第三章糖和苷类..
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35
（一）理化检识
1、菲林反应和多伦反应：仅还原糖反应阳性，
非还原糖和苷类反应阴性。 2、Molish反应 注意：
•单糖、低聚糖、多糖、苷类，Molish反应均为阳性 •丙酮、甲酸、乳酸、草酸、没食子酸、苯三酚、α -萘酚
和葡萄糖醛酸以及各种醛糖衍生物Molish反应也为阳性 •排除检识反应过程中水解产生的游离糖的干扰 •排除游离糖的干扰（正丁醇萃取苷类） •氨基糖反应阴性，碳苷和糖醛酸苷有时呈阴性
Molish反应 氧化亚铜沉淀 游离糖
39
3、水解反应：
• 样品酸水解后放冷的反应液出现沉淀，则 存在苷类化合物。因为苷类在酸水中水解产 生糖和苷元，苷元一般具有亲脂性，水溶性 差，易在水解液中析出沉淀。 多糖和低聚糖水解后产生单糖水溶性好，不 会产生沉淀。
40
（二）色谱检识
1、薄层色谱
1) 硅胶板 2) 展开剂：正丁醇-冰醋酸-水（4：1：5上层），乙 酸乙酯-正丁醇-水（4：5：1上层），氯仿-甲醇-水 （65：35：10下层）等含水系统 3) 显色剂：硫酸、茴香醛硫酸、苯胺-邻苯二甲酸等 4) 硅胶用0.03mol/L硼酸溶液或无机盐水溶液代替水 涂布薄层，能增加糖在固定相中的溶解度，样品承 载量明显增加。
硅胶——生物碱 碱性氧化铝——黄酮、蒽醌等
半化学吸附：氢键，选择性较弱，多可逆
聚酰胺
12
物理吸附的基本规律：极性相似者易于吸附
极性吸附剂：硅胶、氧化铝
对极性物质亲和力强 溶剂极性 非极性吸附剂：活性炭
对非极性成分吸附强
溶剂极性 吸附剂对溶质的吸附力
吸附剂对溶质的吸附力
甲醇（31.2） 水（81.0） 乙酸乙酯（6.11） 乙醇（26.0）
14
1）简单吸附法用于物质的浓缩与精制
活性炭吸附法
结晶、重结晶中脱色、脱臭
从大量稀水液中浓缩微量物质
15
2）吸附柱色谱法
硅胶吸附柱色谱
B．装柱：
C．上样： D．洗脱： E．托尾：
氧化铝吸附柱色谱
A．吸附剂：30～60倍，有时100～200倍
第三章
糖和苷类化合物
王 纠 zhiziangel@163.com
湖北医药学院药学院
Wednesday, October 25, 2017
本章基本内容
一、概述 二、糖和苷的结构与分类 三、糖和苷的理化性质 四、糖和苷的提取与分离
五、糖和苷的检识
六、苷结构的研究
2
第三讲
苷的提取与分离 苷的检识 苷的结构研究
25
根据物质分子大小差异进行分离
透析法 超滤法 超速离心 凝胶滤过法
分子筛滤过
gel filtration： molecular sieve filtration
凝胶渗透色谱 gel permeation chromtography
26
凝胶滤过法
gel filtration：
原 理
• • •
苷元——酸水解 原生苷——防止水解 次生苷——酶解
8
苷类的提取和分离流程(系统溶剂提取法 )
中 药 EtOH EtOH 提取物 减压回收 EtOH 浓缩物 石油醚提取
水沉
石油醚部分 （多为油脂）
残留物 Et2O 或 CHCl3 提取
水层
Et2O 或 CHCl3 提取物（苷元） 残留物 EtOAc 提取
先用水 饱和
EtOAc 提取液 （含单糖苷或含糖较少的苷）
残留物
n-BuOH 提取 n-BuOH 提取液（含糖较多的苷）
9
2、分离
经初步提取得到的苷类通常极性较大，且多为非
结晶性物质，同时不同程度地混有其他物质，分离 困难，一般需先除去杂质，再进一步分离纯化。
除杂：可用溶剂沉淀法，也可用大孔树脂吸附法来富集、
树脂的性质：非极性树脂
易吸附非极性化合物 易吸附极性化合物
极性树脂
溶剂的性质：
物质在溶剂中的溶解度大，树脂对此物质的吸附力就
小
24
洗脱剂
水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。 最常用：乙醇—水 广泛应用于化合物的分离与富集工作中 如：苷类、糖类的分离
应 用
生物碱的精制
多糖、黄酮、三萜类化合物的分离。
OH
OH
OH OH
20
影 响 吸 附 力 强 弱 的 因 素
化合物在不同溶剂中的吸附力，随溶剂极性增强而增强
水中最强———常以水装柱、样品以水溶解上样 含水醇中次之
醇中最弱———常以浓度渐高的含水醇梯度洗脱
EtOH-H2O最常用
各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力
水 甲醇 乙醇 氢氧化钠水溶液 甲酰胺 二甲基甲酰胺 尿素水溶液
溶质可被极性强的溶剂洗脱 溶质可被极性弱的溶剂洗脱
13
极性及强弱判断
一般物质：官能团的种类、数目、位置、碳链长短
R-COOH﹥Ar-OHFra Baidu bibliotekR-OH﹥R-NH-﹥R-CO-NH-﹥
R-CHO﹥R-CO-R﹥R-COO-R﹥R-O-R﹥R-X﹥R-H
溶剂：介电常数ε，极性
环己烷（1.88） 苯（2.29） 无水乙醚（4.47） 氯仿（5.20）
弱
21
强
应 用
醌类、黄酮类等酚性的制备和分离。 脱鞣处理 生物碱、萜类、甾类、糖类、氨基酸等极性
与非极性化合物的分离也有用途
22
4）大孔吸附树脂
性质
原理
高分子聚合物 白色球形颗粒 多孔网状结构 不溶于酸、碱、有机溶剂
吸附原理：分子间
力、氢键 分子筛
23
影 响 吸 附 力 强 弱 的 因 素
水液 水提取液 正丁醇 萃取
苷类 聚糖、多 糖
苷类 蒸干 供试品
Molish反应
正丁醇液
38
呈阳性
因浓硫酸可将结合糖水解为游离糖，Molish反应阳性仅能说 明样品中含有游离或结合的糖，却不能判定是苷类还是游离 糖或其他形式的糖 多糖
不溶物
乙醇 样品 溶解 反应液 菲林反应 滤液 过 滤
苷类 呈阳性
经典方法：元素分析，分子量测定。
现代方法：质谱法（MS，mass spectrum）
• •
确定分子量、分子式 提供部分结构信息
——丢失碎片的大小 如15、17
——碎片的m/z及裂解方式
43
（三）组成苷的苷元和糖的鉴定
苷用稀酸或酶进行水解——单糖和苷元，再鉴定。 1、苷元的结构鉴定 根据化学性质判断类型和母核结构。（IR、UV） 2、苷中组成糖的种类鉴定
凝胶三维网状结构的分子筛作用 按分子量由大到小的顺序分离
凝 胶 的 种 类 、 性 质 及 应 用
葡聚糖凝胶Sephadex G： 葡聚糖+交联剂（环氧氯丙烷） 分子筛 水中应用 分离水溶性成份 商品型号按交联度分类，以10倍吸水量（ml/g）表示 羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20: Sephadex G-25羟丙基化所得 分子筛和反相色谱相结合 水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿中使用 水溶性、脂溶性成分都可分
（适于分子量不同的苷类，如蒽醌、二蒽酮类）
•大孔树脂、活性炭、纤维素、聚酰胺、离子交换树脂等 •大孔树脂法、溶剂法等通常可除掉其他杂质，获得总苷；柱
色谱法可得到单体化合物
11
根据物质吸附性差异进行分离
物理吸附：
分子间力，无选择性，可逆。
硅胶、氧化铝、活性炭
化学吸附：化学键，选择性较强，常不可逆。
可溶于浓盐酸、冰乙酸、甲酸中
17
吸附原理
分子间氢键——半化学吸附
18
影 响 吸 附 力 的 因 素
化合物在含水溶剂中大致有以下规律：
形成氢键的基团数目：越多，越强。 形成氢键的基团所处的位置：
处于易形成分子内氢键者，减弱。
分子中芳香化程度：高，增强。
19
OH
OH
OH
HO
OH
OH
OH OH
41
2、纸色谱
展开剂：正丁醇-冰醋酸-水(4：1：5上层，BAW) ，正丁醇-乙醇-水(4：2：1)，水饱和的苯酚。 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸、间苯二酚-盐酸等。
问题：纸色谱中以BAW和正丁醇作展开 剂，展开糖，谁的Rf值大？
42
六、苷的结构研究
（一）物理常数测定：如熔点、比旋度、溶解度等。
（二）分子量和分子式的测定
Ph N CH3
Ⅰ
碱性 Ⅰ＜Ⅱ ＜ Ⅲ
O O CO CH
树脂（Ⅱ、Ⅲ） NH4Cl 洗脱 洗脱液（Ⅱ） 树脂（Ⅲ） Na2CO3 洗脱
CH2OH
Ⅱ
Ⅰ
Ph N CH3 O CO CH CH2OH
洗脱液（Ⅲ）
树脂
Ⅱ
O N+OHOCH3 OCH3
碱性不同的生物碱的分离
34
Ⅲ
五、苷的检识
苷的检识:苷由糖和苷元组成，含有糖基是苷 类的共性。因此，其共性检识的方法是检识 分子中是否含有糖，这和糖类的检识类似。 其苷元部分的检识将在相应的章节中介绍。 糖的检识:主要是利用糖的还原性和糖的脱水 反应所生成沉淀、产生的颜色变化等现象来 进行理化检识，色谱检识则利用薄层色谱和 纸色谱等方法进行。
如碱性不同的生物碱的分离
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水提液 强酸性阳离子交换树脂 流出液 （酸性、中性成分） 强碱性阴离子交换树脂 流出液 （中性成分） 树脂 （酸性成分） 流出液 （碱性成分） 树脂 （两性成分） 树脂 （碱性、两性成分） 氨水洗脱 洗脱液 强碱性阴离子交换树脂
水提液中酸性、碱性、两性化合物的分离
33
水提液 弱酸性阳离子交换树脂 流出液 树脂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ） 水洗脱 洗脱液 （Ⅰ）
28
根据物质离解程度不同分离进行 分离——离子交换法
离子交换原理
离子交换树脂为固定相，水，含水溶剂装柱 含水流动相通过树脂 可交换离子与树脂上的交换基团交换，吸附到树脂上 中性及无交换离子的成分流出 将吸附到柱上的成分洗脱下来
29
离子交换树脂的性质 离子交换树脂的结构
球形颗粒，不溶于水，可在水中溶胀
径高比（d/h）1:15～1:20
干法装柱/湿法装柱 干法上样/湿法上样 等度/梯度（洗脱剂极性递增） 化学吸附：硅胶—碱性成分 Rf=0.2～0.3 洗脱剂中加入碱
氧化铝—酸性成分 洗脱剂中加入酸
F．洗脱系统的选择： TLC
16
3）聚酰胺柱色谱
性 质
高分子聚合物 不溶于常见有机溶剂 对碱稳定 对酸特别是无机酸稳定性差
纯化总苷。 粗提物溶于少量 甲醇或水，加丙 酮或乙醚使较纯 的苷类沉淀析出
10
粗提物溶于水,上大孔 树脂柱,先用水洗去无 机盐、糖、多肽等杂 质,再用逐步增加浓度 的稀醇洗脱苷类
分离：综合应用各种色谱法
•硅胶：多用氯仿-甲醇系统洗脱。 （常用，适用大多数苷） •反相硅胶：水-甲醇或水-乙腈系统。 （皂苷、某些亲水性苷） •凝胶：Sephadex LH-20、Sephadex G系列。水-醇系统洗脱。
母核
离子交换基团
30
离子交换树脂的种类
阳离子交换树脂：强酸性（-SO3-H+）
弱酸性（-COO-H+） 阴离子交换树脂：强碱性（-N+（CH3）3Cl-） 弱碱性（-NH2，-NH-，-N=）
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离子交换树脂的应用
不同电荷离子的分离
如水提液中酸性、碱性、两性化合物的分离
相同电荷但解离程度不同离子的分离
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方法
取样品的提取液1ml，加5%α -萘酚乙醇液1～3滴，摇匀 后沿试管壁缓缓加入浓硫酸，若在两液面间有紫色环产 生，说明样品组成中含有糖或苷类。
α-萘酚 样品 乙醇 提取液 浓硫酸 紫色环
37
水提取液往往含有大量的单糖、低聚糖、多糖等，
难以直接检识苷类，可用正丁醇萃取，正丁醇萃 取液蒸去溶剂后进行Molish反应，如呈阳性则表 明含有苷类。 单糖、低
3
掌握：苷的分类提取及其常用分离方法 熟悉：苷的结构研究方法。 了解：苷的检识方法
4
四、苷的提取分离
1、提取：
苷的种类不同，性质不同，提取分离方 法也不同
苷：极性随着糖基的增多而增大。糖基增多，
苷元所占比例相应变小，亲水性增大。
苷元：一般可溶于低极性有机溶剂。
5
原生苷：先要设法抑制或破坏酶的活性,常 用的方法是采用甲醇、乙醇或沸水提取 , 或 在药材中拌入CaCO3, 在提取过程中要尽量 避免与酸或碱接触，以防苷类被酸或碱水解 次生苷：可利用发酵、酶解、酸碱水解等 方法处理药材，选择性部分水解以提高目标 物产量。提取前将药材粗粉加适量水拌匀， 加热至35℃左右保持24～48小时，再用有机 溶剂（醇、苯、氯仿、石油醚）进行提取
6
提取苷元时，先用适当方法彻底水解 苷类（酶解或酸水解），再用乙酸乙酯、 氯仿、石油醚等极性小的有机溶剂提出 苷元；也可先提取总苷，再水解成苷元 例如：大豆苷元（葛根）
7
提取苷应注意问题
1) 破坏酶的活性 :
80℃以上加热 60％以上醇提取 加入CaCO3后沸水煮
2) 注意酸碱条件防止苷水解 3) 根据需要采取不同方法提取苷
（一）理化检识
1、菲林反应和多伦反应：仅还原糖反应阳性，
非还原糖和苷类反应阴性。 2、Molish反应 注意：
•单糖、低聚糖、多糖、苷类，Molish反应均为阳性 •丙酮、甲酸、乳酸、草酸、没食子酸、苯三酚、α -萘酚
和葡萄糖醛酸以及各种醛糖衍生物Molish反应也为阳性 •排除检识反应过程中水解产生的游离糖的干扰 •排除游离糖的干扰（正丁醇萃取苷类） •氨基糖反应阴性，碳苷和糖醛酸苷有时呈阴性
Molish反应 氧化亚铜沉淀 游离糖
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3、水解反应：
• 样品酸水解后放冷的反应液出现沉淀，则 存在苷类化合物。因为苷类在酸水中水解产 生糖和苷元，苷元一般具有亲脂性，水溶性 差，易在水解液中析出沉淀。 多糖和低聚糖水解后产生单糖水溶性好，不 会产生沉淀。
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（二）色谱检识
1、薄层色谱
1) 硅胶板 2) 展开剂：正丁醇-冰醋酸-水（4：1：5上层），乙 酸乙酯-正丁醇-水（4：5：1上层），氯仿-甲醇-水 （65：35：10下层）等含水系统 3) 显色剂：硫酸、茴香醛硫酸、苯胺-邻苯二甲酸等 4) 硅胶用0.03mol/L硼酸溶液或无机盐水溶液代替水 涂布薄层，能增加糖在固定相中的溶解度，样品承 载量明显增加。
硅胶——生物碱 碱性氧化铝——黄酮、蒽醌等
半化学吸附：氢键，选择性较弱，多可逆
聚酰胺
12
物理吸附的基本规律：极性相似者易于吸附
极性吸附剂：硅胶、氧化铝
对极性物质亲和力强 溶剂极性 非极性吸附剂：活性炭
对非极性成分吸附强
溶剂极性 吸附剂对溶质的吸附力
吸附剂对溶质的吸附力
甲醇（31.2） 水（81.0） 乙酸乙酯（6.11） 乙醇（26.0）
14
1）简单吸附法用于物质的浓缩与精制
活性炭吸附法
结晶、重结晶中脱色、脱臭
从大量稀水液中浓缩微量物质
15
2）吸附柱色谱法
硅胶吸附柱色谱
B．装柱：
C．上样： D．洗脱： E．托尾：
氧化铝吸附柱色谱
A．吸附剂：30～60倍，有时100～200倍
第三章
糖和苷类化合物
王 纠 zhiziangel@163.com
湖北医药学院药学院
Wednesday, October 25, 2017
本章基本内容
一、概述 二、糖和苷的结构与分类 三、糖和苷的理化性质 四、糖和苷的提取与分离
五、糖和苷的检识
六、苷结构的研究
2
第三讲
苷的提取与分离 苷的检识 苷的结构研究
25
根据物质分子大小差异进行分离
透析法 超滤法 超速离心 凝胶滤过法
分子筛滤过
gel filtration： molecular sieve filtration
凝胶渗透色谱 gel permeation chromtography
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凝胶滤过法
gel filtration：
原 理
• • •
苷元——酸水解 原生苷——防止水解 次生苷——酶解
8
苷类的提取和分离流程(系统溶剂提取法 )
中 药 EtOH EtOH 提取物 减压回收 EtOH 浓缩物 石油醚提取
水沉
石油醚部分 （多为油脂）
残留物 Et2O 或 CHCl3 提取
水层
Et2O 或 CHCl3 提取物（苷元） 残留物 EtOAc 提取
先用水 饱和
EtOAc 提取液 （含单糖苷或含糖较少的苷）
残留物
n-BuOH 提取 n-BuOH 提取液（含糖较多的苷）
9
2、分离
经初步提取得到的苷类通常极性较大，且多为非
结晶性物质，同时不同程度地混有其他物质，分离 困难，一般需先除去杂质，再进一步分离纯化。
除杂：可用溶剂沉淀法，也可用大孔树脂吸附法来富集、
树脂的性质：非极性树脂
易吸附非极性化合物 易吸附极性化合物
极性树脂
溶剂的性质：
物质在溶剂中的溶解度大，树脂对此物质的吸附力就
小
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洗脱剂
水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。 最常用：乙醇—水 广泛应用于化合物的分离与富集工作中 如：苷类、糖类的分离
应 用
生物碱的精制
多糖、黄酮、三萜类化合物的分离。
OH
OH
OH OH
20
影 响 吸 附 力 强 弱 的 因 素
化合物在不同溶剂中的吸附力，随溶剂极性增强而增强
水中最强———常以水装柱、样品以水溶解上样 含水醇中次之
醇中最弱———常以浓度渐高的含水醇梯度洗脱
EtOH-H2O最常用
各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力
水 甲醇 乙醇 氢氧化钠水溶液 甲酰胺 二甲基甲酰胺 尿素水溶液
溶质可被极性强的溶剂洗脱 溶质可被极性弱的溶剂洗脱
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极性及强弱判断
一般物质：官能团的种类、数目、位置、碳链长短
R-COOH﹥Ar-OHFra Baidu bibliotekR-OH﹥R-NH-﹥R-CO-NH-﹥
R-CHO﹥R-CO-R﹥R-COO-R﹥R-O-R﹥R-X﹥R-H
溶剂：介电常数ε，极性
环己烷（1.88） 苯（2.29） 无水乙醚（4.47） 氯仿（5.20）
弱
21
强
应 用
醌类、黄酮类等酚性的制备和分离。 脱鞣处理 生物碱、萜类、甾类、糖类、氨基酸等极性
与非极性化合物的分离也有用途
22
4）大孔吸附树脂
性质
原理
高分子聚合物 白色球形颗粒 多孔网状结构 不溶于酸、碱、有机溶剂
吸附原理：分子间
力、氢键 分子筛
23
影 响 吸 附 力 强 弱 的 因 素
水液 水提取液 正丁醇 萃取
苷类 聚糖、多 糖
苷类 蒸干 供试品
Molish反应
正丁醇液
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呈阳性
因浓硫酸可将结合糖水解为游离糖，Molish反应阳性仅能说 明样品中含有游离或结合的糖，却不能判定是苷类还是游离 糖或其他形式的糖 多糖
不溶物
乙醇 样品 溶解 反应液 菲林反应 滤液 过 滤
苷类 呈阳性
经典方法：元素分析，分子量测定。
现代方法：质谱法（MS，mass spectrum）
• •
确定分子量、分子式 提供部分结构信息
——丢失碎片的大小 如15、17
——碎片的m/z及裂解方式
43
（三）组成苷的苷元和糖的鉴定
苷用稀酸或酶进行水解——单糖和苷元，再鉴定。 1、苷元的结构鉴定 根据化学性质判断类型和母核结构。（IR、UV） 2、苷中组成糖的种类鉴定
凝胶三维网状结构的分子筛作用 按分子量由大到小的顺序分离
凝 胶 的 种 类 、 性 质 及 应 用
葡聚糖凝胶Sephadex G： 葡聚糖+交联剂（环氧氯丙烷） 分子筛 水中应用 分离水溶性成份 商品型号按交联度分类，以10倍吸水量（ml/g）表示 羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20: Sephadex G-25羟丙基化所得 分子筛和反相色谱相结合 水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿中使用 水溶性、脂溶性成分都可分
（适于分子量不同的苷类，如蒽醌、二蒽酮类）
•大孔树脂、活性炭、纤维素、聚酰胺、离子交换树脂等 •大孔树脂法、溶剂法等通常可除掉其他杂质，获得总苷；柱
色谱法可得到单体化合物
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根据物质吸附性差异进行分离
物理吸附：
分子间力，无选择性，可逆。
硅胶、氧化铝、活性炭
化学吸附：化学键，选择性较强，常不可逆。
可溶于浓盐酸、冰乙酸、甲酸中
17
吸附原理
分子间氢键——半化学吸附
18
影 响 吸 附 力 的 因 素
化合物在含水溶剂中大致有以下规律：
形成氢键的基团数目：越多，越强。 形成氢键的基团所处的位置：
处于易形成分子内氢键者，减弱。
分子中芳香化程度：高，增强。
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OH
OH
OH
HO
OH
OH
OH OH
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2、纸色谱
展开剂：正丁醇-冰醋酸-水(4：1：5上层，BAW) ，正丁醇-乙醇-水(4：2：1)，水饱和的苯酚。 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸、间苯二酚-盐酸等。
问题：纸色谱中以BAW和正丁醇作展开 剂，展开糖，谁的Rf值大？
42
六、苷的结构研究
（一）物理常数测定：如熔点、比旋度、溶解度等。
（二）分子量和分子式的测定
Ph N CH3
Ⅰ
碱性 Ⅰ＜Ⅱ ＜ Ⅲ
O O CO CH
树脂（Ⅱ、Ⅲ） NH4Cl 洗脱 洗脱液（Ⅱ） 树脂（Ⅲ） Na2CO3 洗脱
CH2OH
Ⅱ
Ⅰ
Ph N CH3 O CO CH CH2OH
洗脱液（Ⅲ）
树脂
Ⅱ
O N+OHOCH3 OCH3
碱性不同的生物碱的分离
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Ⅲ
五、苷的检识
苷的检识:苷由糖和苷元组成，含有糖基是苷 类的共性。因此，其共性检识的方法是检识 分子中是否含有糖，这和糖类的检识类似。 其苷元部分的检识将在相应的章节中介绍。 糖的检识:主要是利用糖的还原性和糖的脱水 反应所生成沉淀、产生的颜色变化等现象来 进行理化检识，色谱检识则利用薄层色谱和 纸色谱等方法进行。
如碱性不同的生物碱的分离
32
水提液 强酸性阳离子交换树脂 流出液 （酸性、中性成分） 强碱性阴离子交换树脂 流出液 （中性成分） 树脂 （酸性成分） 流出液 （碱性成分） 树脂 （两性成分） 树脂 （碱性、两性成分） 氨水洗脱 洗脱液 强碱性阴离子交换树脂
水提液中酸性、碱性、两性化合物的分离
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水提液 弱酸性阳离子交换树脂 流出液 树脂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ） 水洗脱 洗脱液 （Ⅰ）
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根据物质离解程度不同分离进行 分离——离子交换法
离子交换原理
离子交换树脂为固定相，水，含水溶剂装柱 含水流动相通过树脂 可交换离子与树脂上的交换基团交换，吸附到树脂上 中性及无交换离子的成分流出 将吸附到柱上的成分洗脱下来
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离子交换树脂的性质 离子交换树脂的结构
球形颗粒，不溶于水，可在水中溶胀
径高比（d/h）1:15～1:20
干法装柱/湿法装柱 干法上样/湿法上样 等度/梯度（洗脱剂极性递增） 化学吸附：硅胶—碱性成分 Rf=0.2～0.3 洗脱剂中加入碱
氧化铝—酸性成分 洗脱剂中加入酸
F．洗脱系统的选择： TLC
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3）聚酰胺柱色谱
性 质
高分子聚合物 不溶于常见有机溶剂 对碱稳定 对酸特别是无机酸稳定性差
纯化总苷。 粗提物溶于少量 甲醇或水，加丙 酮或乙醚使较纯 的苷类沉淀析出
10
粗提物溶于水,上大孔 树脂柱,先用水洗去无 机盐、糖、多肽等杂 质,再用逐步增加浓度 的稀醇洗脱苷类
分离：综合应用各种色谱法
•硅胶：多用氯仿-甲醇系统洗脱。 （常用，适用大多数苷） •反相硅胶：水-甲醇或水-乙腈系统。 （皂苷、某些亲水性苷） •凝胶：Sephadex LH-20、Sephadex G系列。水-醇系统洗脱。
母核
离子交换基团
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离子交换树脂的种类
阳离子交换树脂：强酸性（-SO3-H+）
弱酸性（-COO-H+） 阴离子交换树脂：强碱性（-N+（CH3）3Cl-） 弱碱性（-NH2，-NH-，-N=）
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离子交换树脂的应用
不同电荷离子的分离
如水提液中酸性、碱性、两性化合物的分离
相同电荷但解离程度不同离子的分离
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方法
取样品的提取液1ml，加5%α -萘酚乙醇液1～3滴，摇匀 后沿试管壁缓缓加入浓硫酸，若在两液面间有紫色环产 生，说明样品组成中含有糖或苷类。
α-萘酚 样品 乙醇 提取液 浓硫酸 紫色环
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水提取液往往含有大量的单糖、低聚糖、多糖等，
难以直接检识苷类，可用正丁醇萃取，正丁醇萃 取液蒸去溶剂后进行Molish反应，如呈阳性则表 明含有苷类。 单糖、低
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掌握：苷的分类提取及其常用分离方法 熟悉：苷的结构研究方法。 了解：苷的检识方法
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四、苷的提取分离
1、提取：
苷的种类不同，性质不同，提取分离方 法也不同
苷：极性随着糖基的增多而增大。糖基增多，
苷元所占比例相应变小，亲水性增大。
苷元：一般可溶于低极性有机溶剂。
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原生苷：先要设法抑制或破坏酶的活性,常 用的方法是采用甲醇、乙醇或沸水提取 , 或 在药材中拌入CaCO3, 在提取过程中要尽量 避免与酸或碱接触，以防苷类被酸或碱水解 次生苷：可利用发酵、酶解、酸碱水解等 方法处理药材，选择性部分水解以提高目标 物产量。提取前将药材粗粉加适量水拌匀， 加热至35℃左右保持24～48小时，再用有机 溶剂（醇、苯、氯仿、石油醚）进行提取
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提取苷元时，先用适当方法彻底水解 苷类（酶解或酸水解），再用乙酸乙酯、 氯仿、石油醚等极性小的有机溶剂提出 苷元；也可先提取总苷，再水解成苷元 例如：大豆苷元（葛根）
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提取苷应注意问题
1) 破坏酶的活性 :
80℃以上加热 60％以上醇提取 加入CaCO3后沸水煮
2) 注意酸碱条件防止苷水解 3) 根据需要采取不同方法提取苷