布病虎红平板凝集实验操作规程
虎红平板凝集试验
虎红平板凝集试验文章目录*一、虎红平板凝集试验的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、虎红平板凝集试验的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、虎红平板凝集试验的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、虎红平板凝集试验的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、虎红平板凝集试验的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应虎红平板凝集试验的基本信息1、定义虎红平板凝集试验是用来诊断布氏杆菌病。
布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的人畜共患的急、慢性传染病。
因接触病畜或食用受染牛奶或奶制品而感染。
潜伏期1-3周,临床特点是缓慢起病,长期发热、多汗、虚弱、全身痛和关节痛,急性期症状多在3-6月内消退。
本病临床表现变化多端,就个别病人而言,其临床表现可以很简便,仅表现为局部脓肿,或很复杂而表现为几个脏器和系统同时受累。
羊型和猪型布鲁菌病大多较重,牛型的症状较轻,部分病例可以不发热。
国内以羊型布病最为多见,未经治疗者的自然病程为3～6个月(平均4个月),但可短仅1个月或长达数年以上。
其病程一般可为急性期和慢性期,牛型的急性期常不明显。
潜伏期7～60天,一般为2～3周,少数患者在感染后数月或1年以上发病。
实验室中受染者大多于10～50天内发病。
人类布鲁氏菌病可分为亚临床感染、急性和亚急性、慢性感染、局限性和复发感染。
2、专科分类传染病检查3、检查分类病原微生物检查4、适用性别男女均适用5、是否空腹非空腹虎红平板凝集试验的正常值和临床意义1、正常值阴性2、临床意义异常结果:阳性(50%)凝集:诊断布氏杆菌病符合率为95.92%。
需检测人群:感染,常发热,多汗,虚弱,全身痛者。
虎红平板凝集试验的检查过程及注意事项1、检查过程取被检血清0.03ml与抗原0.03ml相混合,于4分钟内观察结果,凡出现“+”以上反应者均为阳性。
对出现阳性反应的动物须进一步作补体结合试验, 或其他辅助诊断试验。
家畜布鲁氏菌病血清学平板试验(PAT)
家畜布鲁氏菌病血清学平板试验（PAT）一、应备有下列材料：1.受检血清：受检血清必须新鲜,无溶血现象、腐败现象、气味。
2.在实验前血清必须置于温室中，使其达到20℃左右。
3.抗原：由兽医生物药品厂生产供应。
本抗原由加热杀死的布鲁氏菌菌体经染色制备而成的淡蓝色悬浮液。
抗原本身出现凝集者应废弃。
使用前应充分振荡，并使其温度达到20℃左右。
4.阴、阳性血清：由兽医生物药品厂生产供应，本方法所用的阴、阳性血清与试管凝集试验法相同。
二、操作方法：1.备一方形洁净的玻璃板：划成25个方格，横数5格，纵数5格，每格四平方公分，第一列各格写下血清号码。
2.用0.2毫升灭菌吸管按下列剂量加受检血清于任何一行（横格）的各格中：第一格0.08毫升，第二格0.04毫升，第三格0.02毫升，第四格0.01毫升。
（如下表）血清号第一格第二格第三格第四格血清量（毫升）1 0.08 0.04 0.02 0.012 0.08 0.04 0.02 0.013 0.08 0.04 0.02 0.014 0.08 0.04 0.02 0.01由于本试验所需血清量较少，因此，在操作过程中要求严格，应尽可能减少误差，最好滴出血清前用滤纸片擦去吸管表面沾附的血清。
3.加平板反应抗原原液0.03毫升于上述各血清量中，并用牙签或细铁丝混匀，使抗原和血清推开，面积直径约2—3公分的圆形。
由血清量最少的一格（即第四格）混起，每份血清用一根牙签，用过的牙签要放固定容器中，工作完毕后集中烧毁。
若用细铁丝作混合，每份血清混匀后应用酒精棉花擦净，然后再作另一份血清的混合。
4.混合完毕，将玻璃板置于酒精灯火焰或凝集反应箱上，均匀加温，使达到30℃左右，并轻轻摇动玻板，使血清与抗原混合液呈缓慢的旋转运动，以保证充分混合。
5—8分钟内记录反应结果。
5.每次试验用1—2份已知阴性血清和1—2份阳性血清作平板凝集反应，以资对照。
6.按下列标准用加号记录反应强度“＃”出现大的凝集片或小的颗粒物，液体完全透明，即100%凝集。
布鲁氏菌抗体检测原始记录
嘉祥县疾病预防控制中心
布鲁氏菌抗体检测原始记录
编号：JXCDC /JL-146 共页第页
样品编号样品种类血清
检测项目布鲁氏菌抗体检测检测依据布病诊断标准附录WS 269-2007 试剂厂家试剂批号
设备名称生物安全柜、电热恒温培养箱试剂效期
一、虎红平板凝集试验（RBPT）：
取0.03ml被检血清，滴于洁净玻片上，然后加入虎红平板抗原0.03ml，混匀，在5分钟内判断结果。
二、试管凝集试验（SAT）：
1、取被检血清0.08ml加入第一管0.92ml的生理盐水内，混匀后，取0.5ml加入第二管中（含0.5ml生理盐水）作1:1稀释，以后各管以此类推，后一管弃去0.5ml。
血清稀释度依次为1:12.5，1:25，1:50，1:100，1:200，1:400，1:800。
2将稀释10倍的布氏菌菌液分别加入各血清管管内，每管加入0.5ml，混匀。
放37℃温箱中22小时观察结果。
最后血清的稀释度为1:25，1:50，1:100，1:200，1:400，1:800，1:1600。
3.菌液凝集程度的判断与同时配制的比浊管透明程度为参照，比浊管的配制方法见表1。
三、布鲁氏菌抗体检测结果：
样品编号姓名RBPT SAT滴度：1:25 1:50 1:100 1:200
检测起至时间年月日时至月日时
检测人：复核人：。
虎红平板凝集试验原理
虎红平板凝集试验原理
虎红平板凝集试验是一种常用的微生物学检测方法，主要用于检测血清中的抗体和抗原。
该试验原理基于抗原与抗体结合后形成凝集物的现象，通过观察凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。
试验步骤：
1. 准备试剂和样品：将需要检测的抗原或抗体样品与相应的抗原或抗体试剂混合。
2. 在平板上滴加混合液：将混合液滴在准备好的平板上，通常是在平板上画出一条直线，然后在直线上滴加混合液。
3. 观察凝集程度：在一定时间内观察滴加的混合液是否出现凝集现象，凝集程度越明显，说明抗原与抗体结合的程度越高。
4. 结果判断：根据凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。
该试验的原理是基于抗原与抗体结合后形成凝集物的现象。
抗原是一种能够引起免疫反应的物质，通常是一种蛋白质或多糖体。
抗体是一种能够识别并结合抗原的蛋白质，通常由免疫细胞产生。
在试验中，当抗原与抗体结合时，它们会形成一个复合物，这个复
合物会在液体中形成凝集物。
凝集程度越明显，说明抗原与抗体结合的程度越高。
通过观察凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。
虎红平板凝集试验是一种简单、快速、经济的检测方法，广泛应用于临床诊断、疫苗研究和生物制品质量控制等领域。
但是，该试验也存在一些局限性，例如对于某些抗原或抗体的检测不敏感，需要结合其他检测方法进行综合分析。
虎红平板凝集试验是一种重要的微生物学检测方法，其原理基于抗原与抗体结合后形成凝集物的现象。
该试验具有简单、快速、经济等优点，但也存在一些局限性，需要结合其他检测方法进行综合分析。
布氏杆菌病虎红平板凝集操作流程
布氏杆菌病虎红平板凝集实验操作流程材料与试剂以布氏杆菌病平板凝集反应为例。
1．玻璃板、刻度吸管等。
2．布氏杆菌平板凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清。
操作方法1．取洁净玻板一块，用玻璃铅笔划成方格，并注明待检血清号码。
2．取０.２ml吸管分别吸取0.08ml、0.04ml、0.02ml和0.01ml各放入一方格内。
大规模检验时，可只做２个血清量，大动物用0.04ml和0.02ml，中小动物用0.08ml和0.04ml。
每检一个样品需换一只吸管。
3．每格内加布氏杆菌平板凝集抗原0.03ml，滴在血清附近，而不要与血清接触。
用牙签（或火柴杆）自血清量最小的一格起，将血清与抗原混匀，每份血清用一根牙签。
4．混合完毕，将玻板置凝集反应箱上均匀加温或采用别的办法适当加温，使温度达到３０℃左右。
3min～5min内记录结果。
结果判定＋＋＋＋：出现大的凝集块，液体完全清亮透明，即100％凝集。
＋＋＋：有明显的凝集片，液体几乎完全透明，即75％凝集。
＋＋：有可见的凝集片，液体不甚透明，即50％凝集。
＋：液体混浊，有小的颗粒状物，即25％的凝集。
－：液体均匀混浊，即不凝集。
以出现＋＋凝集的血清最高稀释倍数作为该份血清的凝集价。
大动物（牛、马、骆驼等）以0.02ml出现凝集价判为布氏杆菌病血清阳性，0.04ml出现凝集价判为可疑。
中小动物（猪、山羊、绵羊等）以0.04ml出现凝集价判为该份血清为布氏杆菌病阳性血清，0.08ml出现凝集价判为可疑。
注意事项1．每次试验必须以标准阳性血清和标准阴性血清进行对照。
2．加抗原前必须摇匀。
3．反应温度最好保证在30℃左右，3min～5min内判定。
如反应温度偏低，可适当延长判读时间。
4．如用两个血清量作试验，任何一个血清量出现凝集反应时，则需要用四个血清量重检。
5．平板凝集反应最好是用于初筛，如出现阳性或可疑反应，再用试管凝集反应进行复检，以定性。
6．平板凝集反应与试管凝集反应的关系。
布鲁氏菌试管凝集试验
“++++”完全凝集，上清液100%清亮 “+++” 几乎完全凝集，上清液75%清亮 “++”显著凝集，上清液50%清亮 “+” 微量凝集，液体25%清亮 “-” 无凝集，液体不清亮 确定每份血清滴度是以出现“++”及以上的
凝集现象的最高血清稀释度
整理课件
诊断标准
没有进行过菌苗接种的人、畜血清试验的标准是 ：
人、牛、马、鹿、骆驼等大家畜血清为1：100( ++)及以上者为阳性，1：50(++)为可疑。
猪、羊(绵羊、山羊)、犬等小家畜血清在1： 50(++)及以上者为阳性，1：25(++)为可疑。
对可疑反应的人和动物应在10-25天内重复检查， 以便进一步确定诊断。
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影响试验结果的因素及注意事项
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器材与试剂
虎红平板凝集抗原、被检血清、清洁脱脂 玻片或有凹形孔的玻片、0.1ml吸管或微量 加样器、混合棒或牙签
整理课件
试验方法
在玻片上加0.03ml被检血清，然后加入虎 红平板抗原0.03ml，充分混匀，在5分钟内 观察结果。
整理课件
(四) 结果判定
有二种方法，第一种是，出现可见的凝集反应就判为阳 性；
整理课件
作凝集反应时，有个别血清会出现前带现象，即 稀释度低的血清管内(或血清量多的格)不发生凝 集，而稀释度高的管内(或血清量少的格)出现凝 集，这叫做前带现象。如果某血清在平板凝集反 应中出现了前带现象，那么做试管反应时应多做 几个管，多采用几个稀释度。
氯化钠的含量增高对血清反应有明显的影响，盐 的浓度越高，反应的敏感性提高，因此在兽医界 为了克服凝集反应中的阻抑抗体的干扰，对羊血 清采用高渗盐水作凝集反应，一般浓度在 10~12%，切记一般人血清不能用高渗盐水。
布病操作规程
布氏杆菌病操作规程
一、虎红平板凝集试验(RBPT)：
取0.03ml备检血清，滴于洁净玻片上，然后加入虎红平板抗原0.03ml，混匀；在5 min内判定结果。
用毕的玻片一并放入利器盒内84处理。
二、试管凝集试验（SAT）：
1、取被检血清0.08ml加入第一管0.92ml生理盐水内，混合后取0.5ml 加入第二管中（含0.5ml生理盐水）作1:1稀释，以后各管类推,后一管弃去0.5ml。
血清稀释度依次为1:12.5，1:25，1:50，1:100，1:200，1:400，1:800。
2、将稀释10倍的布氏菌菌液分别加入各血清管内，每管加0.5ml，混匀。
放37℃温箱中18-24 h观察结果。
最后血清稀释度为1:25，1:50，1:100，1:200,1:400，1:800，1:1600。
3、菌液凝集程度的判定以同时配制的比浊管透明程度为参照，比浊管的配制方法见表1。
表1：比浊管配制
*稀释菌液是将10倍稀释的菌液再作1：1稀释。
管号稀释菌液*（ml）生理盐水（ml）透明程度
1 0 1.00 ++++
2 0.25 0.75 +++
3 0.50 0.50 ++
4 0.7
5 0.25 +
5 1.00 0 —。
布鲁氏菌虎红平板凝集试验
布鲁氏菌虎红平板凝集试验
检验方法：依据GB/T18646-2002
1、材料准备
1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。
1.2受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。
1.3洁净的玻璃板，其上划分成4cm2的方格。
1.4吸管或分装器，适于滴加0.03 ml。
1.5牙签或火柴杆，供搅拌用。
1.6观察结果照明用光源
2、操作方法
2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应血清0.03ml。
2.2 在受检血清旁滴加抗原0.03ml。
2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。
2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。
3、判定
3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。
3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性（+），无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性（-）。
附：
阴性对照：
阳性对照：
品控中心
2013-4-22
操作流程图
为了便于观
察结果，辅
以光源照明。
牛羊布病的检测技术
牛羊布病平板凝集试验一、试验原理：该试验又称为板式孟加拉红平板凝集试验，由于所用的抗原是酸性（PH3.6--3.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgMl类抗体的凝集活性，检查出的抗体是IgG类，因此提高了该项反应的特异性。
血清的制备一、血清制备将血液采集与无抗凝的离心管中，温室静置30分钟，3000r/min l离心5--10min,吸出血清（切勿吸出红细胞成分），分装备用。
要保存的血清则分离后装入离心管与-- 2 0 ℃的冰箱内保存。
二、虎平平板凝集试验（RBPT）将玻璃板清洗干净，划成50个方格（横10x纵5），每格4cm X 4 c m.每一格下再划1cm宽的小格，各格标上被检血清号，每一横行做两份待检血清。
在各方格中加入相应的被检血清 3 0 ul,,然后再其旁加入30ul虎红平板凝集抗原，用牙签搅动被检血清和抗原使之均匀混合，形成直径约2cm的液区。
轻微摇动，置室温条件下（2 0 ℃），4min内观察结果，同时设阳性血清和阳性血清对照。
方法二、在载玻片上加抗原30UL，加入30UL被检测血清，混匀。
在5min内观察结果，轻摇载玻片，出现凝集颗粒为阳性，否则为阴性。
三、结果观察当阴性血清对照不出现凝集（—），阳性血清对照出现凝集（+），方可对代检血清进行判定。
待检血清在4min,内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性（+），无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性（—）四、注意RBPT 操作简单、反应迅速，且对试验条件要求不高，但特异性不高，易受试验温度和凝集时间等因素的影响，不易准确判定结果。
应用此法所得的阳性检出率为70%，较SAT(试管凝集试验) ELISA（酶联免疫吸附试验）低。
该方法主要用于初筛，对其阳性者，还必须经SAT检测为阳性后才能最终判定为阳性。
32.14.1-布病检测原始记录
成都市新都区疾病预防控制中心布病检测原始记录一、初筛方法：虎红平板凝集试验(RBPT)1.1操作：在玻片上加0.03mL被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03mL，摇匀或用牙签混匀，在5min内判定结果。
1.2结果判定：判定凝集程度(－至＋＋＋＋)同平板凝集反应亦可只分为(＋)阳性，(－)阴性两类。
二、确证实验：试管凝集试验(SAT)2.1操作方法：被检血清的稀释：在一般情况下，每份血清用5支小试管(口径8～10mm)，第一管加入2.3mL 石碳酸生理盐水，第二试管不加，第三、四、五管各加0.5mL，用1mL吸管吸取被检血清0.2mL，加入第一管中，混匀。
混匀后，以该吸管吸取第一管中血清加入第二管和第三管各0.5mL，再从第一管吸出0.5mL 丢弃，剩1mL。
以该吸管将第三管混匀，并吸取0.5mL加入第四管，混匀。
再从第四管吸取0.5mL，加入第五管，混匀，吸取0.5mL，弃去。
如此稀释后，从第二管到第五管血清稀释度分别为1∶12.5，1∶25，1∶50和1∶100。
加入抗原：先以0.5％石碳酸生理盐水将抗原原液作适当稀释(一般是作1∶10稀释)。
稀释后的抗原加入各稀释的血清管(第一管不加，作为血清对照)，每管加0.5mL，混匀。
加入抗原后，每管总量1mL，血清稀释度从第二管至第五管分别为1∶25，1∶50，1∶100和1∶200。
对照：阴性血清对照，血清稀释后加抗原(与被检血清对照相似)。
阳性血清对照，其血清稀释到原有滴度，再加抗原，抗原对照，适当稀释的抗原加石碳酸盐水。
判定比浊管制备：每次试验须配制比浊管作为判定的依据。
配制方法是：取本次试验用的抗原稀释液5～10mL，加入等量的0.5％碳酸盐水作倍比稀释。
全部试验管，对照管及比浊管充分振荡后置37℃温箱中20～22h，取出后放室温2h，然后以比浊管为标准判定结果。
2.2记录结果：根据各管中上层液体的清亮度记录结果。
特别是50％清亮度(＋＋)对判定结果关系较大，一定要与比浊管对比判定。
凝集试验
2.3 胰蛋白胨琼脂培养基：
胰蛋白胨20克
氯化钠 蒸馏水
葡萄糖
5克
10克
20克
琼脂
1000毫升
先把琼脂放在蒸馏水中加热熔化，然后将上 述其余各成分加入熔化，用纱布脱脂棉过滤， 调pH6.8 ~ 7.0，分装，13磅高压30分钟备用。
二、防止与个人防护 1 防止经皮肤感染、粘膜感染和呼吸道 感染
结果分析：共检样品多少,其中阳性多少,可疑多少,阴性多少 备 注（使用方法）:使用方法,使用试剂厂家及批号 检验人员： 复核人： 年 月 日
试管凝集反应试验原始结果记录表
稀 释 度 编号 1 2 3 1 2 3 阳性 对照 阴性 对照
1:50
1:100
1:200
1:400
4 5
# -
# -
# -
# -
布鲁氏菌病试管凝集反应试验（牛）
1 血清稀 释度
0.5% 石 炭酸生 理盐水 被检血 清或阳 阴性血 清对照 总 量 加抗原 （1：20）
2 1:100
3 1:200
4 1:400
5 1:800
-
n
1:50
1.2
0.5
0.75
0.5
0.5
0.5
0.5
弃去 0.5
0.05
弃去 0.25
0.5
0.5
0.5
3.2.3.8 将0.5ml 20倍稀释的抗原加入已 稀释好的各血清管中，并振摇均匀，羊 和猪的血清稀释则依次变为1:25 ; 1:50 ; 1:100和1:200，牛、马和骆驼的血清稀释 度则依次变为1:50 ; 1:100；1:200和1:400。 大规模检疫时也可只用2个稀释度，即牛、 马、骆驼用1:50 和1:100，猪、山羊、绵 羊和狗用1:25 和1:50 。
布病试管凝集操作规程
布病试管凝集操作规程1. 引言布病（Brucellosis）是一种由布鲁氏菌（Brucella）引起的传染病，可感染多种动物和人类，并对健康和兽产业产生严重威胁。
试管凝集法是一种常用的布病诊断方法，本文档旨在详细说明布病试管凝集操作规程。
2. 实验材料准备•布氏培养基•布鲁氏菌抗原悬浮液•10% NaCl溶液•洗涤缓冲液（磷酸盐缓冲液pH 7.2）•定标浓度方案3. 实验步骤步骤1：预处理1.1 用洗涤缓冲液稀释布鲁氏菌抗原悬浮液，制备所需浓度的抗原工作悬液。
步骤2：试验操作2.1 取一片琼脂糖布氏培养基，用标准线将试管的高度标定为15mm。
2.2 取试管架，中央孔位套橡胶塞。
2.3 用稀释后的布鲁氏菌抗原悬液和10% NaCl溶液分别配制试验管液和对照液，并调整pH至7.2。
2.4 取一支滴管，带好吸液头涂布鲁氏菌抗原试验管液，并加于试管的15mm标注线上，使试管内液面高于标线，形成一个凸起的液面。
2.5 滴加对照液至试管液面下降至标注线，使液面变平。
2.6 反复称数量出20μL待测血清于对控液上。
直立试管，于10分钟内，转匀试管中液并观察结果。
2.7 观察测得的凝集度，根据凝集度判定试品结果。
4. 计算和结果判定4.1 凝集度计算按照定标浓度方案中所规定的浓度和凝集度的对照表，根据试验结果判定凝集度。
4.2 结果判定根据凝集度和定标浓度方案中的凝集度判定表，确定血清样品中是否存在布鲁氏菌抗体。
5. 结论布病试管凝集操作规程提供了一种用于布病诊断的常用方法。
通过本规程的实施，可准确判断血清样品中是否存在布鲁氏菌抗体，对于布病的早期诊断和治疗具有重要意义。
6. 参考文献（此处列出所引用的参考文献）以上为布病试管凝集操作规程的详细描述，按照操作步骤进行实验，可以获得准确的结果，为布病的诊断和治疗提供参考。
追随着医学技术的进步与发展，布病的诊断方法也在不断完善，我们相信通过不断的研究和实践，将能够为人类解决布病带来的问题。
基层兽医实验室动物布鲁氏菌病凝集
现代农业科技2023年第1期动物科学后涂成直径2cm的圆形,4min后观察结果。
阴性和阳性对照血清的操作方法与待检血清操作方法相同。
只有阴性和阳性对照血清都成立时,试验才可以进行。
虎红平板凝集试验流程简单、易于操作、反应时间短且敏感性比较高,是2018年版国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T18646—2018)推荐的初筛方法,使用效果较好。
3.2试管凝集试验微量法该方法是在U型反应板上取一列连续的4孔为一个样品检测用孔,在第1孔加入184μL稀释液,第2、3、4孔加入100μL稀释液。
在第1孔中加入待检测的羊血清16μL,混匀后取100μL至第2孔,倍比稀释至第4孔后弃去100μL,此时第1~4孔血清的稀释倍数分别为12.5、25.0、50.0、100.0倍。
每孔加入工作浓度的抗原100μL,此时第1~4孔血清的稀释倍数增加1倍,分别为25、50、100、200倍,置37℃温箱中作用24h后取出观察结果。
在每一批次试验样品的检测中应做阴性对照、阳性对照、抗原对照和比浊管,以判断试验是否成立和方便结果观察。
检测牛血清时第1孔加入192μL稀释液和8μL待检血清,第1~4孔的血清稀释倍数增加1倍,其他和检测羊血清操作一致。
试管凝集试验微量法是把反应的试管换成U型板的小孔,反应体系从1mL减少至200μL,抗原用量也减少至原用量的20%。
在血清稀释时可以使用多道移液器,可操作性好,同时可大幅度提高检测效率。
试管凝集试验微量法在一块U 型板多次加样且与一般酶标板加样顺序不同,容易在加样中出现错误;其试验结果要在一块U型板反应观察,当结果变化较大时不易观察,容易出现结果误判现象。
3.3试管凝集试验常量法该方法是用4根试管来检测一个样品,第1根试管中加入920μL稀释液,第2~4根试管加入500μL稀释液。
第1根试管中加入待检测羊或猪血清80μL,混匀后取500μL至第2根试管,倍比稀释至第4根试管后弃去500μL。
动物布鲁氏菌病诊断技术 GB
动物布鲁氏菌病诊断技术GB/T18646—20021 范围本标准规定了动物布鲁氏菌病的诊断技术。
本标准规定的虎红平板凝集试验、乳牛全乳环状试验适用于家畜布病田间筛选试验和乳牛场布病的监测及诊断泌乳母牛布病的初筛试验；试管凝集试验和补体结合试验适用于诊断羊种、牛种和猪种布病感染的家畜。
本标准规定的试管凝集试验不适用于犬种和绵羊副睾种布病感染家畜的检疫。
2 虎红平板凝集试验2.1 材料准备2.1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。
2.1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。
2.1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4cm2的方格。
2.1.4 吸管或分装器，适于滴加0.03mL。
2.1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。
2.2 操作方法2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应血清0.03mL。
2.2.2 在受检血清旁滴加抗原0.03mL。
2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。
2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。
2.3 判定2.3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。
2.3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(—)。
3 乳牛布病全乳环状试验3.1 材料准备3.1.1 布病全乳环状抗原由制标单位提供，按说明书使用。
3.1.2 乳样3.1.2.1 受检乳样须为新鲜的全乳。
3.1.2.2 采乳样时应将母畜的乳房用温水洗净、擦干，然后将乳液挤入洁净的器皿中。
3.1.2.3 采集的乳样夏季时应于当日内检查；保存于2℃时，7d内仍可使用。
3.2 操作方法3.2.1 取乳样lml，加于灭菌凝集试验管内。
3.2.2 取充分振荡混合均匀的全乳环状抗原1滴(约50ul)加人乳样中充分混匀。
3.2.3 置37℃一38℃水浴中60min。
3.2.4 加温后取出试管勿使振荡，立即进行判定。
布鲁氏菌试管凝集试验
操作步骤
加入抗原:先以0.5%石碳酸生理盐水将抗原原液做 适当稀释（一般是作1:10稀释）,稀释后的抗原加 入各稀释的血清管（第一管不加，作为血清对 照）,每管0.5毫升,混匀。加入抗原后，第二管至 第五管每管总量为1毫升，从第二管起血清稀释度 分别为1:25 1:50 1:100 1:200，从第一管再吸出 0.5毫升，剩1毫升。 对照管的制作: 抗原对照（适当稀释的抗原加石碳酸盐水） 被检血清对照 阴性对照（阴性血清稀释后加抗原） 阳性对照（阳性血清稀释到原有滴度加抗原）
评价
此法简便、快速、容易操作，适于基层大面积检 疫； 此法有一定敏感性，检查牛的阳性率稍高于绵羊、 山羊。 因为在酸性环境下IgM活性受抑，该法主要是检 查IgG类凝集抗体，所以特异性较好，与补体结合 试验、二巯基乙醇（2-ME）试验和抗球蛋白 （Coomb’s0）试验有较高的吻合率。 该法受制备抗原时条件影响较大，所以每批制备 抗原应予以检查、标化方可应用。
然后将试验管和对照管充分 混匀后，放于37℃温箱中 20-22小时后取出，在室温 下放置2个小时，以比浊管 为标准判定结果。
结果的判定
判定比浊管的制备:每次试验须配制比浊
管作为判定的标准依据. 配制方法是:取本次试验用的抗原稀释液 （一般1:10）5-10毫升，加入等量的 0.5%石碳酸生理盐水作倍比稀释，按下 表配制比浊管 比浊管的配制
抗原抗体 结合的表面性
抗原抗体的结合仅仅是分子表面的结合， 虽然两者的结合相当稳定，但结合后的抗 原抗体，其本身的结构，生物学活性均未 遭到破坏,并且在一定条件下可解离.即抗原 抗体的结合是可逆的,所以,解离抗原抗体复 合物的方法可用于 提取,纯化抗原或抗体.
布鲁氏菌试管凝集试验
操作步骤
加入抗原:先以0.5%石碳酸生理盐水将抗原原液做 适当稀释（一般是作1:10稀释）,稀释后的抗原加 入各稀释的血清管（第一管不加，作为血清对 照）,每管0.5毫升,混匀。加入抗原后，第二管至 第五管每管总量为1毫升，从第二管起血清稀释度 分别为1:25 1:50 1:100 1:200，从第一管再吸出 0.5毫升，剩1毫升。 对照管的制作: 抗原对照（适当稀释的抗原加石碳酸盐水） 被检血清对照 阴性对照（阴性血清稀释后加抗原） 阳性对照（阳性血清稀释到原有滴度加抗原）
影响试验结果的因素及注意染，存放血清处 温度不能超过10℃，采血后应于3—4日内进行检 查，因放置时间过长可能会导致血清效价降低。 遵守操作规程：所用的器材要清洁、干燥，试剂 的加量一定要正确，放入温箱的温度和时间都要 按要求，否则都影响结果。每份血清和抗原均要 有对照。 高渗盐水作凝集反应，一般浓度在10~12%，一 般切记人血清不能用高渗盐水。
试管凝集反应标准比浊管配制
管号 1 2 3 4 5
抗原稀释液（ml） 生理盐水（ml） 透明度 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00 100% 75% 50% 25% 0%
标记 ++++ +++ ++ ＋ －
结果记录
血清学检查既可协助早期诊断，还可
确定是否复发或重复感染。 感染1-2周后，患者血清中出现IgM抗 体，可以用凝集试验或抗人球蛋白试 验检测． 感染３周后，患者血清中出现IgG抗体， 可以用补体结合试验，荧光抗体或 ELISA检测．
虎红平板的凝集反应（RBPT）
虎红平板凝集法
你知道吗？在动物医学界，有一种听起来像是从武侠小说里走出来的神秘技法——虎红平板凝集法。
乍一听，你是不是以为这是某个武林高手用来凝聚内力、隔空打牛的绝技？嘿，别被名字给唬住了，它其实跟咱们兽医每天跟动物“斗智斗勇”的日常息息相关，而且，还特接地气！
想象一下，你正悠哉游哉地喝着茶，突然接到一个紧急电话：“喂，兽医大大，我家那头宝贝牛好像不对劲啊，眼睛红红的，是不是得了红眼病？”这时候，虎红平板凝集法就该闪亮登场了。
不过，别急，它不是直接给牛眼睛滴眼药水，而是用来检测一种叫做布鲁氏菌的坏家伙，这家伙可是能让牛羊们头疼不已的隐形杀手呢！
说到这虎红平板凝集法，操作起来那叫一个简单粗暴又不失技术含量。
咱们兽医得拿出两块小平板，一块涂上动物的血清，另一块呢，就滴上几滴神秘的虎红试剂。
然后，就像玩“对对碰”一样，把两块平板轻轻一碰，静待几分钟。
要是看到那些血清小点点开始变红、变大、聚成一堆，嘿，那就说明，有情况了！你家宝贝牛很可能已经跟布鲁氏菌“牵手成功”了。
这时候，你可别急着责怪你家牛：“你怎么这么不小心，跟这种坏东西玩到一起去了？”毕竟，在动物的世界里，它们可不懂什么细菌不细菌的。
咱们得赶紧采取措施，隔离治疗，防止病情扩散，让牛羊们都能健健康康地撒欢儿。
虎红平板凝集法，听起来玄乎，其实原理挺简单，就像咱们平时看手相、面相一样，只不过咱们兽医看的是动物的“血清相”。
当然啦，这可比看手相靠谱多了，毕竟，咱们可是拿着科学武器在战斗呢！
所以啊，下次听到“虎红平板凝集法”这个名字，别再脑补什么武林高手了，它可是咱们兽医界的一把“利剑”，专门用来对付那些让动物们头疼的病菌们。
怎么样，是不是觉得咱们兽医的工作也挺有意思，挺接地气的？。