布鲁氏菌虎红平板凝集试验

布病的检测方法

虎红平板凝集试验（RBPT）：实验原理：该试验又称为板式孟加拉红平板凝集实验。

由于所用的抗原是酸性（PH3.6—3.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性，检查出的抗体是IgG类，因此提高了该项反应的特异性。

器材与试剂：虎红平板凝集抗原、载玻片、移液器、枪头方法：在载玻片上加抗原30μl，加入30μl被检血清，混匀。

在5min内观察结果，轻摇载玻片，出现凝集颗粒为阳性，否则为阴性。

试管凝集试验（SAT）：实验原理：布鲁氏菌侵入机体后，会刺激机体产生特异性抗体，这种抗体可与相应的布氏菌抗原发生特异性结合，在电介质作用下，就会形成肉眼可见的凝集反应，也就是用已知抗原查未知抗体。

器材与试剂：布病试管凝集抗原、生理盐水、试管、移液管、移液器、小烧杯、枪头、试管架方法：1.准备试管：取9支试管放在试管架中编号。

1号管为血清对照管，2—8号为试验管，9号为抗原对照管。

2.血清稀释：1号管加入2.3ml生理盐水，2号不加，3号—9号各加入0.5ml生理盐水。

1号管加入0.2ml被检血清，混匀后各吸0.5ml加入2、3号管。

从3号开始做倍比稀释，8号吸0.5ml弃去。

3.加入抗原：10倍稀释抗原（用烧杯，1ml抗原9ml生理盐水），从2号开始每支加0.5ml稀释后抗原，从2号开始，血清被稀释浓度为1：25、1:50、1:100、1:200、1:400、1:800、1:16004.凝集试验标准比浊管的配制（判定透明程度的依据）：取5支试管，编号，取稀释后的抗原再做2倍稀释。

盐水(ml) 清亮度标记管号抗原稀释液(ml)1 0.00 1.00 100% ++++2 0.25 0.75 75% +++3 0.50 0.50 50% ++4 0.75 0.25 25% +5 1.00 0.00 0% —充分混匀，将所有试管放入温箱中37℃培养20—22小时取出，在室温下放置1—2小时后观察结果。

布氏菌病虎红平板凝集试验抗原新兽药证书

布氏菌病虎红平板凝集试验抗原新兽药证书一、概述布氏菌病是一种由布氏菌引起的家畜和野生动物传染病，也可传染给人类。

布氏菌病的传播对动物养殖业和食品安全造成了严重威胁，因此对布氏菌进行有效的检测和防控至关重要。

其中，虎红平板凝集试验是一种常用的血清学检测方法，对布氏菌病的诊断具有重要意义。

二、布氏菌病虎红平板凝集试验抗原1. 抗原来源布氏菌病虎红平板凝集试验抗原主要来源于已知含有布氏菌的动物血清，如牛、羊、猪等。

这些血清样本需要通过严格的筛选和处理，以确保抗原的纯度和稳定性。

2. 制备方法虎红平板凝集试验抗原的制备需要严格按照相关技术规范进行操作。

首先需要从携带布氏菌的动物中提取血清样本，然后通过离心、超滤等手段去除杂质和细菌。

经过适当的稀释和加工处理，最终得到用于虎红平板凝集试验的抗原制剂。

3. 抗原质量控制为了确保抗原的稳定性和活性，需要对抗原制剂进行严格的质量控制。

包括对抗原的存储条件、保存期限、抗原效价等指标进行监测和管理，以确保虎红平板凝集试验的准确性和可靠性。

三、新兽药证书1. 申请流程布氏菌病虎红平板凝集试验抗原作为兽药的一种，需要获得新兽药证书才能在市场上合法销售和使用。

申请新兽药证书需要遵循相关政策和法规，提交包括临床试验报告、生产工艺流程、质量控制方案等材料，并经过相关部门的审批和认证。

2. 证书标注一旦获得新兽药证书，抗原制剂需要在包装、说明书等相关资料上标注证书编号、有效期限等信息。

这些信息对药品的合法性和可追溯性具有重要意义，也为用户提供了使用保障。

3. 证书更新新兽药证书的有效期通常较短，一旦过期就需要重新申请并通过审批，获得更新证书。

抗原生产企业需要及时关注证书的有效期限，提前做好证书更新工作，以保障产品的合法生产和销售。

四、结论布氏菌病虎红平板凝集试验抗原的制备和管理对于布氏菌病的检测和防控具有重要意义。

严格控制抗原的质量和规范生产流程、及时申请和更新新兽药证书，是保障抗原生产质量和市场合法的关键步骤。

(整理)动物布鲁氏菌病诊断技术GB

动物布鲁氏菌病诊断技术GB/T18646—20021 范围本标准规定了动物布鲁氏菌病的诊断技术。

本标准规定的虎红平板凝集试验、乳牛全乳环状试验适用于家畜布病田间筛选试验和乳牛场布病的监测及诊断泌乳母牛布病的初筛试验；试管凝集试验和补体结合试验适用于诊断羊种、牛种和猪种布病感染的家畜。

本标准规定的试管凝集试验不适用于犬种和绵羊副睾种布病感染家畜的检疫。

2 虎红平板凝集试验2.1 材料准备2.1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。

2.1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。

2.1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4cm2的方格。

2.1.4 吸管或分装器，适于滴加0.03mL。

2.1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。

2.2 操作方法2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应血清0.03mL。

2.2.2 在受检血清旁滴加抗原0.03mL。

2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。

2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。

2.3 判定2.3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。

2.3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(—)。

3 乳牛布病全乳环状试验3.1 材料准备3.1.1 布病全乳环状抗原由制标单位提供，按说明书使用。

3.1.2 乳样3.1.2.1 受检乳样须为新鲜的全乳。

3.1.2.2 采乳样时应将母畜的乳房用温水洗净、擦干，然后将乳液挤入洁净的器皿中。

3.1.2.3 采集的乳样夏季时应于当日内检查；保存于2℃时，7d内仍可使用。

3.2 操作方法3.2.1 取乳样lml，加于灭菌凝集试验管内。

3.2.2 取充分振荡混合均匀的全乳环状抗原1滴(约50ul)加人乳样中充分混匀。

3.2.3 置37℃一38℃水浴中60min。

3.2.4 加温后取出试管勿使振荡，立即进行判定。

虎红平板凝集实验之欧阳语创编

虎红平板凝集试验（RBPT）检测布鲁氏菌病的原理和办法由于布鲁氏菌培养的营养条件苛刻并且时间长，所以布鲁氏菌病的诊断以血清学诊断为主。

其原理主要是根据相应抗原抗体可以在体外产生特异性结合并呈现可见反响，用已知抗原(或抗体)检测体液中未知的抗体(或抗原)。

虎红平板凝集试验（RBPT）灵敏度高，价格廉价，操纵便利，检测快速，适于群体布鲁氏菌病的普查。

在国际贸易中是牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验，在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。

检测布鲁氏菌病所用的虎红平板凝集抗原是用抗原性良好的布鲁氏菌菌株经培养，灭活，离心收集菌体用虎红染料染色后，悬浮于乳酸缓冲液中制备而成。

试验原理：虎红平板凝集试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。

由于所用的抗原是酸性（PH3.63.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是IgG类，因此提高了反响的特异性。

虎红平板凝集试验具体办法如下：一、资料准备1、虎红平板凝集抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。

2、被检血清应新鲜，无明显卵白凝块，无溶血和无败北气味。

3、洁净的玻片或玻璃板，其上划分红4cm2的方格。

4、吸管或移液器，适于滴加0.03mL液体。

5、牙签、混合棒或火柴杆，供搅拌用。

二、操纵办法1、实验前，应将血清和抗原在室温放置3060min。

2、将玻璃板上各格标识表记标帜被检血清号，然后加相应被检血清0.03mL。

3、在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原0.03mL。

4、用牙签类小棒搅动血清和抗原，使之充分混合，在5分钟内观察结果。

5、每次试验应设阴性血清、阳性血清对比。

三、结果判定1、在阴、阳性血清对比成立的条件下，方可对被检血清进行判定。

2、受检血清在4min内呈现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性()。

四、办法评价1、虎红平板凝集试验检测布鲁氏菌病，办法简便、快速、容易操纵，适于基层年夜面积检疫；2、该办法敏感性较好，检查牛的阳性率稍高于绵羊、山羊。

布鲁氏菌抗体检测原始记录

嘉祥县疾病预防控制中心
布鲁氏菌抗体检测原始记录
编号：JXCDC /JL-146 共页第页
样品编号样品种类血清
检测项目布鲁氏菌抗体检测检测依据布病诊断标准附录WS 269-2007 试剂厂家试剂批号
设备名称生物安全柜、电热恒温培养箱试剂效期
一、虎红平板凝集试验（RBPT）：
取0.03ml被检血清，滴于洁净玻片上，然后加入虎红平板抗原0.03ml，混匀，在5分钟内判断结果。

二、试管凝集试验（SAT）：
1、取被检血清0.08ml加入第一管0.92ml的生理盐水内，混匀后，取0.5ml加入第二管中（含0.5ml生理盐水）作1:1稀释，以后各管以此类推，后一管弃去0.5ml。

血清稀释度依次为1:12.5，1:25，1:50，1:100，1:200，1:400，1:800。

2将稀释10倍的布氏菌菌液分别加入各血清管管内，每管加入0.5ml，混匀。

放37℃温箱中22小时观察结果。

最后血清的稀释度为1:25，1:50，1:100，1:200，1:400，1:800，1:1600。

3.菌液凝集程度的判断与同时配制的比浊管透明程度为参照，比浊管的配制方法见表1。

三、布鲁氏菌抗体检测结果：
样品编号姓名RBPT SAT滴度：1:25 1:50 1:100 1:200
检测起至时间年月日时至月日时
检测人：复核人：。

布氏杆菌病虎红平板凝集操作流程

布氏杆菌病虎红平板凝集实验操作流程材料与试剂以布氏杆菌病平板凝集反应为例。

1．玻璃板、刻度吸管等。

2．布氏杆菌平板凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清。

操作方法1．取洁净玻板一块，用玻璃铅笔划成方格，并注明待检血清号码。

2．取０.２ml吸管分别吸取0.08ml、0.04ml、0.02ml和0.01ml各放入一方格内。

大规模检验时，可只做２个血清量，大动物用0.04ml和0.02ml，中小动物用0.08ml和0.04ml。

每检一个样品需换一只吸管。

3．每格内加布氏杆菌平板凝集抗原0.03ml，滴在血清附近，而不要与血清接触。

用牙签（或火柴杆）自血清量最小的一格起，将血清与抗原混匀，每份血清用一根牙签。

4．混合完毕，将玻板置凝集反应箱上均匀加温或采用别的办法适当加温，使温度达到３０℃左右。

3min～5min内记录结果。

结果判定＋＋＋＋：出现大的凝集块，液体完全清亮透明，即100％凝集。

＋＋＋：有明显的凝集片，液体几乎完全透明，即75％凝集。

＋＋：有可见的凝集片，液体不甚透明，即50％凝集。

＋：液体混浊，有小的颗粒状物，即25％的凝集。

－：液体均匀混浊，即不凝集。

以出现＋＋凝集的血清最高稀释倍数作为该份血清的凝集价。

大动物（牛、马、骆驼等）以0.02ml出现凝集价判为布氏杆菌病血清阳性，0.04ml出现凝集价判为可疑。

中小动物（猪、山羊、绵羊等）以0.04ml出现凝集价判为该份血清为布氏杆菌病阳性血清，0.08ml出现凝集价判为可疑。

注意事项1．每次试验必须以标准阳性血清和标准阴性血清进行对照。

2．加抗原前必须摇匀。

3．反应温度最好保证在30℃左右，3min～5min内判定。

如反应温度偏低，可适当延长判读时间。

4．如用两个血清量作试验，任何一个血清量出现凝集反应时，则需要用四个血清量重检。

5．平板凝集反应最好是用于初筛，如出现阳性或可疑反应，再用试管凝集反应进行复检，以定性。

6．平板凝集反应与试管凝集反应的关系。

改良试管凝集试验和虎红平板凝集试验检测羊布鲁氏菌病结果比较

阳、阴性血清对比观察结果并记录。若被检血清有颗粒
状或絮状物出现均判为阳性，相反则判为阴性。１．３．３改良试管凝集试验（ＭＳＡＴ）血清样品和标准血清
分别稀释１：２００倍，各血清稀释液和１：２０倍抗原稀释液各６０Ｌ以１００Ｌ移液器加人９６孔Ｕ型底微量反应板中，于平板振荡器上混匀后将反应板以密封膜密封后放置３７ｃｃ温箱反应，２２２４ｈ后取出观察试验结果。１．３．４标记原则１００％凝集即反应孔底部无点状白色沉
５ｍｉｎ，取上清液装入５ｍＬ试管置一２０￣Ｃ的冰箱内保存。
以备检测。
性；马耳他布鲁氏菌，主要宿主是山羊和绵羊］，可以由羊传人牛群，也可由牛传播于牛，而其他动物对它的易感性则与流产布鲁氏菌相同［６］。检测羊布鲁氏菌病血清
摘要：虎红平板凝集试验方便、快捷，目前已广泛应用于养殖场羊布鲁氏茵病的普查，但其假阳性情
况有待探究。利用改良试管凝集试验对虎红平板凝集试验检出的阳性个体进行分析，发现阳性率仅
为８８．８％。表明虎红平板凝集试验存在假阳性，可先用虎红平板凝集试验进行大面积普查，阳性样品
４０１７４５１。布鲁菌虎红平板凝集试验抗原、布鲁菌改进试管凝集试验抗原同样由四川省动物疫病预防控制中心实验室提供，批号分别是２０１４０８１２、川生药字（２０１４）

布鲁氏菌试管凝集试验

整理课件
“++++”完全凝集，上清液100%清亮 “+++” 几乎完全凝集，上清液75%清亮 “++”显著凝集，上清液50%清亮 “+” 微量凝集，液体25%清亮 “-” 无凝集，液体不清亮确定每份血清滴度是以出现“++”及以上的
凝集现象的最高血清稀释度
整理课件
诊断标准
没有进行过菌苗接种的人、畜血清试验的标准是：
人、牛、马、鹿、骆驼等大家畜血清为1：100( ++)及以上者为阳性，1：50(++)为可疑。
猪、羊(绵羊、山羊)、犬等小家畜血清在1： 50(++)及以上者为阳性，1：25(++)为可疑。
对可疑反应的人和动物应在10-25天内重复检查，以便进一步确定诊断。
整理课件
影响试验结果的因素及注意事项
整理课件
器材与试剂
虎红平板凝集抗原、被检血清、清洁脱脂玻片或有凹形孔的玻片、0.1ml吸管或微量加样器、混合棒或牙签
整理课件
试验方法
在玻片上加0.03ml被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03ml，充分混匀，在5分钟内观察结果。
整理课件
(四) 结果判定
有二种方法，第一种是，出现可见的凝集反应就判为阳性；
整理课件
作凝集反应时，有个别血清会出现前带现象，即稀释度低的血清管内(或血清量多的格)不发生凝集，而稀释度高的管内(或血清量少的格)出现凝集，这叫做前带现象。如果某血清在平板凝集反应中出现了前带现象，那么做试管反应时应多做几个管，多采用几个稀释度。
氯化钠的含量增高对血清反应有明显的影响，盐的浓度越高，反应的敏感性提高，因此在兽医界为了克服凝集反应中的阻抑抗体的干扰，对羊血清采用高渗盐水作凝集反应，一般浓度在 10~12%，切记一般人血清不能用高渗盐水。

牛感染布鲁氏杆菌病的净化措施

随着全国各地牛养殖业规模的不断扩大，养牛数量越来越多，各种传染性疾病发病率也呈现逐年上升的趋势。

布鲁氏杆菌病是牛养殖业中较为常见的疫病之一，也是一种人畜共患病，具有较强的传染性与危害性，已被我国列为二类动物性传染病。

该病一旦暴发流行，则会长期潜伏在养殖场内难以净化，当前尚无特效药可以治疗，很容易给养殖户造成不可挽回的经济损失。

因此，如何对牛布鲁氏杆菌病进行有效净化并做好预防控制工作显得尤为重要。

一、牛布鲁氏杆菌病原及流行特点1、病原学特征布鲁氏杆菌病由布鲁氏杆菌感染所致，其菌属众多，当前已知的就有19个生物型、6个种类，该病菌主要寄生在细胞内，侵袭力与传播力均较强，主要侵害宿主淋巴系统及生殖系统。

布鲁氏杆菌外观呈球杆、球型或短杆状，其中牛属菌多呈短杆状，长度为0.5～1.3μm，宽度约为0.4μm，未长有鞭毛、荚膜和芽孢等结构，为革兰式染色阴性菌，涂片镜检多呈单个排布。

该病菌在外界环境中适应能力极强，阳光直射条件下可存活4h，但难耐湿热环境，在60℃温度条件下30min即被灭活，70℃温度条件下5min即被灭活，100℃热水中会被立即灭活，普通的消毒剂均可将其杀灭。

2、流行病学人类与多种动物均易感染布鲁氏杆菌病，其中，以牛、羊、猪等易感性最强，母畜比公畜更易感，成年动物比幼龄动物更易感，发病率也更高。

布鲁氏杆菌病在一年四季均可发生，尤以春、夏季高发。

牛养殖场内患病牛与带菌牛是该病主要的传染源，公牛感染后期的精液、尿液、粪便中会携带大量病菌，患病的妊娠母牛生产或流产后，其乳汁、胎衣、胎盘羊水、恶露等分泌物中携带有大量致病菌，对产房周边环境造成污染，健康牛接触后染病。

通常情况下，患有该病的妊娠母羊在流产后的3年内，其阴道分泌物中仍带有布鲁氏杆菌。

呼吸道、生殖道、消化道等是该病主要的感染途径，也可通过破损的皮肤或黏膜等传染该病。

二、临床症状及病理变化1、临床症状布鲁氏杆菌病多呈地方性流行，牛只染病后通常会有15～180d的潜伏期，大部分为隐性感染。

虎红平板凝集实验

虎红平板凝集试验（RBPT）检测布鲁氏菌病的原理和方法由于培养的营养条件苛刻而且时间长，所以病的诊断以血清学诊断为主。

其原理主要是根据相应抗原抗体可以在体外发生特异性结合并呈现可见反应，用已知抗原(或抗体)检测体液中未知的抗体(或抗原)。

虎红平板（RBPT）灵敏度高，价格便宜，操作方便，检测快速，适于群体布鲁氏菌病的普查。

在国际贸易中是牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验，在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。

检测布鲁氏菌病所用的虎红平板凝集抗原是用抗原性良好的布鲁氏菌菌株经培养，灭活，离心收集菌体用虎红染料染色后，悬浮于乳酸缓冲液中制备而成。

试验原理：虎红平板凝集试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。

由于所用的抗原是酸性（）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是IgG类，因此提高了反应的特异性。

虎红平板凝集试验具体方法如下：一、材料准备1、虎红平板凝集抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。

2、被检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。

3、洁净的玻片或玻璃板，其上划分成4cm2的方格。

4、吸管或移液器，适于滴加液体。

5、牙签、混合棒或火柴杆，供搅拌用。

二、操作方法1、实验前，应将血清和抗原在室温放置30-60min。

2、将玻璃板上各格标记被检血清号，然后加相应被检血清。

3、在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原。

4、用牙签类小棒搅动血清和抗原，使之充分混合，在5分钟内观察结果。

5、每次试验应设阴性血清、阳性血清对照。

三、结果判定1、在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。

2、受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(-)。

四、方法评价1、虎红平板凝集试验检测布鲁氏菌病，方法简便、快速、容易操作，适于基层大面积检疫；2、该方法敏感性较好，检查牛的阳性率稍高于绵羊、山羊。

布氏杆菌虎红平板鉴定标准

布氏杆菌虎红平板鉴定标准
布氏杆菌是一种革兰氏阴性菌，是造成布鲁菌病的病原菌。

以下是布氏杆菌在虎红平板上的鉴定标准：
1. 形态特征：布氏杆菌在虎红平板上生长的菌落为平坦、圆形或略呈不规则形状，直径一般在1-3mm之间。

菌落表面有光泽，颜色为暗灰色、灰白色或淡黄色。

2. 红素反应：布氏杆菌在虎红平板上生长的菌落会产生红素反应，即菌落周围会形成红色环带。

红素反应的程度随着菌落生长时间的增加而逐渐加强。

3. 染色反应：布氏杆菌属于革兰氏阴性菌，在虎红平板上的菌落也会出现革兰氏阴性的染色反应。

4. 硝酸还原反应：布氏杆菌会还原硝酸，因此在含有硝酸盐的虎红平板上，它的菌落周围会呈现深红色。

布鲁氏菌病虎红平板凝集试验的影响因素及注意事项

动物生产 382020.10摘要：本文对布鲁氏菌病虎红平板凝集试验中的影响因素及应注意的事项进行了较全面的分析和总结，以提高试验的准确性，为本病的进一步确诊和疫情分析提供科学依据。

关键词：布鲁氏菌病；虎红平板凝集试验；影响因素；注意事项目前，布鲁氏菌抗体检测仍是我国布病诊断最常用、最主要的检测方法。

其中虎红平板凝集试验（RBPT）具有试验试剂成本低廉、操作简便、快速、检出率高等优势，被广泛应用于布病的大规模筛查，同时由于本方法不需要特殊的试验设备，更适于基层实验室和现场试验。

现将RBPT中的影响检测结果的因素及应注意的问题进行简要分析。

1 RBPT的影响因素1.1　RBPT抗原RBPT抗原的质量是影响布病血清学试验结果准确性的关键性因素之一，不同厂家的抗原对同一批血清样本的检测结果存在不同程度的差异，如果RBPT的假阳性率过高，不仅造成工作量加大，也会造成不必要的经济损失。

1.2　血清血清质量也是影响布病血清学试验结果准确性的重要因素之一，而采集的时间与分离方式直接影响血清的质量。

用于RBPT 的血清最好是新鲜、清亮透明、无溶血、防止细菌污染，并且避免反复冻融。

纤维蛋白原能与虎红抗原产生非特异性凝集反应，而且纤维蛋白原含量越高凝集反应发生的越快、越强。

因此，如果待检血清中含有纤维蛋白原也会出现RBPT假阳性结果，严重影响检测结果的准确性。

1.3　温度试验时，RBPT抗原与被检样品的温度、环境温度对试验结果的准确性也有很大影响。

RBPT用的抗原需要恢复至室温（22±4℃），并且使用前要充分混合均匀。

血清与温度和时间成反比关系，放置血清的时间越短，温度越低，假阳性率越高。

由此可见，在一定温度范围内，温度越高，血清学反应进行的越快。

本试验要求在室温下进行，因此，在试验前要注意观察环境温度是否适合进行本试验。

1.4　药物血清中的药物浓度也会干扰检测结果的准确性，在经过治疗后或治疗期间血清凝集不明显。

布鲁氏菌病虎红平板凝集试验和试管凝集试验的比较

布鲁氏菌病虎红平板凝集试验和试管凝集试验的比较[摘要]目的：对比虎红平板凝集试验和试管凝集试验对布鲁氏菌病检验的敏感性和特异度。

方法：总结我院收集的825份血清样品，先经过虎红平板凝集试验，再进行试管凝集试验，别统计虎红平板凝集试验和试管凝集试验中一个“+”和两个“+”的案例数并计算两种实验的阳性符合率情况。

结果：820例待检血清的中，虎红平板凝聚试验中结果为一个“+”者10例，两个“+”及以上者52例，试管凝聚试验中结果为一个“+”者9例，两个“+”及以上者51例，另外，1:50凝聚阳性的有9,人1:100有23人，1:200有28人，两种布鲁氏菌病检验方法的总阳性符合率为96.8%。

结论：虎红平板凝集试验可能会出现假阳性结果，试验结果为阳性的需经试管凝集试验检验后才可确诊。

[关键词]布鲁氏菌病，虎红平板凝集试验，试管凝集试验布鲁氏菌病属于一种人兽传染性疾病，该类疾病主要是由于布鲁氏菌感染引起的，可分为两大类，即动物间传播的布鲁氏菌病和人之间传播的布鲁氏菌病，而后者的感染源一般是动物[1]。

布鲁氏菌病一旦在人群中开始传播，就会引发重大公共卫生问题，造成严重的后果，而快速的布鲁氏菌病阳性检验方法对于预防和治疗疾病具有重要的现实意义[2]，为此，笔者总结了两种布鲁氏菌病阳性检验方法并加以比较，旨在为布鲁氏菌病的检验提供一定的理论依据，现报道如下：1资料与方法1.1一般资料研究对象为2012年3月-2014年4月期间我院收集的825份血清样品，血清供试者中包括男性400例和女性425例，年龄范围为20岁-49岁，平均年龄为（35.6±15.4）岁。

试验过程中用到的布鲁氏菌病阴性血清诊断试剂与布鲁氏菌病阳性血清诊断试剂均由山东省微生物学研究所提供，布鲁氏菌病的试管凝聚抗原和虎红平板凝聚抗原均由中国预防医学科学院提供。

1.2试验方法所有受试者均先采集静脉血，经离心处理获得血清后进行试验，先进行虎红平板凝聚试验，试验结果阳性者再进行试管凝聚试验，均为阳性者即可确诊。

布鲁氏菌病血清学检测方法优缺点对比

布鲁氏菌病血清学检测方法优缺点对比王　刚1，范伟兴2，刘　坤2，田丽华3，温建新1（1. 青岛农业大学动物医学院，山东青岛　266109；2. 中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛　266032；3. 青岛西海岸新区动物疫病预防与控制中心，山东青岛　266400）摘　要：布鲁氏菌病（简称布病）严重危害畜牧养殖业安全和人类健康，而有效的检测方法能够为布病的预防、检测和净化提供技术支持。

目前针对布病的血清学检测方法主要包括：布病虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）、全乳环状实验（MRT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光偏振测定法（FPA）、补体结合试验（CFT）以及琼脂扩散试验（NH-GD）等。

不同的血清学检测方法各有优缺点：RBT操作简便，敏感性较高，但环境会对检测结果产生一定影响；ELISA敏感性较高，可一次性检测多个样本，但对仪器要求较高；FPA短时间内能够检测大量样品，操作简单，特异性和敏感性与ELISA相似，但需要专业的荧光偏振仪器；SAT特异性较强，但敏感性不高，操作步骤繁琐；CFT的特异性和敏感性都高于SAT，但试验较为繁琐，耗时长；MRT一般只用于牛奶样本检测，无需采血，特异性强，但对牛奶的质量有一定要求；NH-GD对疫苗免疫样本和野毒感染样本具有鉴别诊断能力，但抗原纯度要求高。

因此，RBT、MRT、ELISA、FAP和NH-GD更适合用于布病初筛，而SAT和CFT更加适用于布病复核。

未来应探索更多的血清学检测方法，如荧光微球法、半抗原鉴别诊断方法等，以便为布病检测提供更优选择。

关键词：布鲁氏菌病；血清学；检测方法；优缺点对比中图分类号：S851.3 文献标识码：A 文章编号：1005-944X（2021）05-0072-04DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2021.05.016Comparison on the Serological Detection Methods for BrucellosisWang Gang1，Fan Weixing2，Liu Kun2，Tian Lihua3，Wen Jianxin1（1. School of Veterinary Medicine，Qingdao Agricultural University，Qingdao，Shandong　266109，China；2. China Animal Health and Epidemiology Center，Qingdao，Shandong　266032，China；3. Qingdao West-Coast Economic New Area Center for Animal Disease Prevention and Control，Qingdao，Shandong　266400，China）Abstract：The animal husbandry safety and human health have been seriously endangered by brucellosis，against which，the prevention，detection and purification could be technically supported by an effective detection method. Current serological detection methods mainly include rose-bengal plate agglutination test（RBT），standard-tube agglutination test（SAT），whole milk ring test（MRT），enzyme-linked immunosorbent test（ELISA），ﬂuorescence polarization Assay（FPA），complement ﬁxation test（CFT）and native hapten-gel diffusion test（NH-GD），which are with different advantages and disadvantages as follows：RBT is user-friendly with high sensitivity，but is subject to environment to some extent；ELISA can detect several samples at one time with high sensitivity，but advanced device will be required；FPA can detect a large number of samples in a short time with similar speciﬁcity and sensitivity as ELISA，but a speciﬁc ﬂuorescence polarization instrument will be required；SAT is with good speciﬁcity but lower sensitivity and complicated operation steps；CFT is with higher speciﬁcity and sensitivity compared to SAT，but is收稿日期：2021-02-07　修回日期：2021-02-26基金项目：山东省现代农业产业技术体系特种经济动物创新团队项目（SDAIT-21）通信作者：温建新。

虎红平板凝集试验在家畜布氏杆菌病监测中的应用

４群牦牛近两年流产较多相吻合；在对１８３４头疑似布氏杆菌病流产牦牛群的检测中ＲＢＰＴ的检出率ｔＬＳＡＴ高。
２试验方法
（１）管凝集反应试验方法及判定标准按《动物布鲁氏菌病诊作简便，快速适用于现场大批量检验、检疫。近年来，已在青海省和海晏县牛羊布氏杆菌病的监测、检疫中广泛用于阳性畜的初断技术》ＧＢｆｌ８￣６ — ２００２进行 … 。筛。从省内外的许多检测报导来看，ＲＢＰＴ用于牛布氏菌病的检（２）虎红平板凝集试验方法：按照试剂生产厂家《布氏菌病虎红平板凝集抗原使用说明》，在清洁的玻璃板上０．０３ｍｌ被检血测多数认为是一种有较高特异性和敏感性的快速凝集试验，这也与我们在牦牛上的试验结论一致。ＲＢＰＴ对绵羊布我菌病的检疫虽清加等量虎红抗原充分混合，４— ８ｍｉｎ观察反应结果。有报导，但结果很不一致，２００６年云南省畜牧兽医总站毕运龙等判定标准：凡出现任何程度的凝集均为阳性，完全不凝集为报导ｐ］，５３只阳性羊中ａＢＰＴ￣Ｄ性４４只占８３．０１％，ＳＡＴ阳性２１只占阴性．血清溶血出现凝集判为阴性。３９．６２％，ＢＲＰＴ的阳性检出率明显高于ＡＳＴ；１９９０年贵德县兽医站
较高的牛羊群进行了布氏杆菌病病史及流产等流行病学调查，以探讨和验证虎红平板凝集试验在大规模牛羊布氏杆菌病检测和检

布氏杆菌试验检测步骤

布氏杆菌检测
1. 虎红平板凝集试验(RBPT)：
在玻片上准确加30μl待检血清，然后加30μl虎红平板凝集抗原，立即混匀后5分钟观察结果。

在光线充足处以出现肉眼可见的颗粒判定为阳性结果，反之为阴性结果。

图1：虎红平板凝集试验检测试剂
图2：试验方法:
评价：简便快速、容易操作，漏检率极低，适用于基层大面积检疫；容易出现假阳性，临床上需要借助SAT来确认。

2. 试管凝集试验(SAT):
每份血清取9支小试管，在第一支管加0.5%石碳酸生理盐水2.3毫升，第二支不加，第三支到第九支管各加0.5毫升，然后取待检血清0.2毫升加入第一管中，混匀后吸1毫升加入第二、三管各0.5毫升，第三管混匀后再吸0.5毫升加入第四管，以此类推到到第八管吸0.5毫升弃去，从第二管开始每管加入经0.5%石碳酸生理盐水10倍稀释的试管凝集抗原0.5毫升。

血清最终的稀释度为1：25、1:50、1:1001:200……1:1600第一管为血清对照。

最后一管为抗原对照。

混匀置37℃孵育20-22小时，取出置室温1-2小时观察结果。

较薄的伞状沉淀覆盖在试管底部且上清液为50%混浊者判为该份受检血清的效价。

效价1:100及以上者判为阳性。

图3：试管凝集试验检测试剂
图4 ：试验方法
图5：操作方法
评价：（1）实验室诊断标准之一
（2）滴度1︰100及以上或病程一年以上者滴度为1︰50及以上为阳性
（3）特异好，实用性、敏感性强
（4）主要检查血清中的IgG和IgM，适合于急性期病人的诊断。

（5）缺点：有前带现象，有时出现假阴性结果；产生一定的交叉反应；出结果慢，需要两天。

动物布鲁氏菌病诊断技术 GB

动物布鲁氏菌病诊断技术GB/T18646—20021 范围本标准规定了动物布鲁氏菌病的诊断技术。

本标准规定的虎红平板凝集试验、乳牛全乳环状试验适用于家畜布病田间筛选试验和乳牛场布病的监测及诊断泌乳母牛布病的初筛试验；试管凝集试验和补体结合试验适用于诊断羊种、牛种和猪种布病感染的家畜。

本标准规定的试管凝集试验不适用于犬种和绵羊副睾种布病感染家畜的检疫。

2 虎红平板凝集试验2.1 材料准备2.1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。

2.1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。

2.1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4cm2的方格。

2.1.4 吸管或分装器，适于滴加0.03mL。

2.1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。

2.2 操作方法2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应血清0.03mL。

2.2.2 在受检血清旁滴加抗原0.03mL。

2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。

2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。

2.3 判定2.3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。

2.3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(—)。

3 乳牛布病全乳环状试验3.1 材料准备3.1.1 布病全乳环状抗原由制标单位提供，按说明书使用。

3.1.2 乳样3.1.2.1 受检乳样须为新鲜的全乳。

3.1.2.2 采乳样时应将母畜的乳房用温水洗净、擦干，然后将乳液挤入洁净的器皿中。

3.1.2.3 采集的乳样夏季时应于当日内检查；保存于2℃时，7d内仍可使用。

3.2 操作方法3.2.1 取乳样lml，加于灭菌凝集试验管内。

3.2.2 取充分振荡混合均匀的全乳环状抗原1滴(约50ul)加人乳样中充分混匀。

3.2.3 置37℃一38℃水浴中60min。

3.2.4 加温后取出试管勿使振荡，立即进行判定。

布病虎红平板凝集试验与试管凝集试验对比研究

布病虎红平板凝集试验与试管凝集试验对比研究摘要：本文以虎红平板凝集试验和试管凝集试验这两种方法对布鲁菌病进行检测，并对其检测结果进行对比分析。

试验选择200例牲畜血清作为研究对象，对所有牲畜同时进行虎红平板凝集试验和试管凝集试验，并从两种试验的准确率入手进行分析。

关键词：布病；虎红平板凝集试验；试管凝集试验；对比研究前言：布病又叫做布鲁菌病，此病广泛分布在全世界，为人畜共患病。

在我国属于二类牲畜疫病，主要在狗、山羊、绵羊、猪等家畜中出现，野生动物也会受到感染。

此病最为有效的检测方式为试管凝集试验和虎红平板凝集试验，为提升试验结果准确率，下文对这两种试验结果进行对比分析。

1试验对象及方法1.1试验对象本次试验将200例牲畜血清作为试验对象，待测血清样本采集为某市养殖场，采集后均处于-20℃保存。

1.2材料本次试验使用材料为试管凝集抗原试剂和虎红抗原试剂，两种试剂均在有效期，待检测的血清样本来自上述200例牲畜。

1.3方法1.3.1SAT使用试管凝集试验此种检测方法需要先对患者的血清样本进行稀释。

稀释需要使用五支试管稀释一例血清样本。

在第一支试管中加入2.3毫升的0.9%氯化钠溶液，在第三、四、五支试管中加入0.5毫升的0.9%氯化钠溶液，第二支试管中则不需要加入。

再利用1毫升的吸管将待检测的血清样本取0.2毫升混入至第一支试管中，并确保血清和0.9%氯化钠溶液充分混合。

确定试管中样本已经充分混合后再利用吸管将第一支试管中的溶液分别吸取0.5毫升加入至第二支和第三支试管中，当第三支试管中样本充分混合后，再次利用吸管将0.5毫升样本转移至第四支试管中，最后将第四支试管中的0.5ml溶液转移至第五支试管后进行均匀混合。

此时从第二支试管至第五支试管的稀释度为，8%、4%、2%、1%。

完成血清样本的稀释后再将0.5毫升的抗原试剂加入其中。

此时对试管内样本进行观察，其稀释度分为别4%、2%、1%、0.5%。

并同时准备对照观察所需要的比浊管，将所有待使用的比浊管、试验管进行震荡后将所有血清样本和制备后的设备放入37℃的温箱内，放置时间控制在22小时，取出后将其在常温环境中放置两个小时，最后将比浊管当前的状态为依据进行判断。