滤袋法测定酸性洗涤纤维
滤袋在纤维素分析中的应用
滤袋技术在饲料纤维素分析中的应用滤袋技术（Filter Bag Technology, FBT）是本世纪九十年初发展起来的一种简便易行，高效准确分析技术。
该项技术目前主要应用于饲料和食品中粗纤维（CF），中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）的测定。
在该项技术的开发过程中，美国ANKOM 公司的创始人之父Dr. R. J. Komarek，著名的营养学家、油脂化学家、生化/营养/生理方面的大学教授，做出了卓越贡献。
众所周知的纤维素分析方案的创始人 Dr. Peter Van Soest ，也参入了此项技术的开发。
1993由美国康奈尔大学和加拿大共同合作，开发了ANKOM 纤维分析仪获得专利。
产品开发后的最初两年，该产品和技术应用仅限于国际上4~6 个国家。
自1996年以来，国际市场迅速扩展。
目前已在世界上75个多国家有用户，并被美国、法国、意大利、阿、根廷、爱尔兰、澳大利亚、肯尼亚和越来越多的国家政府、研究机构所采用。
滤袋的结构特点用于纤维素分析的滤袋是用特殊材料制成的统一规格，具有一定孔隙的三维结构袋。
用于纤维素测定和体外消化率测定的F57滤袋的孔径为30微米。
由于这种特殊结构，可使溶液自由通过，但同时不使袋内物质流出。
这种滤袋可耐受强烈化学试剂，甚至可耐受72%硫酸。
做工精制，燃烧后无灰，并且不含氮。
应用滤袋技术测定饲料中粗纤维的方法步骤仪器设备ANKOM 纤维分析仪， F57滤袋，封口机试剂0.255N 硫酸， 0.313N氢氧化钠，丙酮测定操作步骤采用滤袋分析饲料粗纤维主要包括以下几个主要步骤：1、首先将1克左右的样品装入已知重量的F57 滤袋中，然后用封口机封口。
平放在样品架上。
样品架每批可同时放24个滤袋，分8层，每层放3个滤袋，2、然后将放有滤袋的样品架置于纤维分析仪的消煮容器中，加入1900~2000毫升室温酸溶液（0.255N硫酸），密封。
按下加热和搅拌按钮，设定好时间（45分钟）。
不同粉碎粒度的饲料对滤袋法测定纤维物质含量的影响
料 ADF含量差异显著（P＜0.05）。 粗粉碎组饲料的 和 NDF 含 ADF 量普遍高于细粉碎组。 2）
粗粉碎组和细粉碎组的 NDIP含量除青贮类饲料差异显著（P＜0.05）外，其余几类饲料的 NDIP
含量差异均不显著（P＞0.05）；2 组间各类饲料的 ADIP含量差异均不显著（P＞0.05）。 结果提
2.00 mm，细粉碎组为 0.45 过 mm（ 40 目分析筛），测定各样品的 和 NDF、ADF、NDIP 含 ADIP
量。 结果显示：1）粗粉碎组和细粉碎组的干草类饲料、饼粕类饲料 NDF含量差异极显著（P＜
0.01）；2 组间干草类饲料、青贮类饲料 ADF含量差异极显著（P＜0.01），糟渣类饲料、饼粕类饲
Silagefeedstuff
58.51 ±1.63
59.72 ±1.51
7
糟渣类饲料
Distiller' sdried grain solublefeedstuff 47.33 ±1.32
47.50 ±1.20
6
饼粕类饲料
Cakeand mealfeedstuff
31.47 ±3.59
34.31 ±4.04
试验所用溶液组成参照国标 GB/T20806— 20061，采用以下公式计算 含量 NDF ：
NDF（ %） =[ m2 -（ m1 ×C1 ） ] ×100 /m。
式中：m1 为空袋质量（g）；m为样品质量（ g）； m2 为提取处理后样品残渣 +滤袋质量（g）；C1 为 空白袋子校正系数（ 烘干后质量 /原来质量） 。 的测定 1.2.3 ADF
示，采用滤袋法测定不同粉碎粒度的饲料 和 NDF ADF含量差异较大，建议采用 2.00 mm的粉
饲料中酸性洗涤木质素(ADL)的测定-最新国标
饲料中酸性洗涤木质素（ADL）的测定1范围本文件描述了饲料中酸性洗涤木质素（ADL）测定的坩埚法和滤袋法。
本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和植物性饲料原料中酸性洗涤木质素（ADL）的测定。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1酸性洗涤木质素（ADL）acid detergent lignin经酸性洗涤剂和12.00mol/L硫酸溶液处理除去试样中的淀粉、蛋白质、脂肪、糖类和纤维素等成分后的干燥滤渣灰化所丢失的质量占试样质量的百分比。
4坩埚法4.1原理试样用酸性洗涤剂浸煮，水、丙酮洗涤，除去不耐酸的碳水化合物、没有发生梅拉德反应的蛋白质和脂肪，剩余物用12.00mol/L硫酸溶液消化，消化后残渣再干燥、灰化，扣除灰分后的残渣占试样质量的百分比为酸性洗涤木质素。
4.2试剂或材料警示：十六烷基三甲基溴化铵对粘膜有刺激，操作时需戴防护口罩；丙酮和石油醚是高挥发可燃试剂，在进入电热干燥箱干燥前，确保其完全挥发。
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
4.2.1水：GB/T6682，三级。
4.2.2丙酮。
4.2.3石油醚（沸程30℃~60℃）。
4.2.4硫酸溶液（0.50mol/L ±0.025mol/L H 2SO 4）：按照GB/T 601配制和标定。
4.2.5酸性洗涤剂：称取20g 十六烷基三甲基溴化铵（C 19H 42NBr ，CTAB ），加入1000mL 0.5mol/L 硫酸溶液（4.2.4），搅拌溶解，混匀。
4.2.6消泡剂：硅油。
4.2.7硫酸：质量分数72%（12.00mol/L ）。
按以下步骤校准硫酸（H 2SO 4）相对密度至1.634（20℃）或12.00mol/L 。
酸性洗涤纤维和木质素测定的国际标准
外 都小 于 １％ ０ 这些 数据可 与 Ｎ Ｆ法获得 的数 据 Ｄ
相 比。这可能 是小麦 Ａ Ｆ含量低 的原 因。表 １中 Ｄ
定 人员拿 到 的样 品 ， 号从 １ １ ． 盲重 复 的 ． 标 ～２是 不 用识 别样 品种类 ２ ２个 参 与研 究 的实 验 室 中 ．８个 用 Ｆ ｓ １ ｏｓ的
最 近 已 由 国际 分 析 师 协会 （ Ｏ Ｃ） 国际 标 准 化 Ａ Ａ 、
组 织 （ ｏ） 欧洲标 准化 委员会 （ Ｅ 联合 发布 。 ｉ 及 ｓ Ｃ Ｎ）
（ ） 次分 析 ６个 样 品 的萃取 和过 滤 系统 是 ２一
集成 的
（） ３ 用抗凝 结 的快速真 空过 滤系统 。 （ ） 系统 同时 加 热 和 加试 剂 与 水 时 ． 试 ４当 与 剂 的接 触最小 （ ） 剂加 入 系统 也可 简单 地 冲洗 粘 在仪 器 ５试
壁 的样 品
青贮料 青贮料
了。这个 标准也认 为 Ｆｂ ｒ ｃ系统是 一个 有效选 ｉｅ ｅ ｔ
择 。与 常规 的手 工操 作 （ 在烧 杯 中回流 ） 比较 ， 相 Ｆｂ ｒ ｃ 置 的优 点可 以总结 如下 ： ｉｅｔ 装 ｅ （ ） 转 移 样 品 可 改 进 准 确 和精 确度 ； 样 １不 称 品人 钳锅并 保 留到整个分 析过 程 。
Ｎ Ｆ测 定 国 际 标 准 化 方 法 （ Ｎ ＩＯ １ ９ ６２ ０ ） Ｄ Ｅ Ｓ ３ ０ ： ８ ０
１ 材 料 和 方 法
图 １ Ｖ ｎ Ｓ ｅ ｔ 洗 涤 纤维 体 系 ａ ｏｓ 的
１ 样 品 和 实验 室 ． １
选 择 用 作 研 究 的 样 品是 ： 末 、 麦 、 饲 锯 小 牛 料、 豆粕 粉 、 叶草 青贮 料和青 草青 贮料 。分析 三
范氏中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维测定的实验方案1(修改)
饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）和木质素（ADL）的测定实验方案实验原理纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）。
植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
中性洗涤纤维经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
2 所需试剂十二烷基硫酸钠溶液（中性洗涤剂）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA，化学纯）、四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）、磷酸氢二钠、乙二醇乙醚、十六烷基三甲基溴化铵、硫酸、丙酮，无水亚硫酸钠，十氢化萘，95%乙醇3 所需仪器分析天平：感量0.0001 g、容量瓶、锥形瓶、滴定管、移液管、洗瓶、洗耳球、滴管、量筒。
粗纤维测定仪（SLQ-6）、古氏坩埚、干燥器（以氯化钙或变色硅胶为干燥剂）、酸度计4 试剂的配制4.1 30g/L十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液。
称取18.61g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，化学纯）和6.81g四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）和10mL已二醇乙醚同放入1000mL烧杯中，加入少量水加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠。
称取11.9644g磷酸氢二钠（含12水），置于另一烧杯中，加入少量水，微微加热溶解后倾入第一个烧杯，稀释至1000mL。
此溶液PH在6.9-7.1 .4.2 20g/L十六烷三甲基溴化铵（酸性洗涤剂）溶液。
称取20g十六烷三甲基溴化铵，溶于1000mL已经标定过的0.5mol/L硫酸溶液中，搅动溶解，必要时过滤。
4.3 0.5 mol/L硫酸溶液。
称取49g（27.87mL）浓硫酸，慢慢加入已有500mL水的烧杯中，冷却后注入1000mL容量瓶中，定容，标定。
（4.3.1标定硫酸的方法：称量1.6g在270-300℃灼烧至恒重的基准无水碳酸钠，称准至0.0001g。
溶解50mL水中，加入10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，用配制好的硫酸溶液滴定至溶液有绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。
酸洗、中洗洗涤纤维药品配置
酸性洗涤纤维药品配置及操作步骤（Ankom220型纤维分析仪）酸性洗涤剂:（2%）十六烷基三甲基溴化铵溶液：称区20gCTAB（十六烷基三甲基溴化铵溶液）溶解于1000ml 1mol/L硫酸溶液中，搅拌溶解。
1mol/L硫酸（1/2H2SO4）溶液：54.35ml H2SO4定容到1000ml测定操作步骤：1、将0.5g左右的样品装入已知质量的F57滤带中，然后用封口机封口样品架每批可同时放入24个滤袋，分八层，每层放三个滤袋。
2、将放有滤袋的样品架置于纤维分析仪的消煮容器中，加入1900-2000ml 的酸性洗涤剂3、按下加热按钮设定好时间（60min）,待容器中温度显示达100。
C，按下计时按钮，开始倒计时并打开搅拌按钮。
4、60min后关掉加热和搅拌按钮，停止加热和搅拌。
先打开废液阀，将废液排掉。
待废液排尽，关掉排液阀。
然后打开容器盖，加入1900-2000ml热的水（90-100。
C）按下搅拌开关，盖好盖，冲洗滤袋3-5min。
然后在重复2次。
5、将样品架从容器中取出，然后将滤纸置于干净烧杯中，加入丙酮，使滤袋浸没。
2-3min后拿出，轻轻挤出丙酮，并晾干。
然后在烘箱中105。
C烘2-3小时。
然后称重。
中性洗涤纤维药品配置及操作步骤（Ankom220型纤维分析仪）试剂：十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、四硼酸钠、无水磷酸氢二钠、已二醇乙醚、正辛醇、丙酮中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠溶液）：称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA）和6.8g四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）,放入100ml烧杯中，加适量蒸馏水溶解，再加入30g十二烷基硫酸钠和10ml已二醇乙醚，称取4.56g无水磷酸氢二钠置于另一烧杯中，加蒸馏水加热溶解，冷却后将上述两溶液转入1000ml容量瓶并用水定容。
此溶液PH值6.9—7.1（PH 值一般不用调整）。
测定操作步骤：1、将0.5g左右的样品装入已知质量的F57滤带中，然后用封口机封口样品架每批可同时放入24个滤袋，分八层，每层放三个滤袋。
纤维袋法测定饼粕类饲料原料中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量的研究
ａ ｃ ｉ ｄ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｇ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｂ ｅ ｒ （ Ａ Ｄ Ｆ ） ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｆ ｅ ｅ ｄ ．Ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ，ｂ ａ ｓ ｅ ｄ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ＡＮ Ｋ Ｏ Ｍ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ， Ｓ ｉ ｎ ｋ ｉ ａ ｎ ｇ ｌ ｏ ｃ ａ ｌ
摘 要 ：为探讨 用纤维袋测定饼粕类饲料原料 中中性洗涤纤维和酸性 洗涤纤维含量的方法 ，试验选取新 疆本地
几种饼 粕类饲料原料 ，以Ａ Ｎ Ｋ Ｏ Ｍ技 术所测 结果为参照 ，通过测定过程 当中的 消煮时间、理 条件 进行优选 。结果表 明 ，与半 自动 纤维分析 仪 Ａ Ｎ Ｋ Ｏ Ｍ测定值 最接 近 的 中性洗涤纤维 处理条件为消 煮时 间 １ ｈ ，添加无水 亚硫酸钠 １ ｇ ・ １ ０ ０ｍ Ｌ － ，无 需添加 Ａ Ｎ Ｋ Ｏ Ｍ酶 ，不需要脱 脂处理
２ ． Ａ ｇ ｒ ｉ ｂ ｒ ａ ｎ ｄ ｓ Ｐ ｕ ｒ ｉ ｎ ａ ｆ Ｓ ｉ ｎ ｋ ｉ ａ ｎ ｇ ） Ｆ ｅ ｅ ｄ Ｃ ｏ ． ， Ｌ ｔ ｄ ． ， Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｊ ｉ ８ ３ ０ ０ ０ ０ ， Ｓ ｉ ｎ ｋ ｉ ａ ｎ ｇ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｔ ｏ ｅ ｘ ｐ ｌ ｏ ｒ ｅ ｉ ｆ ｂ ｅ ｒ ｂ ａ ｇ ｓ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｆ ｏ ｒ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｎ ｅ ｕ ｔ ｒ ａ ｌ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｇ ｅ ｎ ｔ ｆ ｉ ｂ ｅ ｒ （ Ｎ Ｄ Ｆ ）ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ
《烟草及烟草制品 中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸洗木质素的测定 洗涤剂法》(报批稿)
100.00
0.01
0.01
样品一
24.09
8.39
31.58
89.29
17.24
8.36
25.08
93.82
1.65
8.32
1.72
0.80
样品二
18.47
8.78
27.38
101.44
12.54
8.46
20.69
96.28
1.56
8.29
1.55
-0.11
注1：酸洗木质素的标样无法获取；
6.6 四硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）。
6.7 无水磷酸氢二钠（Na2HPO4）。
6.8 乙二醇乙醚（C4H10O2）。
6.9 正辛醇（C8H18O，消泡剂）。
6.10 丙酮（CH3COCH3）。
6.11 98％浓硫酸（质量分数）。
6.12 十六烷基三甲胺溴（C19H42BrN）。
6.13-高温淀粉酶（活性50kU/g）
7.2.4.2 加热结束后，立即进行抽滤，并用（90～100）℃水冲洗管壁和剩余物，直至滤出液无泡沫。
7.2.4.3将热浸提后的试样和坩埚放在纤维分析仪的冷浸提单元上，用丙酮(6.10)冲洗剩余物3次，确保剩余物与丙酮充分混和，至滤出液无色为止。
7.2.4.4抽干后将坩埚和剩余物放入（105±2）℃烘箱中烘干3～4h至恒量。在干燥器中冷却后称量。再烘干30min，冷却，称量，直至两次称量之差小于0.002g。记录坩埚和剩余物的总重为m5。
烟草及烟草制品中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸洗木质素的测定
洗涤剂法
11
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本标准规定了烟草及烟草制品中中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸洗木质素含量的洗涤剂测定方法。
反刍动物常用饲料的体外消化率
反刍动物常用饲料的体外消化率曹香林;陈建军;郑琛【摘要】为有效利用当地饲料资源,提高反刍动物配合日粮的利用效率和生产性能,选用西北地区常见的棉籽蛋白、玉米啤酒糟、苹果渣、玉米皮、甜菜粕、菜粕和苜蓿等7种反刍动物常用饲料原料,采用应用滤袋的两级离体消化法对干物质（DM）、有机物（OM）、粗蛋白质（CP）、酸性洗涤纤维（ADF）和中性洗涤纤维（NDF）的体外消化率进行测定。
结果表明,甜菜粕的干物质体外消化率（IVDMD）、有机物体外消化率（IVOMD）和粗蛋白质体外消化率（IVCPD）显著高于其他样品（P〈0.05）,玉米啤酒糟的IVDMD、IVOMD、IVCPD、中性洗涤纤维体外消化率（IVNDFD）和酸性洗涤纤维体外消化率（IVADFD）都处于较低水平。
【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2012(040)003【总页数】3页(P150-152)【关键词】反刍动物;两级离体消化;饲料;体外消化率;滤袋【作者】曹香林;陈建军;郑琛【作者单位】^p【正文语种】中文【中图分类】S816.7评定反刍动物饲料消化率最早采用表观消化率法，但后来根据反刍动物代谢的特点发现，该法存在着严重缺陷。
随着反刍动物营养研究的深入，反刍动物饲料评定方法也不断进步和完善，如瘤胃降解与非降解蛋白质体系的提出和发展等。
目前，评定反刍动物饲料消化率的方法主要有3种，即活体法、尼龙袋法和体外法，并从常用的消化代谢试验、尼龙袋试验等又衍生出了人工瘤胃试验、产气量法、移动尼龙袋法［1］。
体外试验以其操作简便、不需要动物、测定时间短、成本低、易于标准化等特点受到青睐。
目前应用较多的体外方法有活体外产气法［2］、两级离体消化法［3］及活体外消化率测定法［4］等。
西北地区常见的反刍动物饲料原料包括棉籽蛋白、棉粕、玉米啤酒糟、苹果渣、玉米皮、甜菜粕和菜粕等，饲料资源丰富。
为有效利用当地饲料资源，提高反刍动物配合日粮的利用效率和生产性能，笔者于2009年3月利用两极离体消化法并结合滤袋技术，对这些原料的消化率进行测定，以期为反刍动物的饲料配制提供参考。
滤袋技术在纤维素分析中的应用
滤袋技术在纤维素分析中的应用滤袋技术（Filter Bag Technology, FBT）是上世纪九十年初发展起来的一种简便易行，高效准确分析技术。
该项技术目前主要应用于饲料和食品中粗纤维（CF），中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）和酸性洗涤木质素（ADL）的测定。
英国RINGBIO仪器集团有限公司（UK RINGBIO INSTRUMENTS CROUP CO.,LTD），借助世界一流大学的卓越研究能力，整合全球著名的营养学家、油脂化学家、生命科学家等科研资源，凭借自身的人才优势，借助积累多年的基础过滤分离经验和理论，特制复合三层滤袋消煮法适用于快速测定饲料、粮食、油料、食品的粗纤维的含量。
英国RINGBIO仪器集团有限公司在滤袋技术领域的研究始终处于世界领先地位。
滤袋的结构特点用于纤维素分析的滤袋是用特殊材料制成的统一规格，具有一定孔隙的三维结构袋。
用于纤维素测定的 Ringbio 纤维分析滤袋的孔径为 25μm。
由于这种特殊结构，可使溶液自由通过，但同时不使袋内的纤维物质流出。
这种滤袋可耐受强烈的化学试剂，甚至可耐受 72% 硫酸。
做工精细，燃烧后无灰，并且不含氮。
传统方法测定饲料中粗纤维在我国，目前饲料中粗纤维的分析大多采用国标（GB/T 6434-2006）法。
在采用该法测定时，通常首先称取一定量样品于高型无嘴烧杯中，然后加入 200mL 的 0.255N 硫酸，在电炉上煮沸，并保持微沸 30min，然后取下，加入一定量蒸馏水，静置，抽滤，用蒸馏水冲洗残渣；加 0.313N 氢氧化钠 200mL ，煮沸并保持微沸 30min，取下并加入一定量的水，静置，抽滤，并将残渣转移到古氏坩埚中。
然后烘干灰化。
该过程不仅费公费时，而且由于酸碱煮沸过程中火力控制不当，很易溢出，造成残渣损失，特别是碱处理时。
此外，在将残渣转移到古氏坩埚中时，很易发生抽滤困难或抽漏的现象。
滤袋技术分析纤维素的优点采用滤袋技术分析粗纤维时，省去了抽滤，而且可批量进行测定。
四个实验室应用滤袋技术检测阿根廷反刍饲料酸性和中型洗涤纤维的变异性
AGRICULTURAL MATERIALSVariability Among Four Laboratories of the Filter Bag Technique to Determine Acid and Neutral Detergent Fiber Contents in Ruminant Feeds from ArgentinaJ OSÉP.F AY and M ARÍA S.G UAITANational Institute of Agricultural Technology,Balcarce Agricultural Experiment Station,CC276,Balcarce,7620Argentina J OSÉL.D ANELÓNUniversity of Buenos Aires,College of Agronomy,Av.San Martín4453,Ciudad de Buenos Aires,1417ArgentinaS ONIA C HIFFLETCatholic University of Argentina,College of Agricultural Sciences,Ramón Freire183,Ciudad de Buenos Aires,1426 ArgentinaM ARISA W A WRZCKIEWICZUniversity of Buenos Aires,College of Agronomy,Av.San Martín4453,Ciudad de Buenos Aires,1417ArgentinaC AROLINA DÍAZCatholic University of Argentina,College of Agricultural Sciences,Ramón Freire183,Ciudad de Buenos Aires,1426 ArgentinaD EBORAH A.R OSSCornell University,Department of Animal Science,Ithaca,NY14853HÉCTOR M.F ERNÁNDEZNational Institute of Agricultural Technology,Balcarce Agricultural Experiment Station,CC276,Balcarce,7620ArgentinaThe objective of this work was to evaluate the filter bag technique(FBT)in an ANKOM200fiber analyzer to assess its accuracy for the determination of acid and neutral detergent fiber (ADF and NDF,respectively)contents in common ruminant feeds from the temperate region of Argentina.The evaluation was done in a ring test of4laboratories.The3Argentine laboratories were from the College of Agronomy,University of Buenos Aires,the College of Agricultural Sciences of the Catholic University of Argentina,and the Balcarce Agricultural Experiment Station of the National Institute of Agricultural Technology (INTA).The fourth laboratory was from the Department of Animal Science of Cornell University,Ithaca,NY.The feeds utilized were soybean meal expeller,whole sunflower seed,corn grain,herbages of alfalfa,ryegrass,tall wheatgrass,weeping lovegrass,guinea and barley grasses,and silages of corn and of a natural grassland.Results indicated that values obtained in the4laboratories were consistent regardless of the laboratory where the analyses were performed. It was concluded that the FBT in the ANKOM instrument gave satisfactory results when used for the determination of both ADF and NDF across samples having a wide range of fiber contents,and that the among-laboratories variability of this methodology was low.I n the United States and other countries,the methodologyof analysis of neutral detergent fiber(NDF)and acid detergent fiber(ADF)by the filter bag technique(FBT)in an ANKOM instrument(ANKOM Technology,Macedon, NY)has proven to be rapid and accurate(1,2).It involves a treatment with a thermally stable amylase(for NDF only),and in samples with high contents of lipids,a pretreatment with acetone.This technique has been tested with numerous feeds of different characteristics and origins(3).However,results obtained when ruminant feeds from the temperate region of Argentina are analyzed by this technique have not been reported.Due to the interest shown by several Argentine laboratories to adopt the FBT,the objective of this cooperative study was to evaluate the consistency of results for NDF and ADF obtained in4laboratories that are currently using this analytical methodology.ExperimentalLaboratoriesThe3participating laboratories from Argentina were from the College of Agronomy of the University of Buenos Aires (UBA),the College of Agricultural Sciences of the Catholic University of Argentina(UCA),and the Balcarce Agricultural Experiment Station(BAL)of the National Institute ofF AY ET AL.:J OURNAL OF AOAC I NTERNA TIONAL V OL.92,N O.2,2009371 Received May19,2008.Accepted by EB September4,2008.Corresponding author’s e-mail:pfay@.ar372F AY ET AL.:J OURNAL OF AOAC I NTERNA TIONAL V OL.92,N O.2,2009Table1.Neutral detergent fiber contents of11feeds as obtained in4different laboratoriesFeedNDF,average%±standard deviationLaboratoryUBA a UCA b BAL c COR dSoybean meal expeller12.07±0.1011.38±0.1610.71±0.1511.73±0.43 Sunflower seed45.72±0.3450.10±0.6944.17±0.1244.93±0.51 Alfalfa26.92±0.5526.82±0.6125.45±0.2126.65±0.37 Ryegrass47.30±0.8545.92±0.7943.69±0.1945.16±0.12 Tall wheatgrass68.34±0.4469.05±0.1967.94±0.1469.68±0.17 Corn silage50.52±0.1249.55±0.2345.16±0.7145.71±0.31 Grassland silage39.95±0.6838.95±0.8635.50±0.5135.26±0.59 Weeping lovegrass76.26±0.9176.24±0.1074.23±0.3376.00±0.37 Corn grain9.66±0.3010.07±0.108.22±0.539.03±0.50 Guinea grass68.69±0.1470.09±0.1168.60±0.4369.72±0.71 Barley grass60.00±0.5859.41±0.1256.54±0.4958.19±0.71a College of Agronomy,University of Buenos Aires,Argentina.b College of Agricultural Sciences,Catholic University of Argentina.c Balcarce Agricultural Experiment Station,National Institute of Agricultural Technology(INTA),Argentina.d Department of Animal Science,Cornell University,Ithaca,NY.Table2.Acid detergent fiber contents of11feeds as obtained in4different laboratoriesADF,average%±standard deviationLaboratoryFeed UBA a UCA b BAL c COR dSoybean meal expeller9.44±0.189.52±1.127.62±1.709.72±2.65 Sunflower seed35.17±0.5336.46±7.3034.63±0.1035.81±0.48 Alfalfa20.76±0.9921.16±0.8218.93±0.3622.44±1.04 Ryegrass27.53±0.3026.80±0.3225.61±0.3426.89±0.30 Tall wheatgrass38.98±0.2040.34±0.5638.09±0.5040.38±0.52 Corn silage30.28±0.7331.47±0.6128.49±0.6129.60±0.92 Grassland silage29.22±0.3431.77±1.3326.67±1.0029.61±0.95 Weeping lovegrass44.49±0.2646.63±1.2843.59±0.7346.24±0.44 Corn grain 3.43±0.28 3.99±0.25 2.80±0.47 4.29±0.32 Guinea grass46.06±0.6948.48±0.2845.89±0.3349.05±0.49 Barley grass35.67±0.9335.37±0.1733.81±0.5436.37±0.47a College of Agronomy,University of Buenos Aires,Argentina.b College of Agricultural Sciences,Catholic University of Argentina.c Balcarce Agricultural Experiment Station,National Institute of Agricultural Technology(INTA),Argentina.d Department of Animal Science,Cornell University,Ithaca,NY.Agricultural Technology(INTA).The laboratory of the Department of Animal Science of Cornell University at Ithaca,NY(COR)was the fourth source of data.This last laboratory was included in this ring test evaluation to have reference results obtained in an internationally renowned laboratory.FeedsEleven feeds in widespread use in Argentina were used: soybean meal expeller(an agroindustrial by-product)and whole sunflower seed(high lipid content).Other feeds included in the comparison were corn grain,herbages of alfalfa,ryegrass,tall wheatgrass(Thinopyum ponticum), weeping lovegrass(Eragrostis curvula),and silages of corn and of a natural grassland.These feeds were chosen because of the wide differences in their ADF and NDF contents. Guinea and barley grasses,2feed standards from the United States,were also incorporated in this study.The samples were dried at105°C to constant weight and ground in a Wiley mill to pass a1mm sieve.All samples were carefully homogenized,and the material was distributed in equal parts among the4laboratories(4,5).TechniqueThe FBT was performed utilizing a semi-automatic ANKOM200fiber analyzer,which allowed the simultaneous processing of11samples and2blank bags(6).The sunflower seeds were pretreated with acetone since they had a lipid content(301.6g/kg)greater than the50g/kg limit set in the method.Although the corn grain sample used also had a rather high lipid content(49.4g/kg),it was not pretreated with acetone since this value did not exceed the established limit. All the values of NDF and ADF were expressed as percent of the dry matter.Statistical AnalysisIn each laboratory,for each feed and type of analysis(NDF or ADF),4sets of duplicates were run in different periods (days)under the usual working conditions in the laboratory.Due to the lack of homogeneity of variances,an analysis of variance(ANOV A)was performed for each feed to test differences among laboratories.Mean results of each laboratory were compared with those obtained from BAL, which was the laboratory that systematically showed the lowest NDF and ADF values.The differences were considered significant when P<0.01.Finally,correlations among the results obtained in the4laboratories were estimated.Results and DiscussionThe results obtained in the4laboratories involved in this ring test comparative study are shown in Tables1and2.From the ANOV A of the NDF contents of each feed,it was observed that there were differences among the laboratories for the majority of the feeds except for tall wheatgrass(P=0.011), guinea grass(P=0.116),and solvent-extracted soybean meal (P=0.029).Regarding ADF,the differences among the laboratories were significant for all the feeds except for solvent-extracted soybean meal(P=0.194)and sunflower seeds(P=0.020).These differences did not respond to a common pattern in relation to the chemical composition of the feeds since this group included feeds with very different NDF and ADF contents.It is more likely that the high sensitivity of the ANOV A,due to the small coefficient of variation of results (<6%),could explain the significance of the differences observed.However,the magnitude of such differences would have little practical relevance in ruminant nutrition.For all of the feeds,the NDF and ADF values from BAL were systematically lower(P<0.01)than those obtained in the other laboratories,the exception being NDF grassland silage;also,the standard errors were generally lower at BAL. These differences could be attributed to the chemical composition of the tap water used to wash the fiber residues, which obviously was not the same in all of the laboratories, because in Argentina contents of salts in tap water vary considerably according to location.This,in turn,could have affected the weight of the washed residues due to differentF AY ET AL.:J OURNAL OF AOAC I NTERNA TIONAL V OL.92,N O.2,2009373 Table3.Pearson’s coefficients of correlation(r)among NDF values of the4laboratoriesLaboratoryLaboratoryUBA a UCA b BAL c COR dUBA1UCA0.9981BAL0.9970.9981COR0.9960.9960.9991a College of Agronomy,University of Buenos Aires,Argentina.b College of Agricultural Sciences,Catholic University of Argentina.c Balcarce Agricultural Experiment Station,National Institute of Agricultural Technology(INTA),Argentina.d Department of Animal Science,Cornell University,Ithaca,NY.Table4.Pearson’s coefficients of correlation(r) among ADF values of the4laboratoriesLaboratoryLaboratoryUBA a UCA b BAL c COR d UBA1UCA0.9981BAL0.9990.9971COR0.9970.9970.9981a College of Agronomy,University of Buenos Aires,Argentina.b College of Agricultural Sciences,Catholic University of Argentina.c Balcarce Agricultural Experiment Station,National Institute of Agricultural Technology(INTA),Argentina.d Department of Animal Science,Cornell University,Ithaca,NY.amounts of salts retained by the same feeds when analyzed in laboratories that were located in different places,as was the case in this work.For the4participating laboratories,standard errors oscillated within a range of0.27to1.25for NDF and from 0.37to 1.02for ADF.This shows that,in general,the variability was low.The correlations among laboratories are presented in Tables3and4.These values suggest that results obtained for NDF and ADF with the ANK were highly correlated(P<0.01)among the laboratories included in this evaluation.In each laboratory,samples were processed in different periods and in the same manner that all samples are routinely processed.Therefore,the absence of systematic errors or periodic variations(across a laboratory),and also the repeatability of results within laboratories,could be assumed. Further,uncontrolled variations within laboratories were small compared with variations among laboratories. Differences among laboratories were comparatively stable, despite the important differences in the means of NDF and ADF for the different feeds.Results indicate that values obtained in the4laboratories were consistent,independent of the laboratory where the analyses were performed.It is concluded that the FBT with the ANKOM200instrument produced satisfactory results with feed samples from Argentina.The interlaboratory variability for either the NDF or the ADF contents of these feeds was similar to the variability reported in previous studies in which other feeds from different regions were analyzed. AcknowledgmentsWe thank ANKOM Technology,Macedon,NY,for providing the reagents and filter bags and for the equipment calibration in the Argentinean laboratories.References(1)Komarek,A.R.(1993)Publication No.101,ANKOMTechnology,Macedon,NY,pp1–10(2)V ogel,K.P.,Pedersen,J.F.,Masterson,S.D.,&Toy,J.J.(1999)Crop Sci.39,276–279(3)Berchielli,T.T.,Paziani,S.F.,Oliveira Sader,A.P.,Tonani,F.L.,&Andrade,P.(2001)Proceedings of the XVII Meetingof the Latin-American Association of Animal Production,Article NA036,Havana,Cuba(4)Dux,J.P.(1990)Handbook of Quality Assurance for theAnalytical Chemistry Laboratory,V an Nostrand Reinhold,New York,NY(5)Johnston,R.K.,&V alente,R.M.(2001)Specifying andEvaluating Analytical Chemistry Quality Requirements forEcological Risk Assessments,/Docs/MESO-01-TM-01.pdf(Scirus08/27/03)(6)Komarek,A.R.,Robertson,J.B.,&V an Soest,P.J.(1994)J.Dairy Sci.77(Suppl.1),114374F AY ET AL.:J OURNAL OF AOAC I NTERNA TIONAL V OL.92,N O.2,2009。
范氏中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维测定的实验方案1（修改）（同名36069）
饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）和木质素（ADL）的测定实验方案实验原理纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）。
植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
中性洗涤纤维经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
2 所需试剂十二烷基硫酸钠溶液（中性洗涤剂）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA，化学纯）、四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）、磷酸氢二钠、乙二醇乙醚、十六烷基三甲基溴化铵、硫酸、丙酮，无水亚硫酸钠，十氢化萘，95%乙醇3 所需仪器分析天平：感量0.0001 g、容量瓶、锥形瓶、滴定管、移液管、洗瓶、洗耳球、滴管、量筒。
粗纤维测定仪（SLQ-6）、古氏坩埚、干燥器（以氯化钙或变色硅胶为干燥剂）、酸度计4 试剂的配制4.1 30g/L十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液。
称取18.61g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，化学纯）和6.81g四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）和10mL已二醇乙醚同放入1000mL烧杯中，加入少量水加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠。
称取11.9644g磷酸氢二钠（含12水），置于另一烧杯中，加入少量水，微微加热溶解后倾入第一个烧杯，稀释至1000mL。
此溶液PH在6.9-7.1 .4.2 20g/L十六烷三甲基溴化铵（酸性洗涤剂）溶液。
称取20g十六烷三甲基溴化铵，溶于1000mL已经标定过的0.5mol/L硫酸溶液中，搅动溶解，必要时过滤。
4.3 0.5 mol/L硫酸溶液。
称取49g（27.87mL）浓硫酸，慢慢加入已有500mL水的烧杯中，冷却后注入1000mL容量瓶中，定容，标定。
（4.3.1标定硫酸的方法：称量1.6g在270-300℃灼烧至恒重的基准无水碳酸钠，称准至0.0001g。
溶解50mL水中，加入10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，用配制好的硫酸溶液滴定至溶液有绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。
不同方法测定饲料中的中性洗涤纤维与酸性洗涤纤维含量分析
不同方法测定饲料中的中性洗涤纤维与酸性洗涤纤维含量分析李博，张丹丹，程景，靳光，王栋才，孙锐锋，徐芳，梁圆，张元庆*（山西农业大学（山西省农业科学院）动物科学学院，山西太原 030032）摘 要：本试验采用传统滤袋代替ANKOM滤袋测定饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）含量，并以滤袋法验证结果，旨在校正ANKOM纤维仪测定结果，探索一种简单方便、节约成本的饲料NDF、ADF测定方法。
试验采用滤袋法、ANKOM纤维仪法、ANKOM纤维仪（传统滤袋）测定13种饲料（小麦秸、构树、连翘、苜蓿、苜蓿青贮、全株玉米青贮、豆科青贮、精料、白酒糟、豆粕、玉米胚芽饼、DDGS、喷浆玉米）中的NDF、ADF含量。
结果表明：经过配对样本T检验分析，ANKOM纤维仪法、ANKOM纤维仪（传统滤袋）与滤袋法相比较，以及ANKOM纤维仪（传统滤袋）与ANKOM纤维仪法比较，NDF、ADF测定结果差异均不显著；以滤袋法校正的ANKOM纤维仪法和ANKOM纤维仪（传统滤袋）测定饲料中的NDF、ADF含量建立的回归公式分别为NDF滤袋法=-1.46+1.064NDF ANKOM（R2=0.923，P<0.001），NDF滤袋法=0.786+0.993NDF ANKOM（传统滤袋）（R2=0.884，P<0.001）；ADF滤袋法=0.545+1.026ADF ANKOM（R2=0.954，P<0.001），ADF滤袋法=1.176+0.996ADF ANKOM（传统滤袋）（R2=0.936，P<0.001）。
可见，使用传统滤袋代替ANKOM滤袋测定饲料NDF、ADF含量是可行的。
关键词：ANKOM纤维仪法；饲料；中性洗涤纤维；酸性洗涤纤维中图分类号：S816 文献标识码：A DOI编号：10.19556/j.0258-7033.20200413-01传统测定饲料中粗纤维（CF）的方法是经过稀酸、稀碱处理后烘干可得，此方法测定的结果仅包括部分纤维素、半纤维素和木质素，测得的结果会低于实际测定结果[1]。
饲料中的酸性洗涤纤维和木质素含量的快速测定
网袋完全符合本试验 的各种要求 。
２ 测定饲料 中的纤维 素和木质 素含量
选取９ 种饲料 样 品，分别 用特制纤 维滤网袋法和 国标 法测定酸性洗涤纤维和木质素含量 。 ２ ． １ 国标 法 选 取次粉 、细麦麸 、豆粕 、玉米胚芽粕 、 玉米 蛋 白饲料 、兔颗粒 配合饲 料 、花生 壳 、葵 花籽 壳、 大豆 秸秧 、花生秧 等９ 种 有代表性 的各种 样品 ，按照 国标 法Ｎ Ｙ／ Ｔ１ ４ ５ ９ — ２ ０ ０ ７ 方法 和Ｇ Ｂ ／ Ｔ ２ ０ ８ ０ ５ ． ２ ０ ０ ６ 的方法分 别进 行 饲料 中的酸性 洗涤纤 维（ ＡＤ Ｆ ） 和酸不 溶木质 素７ ２ ％的浓硫 酸 溶液 室 温 处理 不溶 解 ， 不失 重 。 （ ５ ）纤维滤 网袋５ ５ ０ ℃灼烧后无灰分 。
１ ． ２ 特 制 聚酯 纤 维纤 维滤 网袋 的特 点 经过 大量 的试
验 ，最 终首选 用特制 聚酯 纤维滤 网袋作 为本试 验用 的滤 网袋 ，用 进 １ ２高质量 的聚酯纤 维单丝织 成孔径为２ ５ Ｌ ｔ ｍ的 均匀 一 致 细 网 。完 全 符合 本 试 验 要求 ，并 具有 以下 特 点 ：聚酯 纤维滤 网袋不吸 水， １ ０ ５ ＂ Ｃ烘 箱中烘干不 失重 ， 酸性洗涤剂煮沸 １ ｈ 后不失重 ，在７ ２ ％浓硫 酸室温处理３ ｈ 不 失重（ 见表 １ ） ，各种 试剂长 时间煮沸 不破袋 ；它能用 塑封 机封 口，熔 点在２ ６ ０ ℃左 右 ，而且 塑封 过程 的滤 网袋 不失
液 处 理 过 程 中 滤 网袋 质 量 不 变 ，而 且 不 破 袋 。 （ ４ ）纤 维
从表 １ 可 以看 出，特制 聚酯 纤维 滤 网袋 经过 １ ０ ５ ℃烘 干 处理后 没有 失重 ；经过酸 性洗涤 剂煮沸 １ ｈ 处 理后没 有 失 重 ；聚酯 纤维滤 网在 ７ ２ ％浓 硫 酸室温 处理 ３ ｈ 后 没有 失 重 ；聚 酯纤维滤 网在５ ５ ０ ￣ Ｃ灼 烧无灰分 。说明聚酯纤维 滤
酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维的测定
附：饲料中中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定（附纤维素、木质素的测定）（一）原理饲料养分的常规测定法中存在的重要缺点之一，是测得饲料的粗纤维与无氮浸出物的数值不能反映饲料的真实情况。
测定时粗纤维不是一种纯化合物，而是几种化合物的混合物，其中主要组成是纤维素、半纤维素与木质素。
纤维素与半纤维素具有相似的营养价值，它们的营养价值对反刍家畜较单胃家畜为高。
木质素对全部家畜均不能被消化，但用常规法测定饲料的粗纤维时，饲料中仅有一部分半纤维素和木质素量包括在粗纤维的数值内，其余部分都被计算在无氮浸出物的数值中，且都被认为与糖和淀粉具有同样的消化性能。
由此可见，常规法测得粗纤维的数值不能全部反映饲料中大部分的不消化成分。
由于上述原因，Van Soest氏与其伙伴提出测定饲料中中性洗涤纤维与酸性洗涤纤维的方法，原理为：植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。
将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
（二）试剂1．中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠和6.8g四硼酸钠均放入1000mL刻度烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加30克十二烷基硫酸钠和l0mL乙二醇乙醚，称取4.56克无水磷酸氢二钠置于另一烧杯中，加少量蒸馏水微热溶解后倾入第一个烧杯中，再转入容量瓶中稀释至1000mL，此溶液PH值在6.9-7.1左右(PH值一般不需要调整)。
2．酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）制备称取20g十六烷三甲基溴化铵溶于1000mL2.0 mo l·L-1硫酸溶液中，搅拌溶解，必要时过滤。
饲料中酸性洗涤纤维的测定
饲料中酸性洗涤纤维的测定1 范围本标准规定了饲料中饲料中酸性洗涤纤维(ADF) 的测定方法。
本标准适用于各种植物性单一饲料。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 601 化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1 饲料采样GB/T 20195 动物饲料试样的制备3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1酸性洗涤纤维（ADF）acid detergent fiber用酸性洗涤剂去除饲料中的脂肪、淀粉、蛋白质和糖类等成分后，残留不溶解物质的总称，包括纤维素、木质素及少量的硅酸盐等。
4 原理植物性经酸性洗涤剂浸煮，再用水、丙酮洗涤后不溶解的残渣为酸性洗涤纤维，包括纤维素、木质素和少量硅酸盐等。
5 仪器和设备5.1 样品粉碎机。
5.2 分析筛：孔径为1mm。
5.3 分析天平：感量为0.0001g。
5.4 电热式恒温烘箱。
5.5 可调温电路或电热板。
5.6 回流消煮装置：配冷凝球600mL高型烧杯或配冷凝管的锥形瓶。
5.7 30mL烧结玻璃过滤坩埚（G2）。
5.8 干燥器：无水氯化钙或变色硅胶为干燥剂。
5.9 抽滤装置：烧结玻璃过滤坩埚、抽滤瓶和真空泵组成。
5.10 纤维测定仪：符合本标准测定原理。
6 试剂和溶液本标准所用水，一律指GB/T 6682-1992中的三级水，化学试剂为分析纯。
6.1 硫酸。
6.2 丙酮。
6.3 十六烷基三甲基溴化铵。
6.4 1.00mol/L 硫酸（1/2 H2SO4）溶液：按GB/T 601配制并标定。
6.5 酸性洗涤剂（2%十六烷基三甲基溴化铵溶液）：称取20g CTAB溶解于1000mL 1.0 mol/L 硫酸溶液中，搅拌溶解。
酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维的测定
附：饲料中中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定（附纤维素、木质素的测定）（一）原理饲料养分的常规测定法中存在的重要缺点之一，是测得饲料的粗纤维与无氮浸出物的数值不能反映饲料的真实情况。
测定时粗纤维不是一种纯化合物，而是几种化合物的混合物，其中主要组成是纤维素、半纤维素与木质素。
纤维素与半纤维素具有相似的营养价值，它们的营养价值对反刍家畜较单胃家畜为高。
木质素对全部家畜均不能被消化，但用常规法测定饲料的粗纤维时，饲料中仅有一部分半纤维素和木质素量包括在粗纤维的数值内，其余部分都被计算在无氮浸出物的数值中，且都被认为与糖和淀粉具有同样的消化性能。
由此可见，常规法测得粗纤维的数值不能全部反映饲料中大部分的不消化成分。
由于上述原因，Van Soest氏与其伙伴提出测定饲料中中性洗涤纤维与酸性洗涤纤维的方法，原理为：植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。
将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
（二）试剂1．中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠和6.8g四硼酸钠均放入1000mL刻度烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加30克十二烷基硫酸钠和l0mL乙二醇乙醚，称取4.56克无水磷酸氢二钠置于另一烧杯中，加少量蒸馏水微热溶解后倾入第一个烧杯中，再转入容量瓶中稀释至1000mL，此溶液PH值在6.9-7.1左右(PH值一般不需要调整)。
2．酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）制备称取20g十六烷三甲基溴化铵溶于1000mL2.0 mo l·L-1硫酸溶液中，搅拌溶解，必要时过滤。
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滤袋法测定酸性洗涤纤维(ADF)
A. 试剂
(a) 酸性洗涤剂溶液：称取20 g十六烷三甲基溴化胺（CTAB），溶于1000 mL已标定过的 0.50 mol/L硫酸溶液中，加热搅拌使其溶解。
(b) 0.50 mol/L硫酸溶液：取49 g (约27 mL)浓硫酸，慢慢加入已装有500 mL水的烧杯中，冷却后注入1000 mL容量瓶中，加水至刻度，标定。
(c) 丙酮：无色，并且蒸发后无残渣。
B. 安全注意
(a) 丙酮易燃，操作时应在通风橱中进行，避免吸入或与皮肤接触。
将滤袋放入烘箱之前，要确保滤袋完全干燥，丙酮完全挥发。
(b) CTAB对黏膜有刺激，因此操作时要带防尘口罩和手套。
C.设备
(a) 消化装置- ANKOM 220纤维分析仪。
(b) 滤袋- ANKOM F57滤袋。
(c) 封口机
(d) 干燥器
(e) 分析天平-精确至0.1mg
(f) 电热干燥箱
(g) 耐溶剂记号笔
D. 步骤
(a) 滤袋和样品的准备
1)用耐溶剂的记号笔给滤袋编号，称重(m 1)。
2) 直接准确称取0.5g (± 0.05 g制备好的样品 (m ) 于滤袋中。
样品需要粉碎过1mm筛。
3)在距离滤袋上边缘大约5 mm用封口机封口。
然后将样品在滤袋中展平，均匀分布。
4)至少取一个空白滤袋(C1)，同时做空白测定。
5) 一次最多可以在滤袋架上放24个滤袋。
无论放置滤袋数量多少，9层滤袋架上托盘要全部使用，每层放三个滤袋。
层与层之间错开120度。
然后将装有滤袋的支架放入纤维分析仪消煮器中，然后在顶部将金属压锤放上，以确保消煮过程中不浮起。
6) 样品含有大豆产品或脂肪超过5% - 将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，
盖好盖子。
摇动容器10次，浸泡10 min。
然后更换新的丙酮，重复上述操作一次。
最后将滤袋取出，放在网筛上凉干。
例外：烘烤大豆–由于烘烤大豆的特殊性，需要采用改进后的下面脱脂方法。
将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，盖好盖子。
摇动容器10次，然后更换新的丙酮，浸泡12 h。
取出滤袋，放在网筛上凉干。
(b) 当处理24个滤袋时，向容器中加入2000 mL酸性洗涤剂溶液。
如果处理样品少于20 个滤袋，按照每个滤袋加100 mL酸溶液，但不能少于1500 mL，确保9层托盘滤袋支架能完全浸没。
(c) 打开搅拌和加热开关，确保滤袋支架搅拌正常。
盖上盖子并完全密封好。
仪器将加热并维持溶液温度100°C。
处理时间60 min，包括加热升温时间。
(d) 消煮结束，关上加热和搅拌开关，打开排液阀（开始要慢一点），在打开盖子之前一定将热的溶液排完。
警示：消煮器中的溶液是有压力的。
在打开盖子之前一定将废液阀打开以释放压力。
确保废液排放管与废液容器安全连接。
(e) 溶液排完后，打开盖子，关闭排液阀，加2000 mL (85°C~90°C) 蒸馏水，放下盖子，但不旋紧。
打开搅拌开关（不打开加热开关）搅拌3~5 min。
排掉废液，重复2次，共淋洗3次或洗涤至中性。
(f) 最后一次淋洗后，加冷的自来水以操作和使冷却容器，为下轮测定做好准备。
排干水，从容器中取出带滤袋的支架。
将滤袋从滤袋支架上取下来，轻轻挤压去掉多余的水。
然后将滤袋放入250 mL 烧杯中，加丙酮至覆没滤袋，浸泡3~5 min ，然后取出并轻轻挤压去掉多余的丙酮。
(g) 在通风橱中展开滤袋，让其自然干燥。
完全干燥后放入105°C烘箱烘干3h. 警告：在丙酮完全挥发掉之前不能把滤袋放入烘箱中。
(q) 从烘箱中取出滤袋，直接放入干燥器中冷却至室温，然后称重（m 2）。
E. 计算
试样中中性洗涤纤维质量分数按以下公式计算。
NDF (%) = (m2- (m1 x C1)) x 100 / m
其中：m1 为空袋质量，g；m为样品质量，g；m2 为提取处理后样品残渣+滤袋质量，g；C1 为空白袋子校正系数(烘干后质量/原来质量)。
F．几点说明
如果样品同时测定NDF和ADF，可以先测定NDF，然后将测定完装有残渣的滤袋放在样品架子上，直接加酸性洗涤溶液，然后按照ADF测定程序测定。