4×蛋白上样缓冲液(含DTT)使用说明
蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法
蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法20% （W/V） Glucose配制量100ml配制方法:1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml 的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
0.5 M EDTA （pH8.0）配制量1 L配制方法:1. 称取186.1 g Na2EDTA•2H2O，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH）。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
1 M DTT配制量50ml配制方法:1. 称取7.71g DTT，加入到100ml烧杯中。
2. 加50 ml的0.01 M NaAc（pH5.2），溶解后根据使用情况0.22um滤膜过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
30%丙烯酰胺（29：1）配制量1 L配制方法:1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
Acrylamide 290gBisacrylamide 10g2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至1 L，用0.45um滤膜滤去杂质。
4. 于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。
聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液组份浓度 0.125 M Tris, 1.25 M Glycine,0.5%（W/V）SDS配制量 1 L配制方法：1．称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2．取下列溶液，加入烧杯中。
Tris 15.1gGlycine 94gSDS 5g3. 加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。
蛋白上样缓冲液详解
蛋白上样缓冲液详解
关于《蛋白上样缓冲液详解》，是我们特意为大家整理的，希望对大家有所帮助。
蛋白质上样缓冲溶液这类东西针对绝大多数的人而言全是较为生疏的东西，由于这一东西在我们的日常生活基本上是看不到的，沒有机遇去掌握这类东西的用途和作法，实际上蛋白质上样缓冲溶液是一种十分有效的实验试剂，在科学研究的层面而言是较为有打用途的，这类有机化学药物针对我们而言需要一个专业知识普及化，下边就看看详细介绍吧。
蛋白电泳上样缓冲溶液带有溴酚蓝，功效是标示上样蛋白质的跑胶时标识的，凡士林是提升上样净重的，以防飘浮，烧开是使蛋白质转性的。
在其中的SDS是确保试品中的全部蛋白质带正电荷一致，降低正电荷对电泳原理結果的影响。
氧化剂是让二硫键处在断掉情况，确保蛋白质分子结构的线形，降低因蛋白质空间布局影响电泳原理結果。
蛋白电泳上样缓冲溶液带有溴酚蓝，功效是标示上样蛋白质的跑胶时标识的，凡士林是提升上样净重
的，以防飘浮，烧开是以便使蛋白质转性。
蛋白电泳上样缓冲溶液的功效及烧开的功效蛋白电泳上样缓冲溶液包含2%SDS , 0.1%溴酚蓝10%凡士林,SDS 是确保试品中的全部蛋白质带正电荷一致，降低正电荷对电泳原理結果的影响。
氧化剂是让二硫键处在断掉情况，确保蛋白质分子结构的线形.溴酚蓝功效是标示上样蛋白质的跑胶时标识的，凡士林是提升上样净重的，以防飘浮，烧开是使蛋白质转性的保存起来。
日常生活有很多的东西是我们触碰不上的，可是便是这种触碰不上的东西却可以给我们的日常生活产生极大的改变，蛋白质上样缓冲溶液便是一种那样的东西，尽管难以看到，也基本上不容易听闻这类东西，可是在专业人员来看，蛋白质上样缓冲溶液是运用于科学研究生产中不可或缺的东西。
TruPAGE LDS蛋白上样缓冲液(4×)
北京雷根生物技术有限公司 TruPAGE LDS 蛋白上样缓冲液(4×)简介：蛋白上样缓冲液有很多种，如SDS-PAGE Sample Loading Buffer 、PAGE 连续蛋白上样缓冲液、Tricine 加样缓冲液、TruPAGE LDS 蛋白上样缓冲液等，其中TruPAGE LDS 蛋白上样缓冲液是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的2倍浓缩的蛋白上样缓冲液。
Leagene TruPAG LDS Sample Buffer(4×)常用于TruPAGE 蛋白样品的上样，不含DTT ，不含有毒物质β-巯基乙醇。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE 蛋白加样缓冲液(2×)。
水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。
2、 取适量的蛋白样品和TruPAG LDS Sample Buffer(4×)，按1:3混合，充分混匀。
如有必要可加入DTT ，使DTT 终浓度达到25nM 。
3、 70℃水浴加热10min ，以充分变性蛋白。
4、 冷却到室温后，直接上样到TruPAG 胶加样孔内即可。
5、 通常电泳至染料到达PAGE 胶的底部附近即可停止。
注意事项：1、 Leagene TruPAG LDS Sample Buffer(4×)，有轻微刺激性气味，但不含由毒物质β-巯基乙醇。
有效期： 12个月有效。
相关：编号 名称 PE0052 Storage TruPAG LDS Sample Buffer(4×) 5ml 4℃ 使用说明书 1份编号名称 DH0006苏木素伊红(HE)染色液 PE0018 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒。
蛋白上样缓冲液详解
蛋白上样缓冲液详解
蛋白上样缓冲液这种东西对于大部分的人来说都是比较陌
生的东西，因为这个东西在我们的生活中几乎是看不见的，没有机会去了解这种东西的用处和做法，其实蛋白上样缓冲液是一种非常有用的试剂，在科学的方面来说是比较有打用处的，这种化学药剂对于我们来说需要一个知识普及，下面就看看介绍吧。
蛋白电泳上样缓冲液含有溴酚蓝，作用是指示上样蛋白的跑胶时标记的，甘油是增加上样重量的，以免漂浮，煮沸是使蛋白变性的。
其中的SDS是保证样品中的所有蛋白带电荷一致，减少电荷对电泳结果的影响。
还原剂是让二硫键处于断开状态，保证蛋白分子的线性，减少因蛋白空间结构影响电泳结果。
蛋白电泳上样缓冲液含有溴酚蓝，作用是指示上样蛋白的跑胶时标记的，甘油是增加上样重量的，以免漂浮，煮沸是为了使蛋白变性。
蛋白电泳上样缓冲液的作用及煮沸的作用蛋白电泳上样缓冲液包括 2%SDS , 0.1%溴酚蓝 10%甘油,SDS 是保证样品中的所有蛋白带电荷一致，减少电荷对电泳结果的影响。
还原剂是让二硫键处于断开状态，保证蛋白分子的线性.溴酚蓝作用是指示上样蛋白的跑胶时标记的，甘油是增加上样重量的，以免漂浮，煮沸是使蛋白变性的永久保存。
生活中有许多的东西是我们接触不到的，但是就是这些接触不到的东西却能够给我们的生活带来巨大的改变，蛋白上样缓冲液就是一种这样的东西，虽然很难看见，也几乎不会听说这种东西，但是在专业人士看来，蛋白上样缓冲液是应用于科学生产中必不可少的东西。
蛋白上样缓冲液的主要成分和作用
蛋白上样缓冲液的主要成分和作用蛋白上样缓冲液是生物化学实验中常用的一种缓冲液，它的主要作用是在蛋白质电泳分离过程中，维持样品的稳定性，防止蛋白质的降解和聚集。
本文将从成分和作用两个方面来介绍蛋白上样缓冲液。
一、成分蛋白上样缓冲液的主要成分包括缓冲剂、还原剂、表面活性剂和添加剂等。
1. 缓冲剂缓冲剂是蛋白上样缓冲液中最重要的成分之一，它能够维持溶液的pH 值，防止蛋白质在电泳过程中发生电泳漂移。
常用的缓冲剂有Tris-HCl、MES、MOPS等。
2. 还原剂还原剂是蛋白上样缓冲液中的另一个重要成分，它能够还原蛋白质中的二硫键，使其保持在还原状态下，从而防止蛋白质的氧化和聚集。
常用的还原剂有DTT、β-巯基乙醇等。
3. 表面活性剂表面活性剂是蛋白上样缓冲液中的一种添加剂，它能够降低蛋白质的表面张力，使其更容易进入凝胶中。
常用的表面活性剂有Tween-20、Triton X-100等。
4. 添加剂添加剂是蛋白上样缓冲液中的一种辅助成分，它能够增加样品的稳定性和电泳分离效果。
常用的添加剂有甘油、牛血清白蛋白等。
二、作用蛋白上样缓冲液的主要作用是维持样品的稳定性，防止蛋白质的降解和聚集。
具体来说，它有以下几个作用：1. 维持pH值稳定蛋白上样缓冲液中的缓冲剂能够维持溶液的pH值，防止蛋白质在电泳过程中发生电泳漂移，从而保证电泳分离的准确性和稳定性。
2. 还原蛋白质中的二硫键蛋白上样缓冲液中的还原剂能够还原蛋白质中的二硫键，使其保持在还原状态下，从而防止蛋白质的氧化和聚集，保证电泳分离的准确性和稳定性。
3. 降低表面张力蛋白上样缓冲液中的表面活性剂能够降低蛋白质的表面张力，使其更容易进入凝胶中，从而保证电泳分离的准确性和稳定性。
4. 增加样品稳定性蛋白上样缓冲液中的添加剂能够增加样品的稳定性，防止蛋白质的降解和聚集，从而保证电泳分离的准确性和稳定性。
综上所述，蛋白上样缓冲液是生物化学实验中不可或缺的一种缓冲液，它的主要作用是维持样品的稳定性，防止蛋白质的降解和聚集。
蛋白示踪上样缓冲液
•蛋白示踪上样缓冲液（还原，4x）•
保存：-20℃• •
组分说明•
SDS-PAGE loading buffer5•ml•
产品简介
蛋白上样缓冲液(SDS-PAGE loading buffer)是一种经过改良的以溴酚蓝为染料，4倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液,用于常规的 SDS-PAGE蛋白电泳样品上样。
本产品含有两种示踪染料，分别是蓝色的溴酚蓝和红色的派洛宁γ,可实时监控蛋白样品电泳进程。
同时，在凝胶上显现的红色条带可伴随蛋白样品转移至印迹膜上，因此本产品具有检测Western•Blotting 转膜效率的作用。
使用本产品操作简单，用法与普通上样缓冲液相同。
测试效果
操作步骤•
1. 将蛋白示踪上样缓冲液（还原，4x）与蛋白样品按照1：3 的比例混匀。
•
2. 将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5 分钟。
•
3. 待蛋白样品充分变性后冷却至室温，离心30 秒。
•
4. 离心后，以微量进样器取适量上清，直接加入SDS-PAGE 凝胶加样孔内。
•
5. 进行常规电泳，当染料到达距离凝胶底端0.5•cm-1•cm 处即可停止电泳。
注意事项•
1.本产品分为还原型和非还原型两种，还原型上样缓冲液中含一定量的巯基乙醇，有
轻微刺激性气味，较易区分。
2.本产品在不同的胶浓度中，红色染料与溴酚蓝泳动的前后顺序会略有不同。
3.本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。
4.含巯基的试剂有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
SDS-PAGE蛋白加样缓冲液(2×)
北京雷根生物技术有限公司
SDS-PAGE 蛋白加样缓冲液(2×)
简介：
SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液即SDS-PAGE Sample Loading Buffer(2×)，是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的2倍浓缩的蛋白上样缓冲液。
SDS-PAGE Sample Loading Buffer(2×)常用于SDS-PAGE 蛋白样品的上样，含少量DTT ，但不含有毒物质β-巯基乙醇。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE 蛋白加样缓冲液(2×)。
水浴溶解后立即
室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。
2、 取适量的蛋白样品和SDS-PAGE Sample Loading Buffer(2×)等量混合，充分混匀。
3、 100℃或沸水浴加热5～10min ，以充分变性蛋白。
4、 冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE 胶加样孔内即可。
5、 通常电泳至蓝色染料到达PAGE 胶的底部附近即可停止。
注意事项：
1、 Leagene SDS-PAGE Sample Loading Buffer(2×)中含少量DTT ，有轻微刺激性气味，
但不含由毒物质β-巯基乙醇。
2、 SDS-PAGE Sample Loading Buffer(2×)必须完全溶解后再使用。
编号 名称 PE0024 PE0024 Storage SDS-PAGE Sample Loading Buffer(2×) 5×1ml 10ml -20℃ 使用说明书 1份。
Western Blot膜封闭液体使用说明
Western Blot膜封闭液体使用说明
货号：SW3010
规格：100ml
保存：2-8℃保存，有效期一个月。
产品说明：
Western Blot膜封闭液(Blocking Buffer)适用于Western Blot实验中PVDF膜或NC膜等转印膜的封闭。
封闭后，可以减小后续的一抗或二抗和膜的非特异性结合，降低背景，增强信噪比，以达到理想的显色效果。
按照每张膜封闭需要5-10毫升封闭液计算，一个包装的Western封闭液可以封闭10-20张膜。
使用方法：
Western Blot膜封闭液为即用型，无需稀释。
蛋白转膜后将转印膜置于容器中，加入足够量的膜封闭液充分覆盖膜，室温下振荡封闭半小时至1小时，即完成膜的封闭，然后进行一抗孵育等后续操作。
注意事项：
通常在室温封闭60分钟即可。
对于一些背景非常高的抗体，可以4℃封闭过夜。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
相关试剂：
P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）
PE0010ECL Plus荧光检测试剂(ECL超敏发光液)
PR1800Western blotting蛋白MARKER
SW3020Western Blot膜再生液
T108020×TBS。
蛋白银染试剂盒说明书
蛋白凝胶银染试剂盒使用说明书产品编号：SK6020储存条件：RT，保质期1年。
产品内容：产品内容SK6020-25TA液（增敏浓缩液200×）5mlB液（银染浓缩液100×）10mlC液（显色浓缩液5×）2×100mlD液（添加液）5ml说明书1份产品说明：本试剂盒采用高灵敏度的银染染料，可应用于变性胶及非变性胶的蛋白染色，具有目的条带清晰、背景低、操作时间可灵活控制的优点。
另外，本试剂盒增加了一步短时敏化作用步骤，可明显降低背景及提升目的条带的亮度。
使用说明：（需自备无水乙醇、冰醋酸）以下操作步骤中各溶液的用量以大小为8.5×5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，置于摇床上操作，一般用量25ml。
对于大型凝胶，各溶液的配制量需按凝胶体积的比例放大。
注：实验前准备50ml固定液（冰醋酸：乙醇：超纯水=1:4:6）、50ml洗脱液（10%乙醇）和50ml 终止液（5%的冰醋酸）。
1．水洗：电泳完成后，用超纯水洗胶2次，每次洗涤5分钟。
2．固定：用25ml固定液固定凝胶2次，每次固定15分钟。
3．洗脱：用洗脱液洗胶2次，每次洗涤5分钟。
4．水洗：用超纯水洗胶2次，每次洗涤5分钟。
5．增敏：将上一步洗好的凝胶置于增敏液中，室温下准确孵育1分钟后用超纯水洗胶3次，每次洗涤20秒。
增敏液的配制：取A液125μl加入到25ml超纯水中，混匀。
6．银染：弃去超纯水，将凝胶置于银染工作液中孵育30分钟。
银染液的配制：取B液250μl、D液50µl 加超纯水至25ml，混匀。
7．水洗：用超纯水快速洗胶2次，每次洗涤准确控制为20秒。
8．显影：立即将洗好的凝胶浸没在显影液中，室温孵育2-3分钟，直至蛋白条带显示清晰。
显影液的配制：取C液5ml、D液30µl加超纯水至25ml，混匀。
注意：显影30秒内，蛋白条带开始显现，继续显影至2-3分钟。
蛋白上样缓冲液安全操作及保养规程
蛋白上样缓冲液安全操作及保养规程蛋白上样缓冲液是生物制药领域中常用的一种化学试剂。
在使用过程中，需要注意安全操作及缓冲液的保养，以确保实验结果的准确性和人员的安全。
一、蛋白上样缓冲液的安全操作1. 穿戴个人防护装备在使用蛋白上样缓冲液前，应穿戴个人防护装备，包括实验手套、防护眼镜等。
使用过程中，要避免将缓冲液接触皮肤、口腔和眼睛。
2. 避免混淆和误用蛋白上样缓冲液应存放在标有化学试剂名称和危险等级的专用柜中。
在操作过程中，应避免把缓冲液放错位置和和混淆使用，避免不必要的事故发生。
3. 缓冲液浓度的准确控制缓冲液的浓度对实验结果有很大的影响，因此在使用蛋白上样缓冲液时，要注意缓冲液浓度的准确控制，不能太浓或太淡，要根据实验需要调整浓度。
4. 遵守操作步骤蛋白上样缓冲液的操作步骤应根据实验文献和厂家说明书进行，不能随意操作。
在操作时，要认真阅读说明书，并按照相应的工作流程和实验条件进行实验操作。
5. 实验废弃物的处理蛋白上样缓冲液在实验中可能产生一些废弃物，如玻璃管、过滤器等。
这些废弃物应妥善处理，避免影响实验室环境和人员健康。
二、蛋白上样缓冲液的保养规程1. 储存条件蛋白上样缓冲液应保存在干燥、阴凉、通风的条件下，避免阳光直射。
在储存过程中，应避免与其他化学试剂混合，以免影响缓冲液的质量。
2. 检查期限蛋白上样缓冲液应具有有效期，并在使用前仔细检查缓冲液的保质期和是否发生变质。
如有任何异常情况，应立即停止使用，并及时向供应商询问处理方法。
3. 注意缓冲液的pH值蛋白上样缓冲液的pH值对实验结果有很大的影响，因此在储存和使用缓冲液时，要注意其pH值的变化。
如发现pH值发生变化，要及时调整pH值，以保证实验结果的准确性。
4. 严格控制使用量和储存量蛋白上样缓冲液的使用量和储存量应根据实验需要和缓冲液的有效期进行严格控制。
避免使用过量或储存过多的缓冲液导致浪费，也要避免缓冲液过期后使用，以免影响实验结果。
4×蛋白上样缓冲液(含DTT)说明书
4×蛋白上样缓冲液（含DTT）说明书货号：P1015规格：10ml保存：-20℃保存，建议分装冻存，避免反复冻融，自发货之日起至少12个月有效。
产品简介：本产品适用于SDS-PAGE(SDS-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。
其主要成份为SDS，DTT，溴酚蓝，缓冲盐溶液等。
SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。
DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。
最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。
溴酚蓝用作电泳时的指示剂，可大概指示电泳结束的时间。
使用说明：1、请按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。
如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。
2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。
3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。
注意事项：4、聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右，胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。
请根据自己目的条带来判断电泳时间。
5、本试剂因含DTT，有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6、蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。
线粒体提取试剂盒说明书
线粒体提取试剂盒说明书货号：SM0020规格：50T/100T保存：四周内使用可2-8℃储存，长期保存请置于-20℃。
产品内容：组份SM0020-50T SM0020-100T Lysis Buffer50mL 100mL Mito-Wash Buffer25mL 50mL Store Buffer 5mL 10mL产品简介：线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。
适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的线粒体的制备。
其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。
操作步骤（仅供参考）：1.样本处理a.组织匀浆：称取100~200mg 新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS 或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。
加入1.0mL 冰预冷的Lysis Buffer ，0℃冰浴上下研磨组织20次；b.培养细胞匀浆：消化细胞，PBS 洗涤，800g 离心5~10min 收集细胞，计数。
每次提取需要5×107个细胞，加入1.0mL 冰预冷的Lysis Buffer 重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次。
2.将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000g 离心5min 。
3.取上清，转移至新的离心管中，4℃，1000g 再次离心5min 。
4.取上清，转移至新的离心管中，4℃，12,000g 离心10min 。
离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。
将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。
5.往线粒体沉淀中加入0.5mL Wash Buffer 重悬线粒体沉淀，4℃，1000g 离心5min 。
6.取上清，转移至新的离心管中，4℃，12,000g 离心10min 。
弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底。
7.用50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。
SDS-PAGE分离胶缓冲液（4×）说明书
SDS-PAGE 分离胶缓冲液（4×）SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)保存条件：2-8℃产品内容网站订购： 微信订购：扫一扫右侧二维码服务热线：4006-222-360版本号：12/2015目录号：CW0026S （500 ml ）ComponentCW0026S 500 ml SDS-PAGE Separating Gel Buffer （4×）500 ml产品简介 本产品为配制SDS-PAGE分离胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷。
产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。
操作步骤根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。
I 灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表2）1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer（4×）分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3．加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
5．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。
II 灌制浓缩胶（各试剂使用量请参考附表3）1．去除覆盖在分离胶上的水层。
2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3．加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6．静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。
SDS-PAGE蛋白加样缓冲液(5×)
北京雷根生物技术有限公司 SDS-PAGE 蛋白加样缓冲液(5×)简介：SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液即SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)，是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的5倍浓缩的蛋白上样缓冲液。
SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)常用于SDS-PAGE 蛋白样品的上样，含少量DTT ，但不含有毒物质β-巯基乙醇。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE 蛋白加样缓冲液(5×)。
水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。
2、 取适量的蛋白样品和SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)按4:1混合，充分混匀。
3、 100℃或沸水浴加热5～10min ，以充分变性蛋白。
4、 冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE 胶加样孔内即可。
5、 通常电泳至蓝色染料到达PAGE 胶的底部附近即可停止。
注意事项：1、 Leagene SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)中含少量DTT ，有轻微刺激性气味。
2、 SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)必须完全溶解后再使用。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号名称 PE0025PE0025 PE0025 Storage SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)1ml 5×1ml 10ml -20℃ 使用说明书 1份。
Western Blot Marker使用说明
Western Blot Marker使用说明货号：PR1800规格：10T(50μl)/20T(100μl)保存：-20℃可保存2年。
避免反复冻融，建议分装保存。
产品简介:Western Blot Marker是专门为Western Blot试验设计的分子量标准。
传统的Western Blot 试验需要使用预染蛋白Marker来跟踪检测阳性抗原信号和转膜效率。
但预染蛋白Marker用在Western Blot试验中有三大缺点：（1）预染蛋白Marker无法在胶片上曝光，曝光信号需要根据膜上的预染蛋白Marker来判断，因此后续的图片需要拼接才能两者合而为一；（2）预染蛋白Marker都经过化学修饰，经过化学修饰的蛋白在SDS-PAGE电泳过程中迁移率发生改变，分子量信息不再准确，往往导致Western Blot结果判断出现较大偏差；（3）预染蛋白Marker 无法检测作为杂交过程的阳性对照。
Western Blot Marker由7种不同分子量的蛋白组成（19、20、35、45、60、65、110KDa），其中19、45、65KDa条带为蓝色预染marker，其它四个条带都可与人、小鼠、大鼠、山羊、绵羊、兔的IgG恒定区结合。
Western Blot Marker可以直接结合二抗，或通过结合一抗间接结合二抗，因此蛋白Marker就能与抗原在同一张胶片上曝出信号，阳性信号可以直接通过Western Blot Marker的位置来判断。
另外，预染发光Western Blot Marker还可作为Western Blot试验的阳性对照。
使用说明:1.取出后于室温放置融化；2.温和地充分混匀，取5μl该Western Blot Marker至上样孔中，进行SDS-PAGE电泳。
3.电泳完毕后转至PVDF膜或NC膜，与一抗二抗孵育。
4.孵育完毕，将Western Blot Marker与抗原一起通过ECL曝光至胶片。
SDS-PAGE蛋白电泳手册
蛋白电泳手册SDS—PAGE及Western blot蛋白电泳蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。
根据所采用的支持物不同，有琼脂糖凝胶电泳，淀粉凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳等.其中,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE）由于无电渗作用，样品用量少（1-100μg),分辨率高，凝胶机械强度大，重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶等优点而受到广泛的应用。
PAGE原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (简称Acr) 和交联剂N，N’-亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis)在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支持物进行电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带。
SDS—PAGE原理SDS是一种阴离子表面活性剂，能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。
因此，各种蛋白质—SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。
这种电泳方法称为SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。
实验使用过程中，还加入DTT或者*＊＊，以打开蛋白间的二硫键,破坏蛋白质的四级结构。
SDS-PAGE最常采用垂直板不连续系统（分离胶与浓缩胶）。
索引蛋白电泳（SDS-PAGE）……………………电泳试剂总表……………………………………………………制胶………………………………上样及电泳……………………染色蛋白提取蛋白定量Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用说明BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明Lowry蛋白浓度测定试剂盒使用说明蛋白分子量标准(图）考马斯蛋白胶快速染色液Western blotWestern blotting DAB检测试剂盒Western blotting ECL化学发光检测试剂盒Western blotting 试剂盒使用说明蛋白电泳试剂（部分试剂可以相互替换）系号货号名称1T8060TRIS 三羟甲基氨基甲烷2G8200Glycine 甘氨酸3S8010SDS 十二烷基硫酸钠4A8080Acrylamide 丙烯酰胺5M8200N，N-Methylene Bisacrylamide甲叉双丙烯酰胺6A8090Ammonium Persulfate 过硫酸胺7D8220DTT 二硫苏糖醇8M8210β—Mercaptoethanol β-**＊9T8090TEMED 四甲基＊**10A101030％丙烯酰胺（29：1)11S10514XSDS-PAGE分离胶缓冲液（PH=8。
CCK-8试剂盒操作常见问题
详细说明：
货号：G5500 产品名称：结晶紫水溶液(0.1%) 规格：100ml 产品特点：室温,避光,6 个月。
结晶紫(Crystal violet)又称甲紫，分子式为 C25H30N3Cl·9H2O，分子为 407.98，CAS 号为 548-62-9。
结晶紫属于碱性染料，能溶于水、乙醇，可以 把组织和细胞核染成紫色。
结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广， 是一种优良的染色剂。
商品货号：
产地 Solarbio
规格
价格 140.00 元
G5500
100ml
相关产品： P1015 A1010 P1300-1 T1070 D1060 PR1920 PR1700 SW3010 DA1010 4×蛋白上样缓冲液（含 DTT） 30%丙烯酰胺(29:1) SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 10×电泳转移缓冲液 彩虹 245 广谱蛋白 marker 预染次高分子量蛋白 marker 膜封闭液 DAB 显色试剂盒（20×）
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Westernblot试剂配制及操作流程
Western-Blot操作流程试剂配制1.RIPA裂解液：50mM Tris（MW121.14，PH7.5）3.02g150mM NaCl 4.38g1%TritonX-100 5ml1%脱氧胆酸钠5g0.1%SDS 0.5g蒸馏水至500ml。
调pH值至7.5。
混匀后4℃保存，长期保存于-20℃。
使用时，加入蛋白酶抑制剂cooktail。
2. 蛋白酶抑制剂cooktail所需母液成分：（1）100mmol/L PMSFPMSF 17.4mg异丙醇1ml溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。
（2）10mM 亮肽素leupeptin:-20℃保存（3）2.1mg/ml 抑肽素Aprotinin:4℃保存配制：成分终浓度每ml裂解液所加母液量PMSF 1mmol/L（储存浓度稀释100倍）10ulLeupeptin 0.1mmol/L（储存浓度稀释100倍）10ulAprotinin 1ug/ml （储存浓度稀释2000倍）0.5ul各成分直接加入所用的RIPA裂解液中，之后按照60ul/孔（12孔板）提取蛋白。
1. G250考马斯亮蓝溶液（蛋白定量专用）考马斯亮蓝G250 100mg95％乙醇50ml85％磷酸100ml蒸馏水至1000ml配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入磷酸和水，混匀后，用滤纸过滤，4℃保存于棕色瓶中。
2．牛血清白蛋白B SA储存液（1mg/ml）：100mg BSA粉末溶于20 ml双蒸水，定容至100 ml，加少量防腐剂，4℃保存。
1．4X上样缓冲液1.0 mol/L Tris·HCl（pH6.8）2mlSDS 0.8g溴酚蓝0.04g甘油4ml去离子水定容至10ml。
混匀后，分装于1.5ml离心管中，4℃保存。
使用时稀释成1X。
2．1.0 mol/L二硫苏糖醇（DTT）（10X）用20 ml 0.01 mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT,分装成1ml小份储存于-20 C。
SDSPAGE操作方法要点
SDS-PAGE教程1 SDS-PAGE原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4 g去污剂结合。
当分子量在15 KDa到200 KDa之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：log MW = K – bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS-PAGE [Laemmli法]这种方法帖出来，大家是不是感觉非常的陌生呢？其实这种发方法很普遍，现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。
如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature上的一篇文章中的方法，这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多，而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题，而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已，所以阐述如何操作的文字只有那么一小段（但相当经典），这是SDS-PAGE（不连续系统）的首次成功应用。
现在我们在实验室进行的SDS-PAGE 试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法，目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法，但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。
你也许会恍然大悟：原来我们用的就是Laemmli！SDS-PAGE各试剂配制方法30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide各种组分名称体积(mL)或质量(g) 备注30%Acr-Bis(29:1) 100 mL 实验室配制时用量(100 mL)29% Acrylamide(丙烯酰胺) 29 g 29.2 g1% BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 1 g 0.8 g将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。
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4×蛋白上样缓冲液（含DTT）使用说明
货号：P1015
规格：10ml
保存：-20℃保存，建议分装冻存，避免反复冻融，自发货之日起至少12个月有效。
产品简介：
4×蛋白上样缓冲液（含DTT）适用于SDS-PAGE(SDS-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。
其主要成份为SDS，DTT，溴酚蓝，缓冲盐溶液等。
SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。
DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。
最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。
溴酚蓝用作电泳时的指示剂，可大概指示电泳结束的时间。
使用说明：
1、请按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。
如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。
2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。
3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。
注意事项：
4、聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右，胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。
请根据自己目的条带来判断电泳时间。
5、本试剂因含DTT，有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6、蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。
相关试剂：
P10182×蛋白上样缓冲液（含DTT）
P10174×非变性蛋白上样缓冲液
P001210×丽春红染色液
P1300-500考马斯亮蓝快速染色液
P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
PR1700预染次高分子量蛋白MARKER。