检测和评估。
通过该试验可以快速、准确地了解患者的凝血功能状态,为临床诊断和治疗提供重要参考。
同时,虎红平板凝集试验具有操作简便、结果可靠的特点,成为临床常用的凝血功能检测方法之一。
总的来说,虎红平板凝集试验是一种简便、可靠的凝血功能检测方法,通过观察血浆在平板上的凝集情况可以判断凝血功能的正常与
否。
该试验在临床诊断和治疗中具有重要意义,对于及时发现和处理凝血功能异常具有重要价值。
希望通过本文的介绍,读者能够更加了解虎红平板凝集试验的原理和应用,从而更好地应用于临床实践中。
布鲁氏菌虎红平板凝集试验
布鲁氏菌虎红平板凝集试验
检验方法:依据GB/T18646-2002
1、材料准备
1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供,按说明书使用。
1.2受检血清应新鲜,无明显蛋白凝块,无溶血和无腐败气味。
1.3洁净的玻璃板,其上划分成4cm2的方格。
1.4吸管或分装器,适于滴加0.03 ml。
1.5牙签或火柴杆,供搅拌用。
1.6观察结果照明用光源
2、操作方法
2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号,然后加相应血清0.03ml。
2.2 在受检血清旁滴加抗原0.03ml。
2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。
2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。
3、判定
3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下,方可对被检血清进行判定。
3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+),无凝集现象,呈均匀粉红色者判为阴性(-)。
附:
阴性对照:
阳性对照:
品控中心
2013-4-22
操作流程图
为了便于观
察结果,辅
以光源照明。
牛羊布病的检测技术
牛羊布病平板凝集试验一、试验原理:该试验又称为板式孟加拉红平板凝集试验,由于所用的抗原是酸性(PH3.6--3.9)带色的抗原,该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgMl类抗体的凝集活性,检查出的抗体是IgG类,因此提高了该项反应的特异性。
血清的制备一、血清制备将血液采集与无抗凝的离心管中,温室静置30分钟,3000r/min l离心5--10min,吸出血清(切勿吸出红细胞成分),分装备用。
要保存的血清则分离后装入离心管与-- 2 0 ℃的冰箱内保存。
二、虎平平板凝集试验(RBPT)将玻璃板清洗干净,划成50个方格(横10x纵5),每格4cm X 4 c m.每一格下再划1cm宽的小格,各格标上被检血清号,每一横行做两份待检血清。
在各方格中加入相应的被检血清 3 0 ul,,然后再其旁加入30ul虎红平板凝集抗原,用牙签搅动被检血清和抗原使之均匀混合,形成直径约2cm的液区。
轻微摇动,置室温条件下(2 0 ℃),4min内观察结果,同时设阳性血清和阳性血清对照。
方法二、在载玻片上加抗原30UL,加入30UL被检测血清,混匀。
在5min内观察结果,轻摇载玻片,出现凝集颗粒为阳性,否则为阴性。
三、结果观察当阴性血清对照不出现凝集(—),阳性血清对照出现凝集(+),方可对代检血清进行判定。
待检血清在4min,内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+),无凝集现象,呈均匀粉红色者判为阴性(—)四、注意RBPT 操作简单、反应迅速,且对试验条件要求不高,但特异性不高,易受试验温度和凝集时间等因素的影响,不易准确判定结果。
应用此法所得的阳性检出率为70%,较SAT(试管凝集试验) ELISA(酶联免疫吸附试验)低。
该方法主要用于初筛,对其阳性者,还必须经SAT检测为阳性后才能最终判定为阳性。
32.14.1-布病检测原始记录
成都市新都区疾病预防控制中心布病检测原始记录一、初筛方法:虎红平板凝集试验(RBPT)1.1操作:在玻片上加0.03mL被检血清,然后加入虎红平板抗原0.03mL,摇匀或用牙签混匀,在5min内判定结果。
1.2结果判定:判定凝集程度(-至++++)同平板凝集反应亦可只分为(+)阳性,(-)阴性两类。
二、确证实验:试管凝集试验(SAT)2.1操作方法:被检血清的稀释:在一般情况下,每份血清用5支小试管(口径8~10mm),第一管加入2.3mL 石碳酸生理盐水,第二试管不加,第三、四、五管各加0.5mL,用1mL吸管吸取被检血清0.2mL,加入第一管中,混匀。
混匀后,以该吸管吸取第一管中血清加入第二管和第三管各0.5mL,再从第一管吸出0.5mL 丢弃,剩1mL。
以该吸管将第三管混匀,并吸取0.5mL加入第四管,混匀。
再从第四管吸取0.5mL,加入第五管,混匀,吸取0.5mL,弃去。
如此稀释后,从第二管到第五管血清稀释度分别为1∶12.5,1∶25,1∶50和1∶100。
加入抗原:先以0.5%石碳酸生理盐水将抗原原液作适当稀释(一般是作1∶10稀释)。
稀释后的抗原加入各稀释的血清管(第一管不加,作为血清对照),每管加0.5mL,混匀。
加入抗原后,每管总量1mL,血清稀释度从第二管至第五管分别为1∶25,1∶50,1∶100和1∶200。
对照:阴性血清对照,血清稀释后加抗原(与被检血清对照相似)。
阳性血清对照,其血清稀释到原有滴度,再加抗原,抗原对照,适当稀释的抗原加石碳酸盐水。
判定比浊管制备:每次试验须配制比浊管作为判定的依据。
配制方法是:取本次试验用的抗原稀释液5~10mL,加入等量的0.5%碳酸盐水作倍比稀释。
全部试验管,对照管及比浊管充分振荡后置37℃温箱中20~22h,取出后放室温2h,然后以比浊管为标准判定结果。
2.2记录结果:根据各管中上层液体的清亮度记录结果。
特别是50%清亮度(++)对判定结果关系较大,一定要与比浊管对比判定。
虎红平板凝集实验
虎红平板凝集试验(RBPT)检测布鲁氏菌病的原理和方法由于培养的营养条件苛刻而且时间长,所以病的诊断以血清学诊断为主。
其原理主要是根据相应抗原抗体可以在体外发生特异性结合并呈现可见反应,用已知抗原(或抗体)检测体液中未知的抗体(或抗原)。
虎红平板(RBPT)灵敏度高,价格便宜,操作方便,检测快速,适于群体布鲁氏菌病的普查。
在国际贸易中是牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验,在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。
检测布鲁氏菌病所用的虎红平板凝集抗原是用抗原性良好的布鲁氏菌菌株经培养,灭活,离心收集菌体用虎红染料染色后,悬浮于乳酸缓冲液中制备而成。
试验原理:虎红平板凝集试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。
由于所用的抗原是酸性()带色的抗原,该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是IgG类,因此提高了反应的特异性。
虎红平板凝集试验具体方法如下:一、材料准备1、虎红平板凝集抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供,按说明书使用。
2、被检血清应新鲜,无明显蛋白凝块,无溶血和无腐败气味。
3、洁净的玻片或玻璃板,其上划分成4cm2的方格。
4、吸管或移液器,适于滴加液体。
5、牙签、混合棒或火柴杆,供搅拌用。
二、操作方法1、实验前,应将血清和抗原在室温放置30-60min。
2、将玻璃板上各格标记被检血清号,然后加相应被检血清。
3、在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原。
4、用牙签类小棒搅动血清和抗原,使之充分混合,在5分钟内观察结果。
5、每次试验应设阴性血清、阳性血清对照。
三、结果判定1、在阴、阳性血清对照成立的条件下,方可对被检血清进行判定。
2、受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+),无凝集现象,呈均匀粉红色者判为阴性(-)。
四、方法评价1、虎红平板凝集试验检测布鲁氏菌病,方法简便、快速、容易操作,适于基层大面积检疫;2、该方法敏感性较好,检查牛的阳性率稍高于绵羊、山羊。
布鲁氏菌病虎红平板凝集试验和试管凝集试验的比较
布鲁氏菌病虎红平板凝集试验和试管凝集试验的比较[摘要]目的:对比虎红平板凝集试验和试管凝集试验对布鲁氏菌病检验的敏感性和特异度。
方法:总结我院收集的825份血清样品,先经过虎红平板凝集试验,再进行试管凝集试验,别统计虎红平板凝集试验和试管凝集试验中一个“+”和两个“+”的案例数并计算两种实验的阳性符合率情况。
结果:820例待检血清的中,虎红平板凝聚试验中结果为一个“+”者10例,两个“+”及以上者52例,试管凝聚试验中结果为一个“+”者9例,两个“+”及以上者51例,另外,1:50凝聚阳性的有9,人1:100有23人,1:200有28人,两种布鲁氏菌病检验方法的总阳性符合率为96.8%。
结论:虎红平板凝集试验可能会出现假阳性结果,试验结果为阳性的需经试管凝集试验检验后才可确诊。
[关键词]布鲁氏菌病,虎红平板凝集试验,试管凝集试验布鲁氏菌病属于一种人兽传染性疾病,该类疾病主要是由于布鲁氏菌感染引起的,可分为两大类,即动物间传播的布鲁氏菌病和人之间传播的布鲁氏菌病,而后者的感染源一般是动物[1]。
布鲁氏菌病一旦在人群中开始传播,就会引发重大公共卫生问题,造成严重的后果,而快速的布鲁氏菌病阳性检验方法对于预防和治疗疾病具有重要的现实意义[2],为此,笔者总结了两种布鲁氏菌病阳性检验方法并加以比较,旨在为布鲁氏菌病的检验提供一定的理论依据,现报道如下:1资料与方法1.1一般资料研究对象为2012年3月-2014年4月期间我院收集的825份血清样品,血清供试者中包括男性400例和女性425例,年龄范围为20岁-49岁,平均年龄为(35.6±15.4)岁。
试验过程中用到的布鲁氏菌病阴性血清诊断试剂与布鲁氏菌病阳性血清诊断试剂均由山东省微生物学研究所提供,布鲁氏菌病的试管凝聚抗原和虎红平板凝聚抗原均由中国预防医学科学院提供。
1.2试验方法所有受试者均先采集静脉血,经离心处理获得血清后进行试验,先进行虎红平板凝聚试验,试验结果阳性者再进行试管凝聚试验,均为阳性者即可确诊。
抗凝剂对动物布鲁菌病虎红平板凝集试验的影响
常 显著 , 对试 管凝 集试 验无影 响 。因此 , 临床 上用 虎红 平板 凝 集 试验 进 行 动物 布 鲁 茵病 筛查 时 , 不 能使 用含
有抗 凝 剂的 血液样 品 , 否则会 出现严 重 的非特 异性 凝 集现 象 。 关键 词 : 布鲁 菌病 ; 抗凝 剂 ; 虎红 平板 凝 集试验 ; 试 管凝 集试 验
动物布 病 的监 测 、 净化工作 , 在 检 测 中发 现 , 使 用 抗 凝 剂 的样 品会 出 现严 重 的非 特 异 性 凝 集 现 象 , 所 有
( 2 0 1 5 0 7 0 3 ) , 青 岛异 邦生 物工 程有 限公 司产 品 ; 柠 檬
酸钠、 E DT A— Na 。 , 天 津 市 致 远 化 学 试 剂 公 司产 品 ;
虎红 平 板 凝 集 试 验 ( R B P T) 和 试 管 凝 集 试 验
入 柠檬 酸 钠 、 肝 素 钠 和 乙 二 胺 四 乙酸 二 钠 ( E D TA—
Na )3种 抗 凝 剂 , 充分混匀 , 3 0 0 0 r / mi n , 离心 1 O
( S A T) 是 布病 监测 及诊 断使 用最 广泛 的 两种 检 验 方 法r 6 ] , 被 列入 我 国《 动物布鲁菌病诊 断技术》 ] , 成 为法定 的检验 方 法 。在 实 际检 测 过 程 中 , 虎红 平 板 凝 集试 验 常作 为 动 物 布病 的 田 问筛 查 , 结 果 阳性 的 样 品再 用 试 管 凝 集 试 验 进 行 定 性 确 诊L 8 _ 9 ] 。许 多 试
中图分类号 : ¥ 8 5 2 . 6 1 4 ; ¥ 8 5 4 . 4 3 文献标识码 : A 文章编号 : 1 0 0 7 — 5 0 3 8 ( 2 0 1 7 ) 1 1 - 0 1 3 2 — 0 5
常规试管凝集试验与虎红平板凝集试验检测布病抗体结果对比分析
常规试管凝集试验与虎红平板凝集试验检测布病抗体结果对比分析本文的主要研究目的,是通过虎红平板凝集试验以及常规试管凝集试验对布鲁菌病进行检测,并且分析对比两者的检测结果。
在实际检测的过程中,主要运用试管凝集试验以及虎红平板凝集试验这两种方法。
通过对试验结果分析发现,在四百份的高温血清当中,其中有十八份试管凝集试验阳性,完全来自于三十六份的虎红平板凝集试验的阳性当中。
因此我们能够得出,在对布鲁菌病的实际检测过程中,应用通过虎红平板凝集试验进行有效的筛选,所得到的阳性样品可以通过试管凝集试验来进行复核。
所谓布鲁菌病,通常也被人称作布病或者波状热病。
这种疾病主要是布鲁菌所引发的,并且在世界范围内分布广泛,人类与牲畜都会感染这种慢性的细菌性传染疾病。
布鲁菌病在我国隶属于二类牲畜疫病。
在我国大多数布鲁菌病发病率高的区域,国家颁布了2015年必须对该疾病进行有效的控制,到了2020年必须彻底的清除该疾病。
因此,?τ诓悸尘?病阳性高效的检测手段,对该疾病的预防与医治都有着至关重要的意义。
疾病控制机构通过运用试管凝集试验方法以及虎红平板凝集试验方法对四百例高危群体的样品血清进行检测对比分析。
其详细的分析检测报告结果如下。
1 材料与方法1.1 材料在实际检测的过程中,所使用的材料包括:试管凝集抗原试剂,虎红平板凝集抗原试剂,并且都在有效期之间进行使用。
所检测的血清样品来自于四百例布鲁菌疾病的高危群体。
1.2 方法1.2.1 虎红平板凝集试验(RBPT)在实际检测的过程中,将需要进行检测的血清样品,取出0.03mL,放置于玻片上,并且将0.03mL的虎红平板抗原加入到其中,并且均匀混合,其判定结果将会在5min之内产生。
如果玻片上的混合物当中产生颗粒状的物质或者产生凝集片,其检测结果都为阳性(+)。
如果混合液体呈现出十分浑浊的状态,其检测结果都为阴性(-)。
1.2.2 试管凝集试验(SAT)在运用该种方法进行实际检测的过程中,需要稀释被检测的血清样品。
布病检测标准
动物布鲁氏菌病诊断技术GB/T18646—20021范围本标准规定了动物布鲁氏菌病的诊断技术。
本标准规定的虎红平板凝集试验、乳牛全乳环状试验适用于家畜布病田间筛选试验和乳牛场布病的监测及诊断泌乳母牛布病的初筛试验;试管凝集试验和补体结合试验适用于诊断羊种、牛种和猪种布病感染的家畜。
本标准规定的试管凝集试验不适用于犬种和绵羊副睾种布病感染家畜的检疫。
2虎红平板凝集试验2.1材料准备2.1.1抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供,按说明书使用。
2.1.2受检血清应新鲜,无明显蛋白凝块,无溶血和无腐败气味。
2.1.3洁净的玻璃板,其上划分成4cm2的方格。
2.1.4吸管或分装器,适于滴加0.03mL。
2.1.5牙签或火柴杆,供搅拌用。
2.2操作方法2.2.1将玻璃板上各格标记受检血清号,然后加相应血清0.03mL。
2.2.2在受检血清旁滴加抗原0.03mL。
2.2.3用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。
2.2.4每次试验应设阴、阳性血清对照。
2.3判定2.3.1在阴、阳性血清对照成立的条件下,方可对被检血清进行判定。
2.3.2受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+),无凝集现象,呈均匀粉红色者判为阴性(—)。
3乳牛布病全乳环状试验3.1材料准备3.1.1布病全乳环状抗原由制标单位提供,按说明书使用。
3.1.2乳样3.1.2.1受检乳样须为新鲜的全乳。
3.1.2.2采乳样时应将母畜的乳房用温水洗净、擦干,然后将乳液挤入洁净的器皿中。
3.1.2.3采集的乳样夏季时应于当日内检查;保存于2℃时,7d内仍可使用。
3.2操作方法3.2.1取乳样lml,加于灭菌凝集试验管内。
3.2.2取充分振荡混合均匀的全乳环状抗原1滴(约50ul)加人乳样中充分混匀。
3.2.3置37℃一38℃水浴中60min。
3.2.4加温后取出试管勿使振荡,立即进行判定。
3.3判定标准分为:a)强阳性反应(+++),乳柱上层乳脂形成明显红色的环带,乳柱白色,临界分明;b)阳性反应(++),乳脂层的环带呈红色,但不显著,乳柱略带颜色;c)弱阳性反应(+),乳脂层的环带颜色较浅,但比乳柱颜色略深;d)疑似反应(±),乳脂层的环带颜色不明显,与乳柱分界不清,乳柱不褪色;e)阴性反应(—),乳柱上层无任何变化,乳柱颜色均匀。
布病虎红平板凝集试验与试管凝集试验对比研究
布病虎红平板凝集试验与试管凝集试验对比研究摘要:本文以虎红平板凝集试验和试管凝集试验这两种方法对布鲁菌病进行检测,并对其检测结果进行对比分析。
试验选择200例牲畜血清作为研究对象,对所有牲畜同时进行虎红平板凝集试验和试管凝集试验,并从两种试验的准确率入手进行分析。
关键词:布病;虎红平板凝集试验;试管凝集试验;对比研究前言:布病又叫做布鲁菌病,此病广泛分布在全世界,为人畜共患病。
在我国属于二类牲畜疫病,主要在狗、山羊、绵羊、猪等家畜中出现,野生动物也会受到感染。
此病最为有效的检测方式为试管凝集试验和虎红平板凝集试验,为提升试验结果准确率,下文对这两种试验结果进行对比分析。
1试验对象及方法1.1试验对象本次试验将200例牲畜血清作为试验对象,待测血清样本采集为某市养殖场,采集后均处于-20℃保存。
1.2材料本次试验使用材料为试管凝集抗原试剂和虎红抗原试剂,两种试剂均在有效期,待检测的血清样本来自上述200例牲畜。
1.3方法1.3.1SAT使用试管凝集试验此种检测方法需要先对患者的血清样本进行稀释。
稀释需要使用五支试管稀释一例血清样本。
在第一支试管中加入2.3毫升的0.9%氯化钠溶液,在第三、四、五支试管中加入0.5毫升的0.9%氯化钠溶液,第二支试管中则不需要加入。
再利用1毫升的吸管将待检测的血清样本取0.2毫升混入至第一支试管中,并确保血清和0.9%氯化钠溶液充分混合。
确定试管中样本已经充分混合后再利用吸管将第一支试管中的溶液分别吸取0.5毫升加入至第二支和第三支试管中,当第三支试管中样本充分混合后,再次利用吸管将0.5毫升样本转移至第四支试管中,最后将第四支试管中的0.5ml溶液转移至第五支试管后进行均匀混合。
此时从第二支试管至第五支试管的稀释度为,8%、4%、2%、1%。
完成血清样本的稀释后再将0.5毫升的抗原试剂加入其中。
此时对试管内样本进行观察,其稀释度分为别4%、2%、1%、0.5%。
并同时准备对照观察所需要的比浊管,将所有待使用的比浊管、试验管进行震荡后将所有血清样本和制备后的设备放入37℃的温箱内,放置时间控制在22小时,取出后将其在常温环境中放置两个小时,最后将比浊管当前的状态为依据进行判断。
虎红平板凝集实验之欧阳术创编
虎红平板凝集试验(RBPT)检测布鲁氏菌病的原理和办法由于布鲁氏菌培养的营养条件苛刻并且时间长,所以布鲁氏菌病的诊断以血清学诊断为主。
其原理主要是根据相应抗原抗体可以在体外产生特异性结合并呈现可见反响,用已知抗原(或抗体)检测体液中未知的抗体(或抗原)。
虎红平板凝集试验(RBPT)灵敏度高,价格廉价,操纵便利,检测快速,适于群体布鲁氏菌病的普查。
在国际贸易中是牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验,在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。
检测布鲁氏菌病所用的虎红平板凝集抗原是用抗原性良好的布鲁氏菌菌株经培养,灭活,离心收集菌体用虎红染料染色后,悬浮于乳酸缓冲液中制备而成。
试验原理:虎红平板凝集试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。
由于所用的抗原是酸性(PH3.63.9)带色的抗原,该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是IgG类,因此提高了反响的特异性。
虎红平板凝集试验具体办法如下:一、资料准备1、虎红平板凝集抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供,按说明书使用。
2、被检血清应新鲜,无明显卵白凝块,无溶血和无败北气味。
3、洁净的玻片或玻璃板,其上划分红4cm2的方格。
4、吸管或移液器,适于滴加0.03mL液体。
5、牙签、混合棒或火柴杆,供搅拌用。
二、操纵办法1、实验前,应将血清和抗原在室温放置3060min。
2、将玻璃板上各格标识表记标帜被检血清号,然后加相应被检血清0.03mL。
3、在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原0.03mL。
4、用牙签类小棒搅动血清和抗原,使之充分混合,在5分钟内观察结果。
5、每次试验应设阴性血清、阳性血清对比。
三、结果判定1、在阴、阳性血清对比成立的条件下,方可对被检血清进行判定。
2、受检血清在4min内呈现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+),无凝集现象,呈均匀粉红色者判为阴性()。
四、办法评价1、虎红平板凝集试验检测布鲁氏菌病,办法简便、快速、容易操纵,适于基层年夜面积检疫;2、该办法敏感性较好,检查牛的阳性率稍高于绵羊、山羊。
虎红平板凝集实验之欧阳语创编
虎红平板凝集试验(RBPT)检测布鲁氏菌病的原理和办法由于布鲁氏菌培养的营养条件苛刻并且时间长,所以布鲁氏菌病的诊断以血清学诊断为主。
其原理主要是根据相应抗原抗体可以在体外产生特异性结合并呈现可见反响,用已知抗原(或抗体)检测体液中未知的抗体(或抗原)。
虎红平板凝集试验(RBPT)灵敏度高,价格廉价,操纵便利,检测快速,适于群体布鲁氏菌病的普查。
在国际贸易中是牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验,在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。
检测布鲁氏菌病所用的虎红平板凝集抗原是用抗原性良好的布鲁氏菌菌株经培养,灭活,离心收集菌体用虎红染料染色后,悬浮于乳酸缓冲液中制备而成。
试验原理:虎红平板凝集试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。
由于所用的抗原是酸性(PH3.63.9)带色的抗原,该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是IgG类,因此提高了反响的特异性。
虎红平板凝集试验具体办法如下:一、资料准备1、虎红平板凝集抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供,按说明书使用。
2、被检血清应新鲜,无明显卵白凝块,无溶血和无败北气味。
3、洁净的玻片或玻璃板,其上划分红4cm2的方格。
4、吸管或移液器,适于滴加0.03mL液体。
5、牙签、混合棒或火柴杆,供搅拌用。
二、操纵办法1、实验前,应将血清和抗原在室温放置3060min。
2、将玻璃板上各格标识表记标帜被检血清号,然后加相应被检血清0.03mL。
3、在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原0.03mL。
4、用牙签类小棒搅动血清和抗原,使之充分混合,在5分钟内观察结果。
5、每次试验应设阴性血清、阳性血清对比。
三、结果判定1、在阴、阳性血清对比成立的条件下,方可对被检血清进行判定。
2、受检血清在4min内呈现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+),无凝集现象,呈均匀粉红色者判为阴性()。
四、办法评价1、虎红平板凝集试验检测布鲁氏菌病,办法简便、快速、容易操纵,适于基层年夜面积检疫;2、该办法敏感性较好,检查牛的阳性率稍高于绵羊、山羊。
虎红平板凝集试验原理
虎红平板凝集试验原理
虎红平板凝集试验是一种常用的微生物学检测方法,主要用于检测血清中的抗体和抗原。
该试验原理基于抗原与抗体结合后形成凝集物的现象,通过观察凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。
试验步骤:
1. 准备试剂和样品:将需要检测的抗原或抗体样品与相应的抗原或抗体试剂混合。
2. 在平板上滴加混合液:将混合液滴在准备好的平板上,通常是在平板上画出一条直线,然后在直线上滴加混合液。
3. 观察凝集程度:在一定时间内观察滴加的混合液是否出现凝集现象,凝集程度越明显,说明抗原与抗体结合的程度越高。
4. 结果判断:根据凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。
该试验的原理是基于抗原与抗体结合后形成凝集物的现象。
抗原是一种能够引起免疫反应的物质,通常是一种蛋白质或多糖体。
抗体是一种能够识别并结合抗原的蛋白质,通常由免疫细胞产生。
在试验中,当抗原与抗体结合时,它们会形成一个复合物,这个复
合物会在液体中形成凝集物。
凝集程度越明显,说明抗原与抗体结合的程度越高。
通过观察凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。
虎红平板凝集试验是一种简单、快速、经济的检测方法,广泛应用于临床诊断、疫苗研究和生物制品质量控制等领域。
但是,该试验也存在一些局限性,例如对于某些抗原或抗体的检测不敏感,需要结合其他检测方法进行综合分析。
虎红平板凝集试验是一种重要的微生物学检测方法,其原理基于抗原与抗体结合后形成凝集物的现象。
该试验具有简单、快速、经济等优点,但也存在一些局限性,需要结合其他检测方法进行综合分析。