食品中苯甲酸的测定

食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定

高效液相色谱法

２.1原理

不同样品经提取后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定,根据保留时间定性，外标峰面积定量。

２。２试剂和材料

除另有说明外,所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/Ｔ 6６82要求。

2.2。１甲醇：色谱纯。

2.2.2 乙酸铵溶液：称取1.5４g乙酸铵，加水溶解并稀释至１00０mＬ,经微孔滤膜过滤。

2。2。３亚铁氰化钾溶液:称取10６g亚铁氰化钾[Ｋ

4Ｆe（CN）

6

·3Ｈ

２

Ｏ］加

水至1000mＬ。

２。2.4 乙酸锌溶液：称取2２0g乙酸锌[Zn(ＣH

3CＯＯ)

2

·2Ｈ

2

O］溶于少量水

中,加入30mＬ冰醋酸,加水稀释至100０mL。2。２．5 氨水(1+１）：氨水与水等体积混合. 2。2。6 正己烷.

2.2．7 pH4。4乙酸盐缓冲溶液:

a）乙酸钠溶液:称取6．80ｇ乙酸钠（CH

3COONa·３H

２

Ｏ），用水溶解后定容至1

０00mL。

b）乙酸溶液：称取４。3mL冰乙酸，用水稀释至１0０0mL。

将上述两种溶液按体积比37：63混合，即得pＨ4．4乙酸盐缓冲溶液. 2．2.８ pＨ7.2磷酸盐缓冲溶液:

a）称取2３．88g磷酸氢二钠(Na

2ＨPO

4

·12Ｈ

２

Ｏ)，用水溶解后定容至1０

００mＬ。

b）称取９.07g磷酸二氢钾（ＫH

2PO

4

），用水溶解后定容至1０00mL。

将上述两种磷酸盐溶液按体积比7:3混合,即得pＨ7。２磷酸盐缓冲液.

2.2。9 标准溶液的配制:

a）苯甲酸标准储备液：准确称取0.２360g苯甲酸钠，加水溶解并定容至200ｍL。此溶液每毫升相当于含苯甲酸1．00mg。

b）山梨酸标准储备液：准确称取0．26８0ｇ山梨酸钾，加水溶解并定容至20０ｍL.此溶液每毫升相当于含山梨酸1。00mg.

c）糖精钠标准储备液：准确称取0．170２g糖精钠(C

６H

４

CONNaSO

2

）（120℃

烘干4h)，加水溶解并定容至200mL.此溶液中糖精钠的含量为1。00g/mL.

ｄ）混合标准使用液:分别准确吸取不同体积苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液，将其稀释成苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量分别为０．000ｍg／mL、0.0２0ｍｇ/mL、０.040ｍg/mL、0。０８0mg/mＬ、0。160ｍg/ｍＬ、0。３2０mg/ｍＬ的混合标准使用液.

２。２．10 微孔滤膜:0．４５μm,水相.

2．3仪器与设备

2.3.1 高效液相色谱仪:配有紫外检测器。

2。3。2 离心机：转速不低于４000r/miｎ

2.3.３超声波水浴振荡器。

2。3。4 食品粉碎机。

2。３。5 旋涡混合器。

２.３.6 pH计.

２．3．7 天平：分度值为0。01ｇ和0。1ｍｇ。

２．４分析步骤

2。４。1样品处理

2.4．1.1液体样品

①碳酸饮料、果酒、葡萄酒等液体样品:称取10g样品（精确至0.001g)(如含有乙醇需水浴加热除去乙醇后再用水定容至原体积)于２5mL容量瓶中,用氨水（1+1）调节pH至近中性，用水定容至刻度,混匀,经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

②乳饮料、植物蛋白饮料等含蛋白质较多的样品：称取1０ｇ样品（精确至0．00１ｇ)于2５ｍL容量瓶中，加入2ｍＬ亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液摇匀，以沉淀蛋白质，加水定容至刻度，4000r／min离心10min，取上清液,经微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。

２．４.1.2半固体样品

①含有胶基的果冻样品:称取０。5g~１g样品（精确至0.001g），加水适量，转移至25mL容量瓶中，再加水至约２0mＬ，置6０℃~70℃水浴中加热片刻,加塞，剧烈振摇使其分散均匀后,加氨水（1+1）调节ｐH至近中性，加塞，剧烈振摇，使样品在水中分散均匀，置60℃～70℃水浴锅中加热30mｉn，取出后趁热超声5miｎ,冷却后用水定容至刻度，用微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。

②油脂、奶油类样品：称取2ｇ～3g样品（精确至0.001g)于50ｍL具塞离心管中,加入１０mL正己烷,用旋涡混合器使其充分溶解，4000r／mｉn离心3miｎ，吸出正己烷提取液转移至25０mＬ分液漏斗中,再向50mL具塞离心管中加入10mL 正己烷重复上述步骤，合并正己烷提取液于25０mL分液漏斗中。于分液漏斗中加入20ｍＬpH4．4乙酸盐缓冲溶液加塞后剧烈振摇分液漏斗约3０s，静置分层后,将水层转移至50ｍL容量瓶中,再加入20mLpＨ4。4乙酸盐缓冲溶液，重复上述步骤，合并水层并用乙酸盐缓冲溶液定容至刻度，经微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。

2．4．1.3固体样品

①肉制品、饼干、糕点:称取粉碎均匀样品2g~3g（精确至０．001ｇ)于小烧杯中，用20ｍL水分数次清洗小烧杯将样品移入25mL容量瓶中，超声振荡提取5min,取出后加２mＬ亚铁氰化钾溶液，摇匀,再加入2mL乙酸锌溶液，摇匀,用水定容至刻度,移入离心管中，4000r/ｍin离心5min，吸出上清液,用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析.

②油脂含量高的火锅底料、调料等样品：称取样品2g~3g（精确至０.0０１ｇ)于50mL具塞离心管中,加入10mＬ磷酸盐缓冲液，用旋涡混合器充分混合，然后于４000r／min离心5mｉn，小心吸出水层转移到２5ｍL容量瓶中,再加入１０mL磷酸盐缓冲液于具塞离心管中,重复上述步骤，合并两次水层液，用磷酸盐缓冲液定容至刻度，混匀,用微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。

③凝胶糖果、胶基糖果:按半固体样品2。４.1．2含有胶基的果冻样品处理。2。4.２色谱条件

a)色谱柱：C1８柱，２5０mｍ×4。6mm,5μm，或性能相当者；

ｂ)流动相:甲醇（2.２。1）+乙酸铵溶液(2．2.2）(5+9５）;

ｃ)流速:1ｍL/ｍin;