饮用水大肠杆菌检测方法
生活饮用水标准检验方法 第8部分
生活饮用水标准检验方法第8部分
生活饮用水标准检验方法的第8部分涉及到水质中微生物的检测方法。
这部分通常包括了对大肠杆菌、肠球菌、沙门氏菌等微生物的检测方法。
首先，对水样进行预处理，通常包括过滤、浓缩等步骤，以提高微生物的检测灵敏度。
接着，常用的检测方法包括培养法、PCR法、蛋白质分析法等。
培养法是最常见的微生物检测方法之一，通过将水样接种在含有营养物质的培养基上，观察并计数产生的菌落来确定水样中微生物的数量。
PCR法则是一种分子生物学技术，能够快速、准确地检测特定微生物的DNA序列，从而确定水样中是否存在目标微生物。
蛋白质分析法则是通过检测水样中微生物特定蛋白质的含量来间接判断微生物的存在和数量。
除了这些常见的方法外，还有一些新兴的检测技术，如基因测序技术、质谱分析技术等，也正在逐渐应用于生活饮用水的微生物检测中。
这些方法各有优缺点，可以根据实际情况选择合适的方法进行检测。
总的来说，第8部分的生活饮用水标准检验方法涉及到了对水质中微生物的全面、准确的检测，以保障饮用水的安全和健康。
大肠杆菌的鉴定方法
大肠杆菌的鉴定方法大肠杆菌（Escherichiacoli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于自然环境中，同时也是人和动物肠道中的重要微生物。
尽管大肠杆菌在人体和动物肠道中具有重要的生理功能，但在食品和饮用水中的污染却会给人们的健康带来威胁。
因此，准确地鉴定大肠杆菌的方法对于食品和饮用水的安全至关重要。
一、鉴定大肠杆菌的生理特性大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌，可以通过其生理特性进行鉴定。
大肠杆菌是一种好氧菌，需要氧气才能生长，同时也可以进行厌氧呼吸。
大肠杆菌在温度为37℃时生长最快，此时生长周期为20分钟左右。
大肠杆菌可以利用葡萄糖和其他简单糖类作为碳源，同时也能够分解蛋白质和脂肪酸等有机物。
此外，大肠杆菌可以产生酸和气体，这是鉴定大肠杆菌的重要特征之一。
二、鉴定大肠杆菌的培养基鉴定大肠杆菌的第一步是选择合适的培养基。
常用的培养基有MacConkey培养基、EC培养基、EMB培养基等。
MacConkey培养基是一种选择性培养基，其中含有普通细菌无法利用的普通糖类和有机酸，同时还含有一种选择性抑制剂，可以抑制大多数革兰氏阳性菌和一些革兰氏阴性菌的生长，而大肠杆菌则可以在此培养基上生长并产生红色颜色。
EC培养基和EMB培养基也是常用的选择性培养基，可以选择性地培养大肠杆菌。
三、鉴定大肠杆菌的生化反应在培养出可疑的菌落后，可以进行一系列的生化反应来确认大肠杆菌的存在。
常用的生化反应包括半乳糖发酵试验、气体产生试验、尿素水解试验、亚硝酸盐还原试验等。
半乳糖发酵试验是通过观察菌落的气泡产生来判断大肠杆菌是否存在。
气体产生试验则是通过观察菌落周围的气体产生情况来判断大肠杆菌是否存在。
尿素水解试验则是通过观察菌落周围是否有碱性产生来判断大肠杆菌是否存在。
亚硝酸盐还原试验则是通过观察菌落周围是否有红色颜色的产生来判断大肠杆菌是否存在。
四、鉴定大肠杆菌的分子生物学方法随着分子生物学技术的发展，越来越多的分子生物学方法被应用于鉴定大肠杆菌。
生活饮用水卫生标准大肠菌群数
生活饮用水卫生标准大肠菌群数随着人们对健康的关注不断提高，生活饮用水的质量成为人们越来越关注的话题之一。
而大肠菌群数是衡量生活饮用水卫生质量的重要指标之一。
本文将从大肠菌群数的定义、危害、检测和控制等方面进行探讨，希望能够为大家提供一些有价值的信息和建议。
一、大肠菌群数的定义大肠菌群是指肠道中的细菌群落，包括大肠杆菌、肠球菌、梭菌等多种菌种。
在生活饮用水中，大肠菌群数是指每100毫升水中含有的大肠菌群数量。
通常情况下，生活饮用水中的大肠菌群数应该是0个/100毫升，否则就会给人们的健康带来一定的风险。
二、大肠菌群数的危害大肠菌群数超标的生活饮用水会对人体健康造成很大的威胁。
具体表现如下：1.引起肠胃疾病。
生活饮用水中的大肠菌群会通过口腔、食道、胃等消化道进入人体，引起肠胃疾病，如腹泻、呕吐、腹痛等。
2.导致感染性疾病。
某些大肠菌群可以引起感染性疾病，如肺炎、尿路感染等。
3.对儿童和老年人的危害更大。
儿童和老年人的免疫系统较弱，对大肠菌群的抵御能力较差，因此更容易受到其危害。
三、大肠菌群数的检测为了保证生活饮用水的卫生质量，需要对其进行大肠菌群数的检测。
一般来说，大肠菌群数的检测应该由专业的水质检测机构进行，其检测方法主要包括膜过滤法、MPN法等。
1.膜过滤法。
该方法是将水样通过一种特殊的膜过滤器，将其中的大肠菌群过滤出来，并将其培养在含有大肠菌特异性营养物质的培养基上，最后通过计数器进行计数。
2.MPN法。
该方法是将水样分别加入多个含有大肠菌特异性营养物质的培养液中，通过观察每种培养液中的大肠菌群的生长情况，最终确定其大肠菌群数。
四、大肠菌群数的控制为了保证生活饮用水的卫生质量，需要采取一系列的控制措施，以减少大肠菌群数的污染。
具体措施如下：1.加强水源地保护。
水源地应该建立保护区，禁止污染源进入，保护水源的纯净。
2.加强水厂处理。
水厂应该对水源进行充分的处理，包括混凝、沉淀、过滤、消毒等环节，以保证水质达到标准。
饮用水大肠杆菌测试
多管发酵法测大肠杆菌群一、实验目的1、学习测定水中大肠杆菌群数量的国标测试法（主要为多管发酵法）2、了解大肠杆菌群的数量在水中的重要性二、实验原理我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85中关于生活饮用水的细菌标准具体规定如下：1、细菌总数1ml水中不超过100个。
2、大肠杆菌数1L水中不超过3个。
3、若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过10000个。
多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN 来表示试验结果的。
实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。
不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。
因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。
三、适用范围：大肠菌群系指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
通常用此法作为粪便污染指标来评价食品以及饮用水的卫生质量。
四、检验程序：→→→→→→五、操作方法：5.1 以无菌操作，将检样10ml被测液放于含有90ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。
5.2 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均（均液的PH值应在6.5～７.5之间，必要时分别用1mol/L 匀，做成1：100的稀释液。
氢氧化钠（NaoH）或(1mol/L)盐酸（HCL）调节。
水质大肠杆菌检测标准
水质大肠杆菌检测标准
根据国家标准《自来水卫生标准》（GB 5749-2006），以下是关于水质大肠杆菌检测的标准：
1. 生活饮用水中每升水样不得检出大肠杆菌。
矿泉水、天然矿泉水、纯净水、瓶装饮用水、桶装饮用水等也适用此标准。
2. 饮用水中若发生大肠杆菌超标，应采取相应措施，进行处理和消毒后方可使用。
3. 大肠杆菌是评价饮用水卫生指标的重要细菌指标之一，它的检测结果能够反映水样是否受到了粪便污染。
4. 大肠杆菌的检测方法通常采用培养方法，通过培养样品中的大肠杆菌并观察生长情况来判断水样是否存在细菌。
5. 大肠杆菌的检测应严格遵循操作规程，确保结果的准确性和可靠性。
除了以上国家标准，不同地区和国家可能有不同的水质大肠杆菌检测标准，具体的标准应根据当地的相关法规和标准来执行。
水中大肠菌群的培养
实验三水中大肠菌群的检测（多管发酵法）一、实验目的1. 了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义。
2．学习检测水中大肠菌群的方法。
二、实验原理1.相关性大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌（Escherichia coli）为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。
大肠杆菌能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素B和K，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。
大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。
粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。
水体中的病原微生物常因数量较少而难以检出，即使检出结果为阴性，也不能保证无病原微生物存在；同时检出手续也很复杂。
所以，在实际工作中常借用检查水体中有无“指示菌”存在及其数量多少来判定水质是否被污染。
大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过3个。
大肠菌群是作为粪便污染指标提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中2.检测安全大肠杆菌作为外源基因表达的宿主,遗传背景清楚,技术操作简单,培养条件简单,大规模发酵经济,倍受遗传工程专家的重视.目前大肠杆菌是应用最广泛,最成功的表达体系,常做高效表达的首选体系。
饮用水大肠杆菌标准
饮用水大肠杆菌标准饮用水是人类日常生活中必不可少的资源，然而饮用水安全一直是人们关注的焦点之一。
大肠杆菌是一种能在人体内引起感染的细菌，因此对饮用水中大肠杆菌的标准也就显得格外重要。
本文将对饮用水中大肠杆菌标准进行详细介绍。
首先，关于大肠杆菌的来源及对人体的危害。
大肠杆菌是一种肠道细菌，主要存在于人和动物的肠道中。
其主要通过粪便排入水体中，因此饮用受到污染的水可能会引起腹泻、呕吐等症状，严重时甚至危及生命。
因此，饮用水中大肠杆菌的标准必须严格控制，以保障人们的健康安全。
其次，关于饮用水中大肠杆菌的标准。
根据国家卫生健康委员会发布的《饮用水卫生标准》，对饮用水中大肠杆菌的标准有明确规定。
其中规定了大肠杆菌的检测方法、标准限值以及相关的监测和处理措施。
对于不同用途的饮用水，其大肠杆菌标准也有所不同，但总体来说，标准都是严格的，以确保饮用水的安全性。
另外，关于饮用水中大肠杆菌标准的监测和管理。
饮用水中大肠杆菌的监测是一个持续的过程，需要定期对水质进行检测，确保水质符合标准要求。
同时，对于发现超标的饮用水，相关部门也需要及时采取措施，保障人们的饮水安全。
此外，对于饮用水生产、供应企业也要加强自身管理，严格执行大肠杆菌标准，确保生产的饮用水符合国家标准。
最后，关于大肠杆菌标准的落实和宣传。
除了制定严格的大肠杆菌标准外，相关部门还需要加强对饮用水大肠杆菌标准的宣传和落实。
通过各种途径向社会公众普及饮用水安全知识，提高人们对饮用水安全的重视程度，从而促进大肠杆菌标准的全面贯彻落实。
总之，饮用水中大肠杆菌标准的制定和执行对保障人们饮用水安全至关重要。
相关部门和社会公众都应该共同努力，加强饮用水大肠杆菌标准的监测和管理，确保人们饮用水的安全性，维护公众健康。
实验 水中细菌总数的测定 水中大肠杆菌的测定
实验2 水中大肠菌群数的测定一、目的要求1．了解大肠菌群数量在引用水中的重要性2．学习掌握多管发酵法和滤膜法测定大肠菌群数二、原理若水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容易死亡与变异，因此数量较少，要从中特别是自来水中分离出病原菌常较困难与费时，这样就要找到一个合适的指示菌，此指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。
若指示菌在水中不存在或数量很少，则大多数情况也保证没有病原菌。
最广泛应用的指示菌是大肠菌群，它的定义是：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，并在乳糖培养基中，经37ºC、24～48h培养能产酸产气，根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得检出；若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，其大肠菌群数平均每升不得超过10000个。
检查大肠菌群的方法有多管发酵法与滤膜法两种。
多管发酵法使用历史较久，又称水的标准分析方法，为我国大多数卫生单位与水厂所采用；滤膜法是一种快速的替代方法，而且结果重复性好，又能测定大体积的水样，目前国内已有很多大城市的水厂采用此法。
三、实验仪器和材料1．锥形瓶（500 ml）、试管（18 mm×180 mm）、大试管（容积150 ml）、移液管1 ml 及10ml、培养皿（直径90 mm）、接种环、试管架1个。
2．革兰氏染色液一套：草酸铵结晶紫、革氏碘液、95％乙醇、蕃红染液3．显微镜4．自来水（或受粪便污染的河、湖水）400ml5．蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾、琼脂、无水亚硫酸钠、牛肉膏、氯化钠、1.6％溴甲酚紫乙醇溶液、5％碱性品红乙醇溶液、2％伊红水溶液、0.5％美蓝水溶液。
6．10％NaOH、10％HCl、精密pH试纸6.4～8.4。
大肠杆菌检测实验报告
大肠杆菌检测实验报告一、实验目的掌握大肠杆菌的检测方法，了解其在水质检验中的重要性。
二、实验原理1. 大肠杆菌大肠杆菌是一种常见的肠道杆菌，是一类嗜热性、厌氧性以及革兰阴性杆菌。
该菌种常常是肠道菌群的组成部分，同时也是水污染的重要指示菌之一。
（1）标准培养基法经过富营养培养基的生长，大肠杆菌会形成显性和隐性的群体。
这种检测方法适用于水质样本、地球样品以及饮用水。
（2）膜过滤法样品通过过滤器滤过后，将过滤后的膜放入培养基上培养。
这种方法既适合于生物质量较小的样品，也适用于分析浓度高的样品。
（3）MPN法通过使用3组不同浓度的小管，并观察哪个浓度的小管有生长曲线的所有格子都被满足，来计算菌落形成单位的浓度。
可以适用于样品浓度较低的环境。
三、实验操作1. 实验材料大肠杆菌标准菌株、优化阳性对照菌株、培养基、蒸馏水、实验器材、滤纸、吸管、离心机、洗涤液和细胞硬度试剂。
2. 实验步骤（1）制备纯菌液：将大肠杆菌基配合缓冲液跳接种到营养琼脂平板上，并在37℃的恒温培养箱中培养过夜。
将菌落划入脱色水中，通过洗涤和离心的方式，获得纯化的细胞菌悬液。
（2）制备样品：将需要检测的水样分别过滤，过滤膜使用巨孔滤纸。
滤膜被慢慢放在脱色水上U型板中间的孔里，然后浸泡（3）培养过程: 将U型板接入温度为37℃的有氧培养箱内，在24 - 48小时内观察细菌进行生长，并做出相应的计数和检测。
四、实验结果与分析按照实验操作规程进行样品处理和培养后，确认样品中是否存在大肠杆菌。
如果在实验中产生的试样中出现了大肠杆菌生长，且其生长优于阳性对照；或者在某些水样中不能检测出大肠杆菌，说明该水质品质不满足相关规范的要求。
五、实验结论本实验通过不同的大肠杆菌检测方法，较为全面地了解了大肠杆菌的检测方法及其在水质检验中的重要性。
在实验的基础上，我们有理由相信，通过科学准确的操作，人们可以更好地保证饮用水的健全和安全。
饮用水大肠杆菌检测
水中总大肠杆菌的测定1 原理总大肠杆菌群可用多管发酵法或滤膜法检测。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖，产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验，求得水样中的总大肠菌群数，实验结果以最可能数（most probable number），简称MPN表示。
2 仪器2.1 高压蒸汽灭菌器。
2.2 恒温培养箱，冰箱。
2.3 生物显微镜，载玻片。
2.4 酒精灯，镍铬丝接种棒。
2.5 培养皿(直径100mm)，试管(5×150mm)，小倒管，吸管(1，5，10ml)，烧杯(200，500，2000ml)，锥形瓶(500，1000ml)，采样瓶。
3 培养基及染色剂的制备3.1 乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉浸膏、3g乳糖和5g氯化钠加热溶于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2－7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管（内有倒管）中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩蛋白胨溶液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法制备。
除蒸馏水外，各组分用量增加至三倍。
3.3 品红亚硫酸钠培养基3.3.1 贮备培养基的制备于2000mL烧杯中，先将20-30g琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入3.5g磷酸氢二钾及10g蛋白胨，混匀，使其溶解，再用蒸馏水补充到1000mL调节溶液pH至7.2-7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加10g乳糖，混匀，定量分装于250或500mL锥形瓶内，置于高压灭菌器中，在121℃灭菌15min，贮存与冷暗处备用。
3.3.2 平皿培养基的制备将上法制备的贮备培养基加热融化。
根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按1：50比例吸取5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌空试管中；再按1：200比例称取无水亚硫酸钠，置于另一灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min（灭菌）。
饮用水中大肠杆菌的检测方法
饮用水中大肠杆菌的检测方法(一)水样的采集供细菌学检验的水样，必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证再运送、贮存过程中不受污染。
水样从采集到检验不应超过4h，在0～4℃下保存不应超过24h ，如不能在4h 内分析，应在检验报告上注明保存时间和条件。
1、自来水取样：应在水龙头打开放水5min，再用无菌容器接取水样，待分析。
如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按每500mL水样加3%Na2S2O3.5H2O溶液1mL。
2、江、河、湖、池自然水体取样：可用采样器，采样瓶应先灭菌。
采样后，瓶内应留有空隙。
如果与其他化验项目联合取样，细菌学分析水样应采在其他样品之前。
(二)初发酵试验1.水样稀释：制备水样10-1、10-2的稀释液，方法为用无菌移液管吸取水样10mL放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡使混合均匀，并使其中的细菌尽量呈单个存在，即为10-1稀释液;再从10-1制备10-2稀释液。
以此类推，稀释到所需倍数。
2.接种和培养：以无菌操作于5支三倍浓缩培养基(接种前一定应先检查杜汉氏小管内有无气泡)中各加入水样10mL，5支普通培养基试管中加入水样1mL，5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL，小心混匀放入37℃培养箱中培养24h 。
此即5管法。
3.结果观察：37℃中培养24h后取出观察，观察有无气体(杜汉氏小管内有无气体)和酸产生(培养基有无变色)。
在48h之间，培养管内倒置的杜汉氏小管内有任何量的气体积累，或培养基颜色从紫色变为黄色，便可初步断定为阳性反应。
若所测定的15支管中均为阳性反应，说明浓水样污染严重，可将样品进一步稀释后，再按上述方法接种、培养和观察。
大肠杆菌检测方法步骤
饮用水中大肠杆菌及检测方法一、乳糖发酵实验（初发酵实验）溶液与试剂：乳糖胆盐发酵管成分：蛋白胨20g，猪胆盐5g，乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，蒸馏水1000mL，pH7.4。
（乳糖胆盐培养基取30g，溶于1000mL纯水中即可）操作步骤1：将配制好的培养液，分装于每管10mL，共装9个试管，并各放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
2：水样稀释（1）无菌操作取水样1 mL放于含9mL的灭菌生理盐水中，置于容量瓶中，震荡摇匀为1:10的稀释液。
取上述稀释液1mL，注入9mL灭菌生理盐水，震荡摇匀，为1:100的稀释液。
（2）取水样，1:10稀释液，1：100稀释液各1mL接种到乳糖胆盐发酵管中。
（根据检样的污染程度可以适当调整稀释的比例）每一稀释度接种三管。
3：将试管连同试管架放入培养箱中37℃左右培养24h。
产酸溶液会由紫色变为黄色，产气发酵管中会有气泡。
如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则报告大肠杆菌群阴性，如有产气管，就需要进行分离培养，即进行伊红美蓝培养基鉴别实验。
二、伊红美蓝培养基鉴别实验（接种实验）伊红美蓝琼脂（EMB)成分：蛋白胨10g，乳糖10g，磷酸氢二钾2g，琼脂17g，2%伊红溶液20mL。
0.65%美蓝溶液10mL，蒸馏水1000L，pH7.1.制法：将蛋白胨，磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min，备用。
临用时加入乳糖，并加热融化琼脂，冷至50~55℃，加入伊红美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
操作步骤1称量：准确称取各成分。
2 溶化：加热熔化，定容。
3 调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。
4 灭菌：将两个500ml的三角瓶中加上棉塞。
将培养皿用报纸包好，放入灭菌锅内，121℃高压灭菌15min。
5 倒平板（均在无菌台中操作）：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
水质大肠杆菌检测方法
水质大肠杆菌检测方法水质大肠杆菌是一种常见的水污染指标微生物，其存在表明水体可能受到了粪便或污水的污染。
因此，对于饮用水、游泳水、工业用水等不同用途的水体，检测水质中大肠杆菌的含量具有重要意义。
本文将介绍几种常用的水质大肠杆菌检测方法，以供参考。
一、培养基法。
培养基法是一种常见的大肠杆菌检测方法，其基本原理是将水样在含有大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上培养，然后观察培养基上是否有大肠杆菌的生长。
这种方法操作简单，成本较低，但需要一定的培养时间，通常需要24-48小时才能得到结果。
此外，培养基法对于大肠杆菌的特异性较差，可能会同时检测出其他肠道菌群。
二、膜过滤法。
膜过滤法是一种常用的水质微生物检测方法，其原理是将水样通过微孔膜过滤，然后将膜放置在含有营养物质的培养基上进行培养。
通过计数膜上的大肠杆菌落，可以得到水样中大肠杆菌的数量。
这种方法操作简便，结果准确，而且可以检测到低浓度的大肠杆菌。
但是，膜过滤法需要一定的实验室设备和技术支持。
三、分子生物学方法。
随着分子生物学技术的发展，PCR（聚合酶链式反应）和实时荧光定量PCR等分子生物学方法也被应用于水质大肠杆菌检测中。
这些方法具有高度的特异性和灵敏度，可以快速准确地检测出水样中的大肠杆菌。
此外，分子生物学方法还可以对大肠杆菌进行分子鉴定和基因分析，为进一步研究提供了有力的支持。
然而，分子生物学方法需要相对复杂的实验操作和昂贵的设备，对操作人员的技术要求也较高。
综上所述，针对水质大肠杆菌的检测，可以根据实际情况选择合适的方法。
培养基法操作简单，成本低，适合于一般的水质监测；膜过滤法准确性高，可以检测低浓度的大肠杆菌；而分子生物学方法则具有高度的特异性和灵敏度，适合于对水质中微生物的深入研究。
在实际应用中，可以根据需求和条件选择合适的检测方法，以保障水质安全和生态环境的健康。
生活饮用水标准检验方法-微生物指标[1]
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修订后
微生物指标 限值 微生物指标
限值
-
肠球菌/（CFU/100mL）
0
-
产气荚膜梭状芽胞杆/（CFU/100mL）
0
一、菌落总数
修订前
修订后
细菌总数
菌落总数
原理：细菌总数是指水样在一定 定义：水样在营养琼脂上有氧条 条件下培养后（培养基成分、培 件下37℃培养48h后，所得1ml水 养温度和时间、pH、需氧性质等） 样所含菌落的总数。 所得1ml水样所含菌落的总数。按 本规范规定所得结果只包括一群
酶底物法定义：总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生β半乳糖苷酶的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体 使培养基呈现颜色变化，以此技术来检测水中总大肠菌群的方法。 培养基：MMO-MUG培养基（Minimal Medium ONPG-MUG）。 本方法可分为定性和定量。 定量法：10管法、51孔定量法 培养条件： 36±1℃ 24h
在滤膜上,将滤膜贴在选择培养上, 膜过滤水样, 将滤膜贴在添加乳
经培养后,计数生长在滤膜上的典 糖的选择培养上, 37℃ 培养24h，Fra bibliotek型大肠菌群菌落数。
能形成特征菌落的需氧和兼性厌
培养条件：37℃ 18-24h
氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌以检 测水中总大肠菌群的方法。
培养条件：37℃ 24±2h
酶底物法
能产生β-半乳糖苷酶的细菌群组分解ONPG使培养基呈黄色 酶底物法的主要特点： 优点： 可同时判断水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌 检测时间较短，只需18-24h，最长需要28h 无需确证试验 操作简单，对试验条件和人员要求低 缺点： 检测成本高
总大肠菌群三种方法的比较
时间 验证试验 步骤 特殊设备 价格
生活饮用水中总大肠菌群检测方法探讨
分析检测Analysis and Testingdoi:10.16736/41-1434/ts.2020.15.048生活饮用水中总大肠菌群检测方法探讨Discussion on the Detection Method of Total Coliform Group in Drinking Water◎ 魏金梅，钟国庆（赣州市食品药品检验检测中心，江西 赣州 341000）Wei Jinmei, Zhong Guoqing(Ganzhou Testing Center for Food and Drug Control, Ganzhou 341000, China)摘 要：本文概述了总大肠菌群的定义及将其作为饮用水污染指示菌的原因，并阐述了其与耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌的关系，然后重点介绍了饮用水中总大肠菌群的3种检测方法，并对这3种检测方法进行了详细的对比分析。
关键词：生活饮用水；总大肠菌群；指示菌；检测方法Abstract：This paper summarizes the definition of total coliform bacteria and use it as a drinking water pollution indicator bacteria, and expounds its heat-resistant coliform bacteria and E. coli relationship, and focuses on the three detection methods of total coliform bacteria in drinking water, and the detection methods of the three detailed comparative analysis.Key words：Drinking water; Total coliform colony; Indicator bacteria; Detection method中图分类号：R123.1水作为人类赖以生存和发展的必要自然资源，与人们的生活息息相关。
实验九多管发酵法测定水中大肠菌群
证实有大肠菌群存在后，再根据复发酵的阳性管
（瓶）数查表，即得每升水样中的大肠菌群数。
▲ 将100、10、1、0.1（10-1）ml水样的发酵管 结果查水 样的发酵管结果查表4
五 实验报告
实验课程论文
封面格式 《水处理微生物学》课程实验
水样管/ml 100 10 1 0.1 0.01
发酵结果
2 思考题
(1) 大肠菌群的定义是什么? (2) EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查 大肠菌群时，各起什么作用？
存在于肠道中的正常菌群,在正常生理情 况下不致病.
（1）大肠埃希氏杆菌（Escherichia coli） E.coli
（2）产气杆菌（Aerobacter aerogenes） （3）枸橼酸盐杆菌（Coli citrovorum） （4）副大肠杆菌（Paracoli） 大肠菌群的生理习性与病原菌相似，并且外界 存活时间基本一致.
经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢 杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通 浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一 初发酵管的同类型菌落1--3个，37℃培养24h，结果 若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。
同类型菌落① 深紫黑色、有金属光泽。 ② 紫黑色、不带或略带金属光泽。 ③ 淡紫红色、中心颜色较深。
3 复发酵试验
以上大肠菌群阳性菌落，经涂片革兰氏染 色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，通过此试验再 进一步证实。
原理与初发酵试验相同，经24h培养产酸 又产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。
水样 接种
初步 发酵
产酸 产气
大肠菌群
厌氧芽孢杆菌
好氧芽孢杆菌
平 板 分 离
鉴 别 培 养 基
产酸 复发酵
娃哈哈饮用水中的细菌菌落的测定实验方案
娃哈哈饮用水中的细菌菌落的测定实验方案一、实验目的1.堂握水样的采取方法，检测水和饮料中细菌。
2.掌握多管发酵法测定大肠杆菌群。
3.学习和掌握细菌南落总数及大肠杆菌群数量与水质标准的关系。
二、实验原理1.细菌总数是指1m液体样本在牛肉干蛋自陈培养基中经37、24h 培养所生长的菌落数，用每毫升菌数形成单位（CFU/mL）表示。
水中细菌总数可说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物质含量越大。
本实验运用平板南落计数技术测定水及汽水中细菌总数。
2.我国城市供水卫生标准规定每1mL自来水样细菌总数37C培养24h不得超过80个，每100m水样中不得检测出大肠杆菌群。
瓶装汽水每1mL细菌总数不得超过100个，每100mL中大肠杆菌群不超过6个2.3大肠杆菌群数的测定用乳糖多管发酵法。
大肠杆菌能在37C、培养24h发酵乳糖产酸产气的生理特点，将水和饮料样本根据含菌量不等程度做稀释后接种到含不等浓度的乳糖蛋自陈发酵液中。
液质清洁度高则含菌量少，可不经稀释，接种量较大：液质差则应进行不等程度稀释后再接种。
接种>1mL以上用3倍乳糖发酵液，<=lmL用单倍乳糖发酵液。
接种后在37C培养24h后观察并根据样品接种量和发酵结果用统计学方法制成不同表格，从表中查出数字即可确定所测液体中大肠杆南群的含量，以最可能数表示。
三、实验仪器及试剂1.仪器及其他用品试管（44）、培养皿（29）、250mL三角烧瓶（8）、500mL三角烧瓶（2）、500mL烧杯（5）、500mL带玻璃塞的空瓶（2）、德汉室小管44）、10mL移液管（2）、5mL移液管（2）、1ml，移液管（2）、试剂瓶（1）、钢杯（1）、玻璃涂棒、玻璃棒、接利环、吸管、移液枪、报纸、酒精灯、石棉网、三脚架、试管架、电热炉、微波炉培养箱、高压蒸汽灭菌锅、显微镜、载玻片、擦镜纸、电子天平、pH试纸、吸水纸、载玻片夹子。
2.试剂蒸馏水、实验室自来水、旺旺超市250mL瓶装雪碧、革兰氏染色液、无菌生理盐水，无菌水，草酸铵结晶紫染液，卢戈氏碘液，95%乙醇，番红复染液3.培养基（1）牛肉膏蛋白陈培养基：牛肉膏0.3e、蛋白陈1.Og、NaCl 0.5g水100mL、琼脂2.0g，pH7.2、121C灭菌20min、（2）单倍乳糖蛋白陈培养基：蛋白陈 2.0g、牛肉膏0.6g、乳糖1.0g、NaC]1.0g、1.6%澳甲酚紫乙醇液0.2mL、蒸馏水200mL；（3）三倍浓缩乳糖蛋白陈培养基：蛋白陈4.0g、牛肉膏1.2g、乳糖6.0g-NaCl 2.0g、1.6%澳甲酚紫乙醇液0.4mL、蒸馏水400mL：将蛋白陈、牛肉膏、乳糖及NaCl加热溶解于蒸馏水中，调pH7.3左右，加1.6%澳甲酚紫乙醇液，充分混匀，分装于有德汉氏小管的试管（发酵管）中。
水中总大肠菌群检测方法
水中总大肠菌群检测方法【摘要】俗话说：人可以七天不吃饭，但绝不可以三天不喝水。
这虽然是个俗语，但其意在说明水的珍贵。
水是人类赖以生存和发展的重要自然资源，它与人们的生活息息相关。
然而，在人们的日常用水中，饮用水的卫生质量是否达标，以及如何消除人们生活用水中存在的安全隐患等一系列问题已经成为我国社会民众广泛关注的话题。
【关键词】总大肠菌群；检测；检测方法随着社会经济的高速发展以及工业化、城市化进程的推进，水资源污染问题越来越严重，与此同时，人们对于生活饮用水的水质要求也越来越高。
目前，我国的饮用水中存在大量的微生物，其中，部分微生物对人们的身体健康有一定的威胁，因此，饮用水必须严格地进行消毒杀菌处理，并应经过严格的微生物检测，检测达标后方可输配给终端用户。
目前常采用的微生物检测方法主要有多管发酵法、滤膜法等。
笔者结合实际工作经验分析了相关的检验方法及步骤。
一、总大肠菌群饮用水中的总大肠菌群主要是指大肠杆菌、大肠菌群和粪大肠菌群三大类型细菌共同组成的大肠菌群。
总大肠菌群是指在37℃条件下培养时，能够使乳糖进行发酵，并且在全天24小时之内都产酸、产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
主要包括埃希氏菌属、柠檬酸细菌属肠杆菌属及克雷伯氏菌属四种细菌。
由于其数量大，在体外存活时间与肠道致病菌相近，且检验方法比较简便，故被作为检验肠道致病菌的指示菌。
水中大肠菌群数的多少，表明水体被粪便污染的程度，并间接地表明有肠道致病菌存在的可能性。
因此，总大肠菌群是评价饮用水水质的重要指标，具有广泛的卫生学意义。
目前，检测总大肠菌群的方法主要有两种，分别是多管发酵法和滤膜法。
二、多管发酵法多管发酵法是做早被用作水质检测的技术，至今应用已超过80年，在水样大肠菌群的检测中一直在应用。
其核心是将水样进行10倍系列稀释，分别接种到乳糖蛋白胨培养液中，在35℃培养48小时，观察细菌生长情况。
将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美篮琼脂平板上进行分离培养，并通过革兰染色、镜检和进行证实试验。
5750.1-2023生活饮用水标准检验方法
5750.1-2023生活饮用水标准检验方法
根据5750.1-2023生活饮用水标准，以下是常见的饮用水检验
方法：
1. 总大肠菌群检验：采用MPN法检验，即多管摇底法或多管
浑浊法。
2. 大肠菌群（致病性大肠杆菌）检验：采用培养法或PCR法。
3. 残留氯检验：采用溴酸苯胺法、二氯苯胺法或DPD法。
4. pH值检验：采用玻璃电极法、电极法或试纸法。
5. 悬浮物和沉淀物检验：采用过滤法和称量法。
6. 溶解氧检验：采用溶解氧电极法或青蛙法。
7. 氨氮检验：采用Nessler法、萘酚法或蒸馏-滴定法。
8. 总硬度测定：采用EDTA滴定法。
9. 重金属检验：采用原子吸收光谱法、电感耦合等离子体发射光谱法或电感耦合等离子体质谱法。
10. 有机污染物检验：采用气相色谱法、高效液相色谱法或质
谱法。
注意：以上仅是常见的饮用水检验方法，具体的检验项目和方
法也会根据需要和要求而有所不同。
因此，在具体的实验室操作中应根据标准的要求和方法操作。
饮用水中大肠杆菌检测方法是什么
饮用水中大肠杆菌检测方法是什么大肠杆菌是比较常见的细菌，对于人体是有害的，常见于我们的饮用水当中，要是长时间的饮用含有大肠杆菌的水的话，对于身体的伤害是很大的。
对此，要检查水中的大肠杆菌。
那饮用水中大肠杆菌检测方法是什么?这个问题，很多的朋友都很好奇，下面就为大家简单的介绍一下。
饮用水中大肠杆菌检测方法是什么?1、饮用水中大肠杆菌快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)水样中微生物的收集及其DNA的提取：采用灭菌后的滤膜或滤器过滤水样，在装有无菌水的EP管中，洗涤滤膜，离心，弃上清液，备用;(2)水样中微生物DNA的提取： A、向EP管中加入TE 缓冲液，使之重悬; B、加入SDS和蛋白酶K，混匀，温育45min～1h; C、加入氯仿/异戊醇，混匀，离心，将上清液转入一个新EP管中; D、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，混匀，离心，将上清液转入一个新EP管中; E、加入异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，离心; F、弃上清，沉淀物用乙醇洗涤，晾干; G、将沉淀重溶于TE缓冲液，摇匀; H、用紫外分光光度计测定提取的基因组DNA模板的0D值，计算其DNA浓度，计算方法为： DNA 浓度(μg/μL)=OD值260nm×样品稀释倍数×50/1000 I、将基因组DNA模板做好标记，贮存，备用;(3)PCR扩增; 反应引物：上游引物：5’-tgttcagtggcaagagtt-3’下游引物：5’-taatcgatatacccgctc-3’50μL反应体系： 10×PCR缓冲液5μL Tag酶2U/μL1μL MgCl2(25mM)5μL dNTP(2.5MM)5μL ddH2029μL 上游引物10μM2μL 上游引物10μM2μL 模板DNA1.5μg/μL1μL(4)产物观察： A、凝胶的准备：先配置琼脂糖溶液，加热，使其充分溶解，再加入溴化乙锭溶液; B、配置TAE电泳液; C、倒胶：将配置好的琼脂糖溶液倒入胶板中，待其凝固后，放入电泳槽中; D、电泳：将扩增好的PCR产物与缓冲液按比例混合，加入到凝胶加样孔中，同时加入 DNA分子量标准，接通电源，设定电压和电流，开始电泳。
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1、饮用水中大肠杆菌快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)水样中微生物的收集及其DNA的提取：采用灭菌后的滤膜或滤器过滤水样，在装有无菌水的EP管中，洗涤滤膜，离心，弃上清液，备用；(2)水样中微生物DNA的提取：A、向EP管中加入TE缓冲液，使之重悬；B、加入SDS和蛋白酶K，混匀，温育45min～1h；C、加入氯仿/异戊醇，混匀，离心，将上清液转入一个新EP管中；D、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，混匀，离心，将上清液转入一个新EP管中；E、加入异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，离心；F、弃上清，沉淀物用乙醇洗涤，晾干；G、将沉淀重溶于TE缓冲液，摇匀；H、用紫外分光光度计测定提取的基因组DNA模板的0D 值，计算其DNA浓度，计算方法为：DNA浓度(μg/μL)＝OD值260nm×样品稀释倍数×50/1000 I、将基因组DNA模板做好标记，贮存，备用；(3)PCR扩增；反应引物：上游引物：5’-tgttcagtggcaagagtt-3’下游引物：5’-taatcgatatacccgctc-3’50μL反应体系：10×PCR缓冲液5μL Tag酶2U/μL1μL MgCl2(25mM)5μL dNTP(2.5MM)5μL ddH2029μL 上游引物10μM2μL 上游引物10μM2μL 模板DNA1.5μg/μL1μL (4)产物观察：A、凝胶的准备：先配置琼脂糖溶液，加热，使其充分溶解，再加入溴化乙锭溶液；B、配置TAE电泳液；C、倒胶：将配置好的琼脂糖溶液倒入胶板中，待其凝固后，放入电泳槽中；D、电泳：将扩增好的PCR产物与缓冲液按比例混合，加入到凝胶加样孔中，同时加入DNA分子量标准，接通电源，设定电压和电流，开始电泳。
E、观察；将扩增产物在紫外光下观察，拍摄图片。