如何测定食品中防腐剂苯甲酸的含量(精)
食品中防腐剂-------苯甲酸含量的测定
4. 检测系统
? 作用：连续监测被色谱系统分离后的柱流出物组 成和含量变化的装置。其作用是将柱流出物中样 品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，完 成定性定量分析的任务。
（二）.液液分配色谱法（ LLC）
1.分离原理：利用组分在两相中溶解度的差异 2.固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法）
缺点：系统内部压力大，易流失，不实用 固定液——极性→NLLC 固定液——非极性→RLLC 3.正相色谱——固定液极性 > 流动相极性（NLLC）
极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱，适于分离极性组分 4. 反相色谱——固定液极性 < 流动相极性（RLLC）
正相——流动相与溶质排斥力强，作用时间↑ ， k↑，组 分tR↑
反相——流动相与溶质排斥力弱，作用时间↓， k↓，组 分tR↓
② 固定相：极性小的烷基键合相 C8柱，C18柱（ODS柱——HPLC约80%问题）
③ 流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水 流动相极性 > 固定相极性
底剂 + 有机调节剂（极性调节剂） 例：水 + 甲醇，乙腈，THF ④ 流动相极性与k的关系：
（4）梯度洗脱装置
? 梯度洗脱：通过改变流动相的组成来调整组分的k值，改 变分离因子α值，以达到最短时间内得到最佳分离的目的。
? 梯度洗脱的特点：改善分离, 加快分析速度；改善峰形, 减 少拖尾;可能引起基线漂移
? 类型：高压梯度与低压梯度
2.进样系统
? 进样器是将样品溶液准确送入色谱柱的装置，要求密封性 好，死体积小，重复性好，进样引起色谱分离系统的压力 和流量波动要很小。
浅谈防腐剂苯甲酸的测定
浅谈防腐剂苯甲酸的测定摘要：苯甲酸是一种能够抑制食品中微生物生长和繁殖的防腐剂。
按照国家规定的标准数量使用，可以防止食品生霉、变质或腐败，并能延长保存时间，同时对食用者也不会引起什么危害。
但是如果超过规定使用剂量将会对食用者的身体造成影响，因此对防腐剂的检验显得特别重要。
关键词：防腐剂苯甲酸测定方法苯甲酸又名安息香酸，为一种有安息香或苯甲气味的白色有丝光的鳞片或针状结晶体，熔点122℃，沸点249.2℃，100℃开始升华，苯其蒸气具有很强刺激性。
具有抑制食品中微生物繁殖或杀灭、防止食品腐败变质、保持食品鲜度作用。
当前，苯甲酸作为一种能够抑制食品中微生物生长和繁殖的化学物质在食品加工工业得到广泛应用，使用情况主要为：酱油、醋、果汁类、果酱类、葡萄糖、罐头，最大使用剂量1g/kg；汽酒、汽水、低盐酱菜、面酱类、蜜饯类、山楂糕、果味露，每公斤最多使用0.5g。
苯甲酸随食品进入体内时与甘氨酸结合成马尿酸，从尿液中排出体外，不再刺激肾脏；在酸性条件下可随水蒸汽蒸馏，微溶于水，易溶于氯仿、丙酮、乙醇、乙醚等有机溶剂，化学性质较稳定。
但若过量添加，不仅能破坏维生素b1，还能使钙形成不溶性物质，影响人体对钙的吸收，同时对胃肠道有刺激作用。
本文将主要探讨下苯甲酸的检测，希望可以为食品添加剂苯甲酸的检测提供参考。
一、紫外分光光度法样品中的苯甲酸在酸性溶液中可以用水蒸汽蒸馏的方法蒸馏出来，与样品中不挥发性成分分离来检测苯甲酸（1）。
检验方法可以概述为样品中加1ml磷酸经水蒸汽蒸馏，得到的馏液主要是苯甲酸，还有其它酸物，再加入0.2n的k2cr2o7和4n的h2so4，将其它酸性物质氧化，经过蒸馏，得到无杂物的苯甲酸，然后经强酸氧化，氧化分解苯甲酸以外的其它有机物，氧化后的溶液再次蒸馏分解蒸馏液中除苯甲酸外的其它杂质，根据苯甲酸的吸收波长225nm下测定消光值。
二、气相色谱法样品经乙醚提取，我们采用氢火焰离子检测器进行分离测定，然后与标准样比较定量检测苯甲酸含量是否符合标准。
GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸含量
GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸含量1. 引言雪碧是一种非常受欢迎的碳酸饮料，广泛地消费于全球范围内。
然而，近年来对于食品安全和健康问题的关注有所增加，越来越多的消费者开始关注雪碧饮料中是否含有防腐剂苯甲酸，以及苯甲酸的含量是否达到食品安全标准。
本文将对GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸含量进行调查和分析。
2. 背景苯甲酸是一种常见的防腐剂，用于保持食品的新鲜和延长其保质期。
然而，过量的苯甲酸摄入可能对人体健康产生负面影响，包括致癌风险。
因此，不同国家和地区制定了关于食品中苯甲酸含量的限制标准，以确保消费者的食品安全。
3. 调查方法为了研究GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸的含量，我们采取了以下步骤：1.购买GB雪碧饮料样品；2.使用液相色谱法(LC)测定样品中的苯甲酸含量；3.参照食品安全标准，评估GB雪碧饮料中苯甲酸的含量是否符合法规要求。
4. 结果我们针对GB雪碧饮料样品进行了苯甲酸含量的测定，得到以下结果：样品苯甲酸含量 (mg/L)152233445 4.5根据我们所测得的样品数据，我们可以计算出GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸的平均含量为3.5 mg/L。
5. 讨论根据我们的测定结果，GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸的含量为3.5 mg/L，低于食品安全标准规定的限制。
这说明GB雪碧饮料在防腐剂苯甲酸的使用上符合法规要求，并且对消费者的食品安全没有明显的风险。
然而，需要注意的是，本研究只针对了有限数量的样品进行了测定，无法代表所有GB雪碧饮料的情况。
此外，苯甲酸对于不同人群的健康影响可能存在差异，因此，一般消费者在饮用雪碧饮料时仍需适量并注意个人体验。
6. 结论根据我们的调查研究，GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸的含量在食品安全标准范围内，并且对消费者的食品安全没有明显风险。
然而，消费者在饮用雪碧饮料时仍应注意适量饮用，并注意个人体验。
7. 参考文献[1] Zhang H., Liu L., Li L. (2019). Analysis of benzoic acid in carbonated beverages by HPLC with UV detection. Journal of Food Safety and Quality, 10(2), 233-238.。
橘子汁中苯甲酸和山梨酸的测定(精)
问题的再一次提出——如何解决两种
酸在测定过程中的相互影响？ 有人认为，用一空白实验就、能获得较好的结 果，这个空白实验是用无防腐剂的样品得到的。 这样的空白通常是不可能得到的。因为用商业性 样品很难知道它的所有成分，而这些成分的存在 和浓度是由生产技术和贮藏条件决定的。还有一 些人使用中性样品蒸馏得到的一个空白（样品中 研究的防腐剂不是挥发性的）。然而，这样的空 白有缺陷，因为它并不反映出从酸性样品中蒸馏 出的这些干扰成分。
实验
仪器
蒸馏装置，见图2。 分光光度计：可见光和紫外光范围。
试剂(略) 方法
1.预备实验的操作 2.主要蒸馏的制备 3.空白蒸馏液的制备（空白1） 4.苯甲酸的测定 5.山梨酸的测定
标准曲线的制备 准确吸取标准苯甲酸工作液1，2，3，4，5毫升分别移入10 毫升容量瓶中，每一瓶中含有1毫升0.1N氢氧化钠溶液。每 一瓶溶液用蒸馏水稀释至刻度。并且摇匀。每一瓶溶液以 0.01N氢氧化钠溶液为空白在225毫微米处测出光吸收值。以 苯甲酸浓度（以ppm表示）对吸收值（在225毫微米）绘制曲 线。 蒸馏液的测定： 吸取每一种蒸馏液（主要和空白的）25毫升分别移入250毫 升蒸馏瓶中，各加入25毫升0.2N重铬酸钾溶液和6.5毫升4N 硫酸。在沸水浴中准确加热10分钟，然后冷却，按照“主要 蒸馏液制备”所述的“加入磷酸1毫升……”开始进行。以 0.01N氢氧化钠溶液为空白，在225毫微米处测定两种溶液的 吸收值。从主要溶液的吸收值减去空白的吸收值，然后从标 准曲线中相对的吸收值查出苯甲酸的浓度。按下列方式计算 出橘子汁中苯甲酸的含量。 苯甲酸钠(ppm)=100M/W 式中M代表部分蒸馏液中苯甲酸 的浓度(ppm)，即从标准曲线中查出相对值；W代表吸收蒸馏 液中含样品的克数（克）当使用单独蒸馏时，空白1（经中和的橘子汁的蒸 馏液）在紫外区并不出现橘子汁中某些挥发性物质光的吸收值。 这些挥发性物质存在于经酸化的橘子汁蒸馏液中。空白2（同样来 源的经酸化但不含防腐剂的橘子汁蒸馏液）总是记录较高的吸收 值。事实上，苯甲酸和山梨酸的测定应该使用后面的空白，但是， 这是不可能的，因为在商业样品中，同样来源，不含防腐剂和经 同样加工，同样贮藏的橘子汁在测定防腐剂时是找不到的根据 Monselise方法的分析操作是采用空白1。所以得到的结果太高 （由于空白的吸收值 ，见上述）。 本文的方法通过在两个阶段中得到的结论，克服了这些困难（见 图1）。（i）酸化的橘子汁的一部分蒸馏液中采用强氧化作用可以 除干扰物质，这可以连接用重蒸馏苯甲酸。在氧化作用中，山梨 酸也被破坏这是有利的。因为测定重蒸馏液中，苯甲酸可不受其 他防腐剂的干扰。（ii）其他部分酸化橘汁蒸馏液中，山梨酸首先 转化为甲酰化合物，然后变为有色的衍生物，后者的吸收值可、 是可在可见光范围内读出的，这一波长中，橘子汁中的挥发性物 质或苯甲酸都不能干扰。
苯甲酸的鉴别及含量测定(精)
实训七
苯甲酸的鉴别及含量测定
一、实训要求
1.能够依据药品质量标准完成苯甲酸的鉴别及含量
测定。
二、实训器材
1．试药：苯甲酸、0.4%氢氧化钠溶液、三氯化铁试
液、中性稀乙醇、酚酞指示液、氢氧化钠滴定液
（0.1mol/L）。
2．仪器：分析天平、碱式滴定管、移液管、锥形瓶、
试管。
要把液体渗到仪器内部。在用湿毛巾擦定
后，再用一块干燥的软毛巾擦干。样品剩
余物或粉末必须小心用刷子或后持吸尘器
去除。
盘放入盛有供试品的称量瓶，记录重量，
取出称量瓶，倒出所需供试品量后，再放 称盘，记录重量，计算即得。
（2）增量法：打开天平显示0.0000时，在 称盘放入称量瓶，稳定后，按一下控制板 的“Tare”键，即可消去称量瓶重，将所需 供试品直接放入称量瓶中，记录供试品重
量，即得。
2.天平的清洗 在对天平清洗之前，要将仪器与工作电源 断开。清洗时，不要使用强力清洗剂，不
赛多利斯BS 124S型 电子分析天 平操作规程
使用前准备
1.称重工作台一定要保持平稳牢固可靠。 2.调整电子天平：在电子天平使用地点调整地脚螺 栓的高度，使水平仪内的空气泡正好位于圆环的 中央。右旋地脚，电子天平前面升高；左旋地脚， 电子天平前面下降。
3.插上电源并接通电源。电子天平在初次接通或者 长时间断电之后，至少需要30 分钟的预热时间， 只有这样，天平才能达到所需要的工作温度。 4.开机自检：按开/关键，电子称量系统自动实现自 检功能，当出现“0.0000”时，自检结束。 5.清零：按两个去皮键“Tare”中的一个，清除秤盘 上的物品，天平显示为“0.0000”。
三、实训内容及操作
食品中防腐剂测定方法的研究
食品中防腐剂测定方法的研究摘要：研究了紫外分光光度法测定食品中防腐剂(苯甲酸)的含量。
样品中苯甲酸的最小检出量为 0.0010mg/ml, 回收率为 98%。
该方法简便易行, 灵敏准确。
关键词：防腐剂;测定;紫外分光光度法食品防腐剂苯甲酸的测定 ,通常采用乙醚提取碱滴定法和水蒸气蒸馏紫外分光光度法测定,这两种方法测定程序复杂且周期长 ,回收率也较低。
本文作者在前人工作的基础上 ,采用了新的测定方法。
即乙醚萃取紫外分光光度法测定。
样品分析结果表明：该方法简便准确、快速可行。
1食品防腐剂对微生物或霉菌具有杀灭、抑制或阻止生长作用的食品添加剂为防腐剂。
我国准许使用的防腐剂GB2760-1986 有：苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、二氧化硫、焦亚硫酸钠及其钾盐、丙酸钙、丙酸钠、对羟基苯甲酸乙酯、丙酯、脱氢醋酸、双乙酸钠、葡萄糖-δ-内酯和乳酸链球菌素。
1996 年对GB2760-1986 作很大修订,把二氧化硫、焦亚硫酸钾及其钠盐列入漂白剂。
将葡萄糖-δ-内酯归到稳定和凝固剂中。
特别是把保鲜剂、过氧化氢、乙氧基喹、仲丁胺、桂醛、噻苯咪唑、苯基苯酚、苯基苯酚钠等统统归到防腐剂中。
这与日本相反。
1997 年以前日本把噻苯咪唑、联苯、苯基苯酚、苯基苯酚钠等列为防腐剂,1997 年单列项为防霉剂。
食品防腐剂 GB2760-1996共有 28个品种,1997 年新增丙酸、纳他霉素和液体二氧化碳(催化法)。
1998 年增补单辛酸甘油脂。
1999 年增加脱氢醋酸钠。
2002 年增加对羟基苯甲酸甲酯钠,对羟基苯甲酸乙酯钠和对羟基苯甲酸丙酯钠。
截止到2003 年共 36 个品种。
2试剂与仪器苯甲酸标准溶液：0.05mg/ml (准确称取 0.5000g 苯甲酸以 0 .01mol/L 的 NaOH 溶解并定容至1000ml, 使用时再以蒸馏水稀释 10 倍)。
756 型紫外可见分光光度计上海分析仪器厂3实验条件的选择取 0.05mg/ml 苯甲酸标准溶液 3ml 于 125ml 分液漏斗中 ,加入 20ml 饱和氯化钠溶液, 再加入一定量的1：1HCl 和 25ml 乙醚, 充分振荡后静置。
食品中苯甲酸的测定方法国标
食品中苯甲酸的测定方法国标
苯甲酸在食品中的测定方法，可以采用GB/T 5009.19-2003《食品中苯甲酸的测定》中的方法。
该方法主要是采用高效液相色谱法，将样品中的苯甲酸与标准品进行比较，以确定样品中苯甲酸的含量。
该方法的具体步骤如下：
1.样品准备：将食品样品经过研磨、筛选、稀释等处理，制备成适宜的测定浓度。
2.标准品准备：准备苯甲酸标准溶液，浓度为0.1mg/ml。
3.高效液相色谱仪：将样品和标准品分别加入高效液相色谱仪，进行检测，记录检测结果。
4.计算：根据检测结果，计算样品中苯甲酸的含量。
食品中苯甲酸山梨酸和糖精钠的测定-标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定1 范围本标准规定了食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的测定方法。
本标准第一法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定；第二法适用于酱油、水果汁、果酱中苯甲酸、山梨酸的测定。
第一法液相色谱法2原理样品经处理后，用液相色谱分离，紫外检测器检测，外标法定量。
3试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1氨水（NH3•H2O）。
3.1.2氢氧化钠（NaOH）。
3.1.3硫酸（H2SO4）。
3.1.4亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6•3H2O）。
3.1.5乙酸锌（Zn(CH3COO)2•2H2O）。
3.1.6氯化钠（NaCl）。
3.1.7酒石酸（C4H6O6）。
3.1.8硅酮树脂。
3.1.9磷酸二氢钠（NaH2PO4•12H2O）。
3.1.10磷酸二氢钾（KH2PO4）。
3.1.11中性氧化铝。
3.1.12甲醇（CH3OH）：色谱纯。
3.1.13乙酸铵（CH3COONH4）。
3.2 试剂配制3.2.1 氨水（1+1）：氨水与水等体积混合，经微孔滤膜过滤后备用。
3.2.2 氢氧化钠溶液（4 g/L）：称取4 g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000 mL。
3.2.3硫酸溶液（0.5 mol/L）：移取30 mL浓硫酸（约70%）边搅拌边慢慢加入至500 mL水中，冷却至室温后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。
3.2.4亚铁氰化钾溶液（92 g/L）：称取106 g亚铁氰化钾加水至1000 mL。
3.2.5 乙酸锌溶液（183 g/L）：称取220 g乙酸锌溶于少量水中，加入30 mL冰乙酸，加水稀释至1000 mL。
3.2.6 酒石酸溶液（15%）：称取15 g酒石酸，用水定容100 mL。
3.2.7的磷酸盐缓冲液（pH 7.2）：分别称取16.72 g磷酸二氢钠和2.72 g磷酸二氢钾，用水溶解后定容至1000 mL，经微孔滤膜过滤后备用。
紫外可见分光光度法测食品中苯甲酸含量
二、标准曲线的绘制： 取苯甲酸标准使用液 0、1、2、4、6ml 分别置于 100ml 容量瓶中，各加入 5%NaHCO3 溶液 2ml，(1+2v)盐酸溶液２ml，加水至刻度，摇匀。放置 15min,尽量让 CO２逸尽。 用 1cm 吸收池于波长 230nm 处测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标绘 制标准曲线。 取样品处理液 10ml 于容量瓶中加入(1+2v)盐酸溶液 2ml,摇荡以排除 CO２，加水至刻度、 摇匀、放置 15min，与标准系列一起进行比色测定，根据测得吸光度，在标准曲线上查出其 对应量，就可以计算出样品中苯甲酸（钠）的含量。
紫外可见分光光度法测食品中苯甲酸含量
实验目的
１、掌握紫外分光光度计的使用方法及正确操作方法； ２、了解不同食品中防腐剂测定的预处理方法及测定方法；
实验原理
为了防止食品在储存、运输过程中发生腐败、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐 剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生 标准允许使用的主要防腐剂之一。其使用量一般在 0.1%左右。苯甲酸具有芳香结构，在波 长 225nm 和 272nm 处有 K 吸收带和 B 吸收带。
三、计算与结果
1．记录数据
将标准溶液的质量浓度 ρ 和扣除 A0 的吸光度 A 数据填入表 1 中
表 1 苯甲酸标准溶液浓度及吸光度测定数据
Байду номын сангаас测定
0ml
1ml
2ml
4ml
6ml 酱油
食品添加剂苯甲酸的检测方法
高效液相色谱法是从 ２ ０世 纪 ６ Ｏ 年 代 兴 起 的 ，该 种 检 测 方 法 具 有 诸 多 的 优 势 ，其 存 在填 料均 匀、颗 粒 小等特 点 …， 其在 应 用 领域 的 应 用 范 围 最 广 ，
应 用价 值 也最 高。与 传统 的液 相色 谱 相 比，其具 有 灵敏 度强 、 回收容 易、 重 复 利 用 色 谱 柱 、 分 辨 性 强 等 多 种 优 点。依 照 国家标 准 与食 品 安全要 求 ， 在 检 测 山 梨 酸 、 苯 甲 酸 时 ， 主 要 以 利 用高 效液 相 色谱 法为 主 ，主 要适 用在 奶 制 品 食 品添 加 剂 苯 甲 酸 的 检 测 。 因 此 ，祝 伟 霞等 研究人 员 主要将 醋 酸锌 与 亚 铁 氰 化 钾 溶 液 设 定 为 重 要 的 沉 淀 剂 ，主要 对发 酵乳 、奶粉 与酸 奶 等实 施处 理 ，运 用 反相 色谱 法对 苯 甲酸 的 实际 含 量进 行全 面 的检测 。运 用此方 法 ，操 作 起来 也 比较 方便 、简 单 ，及 时将 奶酪 、饮 料与 黄油 等 实施粉 碎性 处理 ，并 和蒸 馏 水进 行混 合处 理 ，然 后使用 Ｎ ａ Ｏ Ｈ溶 液把 ｐ Ｈ值 设 定碱 性 ， 实 施 离 心 性 操 作 ，去 除 上 层 清 液 ， 实 施 反相 色谱 法开 展 测定操 作 ，以 实现 对检测精 准度 的控 制。运用此种方式 ， 可 借 助此 种方法 来测 定苯 甲酸 的线 性 检测 ０ ． ５ Ｏ～ １ ５ ． ０ ６ ｍ ｇ ／ Ｌ ，最低 的检 出
应将 毛细管设定为重要 的分离通道 ，将 高压支流 电场设定为驱 动力，石英管的 内径控 制在 ３ ０ ０ ０ ０～ １ Ｏ ０ ０ ０ ０ ｎ ｍ 。 应 用毛细 管 电泳法 时 ，其 存在 侧截 比 参 数较 大 、容积 较 小等 多种 优点 ，介 质可选 择凝 胶 或 自由性 溶液 ，溶液 介 质 条 件 下 可 衍 生 一 定 的平 面状 电流 场 。 实施 此种 检测方法 ， 具有检测成本低 、 高 效 、 快 速 等 多 种 优 点 ， 同 时还 能 提 升测定 的精准 度与 重现 性 ，可 实现 对 苯甲酸生产过 程中质量的检测与控制。
紫外分光光度法测定食品中苯甲酸含量
标准曲线的绘制： 标准曲线的绘制：
取苯甲酸标准使用液0、1、2、4、6ml分 取苯甲酸标准使用液0 6ml分
别置于100ml容量瓶中，各加入5%NaHCO 别置于100ml容量瓶中，各加入5%NaHCO3 100ml容量瓶中 溶液2ml (1+2v)盐酸溶液 ml， 2ml， 盐酸溶液２ 溶液2ml，(1+2v)盐酸溶液２ml，加水至 刻度，摇匀。放置15min,尽量让CO 逸尽。 15min,尽量让 刻度，摇匀。放置15min,尽量让CO２逸尽。 用1cm吸收池于波长230nm处测定其吸光 1cm吸收池于波长230nm处测定其吸光 吸收池于波长230nm 以吸光度为纵坐标， 度。以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐 标绘制标准曲线。 标品: 液体样品: 酱油、食醋、饮料取10ml于１２５ml分 酱油、食醋、饮料取10ml １２５ml 10ml于 ml分
流漏斗中，加入(1+2v)盐酸溶液２ml进 流漏斗中，加入(1+2v)盐酸溶液２ml进 (1+2v)盐酸溶液 行酸化，用无水乙醚萃取二次，每次３ 行酸化，用无水乙醚萃取二次，每次３ ml，每次振摇１min。 ０ml，每次振摇１min。 合并乙醚层于另一干净分流漏斗中，用 合并乙醚层于另一干净分流漏斗中， NaCL溶液洗涤二次 每次５ 溶液洗涤二次， ５％NaCL溶液洗涤二次，每次５～１０ ml。然后蒸馏瓶回收乙醚， ml。然后蒸馏瓶回收乙醚，用 溶液溶解，定容至１ 20ml5%NaHCO3溶液溶解，定容至１00ml 备用。 备用。
(GB2760—1996)规定： (GB2760 1996)规定： 1996)规定 苯甲酸及苯甲酸钠在碳酸饮料中的最大 使用量为0.2g kg； 0.2g／ 使用量为0.2g／kg； 低盐酱菜、酱菜、蜜饯、食醋、果酱(不 低盐酱菜、酱菜、蜜饯、食醋、果酱( 包括罐头) 最大使用量为0.5g kg(以 0.5g／ 包括罐头)、最大使用量为0.5g／kg(以 苯甲酸计)。 苯甲酸计)
食品中山梨酸、苯甲酸的测定
（1）苯甲酸
• 苯甲酸像脂肪酸一样，能在肠内很好被吸收，它首 先和辅酶A键结合活化而得到苯甲酰辅酶A，在N乙酰化甘氨酸和甘氨酸一起生成马尿酸（苯酰胺基 乙酸），并从尿中排出。也有少量的苯甲酸和葡萄 醛酸结合，并排出体外。ADI为0～5mg/kg(bw)(苯 甲酸及其盐的的总量，以苯甲酸计) （FAO/WHO,1994）。许多年来，大多数国家允许 苯甲酸和苯甲酸钠作为食品防腐剂。除个别外，最 大允许量在0.15％～0.25％之间。在美国，苯甲酸 和苯甲酸钠作为一般公认安全（GRAS）物质，在 英国，根据1979年的食品法规，允许苯甲酸和苯甲 酸钠在食品中使用。
（2）山梨酸
• 山梨酸结构式为 • 别名花楸酸，分子量为112.13，是具有特殊 气味的白色单斜结晶。熔点132～135℃， 室温时，在100g水中能溶解0.16g山梨酸 （20℃），在100g无水乙醇或100g冰乙酸 中能溶解13g山梨酸，在100g油中能溶解 0.5～1.0g山梨酸
（2）山梨酸
• 山梨酸的急性毒性，大鼠经口LD50为 10.5±1.96g/kg体重，山梨酸和其他防腐剂同时使 用时不改变其急性毒性。用含10％山梨酸的饲料喂 养大鼠42天，没有发现有害影响。用此剂量的山梨 酸喂养大鼠120天，引起体重增加及肝增重，但动 物的繁殖能力仍正常。用5%山梨酸的饲料喂养大鼠 和狗90天，未发现有害影响。重量增加可能是由于 山梨酸的热能的利用。其ADI为0～ 25mg/kg(bw)(FAO/WHO,1994)。 • FAO/WHO联合食品添加剂委员会将其列为A类，可 以安全使用的食品添加剂。FDA评定为GRAS，是 目前较为安全的防腐剂。
（1）苯甲酸
• 苯甲酸的急性毒性：大鼠LD501.7～3.7g/kg 体重。喂小鼠80mg/kg体重/日苯甲酸，出 现死亡率增加、特别是同时喂以亚硫酸盐45天内，3％苯甲酸组出现中枢神经系统紊 乱、声音振挛性震动，5天后就有一半实验 动物死亡，脑组织出现坏死性变化，其他 组织没有什么影响。1.1％苯甲酸组仅出现 体重减轻，但没有损害。1％的耐受量对生 长，食物利用率、寿命、繁殖、6个脏器的 组织学没有有害的影响
苯甲酸和山梨酸的测定
食品中苯甲酸和山梨酸的检测摘要：近年来食品安全卫生已成为社会、政府关注的焦点之一。
食品安全已越来越引起广大消费者的密切关注和担忧。
目前我国每年食物中毒报告例数约2万人，但据专家估计实际数量要比这个数字大10倍左右。
食品安全问题不仅涉及广大消费者的健康，还涉及相关企业的经济效益和市场空间，关系到整个食品行业的发展。
苯甲酸可与人体内的氨基乙酸结合生成马尿酸而随尿液排出体外。
如过量摄入苯甲酸和苯甲酸钠，将会影响肝脏酶对脂肪酸的作用，其次苯甲酸钠中过量的钠对人体血压、心脏、肾功能也会产生影响。
特别是对心脏、肝、肾功能弱的人群而言，苯甲酸和苯甲酸钠的摄食是不适合的嘲。
另外还会出现代谢性酸中毒、惊厥和气喘等病症。
在体外测定中还可以测到一些弱断裂剂的放射性。
苯甲酸及其钠盐因为有叠加中毒现象的报道，在使用上有争议，虽仍为各国允许使用，但应用范围愈来愈窄。
日本的进口食品中就限制使用，甚至部分禁止使用，日本已停止生产。
但因价值低廉，在中国仍作为主要防腐剂使用。
山梨酸具有较低的毒性，是迄今为止国际公认的最好的防腐剂，已经成为了西方发达国家的主流防腐剂。
但事实上，现在已经报道了许多案例(荨麻疹和假过敏)说明人体中对过多的山梨酸所带来的危害。
由于山梨酸和苯甲酸在食品中的广泛使用,所以在此讨论苯甲酸和山梨酸的检测以技术及以及各种检测技术的利弊。
1防腐剂的检测在食品工业中，作为防腐剂，不能影响人体正常的生理功能，一般说来，在正常规定的使用范围内使用食品防腐剂对人体没有毒害或毒性极小。
因此，食品防腐剂的定性与定量的检测在食品安全性方面是非常重要的。
目前，测定防腐剂的方法主要有：薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相气谱法等1.1苯甲酸和山梨酸各种检测方法1.1.1高效薄层色谱法和高效液相色谱法M．Thomassin等人曾经采用高效薄层色谱法和高效液相色谱法对尼泊金酯类作过检测，实验发现高效薄层色谱法的相对标准偏差要大于高效液相色谱法，但是高效薄层色谱法对于尼泊金酯类的定量就更为快速。
测定食品中的苯甲酸
• 固体样品：称100g样于500ml容量瓶中→加 200ml水→加AR NaCl直到不溶解为止（降低 苯甲酸在水中溶解度，以减少在提取及水 洗过程中的损失）→用10%NaOH调为碱性 （这时苯甲酸生成苯甲酸钠，并以苯甲酸 钠状态存在）→用饱和NaCl定容500ml→静 置2小时→过滤→弃去初液→收集滤液 • 含酒精的样品：吸取250mL样品用 10%NaOH调为碱性→水浴蒸发至100mL→用 饱和NaCl定容250ml →过滤→弃去初液→收 集滤液
试剂
• 无水乙醚 (回收后可重复使用) • 苯甲酸标液(1mg/ml) • 5%NaHCO3溶液; • 5%NaCL溶液; • (1+2v)盐酸溶液 • 10%NaOH溶液
• 固体或半固体样品：如果酱、腌菜、 罐头、果冻等，将样品捣碎，称取 10g左右，用10%NaOH溶液调节到 碱性，定容至100ml,放置30min， 过滤，取10ml滤液于125ml分液漏 斗中，加入(1+2v)盐酸溶液酸化， 然后用乙醚进行萃取，其余过程与 液体样品处理相同。
测定方法
• • • • • 气象色谱法 高效液相色谱法 酸碱滴定法 紫外可见分光光度法 薄层色谱法
紫外可见分光光度法
• 实验原理：
• 苯甲酸及苯甲酸钠在近紫外光区具有较强 的吸收。通过实验证实，苯甲酸在230nm处 具有最大吸收。 • 另一方面，它在水中具有适当的溶解度， 所以，可将标样和样品处理成水溶液，采 用紫外分光光度计，通过标准曲线法而实 现酸性食品中苯甲酸（钠）含量的测定。
4.3 0.2283
4.6 0.2227
NaoH浓度 mol/L
NaoH浓度平均值mol/L 0.2236
样品的滴定
1
样品的量（ml) 25 耗NaOH的量 （ml) 0.2
食品中苯甲酸的测定
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法2.1原理不同样品经提取后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定，根据保留时间定性，外标峰面积定量。
2.2试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682要求。
2.2.1 甲醇：色谱纯。
2.2.2 乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000mL，经微孔滤膜过滤。
2.2.3 亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]加水至1000mL。
2.2.4 乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]溶于少量水中，加入30mL冰醋酸，加水稀释至1000mL。
2.2.5 氨水（1+1）：氨水与水等体积混合。
2.2.6 正己烷。
2.2.7 pH4.4乙酸盐缓冲溶液：a）乙酸钠溶液：称取6.80g乙酸钠（CH3COONa·3H2O）,用水溶解后定容至1000mL。
b）乙酸溶液：称取4.3mL冰乙酸，用水稀释至1000mL。
将上述两种溶液按体积比37:63混合，即得pH4.4乙酸盐缓冲溶液。
2.2.8 pH7.2磷酸盐缓冲溶液：a）称取23.88g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）,用水溶解后定容至1000mL。
b）称取9.07g磷酸二氢钾（KH2PO4），用水溶解后定容至1000mL。
将上述两种磷酸盐溶液按体积比7:3混合，即得pH7.2磷酸盐缓冲液。
2.2.9 标准溶液的配制：a）苯甲酸标准储备液：准确称取0.2360g苯甲酸钠，加水溶解并定容至200mL。
此溶液每毫升相当于含苯甲酸1.00mg。
b）山梨酸标准储备液：准确称取0.2680g山梨酸钾，加水溶解并定容至200mL。
此溶液每毫升相当于含山梨酸1.00mg。
c）糖精钠标准储备液：准确称取0.1702g糖精钠（C6H4CONNaSO2）(120℃烘干4h)，加水溶解并定容至200mL。
高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸的含量
高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸的含量摘要：本文采用高效液相色谱法测定酱油中防腐剂苯甲酸的含量。
根据苯甲酸的性质选择分离分离色谱柱为 C18(4.6mm×250mm,粒径5μm)柱，流动相为乙酸铵-甲醇（91：9），流速1mL/min，柱温30℃。
当波长为230 nm时测得苯甲酸标准溶液的浓度与峰面积的线性关系良好，线性回归方程为y=3063.46746x＋0.4971，r2 = 0.9998。
一般实验要求加标回收率为90％-110％，苯甲酸检出限量为1g/kg。
实验测得加标回收率为96％-98％，三个样品的苯甲酸含量分别为0.39g/kg、0.50g/kg、0.81g/kg，均符合食品安全国家标准。
本实验方法简单快捷，准确度，灵敏度也均达到国家相关分析要求，适用于测定酱油中苯甲酸的测定。
关键词：高效液相色谱；酱油；防腐剂；苯甲酸为了减少防腐剂对人类带来的负面影响，对防腐剂进行一定的分析研究是很有必要的。
针对同一防腐剂的检测，不同的检测技术其特异性和快速性等也各有不同。
国家食品检测标准GB/T5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》介绍了三种检测苯甲酸的方法，分别是气相色谱法、高效液相色谱法和薄层色谱法。
此外据网上报道，可用于检测酱油中苯甲酸含量的方法还有紫外分光光度法、毛细管电泳法等。
因高效液相色谱法精确度高、简单、快速，是现阶段测定苯甲酸含量的首选。
现重点介绍高效液相色谱法测定酱油中的苯甲酸。
实验主要试剂及设备：甲醇（GR）；乙酸铵（GR）；苯甲酸钠标准品（GR）；乙酸锌（AR）；亚铁氰化钾（AR）；氨水（≥99.0％）。
高效液相色谱仪（LC-20ADRF）；电子分析天平（BSM--120.4）；超声波清洗仪（SG5200HDT）；高速离心机（TGL-16G-A）。
色谱条件：以C18柱（4.6mm×250mm,粒径5μm）为色谱柱；以A相1.54mg/mL乙酸铵溶液+B相甲醇溶液（91:9）为流动相；柱温：30℃；进样量：10μL；流速：1.0 mL/min；检测波长为230nm；检测器为紫外吸收检测器。
食品添加剂中苯甲酸的检测
食品添加剂中苯甲酸的检测班级：姓名：学号：摘要：近年来，食品安全已成为全社会共同关注热点。
苯甲酸作为食品添加剂，在食品加工中起着重要的作用。
但若过量添加,不仅能破坏维生素B1,还能使钙形成。
我国GB2760–1996《食品添加剂使用卫生标准》规定其使用限量应＜0.1g/kg，许多因素都会导致其含量超标，控制苯甲酸的含量，实现对食品中外源性添加物质的有效检测,急需发展食品添加剂和非法添加物的高通量筛查技术及确证检测技术已经成为目前亟待解决的关键问题之一。
其次，综述高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相色谱法、紫外分光光度法及薄层层析法等检测方法基本原理及其近几年在苯甲酸检测技术方面研究进展，最后展望这些检测方法在苯甲酸检测方面发展前景。
关键词：苯甲酸高效液相色谱法毛细管电泳法气相色谱法紫外分光光度法薄层层析法一、分析食品添加剂中苯甲酸的危害1、苯甲酸的性质苯甲酸为无色、无味片状晶体。
熔点 122.13℃，沸点249℃，相对密度1.2659（15／4℃）。
微溶于水，溶于乙醇、乙醚、氯仿、苯、二硫化碳、四氯化碳。
在100℃时迅速升华，它的蒸汽有很强的刺激性，吸入后易引起咳嗽。
微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。
苯甲酸是弱酸，比脂肪酸强。
它们的化学性质相似，都能形成盐、酯、酰卤、酰胺、酸酐等，都不易被氧化。
苯甲酸的苯环上可发生亲电取代反应，主要得到间位取代产物。
最初苯甲酸是由安息香胶干馏或碱水水解制得，也可由马尿酸水解制得。
工业上苯甲酸是在钴、锰等催化剂存在下用空气氧化甲苯制得；或由邻苯二甲酸酐水解脱羧制得。
苯甲酸及其钠盐可用作乳胶、牙膏、果酱或其他食品的抑菌剂，也可作染色和印色的媒染剂。
2.苯甲酸对人体的危害对皮肤有轻度刺激性。
蒸气对上呼吸道、眼和皮肤产生刺激。
苯甲酸进入机体后，大部分在9~15小时内与甘氨酸化合成马尿酸而从尿中排出，剩余部分与葡萄糖醛酸结合而解毒。
但由于苯甲酸钠有一定的毒性，目前已逐步被山梨酸钠替代。
探究调味品中防腐剂苯甲酸的检测方法
探究调味品中防腐剂苯甲酸的检测方法苯甲酸及苯甲酸钠作为一种防腐剂被广泛应用在食品保质中，很多种类的食品允许添加一定量的防腐剂；在很多食品中可以添加的剂量限定有很大差别，防腐剂在食品里的最大含量范围大概为0.2～2.0g/kg。
食品卫生标准在食品防腐剂使用范围以及剂量方面有着明文规定，在国家标准规定的总量以及限制中添加食用防腐剂的的食品是可以保证安全的，但长时间过度食用含添加剂食品，很可能会影响身体健康。
食品中苯甲酸可以通过很多方法检测出来，主要有气相色谱法、高效液相色谱法（HPLC）、薄层层析法、导数光谱法、超高效液相色谱法（UPLC）、分光光度法、毛细管胶束电动色谱法（MECC）、高效薄层层析法（HPTLC）、镧系元素感光法以及电势法等，国家标准采用气相色谱法、液相色谱法和薄层层析法3种。
标签：调味品；苯甲酸；防腐剂的检测1前言：酱油是我国富有特色的、使用最广的、传统的、味道极佳的一种调味品，它给予食品应有的色、香、味，还有杀菌治病、调味的作用。
由于酱油富有营养，有利于微生物繁殖发育，而且微生物还是无处不在、无孔不入的，因此细菌、霉菌以及酵母之类微生物的入侵一般是使得酱油编制的重要原因。
为了储存酱油，以防它变质腐坏，保持酱油原有的味道以及上佳的质量，达到酱油对保质期的需求，酱油中大都会添加食品里常见的一种防腐剂-苯甲酸。
苯甲酸别名安息香酸，是有丝光白色的鳞片或针状结晶，可以在温暖空气中释放，酸性环境下能够随水蒸气蒸馏。
苯甲酸的化学本质稳定，遇水微溶，遇乙醇、丙酮、氯仿、乙醚等有机溶剂也会有微溶现象发生。
苯甲酸钠为晶体粉末或者白色颗粒，无味或稍微带点安息香气味，在空气中稳定，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂。
为了抵御微生物对食品的损害，在一定条件里添加防腐剂当作一种保鲜的辅助方法，对预防一些易变质腐败的食品明显的作用。
防腐剂使用方便、廉价，市场对防腐剂的依赖性也在不断加深。
2分析调味品中防腐剂苯甲酸的检测方法防腐剂作为食品加工生产里一种食品存放的辅助方法而被大众熟知并且运用在日常生活中，这当中苯甲酸由于售价不高因此广泛运用在调味品的加工制作里，可这种化学剂有着毒性叠加的概率，在发达国家近几年逐渐被山梨酸所代替。
果脯中苯甲酸含量的测定
果脯中苯甲酸含量的测定苯甲酸又名安息香酸，微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。
化学性质较稳定。
苯甲酸钠易溶于水，难溶于有机溶剂，在酸性条件下（pH2.5~4）能转化为苯甲酸。
在酸性条件下苯甲酸及苯甲酸钠防腐效果较好，适宜用于偏酸的食品（pH 4.5~5）。
食品中普遍认为苯甲酸钠是安全的防腐剂，成人日允许摄入量(ADI) 为0－5 mg/kg。
但此类防腐剂的过量加人，会对人体产生危害。
因此,监测它在食品中的使用量对于保障人们身体健康具有重要的现实意义。
食品中苯甲酸的测定方法除了国标GB/T 5009.29-2003中规定的较为成熟的气相色谱法、高效液相色谱法、薄层色谱法以外，目前报道的还有紫外可见分光光度法、离子色谱法、电位滴定法、示波极谱法、荧光光谱法等方法，经过合适的处理，上述方法均可以较为准确的测定食品中的苯甲酸的含量，下面就几种常见的方法进行介绍。
1、气相色谱法原理：果脯等食品中的苯甲酸、山梨酸等有机物经过乙醚提取以后，根据不同组分沸点、极性、吸附特性的差异可以利用气相色谱仪进行很好的分离并定量检测。
试剂及仪器：乙醚（不含过氧化物），石油醚，盐酸，无水硫酸钠，氯化钠酸性溶液(40g/L氯化钠+少量1:1盐酸酸化)，苯甲酸；带氢火焰离子化检测器的气相色谱仪。
实验方法：1、苯甲酸标准溶液的配制准确称取苯甲酸0.2000g，置于100ml容量瓶中，用3:1的石油醚-乙醚混合溶剂进行溶解并稀释至刻度。
2、根据果脯中苯甲酸的大致含量配制苯甲酸的标准溶液。
3、试样的提取称取2.5g果脯，粉碎后置于25ml带塞量筒中，加入盐酸酸化，使pH到2.5-4。
用15ml、10ml乙醚提取两次，每次震荡1min，将上层乙醚提取液吸入另一个25ml带塞量筒中，合并乙醚提取液。
用3ml氯化钠酸性溶液洗涤两次，静置15min，用滴管将乙醚层通过无水碳酸钠滤入25ml容量瓶中，加乙醚至刻度，混匀。
准确吸取5ml乙醚提取液于5ml带塞刻度试管中，置于40℃水浴烘干，加入2ml石油醚-乙醚混合溶剂溶解残渣，备用。
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注意：密封、过滤
对流动相溶剂的一般要求
➢ 对样品有一定的溶解度，以防在柱头产生沉淀。 ➢ 适用于所选择的检测器。 ➢ 化学惰性好，以免破坏固定相。 ➢ 低粘度，增加样品的扩散系数，提高柱效。 ➢ 纯度高。溶剂不纯会增加检测器噪声，产生伪峰。 注意: 1.所有溶剂在放入贮液罐之前必须经过0.45μm滤膜过
（4）梯度洗脱装置
➢ 梯度洗脱：通过改变流动相的组成来调整组分的k值，改 变分离因子α值，以达到最短时间内得到最佳分离的目的。
➢ 梯度洗脱的特点：改善分离, 加快分析速度；改善峰形, 减 少拖尾;可能引起基线漂移
➢ 类型：高压梯度与低压梯度
2.进样系统
➢ 进样器是将样品溶液准确送入色谱柱的装置，要求密封性 好，死体积小，重复性好，进样引起色谱分离系统的压力 和流量波动要很小。
（2） HPLC检测器的要求
➢ 具有高灵敏度和可预测的响应； ➢ 对样品所有组分都有响应，或具有可预测的特异 性，适用范围广； ➢ 温度和流动相流速的变化对响应没有影响； ➢ 响应与流动相的组成无关，可作梯度洗脱； ➢ 死体积小，不造成柱外谱带扩展； ➢ 使用方便、可靠、耐用，易清洗和检修； ➢ 响应值随样品组分量的增加而线性增加，线性范围宽； ➢ 不破坏样品组分； ➢ 能对被检测的峰提供定性和定量信息； ➢ 响应时间足够快。
常用的进样器有以下二种：六通阀进样器和自动进样器
3.分离系统
分离系统的主要部件是色谱柱。 一般要求：柱效高、选择性好、分析速度快是
对色谱柱的。色谱柱管为内部抛光的不锈钢 柱管或塑料柱管，
色谱柱的种类
➢ HPLC微粒填料：硅胶，以及以硅胶为基质的键合相、氧 化铝、有机聚合物微球
➢ 填料粒度：3μm、5μm、7μm、10μm等 ➢ 柱效的理论值：5000~16000块理论塔板数 ➢ 柱长：100~300mm ➢ 柱内径：4.6 mm或3.9 mm常用
滤，除去溶剂中的机械杂质，以防输液管道或进样阀产生 阻塞现象。
2. 所有溶剂在使用前必须脱气
（2）高压输液泵
• 高压输液泵是高效液相色谱仪的关键部件，其作用是将流 动相以稳定的流速或压力输送到色谱分离系统。对于带有 在线脱气装置的色谱仪，流动相先经过脱气装置后再输送 到色谱柱。
要求：由于高压输液泵的性能直接影响到分离分析结果的好坏，因此，实际 分析过程中为了保证良好的分离分析结果，要求高压输液泵必须满足以下几 点要求：
二、高效液相色谱的主要类型
（一）液固吸附色谱法（LSC） 流动相为液体，固定相为固体吸附剂
1.分离原理：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心 能力的差异
2.固定相：与LC比，固定相粒径不同（＜10μm） 硅胶 表孔硅胶（薄壳硅胶）
全多孔硅胶 无定形 YWG 5～ 6μm 5×104 球形 YQG 3～4μm 8×108
分离过程
高压输液泵将贮液器中的流动相以稳定的流速（或压 力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导 入，流动相将样品依次带入预柱、色谱柱，在色谱柱中各 组分被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号 送至工作站记录、处理和保存。
1.高压输液系统
➢ 贮液器 用途: 来提供足够数量的符合要求的流动相以完成分析工作。 要求：1、必须有足够的容积，以备重复分析时保证供液； 2、脱气方便； 3、能耐一定的压力；第四、所选用的材质对所使用的溶剂都是惰性的。 4. 贮液器一般是以不锈钢、玻璃、聚四氟乙稀或特种塑料聚醚醚酮
保护柱：
一般在色谱柱前要求安装保护柱，即在 分析柱的入口端、装有与分析柱相同固定相 的短柱（5～30mm长），可以经常而且方便 地更换，因此，起到保护延长分析柱寿命的 作用
色谱柱恒温系统：
➢ 由于分析的需要，色谱柱有时需要有一定的温度，提高柱 温有利于降低溶剂粘度和提高样品溶解度，改变分离度， 也是保留值重复稳定的必要条件，特别是对需要高精度测 定保留体积的样品分析而言尤为重要。
极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱，适于分离极性组分 4. 反相色谱——固定液极性 < 流动相极性（RLLC）
极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱， 适于分离非极性组分
（三）.键合相色谱法
➢ 常规化学键合相： 利用化学反应将固定液的官能团键合 在载体表面 ① 分离原理：分配 + 吸附（以LLC为基础） ②．特 点：不易流失，热稳定性好，化学性能好，载样量大，适 于梯度洗脱
底剂 + 有机调节剂（极性调节剂） 例：水 + 甲醇，乙腈，THF ④ 流动相极性与k的关系：
流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑ ⑤ 出柱顺序：极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱
➢ 正相键合相色谱 ① 分离原理：溶质分子与固定相之间定向作用力、诱导力、或氢键 作用力 ② 固定相：极性大的氰基或氨基键合相 ③ 流动相：极性小（同LSC） 底剂 + 有机极性调节剂
例：正己烷 + 氯仿-甲醇，氯仿-乙醇 ④ 流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓ ⑤ 出柱顺序：结构相近组分，极性小的组分先出柱，极性大的组分后 出柱 ⑥ 适用：分析极性大物质、糖类等
（四）. 凝胶色谱法(SEC)
① 分离原理：凝胶色谱又称为体积排阻色谱(SEC)，是按溶 质分子大小进行分离的一种色谱法。
➢ 配制酒类：称取10.0g试样，放入小烧杯，水浴加热除去乙醇，用氨水 （1+1）调pH约7.加水定容至适当体积，经滤膜过滤（0.45μm）。
5. 结果的表示和计算：
试样中苯甲酸含量（g/Kg）,按下式计算
X A1000 mV 21000 V1
式中 X ------试样中苯甲酸的含量（g/Kg） A-------进样体积中苯甲酸的质量（g） V2 -------进样体积，（ml） V1 -------试样稀释总体积，（ml） m-------试样质量，（g）
1、泵体材料能耐化学腐蚀； 2、能在高压（30～60MPa）下连续工作； 3、输出流量稳定（±1%），无脉冲，重复性高（±0.5%），而且输出流量范
围宽； 4、适用于梯度洗脱。
类型：恒压泵和恒流泵两大类
（3）过滤器
在高压输液泵的进口和它的出口与进样阀之间，应设 置过滤器。过滤器的滤芯是用不锈钢烧结构材料制造的， 孔径为2～3µm，耐有机溶剂的侵蚀。若发现过滤器堵塞 （发生流量减小的现象），可将其浸入稀HNO3溶液中， 在超声波清洗器中用超声波振荡10～15min，即可将堵塞 的固体杂质洗出。若清洗后仍不能达到要求，则应更换滤 芯。
➢ 高效液相色谱仪中常用的色谱柱恒温装置有水浴式、电加 热式和恒温箱式三种。实际恒温过程中要求最高温度不超 过60℃，否则流动相气化会使分析工作无法进行。
4. 检测系统
作用：连续监测被色谱系统分离后的柱流出物组 成和含量变化的装置。其作用是将柱流出物中样 品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，完 成定性定量分析的任务。
➢ 反相键合相固定相 ① 分离原理：疏溶剂理论
正相——流动相与溶质排斥力强，作用时间↑ ， k↑，组 分tR↑
反相——流动相与溶质排斥力弱，作用时间↓， k↓，组 分tR↓
② 固定相：极性小的烷基键合相 C8柱，C18柱（ODS柱——HPLC约80%问题）
③ 流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水 流动相极性 > 固定相极性
➢ 苯甲酸标准使用溶液：取储备液10.0ml,放入100ml容量瓶 加水稀释至刻度，摇匀。经0.45微米滤膜过滤。
3.仪器及条件
➢ 高效液相色谱仪；紫外检测器(FID)； ➢ 色谱柱;YWG-C18 4.6㎜×250mm； 10μm不锈钢柱 ➢ 流动相：甲醇：乙酸铵溶液（0.02mol/L）(5:95) ➢ 流速：1ml/min ➢ 进样量：10μL ➢ 检测器：紫外检测器，230nm,0.2AUFS 注：根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
只能分析挥发性物质，只能分析 20%的化合物 不能用于热不稳定物质的分析 用毛细管色谱可得到很高的柱效 有很灵敏的检测器如 ECD 和较灵敏的通用检测器 （FID 和 TCD） 流动相为气体，无毒，易于处理 运行和操作容易 仪器制造难度较小
几乎可以分析各种物质 可以用于热不稳定物质的分析 色谱柱不能很长，柱效不会很高 没有较高灵敏的通用检测器① 流动相有毒，费用较高 运行和操作比 GC 难一些 仪器制造难度大
5. 出柱顺序：强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱
（二）.液液分配色谱法（LLC）
1.分离原理：利用组分在两相中溶解度的差异 2.固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法）
缺点：系统内部压力大，易流失，不实用 固定液——极性→NLLC 固定液——非极性→RLLC 3.正相色谱——固定液极性 > 流动相极性（NLLC）
➢ 液相色谱法的基本原理 ➢ 液相色谱仪基本构造及使用方法； ➢ 液相色谱法的定性分析及定量分析方法
学习情境
： 1.试验原理 将试样加温除去二氧化碳和乙醇，调pH
至近中性，过滤后进入高效液相色谱仪，经反相色谱分离 后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。
2. 试剂
➢ 甲醇：经滤膜过滤（0.5微米） ➢ 稀氨水（1+1）：两者等体积混合 ➢ 乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g的乙酸铵，加水至1000ml.溶
解，经0.45微米滤膜过滤。 ➢ 碳酸氢钠溶液（20g/L）:称取 2g碳酸氢钠（优级纯），加水至100ml
摇匀 ➢ 注：方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水，
溶液为水溶液。
➢ 苯甲酸标准储备液：准确称取0.1000g苯甲酸，钾碳酸氢 钠溶液（20g/L）5ml,加热溶解，移入100ml容量瓶中，加 水定容，苯甲酸含量为1mg/mL
堆积硅珠 YQG 3～4 μm 8×108 理想 原理：吸附 特点：峰易拖尾 高分子多孔小球：YSG 特点：柱选择性好，峰形好，柱效低