芸香苷的提取、分离和鉴定

2.色谱鉴定 a. 芸香苷和槲皮素的纸色谱 层析材料：定性滤纸。 点 液。 展开剂：正丁醇－醋酸－水（4:1:5）上层溶液。 展开方式：预饱和后，上行展开。 显 色：喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外光灯、 （365nm）下检视色斑的变化。 观察记录：记录图谱及斑点颜色。 b. 芸香苷与槲皮素的聚酰胺色谱 层析材料：聚酰胺薄膜。 样：提取的槲皮素承芸香苷的乙醇溶液和对照品的乙醇溶
芸香苷的提取、 芸香苷的提取、分离和鉴定
一、实验目的 1.熟悉利用化合物的物理、化学性质对其进行分 析和鉴定的方法。 2.掌握紫外光谱在黄酮类化合物结构鉴定中的方 法和应用。
二、实验原理 主要是利用芸香苷的物理化学性质对其进行提取分离。 三、操作要点 1.芸香苷的提取－水提取法 芸香苷的提取－ 芸香苷的提取 称取槐花米粗粉20 g（压碎），加沸水300 ml，加热煮沸 30 min，纱布趁热过滤，残渣同法再操作一次，合并两次滤 液，室温放置析晶，待全部析出后，减压抽滤，用蒸馏水洗 涤芸香苷结晶，抽干，得粗制芸香苷，置空气中干燥后，称 重。 2.芸香苷的精制 芸香苷的精制 取粗制芸香苷2 g，加蒸馏水400 ml，煮沸至芸香苷全部 溶解，趁热抽滤，冷却后即可析出晶体，抽滤，得芸香苷精 制品，置空气中干燥后，称重。
五、思考题 1．黄酮类化合物还有哪些提取方法?芸香苷的提取还 可用什么方法? 2．酸水解常用什么酸?为什么用硫酸比用盐酸水解后 处理更方便? 3．本实验中各种色谱的原理是什么?解释化合物结构 与Rf值的关系。
3.芸香苷的水解 芸香苷的水解 取精制芸香苷1g，研细后置于250ml圆底烧瓶中，加入2% 硫酸100ml，加热回流30min，瓶中混浊液逐渐变为澄清的棕 黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。放冷沉淀，抽滤，保存滤 液（应为澄清无色液体），用做糖的检查，沉淀物为芸香苷来自百度文库苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称 重。粗制槲皮素再用50%乙醇重结晶得精制的含2分子结晶水 的槲皮素。 取芸香苷水解后的滤液10 ml，加饱和氢氧化钡溶液（或 碳酸钙粉末）中和至中性，滤去白色的硫酸钡沉淀，滤液水 浴60℃浓缩至2～3 ml，加2～3 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。
点 样：提取的芸香苷与槲皮素的乙醇溶液和对照品的乙醇溶液。 展开剂：乙醇－水（7:3）或甲醇－水（8:2）。 展开方式：上行展开。 显 色：喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外灯光（365nm）下检视色斑 的变化。 观察记录：记录图谱及斑色颜色。 c. 糖的色谱鉴定 层析材料：定性滤纸。 点 样：糖的供试液及葡萄糖、鼠李糖对照品溶液。 展开剂：正丁醇－醋酸－水（4:1:5）上层溶液。 展开方式：上行展开。 显 色：苯胺－邻苯二甲酸试液，喷洒后先用电吹风冷吹至于，再吹热风 至出现斑点为止。 观察记录：记录图谱及斑点颜色。
四、鉴定 1.呈色反应 取芸香苷及槲皮素精品约10 mg，各用5 ml乙醇溶解，制成样品溶液， 按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 a. Molish反应 取样品溶液l ml，加10％α-萘酚溶液0.5 ml，振摇后斜置 试管，沿管壁滴加0.5 ml硫酸，静置，观察并记录液面交界处颜色变化。 b. 盐酸－镁粉反应 芸香苷与槲皮素溶液分别置于两试管中，加入金属 镁粉少许，盐酸2滴～3滴，观察并记录颜色变化。 c. 醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、槲皮素的乙醇 溶液，然后各加1％醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记 录现象。 d. 三氯化铝纸片反应 在两张滤纸条上分别滴加芸香苷、槲皮素醇溶液 后，各加1%三氯化铝乙醇溶液两滴，观察颜色变化，记录现象。 e. 锆－柠檬酸反应 取样品溶液2 ml，加入2%二氯氧锆甲醇溶液3滴～4 摘，观察颜色，然后加入2％柠檬酸甲醇溶液3滴～4滴，观察并记录颜色变 化。