上海交通大学微生物实验课件实验十病毒血凝和血凝抑制试验
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37℃培养72小时的鸡胚--放置于4 ℃，致死鸡 胚--消毒气室--用镊子打开气室-打开壳膜--用移液 器或吸管收集尿囊液于1.5毫升离心管--5000转， 离心5分钟，以去除细胞沉淀--上清液作血凝 和 血 凝抑制试验作用. 观察鸡胚的病变特征 (三)制备1%浓度的鸡红细胞
采集新鲜的抗凝血,以生理盐水洗3次,每次离 心5分钟,转速为4000转,最后用生理盐水配制成1% 浓度。
某一病毒能够引致血凝，是否可以判定它是何种 病毒？如果不行，应该再要进行什么实验？为什么？
下次实验
血清学试验（凝聚试验和ELISA)p1wenku.baidu.com3,171
HA和HI结果判定
HA试验
HI试验 判定结果：能将病毒凝集红细胞的作用完全抑制的血清 的最高稀释倍数为该血清的红细胞凝集抑制效价，以2 的指数表示。
比较一下，你自己培养的病毒与 提供的病毒的血凝效价和血凝抑 制效价，分析一下实验中关键点 是哪些？
实验报告
实验目的 实验原理 实验步骤 结果与分析 思考题
10孔，弃50μl。 3、E排加50μl4个血凝单位病毒抗原，加至11孔
F排加另一种病毒，同上 4、 然 后 各 孔 加 50μl的 1%鸡 红 细 胞 ， 混 匀 ， 室 温 静 置
30min 。 5、观察结果，确定血清的HI效价。血凝被抑制的抗体最
高稀释度即为血清抗体的血凝抑制效价（HI效价）。
4、混匀、室温静止30min 。 5、确定红细胞100%凝聚的病毒的最高稀释度，为
HA滴度。
6、血凝效价（HA）的确定
将板直立，首先观察红细胞阴性对照， 应呈逗点状。红细胞凝集孔呈颗粒状附 于孔底。能凝集红细胞的最高稀释度即 为血凝效价。
结果判定
A B C D
进行血凝抑制前抗原要做什么准备？
(五) 4单位病毒液的配制
实验十 病毒血凝和血凝抑制
一、 实验目的
1: 学会通过鸡胚接种增殖的病毒的收集 2: 掌握病毒血凝和血凝抑制试验的基本原理和基本操作 3: 理解病毒血凝和血凝抑制试验的应用
二 、实验原理
1:红细胞凝集 某些病毒（如流感病毒，新成疫病毒，麻疹 病毒等）拥有血凝素糖蛋白，可与人或某些 动物的红细胞表面的相应受体结合，从而呈 现红细胞凝集现象。在此，病毒与红细胞是 配体与受体的关系，而不是颗粒性抗原与相 应抗体作用的凝集反应。 这种凝聚多种病毒都具有，不是完全特异的
病
红
毒
细
颗
胞
粒
2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入 特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或 其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗 粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被 抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝 抑制反应。
抗原
抗体
I am late！
3:利用已知抗体，可通过红细胞凝集抑制试验 鉴定某些具红细胞凝集特性的病毒，同样也 可利用已知病毒抗原，通过红细胞凝集抑制 试验来测定抗体水平，从而评价疫苗的免疫 效果，或动物是否受到病毒感染
血凝实验是病毒与红细胞的凝集 血凝抑制试验是抗原抗体的特异性血清实验
4 红细胞的解脱现象
某些具红细胞凝集特性的病毒还拥有神经氨 酸酶活性，其可使病毒从红细胞上解脱下 来，因此，血凝试验的时间太长，可能会 在高浓度孔见到类似阴性的反应结果，实 验过程中必须控制好时间。
三 、实验操作
(一)病毒的鸡胚接种与培养 (二)病毒尿囊液的收集
(四)红细胞凝集试验（每2人一块血凝板）
1、50μl的生理盐水加入96孔微量板A 、 B行的1-12 孔。
2、被检病毒液50μl分别加入A 、 B行（一行为标准 病毒，一行为自己收集的病毒）的第一孔，然后倍 比稀释至第11孔，弃去50μl，第12孔不加任何病毒 液，为阴性对照。
3、加50μl的1%鸡红细胞于12个孔，按病毒的低浓度 至高浓度加入。
以出现红细胞凝集现象的病毒最高稀释 度为1个血凝单位,将原病毒液稀释成4倍于 最高稀释度的病毒液,即为4单位病毒液。例 如:出现红细胞凝集现象的最高稀释度是26次 方(病毒的血凝效价为26),那么, 4单位病毒 液就为病毒原液作24稀释。
(六)病毒的红细胞凝集抑制试验
1、加生理盐水50μl于96孔板的E、F两排的1-12孔。 2、各加标准血清50μl于E、F两排第一孔，倍比稀释到第
采集新鲜的抗凝血,以生理盐水洗3次,每次离 心5分钟,转速为4000转,最后用生理盐水配制成1% 浓度。
某一病毒能够引致血凝，是否可以判定它是何种 病毒？如果不行，应该再要进行什么实验？为什么？
下次实验
血清学试验（凝聚试验和ELISA)p1wenku.baidu.com3,171
HA和HI结果判定
HA试验
HI试验 判定结果：能将病毒凝集红细胞的作用完全抑制的血清 的最高稀释倍数为该血清的红细胞凝集抑制效价，以2 的指数表示。
比较一下，你自己培养的病毒与 提供的病毒的血凝效价和血凝抑 制效价，分析一下实验中关键点 是哪些？
实验报告
实验目的 实验原理 实验步骤 结果与分析 思考题
10孔，弃50μl。 3、E排加50μl4个血凝单位病毒抗原，加至11孔
F排加另一种病毒，同上 4、 然 后 各 孔 加 50μl的 1%鸡 红 细 胞 ， 混 匀 ， 室 温 静 置
30min 。 5、观察结果，确定血清的HI效价。血凝被抑制的抗体最
高稀释度即为血清抗体的血凝抑制效价（HI效价）。
4、混匀、室温静止30min 。 5、确定红细胞100%凝聚的病毒的最高稀释度，为
HA滴度。
6、血凝效价（HA）的确定
将板直立，首先观察红细胞阴性对照， 应呈逗点状。红细胞凝集孔呈颗粒状附 于孔底。能凝集红细胞的最高稀释度即 为血凝效价。
结果判定
A B C D
进行血凝抑制前抗原要做什么准备？
(五) 4单位病毒液的配制
实验十 病毒血凝和血凝抑制
一、 实验目的
1: 学会通过鸡胚接种增殖的病毒的收集 2: 掌握病毒血凝和血凝抑制试验的基本原理和基本操作 3: 理解病毒血凝和血凝抑制试验的应用
二 、实验原理
1:红细胞凝集 某些病毒（如流感病毒，新成疫病毒，麻疹 病毒等）拥有血凝素糖蛋白，可与人或某些 动物的红细胞表面的相应受体结合，从而呈 现红细胞凝集现象。在此，病毒与红细胞是 配体与受体的关系，而不是颗粒性抗原与相 应抗体作用的凝集反应。 这种凝聚多种病毒都具有，不是完全特异的
病
红
毒
细
颗
胞
粒
2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入 特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或 其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗 粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被 抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝 抑制反应。
抗原
抗体
I am late！
3:利用已知抗体，可通过红细胞凝集抑制试验 鉴定某些具红细胞凝集特性的病毒，同样也 可利用已知病毒抗原，通过红细胞凝集抑制 试验来测定抗体水平，从而评价疫苗的免疫 效果，或动物是否受到病毒感染
血凝实验是病毒与红细胞的凝集 血凝抑制试验是抗原抗体的特异性血清实验
4 红细胞的解脱现象
某些具红细胞凝集特性的病毒还拥有神经氨 酸酶活性，其可使病毒从红细胞上解脱下 来，因此，血凝试验的时间太长，可能会 在高浓度孔见到类似阴性的反应结果，实 验过程中必须控制好时间。
三 、实验操作
(一)病毒的鸡胚接种与培养 (二)病毒尿囊液的收集
(四)红细胞凝集试验（每2人一块血凝板）
1、50μl的生理盐水加入96孔微量板A 、 B行的1-12 孔。
2、被检病毒液50μl分别加入A 、 B行（一行为标准 病毒，一行为自己收集的病毒）的第一孔，然后倍 比稀释至第11孔，弃去50μl，第12孔不加任何病毒 液，为阴性对照。
3、加50μl的1%鸡红细胞于12个孔，按病毒的低浓度 至高浓度加入。
以出现红细胞凝集现象的病毒最高稀释 度为1个血凝单位,将原病毒液稀释成4倍于 最高稀释度的病毒液,即为4单位病毒液。例 如:出现红细胞凝集现象的最高稀释度是26次 方(病毒的血凝效价为26),那么, 4单位病毒 液就为病毒原液作24稀释。
(六)病毒的红细胞凝集抑制试验
1、加生理盐水50μl于96孔板的E、F两排的1-12孔。 2、各加标准血清50μl于E、F两排第一孔，倍比稀释到第