高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸的含量
食品中防腐剂-------苯甲酸含量的测定
4. 检测系统
? 作用：连续监测被色谱系统分离后的柱流出物组 成和含量变化的装置。其作用是将柱流出物中样 品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，完 成定性定量分析的任务。
（二）.液液分配色谱法（ LLC）
1.分离原理：利用组分在两相中溶解度的差异 2.固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法）
缺点：系统内部压力大，易流失，不实用 固定液——极性→NLLC 固定液——非极性→RLLC 3.正相色谱——固定液极性 > 流动相极性（NLLC）
极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱，适于分离极性组分 4. 反相色谱——固定液极性 < 流动相极性（RLLC）
正相——流动相与溶质排斥力强，作用时间↑ ， k↑，组 分tR↑
反相——流动相与溶质排斥力弱，作用时间↓， k↓，组 分tR↓
② 固定相：极性小的烷基键合相 C8柱，C18柱（ODS柱——HPLC约80%问题）
③ 流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水 流动相极性 > 固定相极性
底剂 + 有机调节剂（极性调节剂） 例：水 + 甲醇，乙腈，THF ④ 流动相极性与k的关系：
（4）梯度洗脱装置
? 梯度洗脱：通过改变流动相的组成来调整组分的k值，改 变分离因子α值，以达到最短时间内得到最佳分离的目的。
? 梯度洗脱的特点：改善分离, 加快分析速度；改善峰形, 减 少拖尾;可能引起基线漂移
? 类型：高压梯度与低压梯度
2.进样系统
? 进样器是将样品溶液准确送入色谱柱的装置，要求密封性 好，死体积小，重复性好，进样引起色谱分离系统的压力 和流量波动要很小。
高效液相色谱仪的定性、定量分析(未知样品中苯甲酸含量的测定)
一. 实验目的：
1. 学习高效液相色谱法的测定原理； 2.掌握高效液相色谱仪（HP1100）的定性、定量 分析方法。
二。实验原理： 高效液相色谱法是重要的色谱方法，是在经典液相色谱法 和气相色谱的基础上发展起来的，（经典液相色谱法使用粗粒 多孔固定相，装填在大口径、长玻璃管柱内，流动相仅靠重力 流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度极其缓慢，柱入 口压力低，仅有低的柱效，分析时间长；气相色谱原理类似， 流动相为气体，只能分离小分子量、低沸点的有机化合物，配 合程序升温可分析高沸点的有机化合物。）弥补了经典液相色 谱法和气相色谱的缺点。它使用了多孔微粒固定相，装填在小 口径短的不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高压的色谱 柱，溶质在其中的传质、扩散速度大大加快，从而在短时间内 获得高的分离能力。可分析低分子量、低沸点的有机化合物， 更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化 合物。
三．仪器和试剂： 1． 高效液相色谱仪，VWD（254nm）检测仪。 2．色谱柱：C18 3．超声波发生器或水泵(用于过滤或排气) 4．注射器：50微升 5．容量瓶：100ml若干 6．移液管：2ml、4ml、8ml 7．流动相：甲醇：乙酸+乙酸氨（PH=3.5）=60：40， 制备前，先调节水(用酸或缓冲盐)的PH=3.5，进入系统 色谱前，用超声波发生器或水泵脱气。
四．实验步骤：（ESTD法） 1． 标准储备液的配置：准确量取0.144克苯甲酸钠试剂 ， 用 纯 水 或 去 离 子 水 溶 解 ， 定 容 到 100 毫 升 ， 浓 度 为 1.44mg/ml. 分别取此标准液5 ml，2.5 ml，1 ml, 0.5 ml稀 释为10 ml，则浓度分别为0.72 mg/ml，0.36 mg/ml，0.144 mg/ml，0.072 mg/ml。 2． 打开计算机，开仪器，稳定后，打开桌面的ONLINE 工作站。 设定方法：设置泵的流速为1ml/min，柱温为室温（ 40度左右），停止时间为4min，流动相比例（甲醇：水 =60；40），当流动相通过色谱柱约5-10min，记录仪上基 线稳定后，开始进样。 3． 进样：进样阀放在装载的位置上，用注射器取25微升 浓度最低的标准样（比进样阀上的定量环多5-10微升以上 ），注入进样阀中。
优化气相色谱法测定酱油中对羟基苯甲酸酯类含量的方法
中国食品添加剂
China Food Additives
优化气相色谱法测定酱油中 广东省测试分析研究所（中国广州分析测试中心），广州 510000； 2. 吉姆斯（广州）实验技术有限公司，广州 510000）
摘 要 ：目的 ：优化气相色谱法测定酱油中对羟基苯甲酸酯类含量的分析方法。试样先后经饱和氯化钠溶 液洗涤，盐酸酸化，无水乙醚提取，碳酸氢钠溶液洗涤后浓缩近干，无水乙醇溶解的条件下以外标法定量，通过 5 种不同极性的色谱柱与柱温箱温度的系列变化进行测试，最终确定最佳分离柱为 Inert Cap 1301，柱温箱的初始 温度为 90℃。结果 ：对羟基苯甲酸酯类的加标回收率在 91% ～ 103% 之间，相对标准偏差在 0.6% ～ 0.8% 之间， 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯与对羟基苯甲酸丁酯的方法检出限分别为 0.528mg/kg、 0.497mg/kg、0.473mg/kg 与 0.440mg/kg。结论 ：优化仪器分析方法后，测定酱油中对羟基苯甲酸酯类含量的灵敏 度明显提高，分析时间明显缩短，加标回收良好，这有利于提高检测分析效率，减小分析时间成本。
SONG Si-yuan，HUANG Jin-bo
（1. Guangdong Institute of Analysis(China National Analytical Center)，Guangzhou 510000； 2. James (Guangzhou) Experimental Technology Co.，Ltd.，Guangzhou 510000）
收稿日期：2019-04-14 作者简介：宋思园（1992-），女，本科，主要从事食品、保健品、化妆品、药物标准研究和检测方法证实与优化。 *通讯作者：黄锦波，E-mail：550846284@。
高效液相色谱测定食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠方法验证
中图分类号：TS207
XIANDAISHIPIN 现代食品 /137
分析检测 Analysis and Testing
1 实验材料
单位为 g。
1.1 试剂与仪器设备
3 结与结论
苯甲酸标准物质 [1.0 mg·mL-1，编号：GBW(E)100006， 中国计量科学研究院 ]、山梨酸标准物质 [1.0 mg·mL-1， 编号：GBW(E)100007，中国计量科学研究院 ]、糖精 钠标准物质 [1.0 mg·mL-1，编号：GBW(E)100008，中 国计量科学研究院 ]，电子天平、高速冷冻离心机、岛
1.2 仪器条件
3.2 检出限
色谱柱：Venusil C18 Plus 4.6 mm×250 mm，5 μm； 流动相：甲醇 + 乙酸铵溶液 =10+90，pH 为 8.5；流速： 1 mL·min-1；检测波长：230 nm；进样量：10 μL；柱 温：30 ℃。
苯甲酸在 0.25 mg·L-1 时，信噪比大于 3 ∶ 1，检出 限为 0.006 g·kg-1；山梨酸在 0.20 mg·L-1 时，信噪比大 于 3 ∶ 1，检出限为 0.005 g·kg-1；糖精钠在 0.50 mg·L-1 时，信噪比大于 3 ∶ 1，检出限为 0.012 5 g·kg-1。
关键词：山梨酸；苯甲酸；糖精钠；高效液相色谱
Abstract：With the rapid development of modern food industry, benzoic acid, sorbic acid and sodium saccharin are widely used in food. At the same time, excessive use of additives also brings harm to people’s food safety. Therefore, the detection method of additives is very important. Refer to GB 5009.28-2016 national food standards, sorbic acid, benzoic acid and sodium saccharin are widely used in food, the principle of saccharin sodium determination is to use high performance liquid chromatography to determine benzoic acid, sorbic acid and saccharin sodium in food. Through validation of the detection method, the repeatability, detection limit and recovery rate of the method are determined. Under the condition, all the three components were separated completely with a good linear relationship. The standard recovery rate was in the range of 89.4% ～ 102.7%, and the relative standard deviation was 0.02% ～ 0.10%. The adaptability of the laboratory environment and equipment to this method is better determined, which greatly reduces the personnel capacity. The inaccuracy caused by force, environment, equipment and other reasons.
食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量的测定
食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量的测定专业：食品科学与工程教育姓名：蒋翠莲学号：20105494 指导老师：白绮摘要:[目的]用高效液相色谱法测酱油和食醋中山梨酸钾和苯甲酸钠的含量。
【方法】采用RP-HPLC法以C-18不锈钢柱（150mm）为色谱柱；流动相：甲醇：乙酸铵溶液（0.02mol/L）=5:95；柱温30℃；流速1.0mol/min ；检测波长230nm；进样量(标准进样量：2.5 ，5 ，7.5 ，10 ，15 ,20ul；样品进样量:5 ul)。
【结果】酱油中的山梨酸钾含浓度为0.069mg/ml；苯甲酸钠为0.0146mg/ml；醋中的山梨酸钾为0.00141mg/ml苯甲酸钠为0.00155mg/ml。
结论：高效液相色谱法具有高速、高效、高灵敏度的优点 所以数据准确 用外标法计算结果操作简单 计算方便 得出样品中苯甲酸钠的含量。
关键词：高效液相色谱法苯甲酸钠山梨酸钾前言：苯甲酸钠，化学式：C6H5O2Na，是苯甲酸的钠盐，苯甲酸钠是很常用的防腐剂，有防止变质，延长保质期的效果。
山梨酸钾别名2,4-己二烯酸钾，是山梨酸的钾盐，也是防腐剂。
本实验采用RP-HPLC法对酱油和醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾的含量测定，方法简便，快速，实用于苯甲酸钠和山梨酸钾的定量分析。
1 实验部分1.1实验目的了解高效液相色谱仪基本结构和使用原理，操作过程。
学习高效液相色谱保留值定性方法和外标法的标准曲线测定方法。
学习RP-HPLC法对食品中苯甲酸钠和山梨酸钾的含量的测定方法。
1.2 仪器与试剂LC-6A/10A 高效液相色谱处理系统：由日本岛津公司提供；Milli-Q超纯水处理器；HS6150D型超声波处理器；2XZ-1型旋片真空泵，由浙江黄岩求精真空泵厂制造。
甲醇：HPLC，500ml，由Guangdong Ghuanghua Sol-Techco，Led提供；氨水：AR，500ml，由成都市科龙化工厂提供；碳酸氢钠（优级纯）纯度99.5%，500g 由成都市科龙化工厂提供；苯甲酸钠：AR 纯度99.5%，250g 由成都科龙化工厂提供；山梨酸钾：AR 纯度98.0%，由成都市科隆化工厂提供。
高效液相色谱法测定红醋中苯甲酸含量的不确定度评定
不确定度是表征合理地赋予被测量值的分 散性，与测量结果相联系的参数，它可以给出测 量结果的可信程度，是对测量结果质量的定量评 定 [1]。通过对测量数据进行不确定度分析，可找 出影响不确定度的因素，对不确定度进行评估， 给出不确定度，能如实反映测量的置信度和准确
性，为评价测量结果提供科学依据。目前，不确 定度广泛使用于检测实验室和计量机构中，随着 社会对食品安全的关注度不断提高，不确定度在 食品检测实验室的质量管理和质量保证中也显得 更为重要。 在我国，苯甲酸是一种可以限量使用于蜜饯
Abstract: A mathematical model was established to assess the uncertainty for determining the concentration of benzoic acid in red vinegar by high performance liquid chromatography. Various sources of uncertainty from the determination procedure are assessed. The influence of the identified uncertainty of the analytical result is evaluated, and references for the reliability and consistency of the testing data in the laboratory are made. Key words: red vinegar; benzoic acid; high performance liquid chromatography; uncertainty
应用高效液相色谱法测定食品中3种防腐剂的含量
应用高效液相色谱法测定食品中3种防腐剂的含量摘要：近年食品抽检中发现食品防腐剂超标使用，因此了解常见食品中防腐剂含量，可为食品安全监管提供参考。
采用高效液相色谱法对糖果、中式糕点及酱卤肉制品中苯甲酸、山梨酸及脱氢乙酸含量进行测定分析。
结果表明，中式糕点均含有苯甲酸，属于违法添加苯甲酸类防腐剂的食品；酱卤肉制品山梨酸含量超过国家标准规定的限值；其他食品的苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸含量均符合国家标准规定。
可见，苯甲酸、山梨酸存在超标使用问题，需要加强抽样检查监督管理力度，增加食品安全水平。
关键词：苯甲酸；山梨酸；脱氢乙酸；高效液相色谱随着经济水平的发展和科技水平的提高，市场上不断出现各式各样、色彩鲜明、可口美味、形状各式的食品，而多数食品易受微生物影响发生腐败变质，但为了到达更好的贮藏效果，会人为的在食品中适量添加如苯甲酸、山梨酸、脱氧乙酸等常用的食品防腐剂已达到增加食品储存时间的目的。
在国家发布的GB2760《食品添加剂使用标准》中就对所有类型的防腐剂在各种食品中的最多用量设定了严苛的要求，在规定范围内添加可以有效保证食品安全问题，但化学防腐剂长期且大量被人体摄入则可能会对人体有影响，如诱发癌症、导致畸变、引起中毒及其他影响人体健康的潜在危害[1,2]。
因此通过合适的方法检测食品中防腐剂的含量对我们来说是非常必要的。
目前国家标准或地方标准中很少有能够同时检测苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的方法，即使有同时检测的方法但检测过程过于复杂。
本文应用高效液相色谱法对6种食品中苯甲酸、山梨酸、脱氧乙酸3种防腐剂的含量进行测定。
1材料与方法1.1 仪器与试剂本次实验所用样品均采集于本市各镇商场超市、门店，实验所用主要仪器为QC系列超纯水机、离心机、数控超声波清洗器、涡旋混匀仪、电子天平；试验条件是高效液相色谱；试剂为甲醇、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸。
1.2 实验方法1.2.1 苯甲酸、山梨酸及脱氢乙酸标准溶液配制依次从不同标准储备液中提取出一定数量的溶液，将其掺杂搅拌制作成混合标准液，其浓度是100μg/mL；接着，置于0-4℃环境内贮存备用，用水分别进行稀释，使其变成1μg/mL、5μg/mL、10μg/L、20μg/mL以及50μg/mL的混合标准工作溶液。
高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸的含量
高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸的含量摘要：本文采用高效液相色谱法测定酱油中防腐剂苯甲酸的含量。
根据苯甲酸的性质选择分离分离色谱柱为 C18(4.6mm×250mm,粒径5μm)柱，流动相为乙酸铵-甲醇（91：9），流速1mL/min，柱温30℃。
当波长为230 nm时测得苯甲酸标准溶液的浓度与峰面积的线性关系良好，线性回归方程为y=3063.46746x＋0.4971，r2 = 0.9998。
一般实验要求加标回收率为90％-110％，苯甲酸检出限量为1g/kg。
实验测得加标回收率为96％-98％，三个样品的苯甲酸含量分别为0.39g/kg、0.50g/kg、0.81g/kg，均符合食品安全国家标准。
本实验方法简单快捷，准确度，灵敏度也均达到国家相关分析要求，适用于测定酱油中苯甲酸的测定。
关键词：高效液相色谱；酱油；防腐剂；苯甲酸为了减少防腐剂对人类带来的负面影响，对防腐剂进行一定的分析研究是很有必要的。
针对同一防腐剂的检测，不同的检测技术其特异性和快速性等也各有不同。
国家食品检测标准GB/T5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》介绍了三种检测苯甲酸的方法，分别是气相色谱法、高效液相色谱法和薄层色谱法。
此外据网上报道，可用于检测酱油中苯甲酸含量的方法还有紫外分光光度法、毛细管电泳法等。
因高效液相色谱法精确度高、简单、快速，是现阶段测定苯甲酸含量的首选。
现重点介绍高效液相色谱法测定酱油中的苯甲酸。
实验主要试剂及设备：甲醇（GR）；乙酸铵（GR）；苯甲酸钠标准品（GR）；乙酸锌（AR）；亚铁氰化钾（AR）；氨水（≥99.0％）。
高效液相色谱仪（LC-20ADRF）；电子分析天平（BSM--120.4）；超声波清洗仪（SG5200HDT）；高速离心机（TGL-16G-A）。
色谱条件：以C18柱（4.6mm×250mm,粒径5μm）为色谱柱；以A相1.54mg/mL乙酸铵溶液+B相甲醇溶液（91:9）为流动相；柱温：30℃；进样量：10μL；流速：1.0 mL/min；检测波长为230nm；检测器为紫外吸收检测器。
高效液相色谱仪的定性、定量分析(未知样品中苯甲酸含量的测定)
一. 实验目的：
1. 学习高效液相色谱法的测定原理； 2.掌握高效液相色谱仪（HP1100）的定性、定量 分析方法。
二。实验原理： 高效液相色谱法是重要的色谱方法，是在经典液相色谱法 和气相色谱的基础上发展起来的，（经典液相色谱法使用粗粒 多孔固定相，装填在大口径、长玻璃管柱内，流动相仅靠重力 流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度极其缓慢，柱入 口压力低，仅有低的柱效，分析时间长；气相色谱原理类似， 流动相为气体，只能分离小分子量、低沸点的有机化合物，配 合程序升温可分析高沸点的有机化合物。）弥补了经典液相色 谱法和气相色谱的缺点。它使用了多孔微粒固定相，装填在小 口径短的不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高压的色谱 柱，溶质在其中的传质、扩散速度大大加快，从而在短时间内 获得高的分离能力。可分析低分子量、低沸点的有机化合物， 更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化 合物。
4．进样阀从装载转向进样位，同时按进样按扭，工作站 开始记录并出图11。 5．苯甲酸的色谱峰出完后，按照4-5步骤连续操作四次， 获得从最低浓度到最高浓度的标准试液的五张色谱图，分 别为11，12，13，14，15（15为流动相进样，设浓度为0 mg/ml）。 6．按照4-5步骤取25微升的未知样品，进样，出谱图W1。
四．实验步骤：（ESTD法） 1． 标准储备液的配置：准确量取0.144克苯甲酸钠试剂 ， 用 纯 水 或 去 离 子 水 溶 解 ， 定 容 到 100 毫 升 ， 浓 度 为 1.44mg/ml. 分别取此标准液5 ml，2.5 ml，1 ml, 0.5 ml稀 释为10 ml，则浓度分别为0.72 mg/ml，0.36 mg/ml，0.144 mg/ml，0.072 mg/ml。 2． 打开计算机，开仪器，稳定后，打开桌面的ONLINE 工作站。 设定方法：设置泵的流速为1ml/min，柱温为室温（ 40度左右），停止时间为4min，流动相比例（甲醇：水 =60；40），当流动相通过色谱柱约5-10min，记录仪上基 线稳定后，开始进样。 3． 进样：进样阀放在装载的位置上，用注射器取25微升 浓度最低的标准样（比进样阀上的定量环多5-10微升以上 ），注入进样阀中。
高效液相色谱测定食品中的苯甲酸盐
(三)薄层色谱法原理 样品 酸化 后,用乙醚提取
苯甲酸, 和糖精) 苯甲酸,山梨酸 (和糖精).
(四)紫外分分光度法测定苯甲酸原理 性溶液中可以随水蒸气蒸馏出来, 样品中苯甲酸在 酸 性溶液中可以随水蒸气蒸馏出来,与样 成分分离, 吸收苯甲酸, 品中 非挥发性 成分分离,用 碱液 吸收苯甲酸,然后 溶液在加热的条件下进行激烈氧化, 用 重铬酸钾 和 硫酸 溶液在加热的条件下进行激烈氧化, 使除苯甲酸以外的其它有机物氧化分解, 使除苯甲酸以外的其它有机物氧化分解,将此氧化后的溶液再次蒸 吸收苯甲酸, 馏,用 碱液 吸收苯甲酸,第二次所得的蒸馏液中基本不含 除苯甲酸以外的其它杂质.根据苯甲酸钠在225nm有最大吸收,故 有最大吸收, 除苯甲酸以外的其它杂质.根据苯甲酸钠在 有最大吸收 测定吸光度可计算出苯甲酸含量. 测定吸光度可Байду номын сангаас算出苯甲酸含量. (P220:适用于牛奶等有机物含量高 :
(一)高效液相色谱法 3,仪器试剂
(一)高效液相色谱法 4,测定
准确称取酱油5g,用氨水(1:1)调pH至7,加 水定容至50mL,混匀,用滤膜(0.45um)过滤.滤 液备用.
(一)高效液相色谱法 5,结果计算 6,讨论 比较高效液相色谱法与其他方法的原理; 讨论高效液相色谱法测定苯甲酸的注意事项.
(二)气相色谱法
请比较( 请比较(二)
原理 样品酸化后,用乙醚提取苯甲酸,山梨酸,用带氢火焰离子化检测 样品酸化后,用乙醚提取苯甲酸,山梨酸, 器的气相色谱仪进行分离测定,与标准系列比较定量.测出苯甲酸, 器的气相色谱仪进行分离测定,与标准系列比较定量.测出苯甲酸, 山梨酸量后,再分别乘以适当的相对分子质量比,求出苯甲酸钠, 山梨酸量后,再分别乘以适当的相对分子质量比,求出苯甲酸钠, 山梨酸钾量. 山梨酸钾量. 说明 本法为国家标准方法,可同时测定食品中苯甲酸和山梨酸的含量, 本法为国家标准方法,可同时测定食品中苯甲酸和山梨酸的含量, 山梨酸保留时间为173 173秒 苯甲酸保留时间为368 368秒 适用于酱油, 山梨酸保留时间为173秒,苯甲酸保留时间为368秒.适用于酱油, 科学的,但单位有误!), !),用于 果汁,果酱.最低检出限为1 果汁,果酱.最低检出限为1ug(科学的,但单位有误!),用于 色谱分析的样品为1g 1g时 最低检出浓度为1mg/kg 色谱分析的样品为1g时,最低检出浓度为1mg/kg (采用相同的提 取方法). 取方法).
实验四 液相色谱法测定苯甲酸、山梨酸含量
2分钟出现的可能是溶剂峰脱机文件调用实验结果
推一针浓度峰面积
提取10ml雪碧（只含苯甲酸）稀释至50ml 稀释五倍六个芒果（只含山梨酸）
4,5组雪碧样品
4,5组芒果样品
数据处理：
雪碧检测样品中苯甲酸含量y=2257 代入标准曲线y=73.548x-47.704 得x=31.33 ug/ml 由于检测样品为稀释了五倍的雪碧， ml ug c v v v c v c /33.31,5,
2122211==⋅=⋅
所以c 1=5*31.33=156.5ug/ml
芒果饮料检测样品中山梨酸含量y=5736 代入标准曲线y=84.55x-21.065 得x=68.10 ug/ml 由于检测样品为稀释了五倍的原饮料，
所以c 3=340.5ug/ml 由GB 中饮料的山梨酸含量不得超过200ug/ml ， 碳酸饮料中苯甲酸含量不得超过500ug/ml ，
可知测得样品符合国家标准。
芒果饮料的速溶图中5min 处出现峰，并非苯甲酸。
因为笨甲酸的峰出现时间为6.293min, 查配料表及其他数据可推出其为乙酰胺酸钾。
高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠
将 上 述 混 合 标 准 溶 液 进 行 测 定，
根据待测物质峰面积和浓度关系绘图，
得到标准曲线回归方程。苯甲酸、山
梨酸和糖精钠在 0.2 ～ 200 mg/L 范围
内线性关系良好，苯甲酸在 0.25 mg/L
时，线性方式 y=31 991.7x，相关系数
r=0.999 7，检出限为 0.006 g/kg；山
1.2.1 配制混合标准溶液 精密称取苯甲酸、山梨酸和糖精钠 标准物质各 4.0 mL 于 20 mL 容量瓶中，
用水配制成 200 μg/mL 的标准混合储备 液，再用水稀释成 100 μg/mL、50 μg/ mL、25 μg/mL、12.5 μg/mL、2.5 μg/ mL、0.5 μg/mL、0.2 μg/mL 的 系 列 标 准工作液，由低浓度到高浓度依次进样。
梨酸在 0.20 mg/L 时，线性方式 y=60
861.2x，相关系数 r=0.999 8，检出限
为 0.005 g/kg； 糖 精 钠 在 0.50 mg/L
时，线性方式 y=21521.4x，相关系数
r=0.999 7，检出限为 0.012 5 g/kg。
（下转 132 页）
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1.2.2 样品处理 称 取 2.0 g 果 酱 样 品 于 50 mL 比 色 管 中， 加 30 mL 水 和 0.5 mol/L 的 氢氧化钠溶液 1.0 mL，摇匀后置于超 声清洗器中提取 15 ～ 20 min，直至 被测组分完全溶解。然后再添加 0.42 mol/L 的硫酸锌溶液和 0.5 mol/L 的氢 氧化铵溶液各 1.5 mL，加水定容到 50 mL 后摇匀，静置，然后用双层滤纸过 滤上层清液，将最初过滤的 5 mL 液体 丢弃，并采用 0.45 μm 的滤膜对滤液 再次过滤，进样 5 μL 开展色谱分析。 如果液体样品不包含蛋白质，则不需 要蛋白质沉淀过程，直接取样后用水 定容，超声提取后过滤进样即可；如 果是固体样品，则需要将固体样品研 磨粉碎，然后进行样品处理 [2]。 1.2.3 检测 精确称取处理液和混合标准溶液 各 20 μL 放置于高效液相色谱仪中进 行分离，以标准溶液的固定峰值为依 据，根据峰面积计算样液中的被测物 质含量，计算公式为：，其中 X 表示 样 品 中 待 测 组 分 的 含 量， 单 位 为 g/ kg；C 表示由标准曲线得出的样液中 待测物质的量浓度，单位为 mg/mL， V 表示样品定容的体积，单位 mL；m 表示样品的质量，单位为 g。
苯甲酸的测定实验报告液相色谱
苯甲酸的测定实验报告液相色谱
高效液相色谱法是重要的色谱方法，是在经典液相色谱法和气相色谱
的基础上发展起来的，(经典液相色谱法使用粗粒多孔固定相，装填在大
口径、长玻璃管柱内，流动相仅靠重力流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度极其缓慢，柱入口压力低，仅有低的柱效，分析时间长，气相色
谱原理类似，流动相为气体，只能分离小分子量、低沸点的有机化合物，
配合程序升温可分析高沸点的有机化合物。
)弥补了经典液相色谱法和气
相色谱的缺点。
测定食品中的苯甲酸
• 固体样品：称100g样于500ml容量瓶中→加 200ml水→加AR NaCl直到不溶解为止（降低 苯甲酸在水中溶解度，以减少在提取及水 洗过程中的损失）→用10%NaOH调为碱性 （这时苯甲酸生成苯甲酸钠，并以苯甲酸 钠状态存在）→用饱和NaCl定容500ml→静 置2小时→过滤→弃去初液→收集滤液 • 含酒精的样品：吸取250mL样品用 10%NaOH调为碱性→水浴蒸发至100mL→用 饱和NaCl定容250ml →过滤→弃去初液→收 集滤液
试剂
• 无水乙醚 (回收后可重复使用) • 苯甲酸标液(1mg/ml) • 5%NaHCO3溶液; • 5%NaCL溶液; • (1+2v)盐酸溶液 • 10%NaOH溶液
• 固体或半固体样品：如果酱、腌菜、 罐头、果冻等，将样品捣碎，称取 10g左右，用10%NaOH溶液调节到 碱性，定容至100ml,放置30min， 过滤，取10ml滤液于125ml分液漏 斗中，加入(1+2v)盐酸溶液酸化， 然后用乙醚进行萃取，其余过程与 液体样品处理相同。
测定方法
• • • • • 气象色谱法 高效液相色谱法 酸碱滴定法 紫外可见分光光度法 薄层色谱法
紫外可见分光光度法
• 实验原理：
• 苯甲酸及苯甲酸钠在近紫外光区具有较强 的吸收。通过实验证实，苯甲酸在230nm处 具有最大吸收。 • 另一方面，它在水中具有适当的溶解度， 所以，可将标样和样品处理成水溶液，采 用紫外分光光度计，通过标准曲线法而实 现酸性食品中苯甲酸（钠）含量的测定。
4.3 0.2283
4.6 0.2227
NaoH浓度 mol/L
NaoH浓度平均值mol/L 0.2236
样品的滴定
1
样品的量（ml) 25 耗NaOH的量 （ml) 0.2
高效液相色谱内标法测定酱油中糖精钠和苯甲酸钠
高效液相色谱内标法测定酱油中糖精钠和苯甲酸钠邸万山【摘要】以山梨酸钾为内标物,采用高效液相色谱法测定酱油中的糖精钠和苯甲酸钠的含量.样品经体积分数为50％的乙醇溶液提取后,采用Nova-Pak C18色谱柱(3.9 mm×l5 mm×5 μm)分离,以甲醇-0.02 mol/L乙酸铵(5:95,V/V)为流动相进行洗脱,流速1 mL/min,紫外检测波长230 nm.结果表明,在0.1～1.4 mg/kg的添加范围,糖精钠、苯甲酸钠的加标回收率分别为99.5％～102.3％,95.1％～102.1％,相对标准偏差(RSD)分别为0.69％和0.82％.所测酱油中糖精钠和苯甲酸钠的含量分别为3.27 mg/kg和0.133 mg/kg.采用该方法回收率高、准确性好,可用于酱油中糖精钠和苯甲酸钠含量分析.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2015(034)011【总页数】4页(P153-156)【关键词】高效液相色谱法;酱油;糖精钠;苯甲酸钠;检测【作者】邸万山【作者单位】辽宁石化职业技术学院应用化学系,辽宁锦州121001【正文语种】中文【中图分类】TS207.3随着生活水平的提高，食品的种类也日益丰富，为了提高食品的保藏性能，延长保质期，改善食品的感官性状，在食品中加入适量的防腐剂、甜味剂、发色剂、人工合成色素等添加剂来改变食品的色、香、味、形等特征。
但是，食品添加剂加入量若超过了国家标准允许的最大使用量，就会对人体产生危害［1］。
我国对糖精钠、苯甲酸钠的最大使用量的规定分别为5 mg/kg和0.15 g/kg［2］。
酱淮俗称豉淮，是我国传统的酿造食品，富含多肽、氨基酸等营养成分，对人体铁吸收有促进作用［3］。
主要以大豆、小麦、麸皮、食盐等为原料，在米曲霉分泌酶系的协同作用下，经过制曲、发酵等程序酿制而成的液体调味品。
酱淮除食盐成分外，还包括多种氨基酸、可溶性蛋白质、还原糖类、有机酸、色素及香料等成分［4-5］。
高效液相色谱法测定酱油和食醋中4种对羟基苯甲酸酯
２ ０ １ ３年 ６ 月
楚
雄
师
范
学
院
学
报
Ｖ０ １ ． ２８ Ｎｏ ．６
Ｊ０ＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＵＸＩ ＯＮＧ ＮＯＲＩ ＭＡＬ ＵＮＩ ＶＥＲＳＩ ＴＹ
Ｊ ｕ ｎ ． ２ ０１ ３
高 效 液 相 色 谱 法 测 定 酱 油 和 食 醋 中 ４种 对 羟 基 苯 甲 酸 酯
意义 。
当前 ，对 羟 基 苯 甲 酸 酯 类 防 腐 剂 的 测 定 方 法 主 要 有 高 效 液 相 色 谱 法 Ｊ 、薄 层 色 谱 法 “ 、毛 细 管 电泳 法 、气 相 色 谱 法 １ ３ － １ ７ ］ 、高 效 液 相 色 谱 串 联 质 谱 检 测 法 １ ８ － １ ９ ］ 等 。其 中 ， 应 用 比较 广 泛 的 是 高效 液 相 色 谱 法 和 气 相 色谱 法 ，而 薄 层 色 谱 法 和 毛 细 管 电 泳 法 应 用 的相 对 较
肖 丽 恒 ， 吕 任 一 ， 何 学 梅 等 ：高 效 液 相 色 谱 法 测 定 酱 油 和 食 醋 中 ４种 对 羟 基 苯 甲 酸 酯
０ ． １ ｍｇ ／ ｋ ｇ 、０ ． ２ ｍｇ ／ ｋ ｇ 、０ ． ２ ５ ｍｇ ／ ｋ ｇ 、０ ． ２ ｍｇ ／ ｋ ｇ（ Ｓ ／ Ｎ＝３ ） ，不 同 剂 量 的 加 标 回 收 率 为 ８ ６ ． ３ ％ ～１ ０ １ ． ６ ％ ，
相对 标 准偏 差 （ ＲＳ Ｄｓ ）为 ０ ． ７ ％ ～３ ． １ ％ 。该 方 法 简 便 、快 速 、灵 敏 ，准 确 度 和 重 现 性 较 好 ，可 作 为 酱
油 和食 醋 中测 定 多种 对 羟 基 苯 甲酸 酯 类 添 加 剂 的 有 效方 法 。 关 键 词 ：对 羟基 苯 甲酸 酯 ；酱 油 ；食 醋 ；高效 液 相 色 谱 法
食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量的高效液相色谱法测定
文献标识码 ： Ａ
文章 编号： １ ６ ７ ４ — ０ ９ ８ Ｘ （ ２ ０ １ ３ ） Ｏ ６ （ ｂ ） 一 ０ １ ２ ４ 一 Ｏ ｌ 数为１ １ ５ ７ ． ２ ６ ５ ４ ， 分离度为１ ． ２ ５ ２ ９ ， 选择 因
子 为１ ． １ ２ ０ ７ 。
苯 甲酸 钠 和 山梨 酸 钾 是 食 醋 和 酱 油 生 产 中常用 的 防腐 剂 ， 前 者 用量 过 多 会对 人体 肝 脏 产 生危 害 ， 甚 至 产 生 致 癌 作用 ； 掺 有 碳 酸钾的山梨酸钾产品， 在存放３ 个 月之 后 ， 颜色会变成黄 色或棕色 ， 一 些 不 法 企 业在 伪 劣产 品中 添加 化 工原 料 增 白剂 ， 以增 加 产 品 的 白度 、 掩盖劣变后产生的黄色， 化 工 增 白剂 会 对人体 的 健 康 产生 严 重 的危 害。 采 用 ＲＰ —ＨＰ Ｌ Ｃ法 定 量 测 定 食 醋和 酱 油 中的 苯 甲酸 钠 和 山 梨 酸 钾 的含 量 ， 结 果 表 明 该 方 法 简便 ， 快速， 值 得 推 广应 用。
ｙ＝３９ ４９３ ｘ＋２６６１ ３，ｒ ２ ＝ Ｏ． ９８９０ 。
３ 结语
本 实 验 观 察表 明 ： ①色谱 图中有 些 峰 有 轻 微 的 拖 尾现 象 ， 产生 的原 因可能 为系 统 内 的死体 积 大 ， 色谱柱 上有 样品 吸附。 操作 中， 应 尽 量 降 低 流 动 柱 管 线 的 死 体 积 降 低 到 最
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高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸的含量
摘要：本文采用高效液相色谱法测定酱油中防腐剂苯甲酸的含量。
根据苯甲酸
的性质选择分离分离色谱柱为 C18(4.6mm×250mm,粒径5μm)柱，流动相为乙酸铵-甲醇（91：9），流速1mL/min，柱温30℃。
当波长为230 nm时测得苯甲酸标
准溶液的浓度与峰面积的线性关系良好，线性回归方程为y=3063.46746x＋0.4971，r2 = 0.9998。
一般实验要求加标回收率为90％-110％，苯甲酸检出限量为1g/kg。
实验测得加标回收率为96％-98％，三个样品的苯甲酸含量分别为0.39g/kg、
0.50g/kg、0.81g/kg，均符合食品安全国家标准。
本实验方法简单快捷，准确度，
灵敏度也均达到国家相关分析要求，适用于测定酱油中苯甲酸的测定。
关键词：高效液相色谱；酱油；防腐剂；苯甲酸
为了减少防腐剂对人类带来的负面影响，对防腐剂进行一定的分析研究是很有必要的。
针对同一防腐剂的检测，不同的检测技术其特异性和快速性等也各有不同。
国家食品检测标
准GB/T5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》介绍了三种检测苯甲酸的方法，分别
是气相色谱法、高效液相色谱法和薄层色谱法。
此外据网上报道，可用于检测酱油中苯甲酸
含量的方法还有紫外分光光度法、毛细管电泳法等。
因高效液相色谱法精确度高、简单、快速，是现阶段测定苯甲酸含量的首选。
现重点介绍高效液相色谱法测定酱油中的苯甲酸。
实验主要试剂及设备：
甲醇（GR）；乙酸铵（GR）；苯甲酸钠标准品（GR）；乙酸锌（AR）；亚铁氰化钾（AR）；氨水（≥99.0％）。
高效液相色谱仪（LC-20ADRF）；电子分析天平（BSM--120.4）；超声波清洗仪
（SG5200HDT）；高速离心机（TGL-16G-A）。
色谱条件：
以C18柱（4.6mm×250mm,粒径5μm）为色谱柱；以A相1.54mg/mL乙酸铵溶液+B相甲
醇溶液（91:9）为流动相；柱温：30℃；进样量：10μL；流速：1.0 mL/min；检测波长为
230nm；检测器为紫外吸收检测器。
一、样品分析
1.样品中苯甲酸含量的测定
精确称取酱油2.0g，置于具塞塑料离心管中，样品称取质量为2.0135g。
样品称量后，加
水至30mL，再加1mL亚铁氰化钾溶液（10.6％）和1mL乙酸锌溶液（21.9％），混匀。
用
（1+1）氨水调pH至中性，再用超纯水定容至40mL。
盖好管塞，在高速离心机中离心至沉
淀完全，清液经微孔滤膜（4.5um）过滤，滤液在超声波清洗仪超声后注入色谱进样瓶中，
按色谱条件中所述上机检测、分析。
酱油样品中苯甲酸含量的计算公式：
式中：
y--酱油样品中苯甲酸组分含量，单位为克每千克(g/kg)；
c--由苯甲酸溶液标准曲线得出的样液中苯甲酸的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；
v--样品定容体积，单位为毫升（mL）；
m--样品质量，单位为克（g）。
按照相关实验要求，同一实验室内两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的10%，计算结果保留两位有效数字。
2.重复性实验
准确称取酱油样品5份于5支具塞塑料离心管中，样品称取质量分别是2.0129g、
2.0036g、2.0437g、2.0152g、2.0082g。
按上处前处理方法处理制得样品进样溶液，将制得样
液注入色谱进样瓶中，将样品放入液相色谱仪依次进样测定，检测实验的重复性。
3.加标回收实验
准确称取4份酱油样品于4支具塞塑料离心管中，样品称取质量分别为2.0736g、
2.0018g、2.0132g、2.0537g。
称取样品后向4支离心管中分别加入1mg/mL的苯甲酸标准溶
液0.5mL、1mL、1.5mL、2mL，充分混合后，按照样品前处理方法处理，将样品放入液相色
谱仪检测加标样品的苯甲酸含量，并计算其加标回收率。
二、结果与讨论
样品苯甲酸含量
将样品处理液和0.1mg/mL的苯甲酸标准溶液分别注入色谱进样瓶中，再依次送入仪器，通过高效液相色谱仪进行分离检测。
并以苯甲酸标准溶液的峰的保留时间为依据定性，以其
峰面积为依据定量，求出样液中苯甲酸含量，供计算。
1.苯甲酸标准溶液色谱特征
图酱油样液色谱图
通过上图可知，酱油样液在保留时间为10.433min处有峰出现，峰面积为126.9773，该
峰是苯甲酸峰，酱油中的苯甲酸浓度为0.041mg/mL。
根据我国国家卫生部发布的相关规定，酱油中苯甲酸含量不得高于1g/kg。
通过以上实验数据，计算酱油样品的苯甲酸含量，其苯甲酸含量为0.81g/kg。
故酱油的苯甲酸含量符合食
品安全国家标准。
3.重复性实验结果
酱油的峰面积分别为126.8773、122.0851、127.1335、128.3456、126.3277，酱油中的苯
甲酸浓度分别为0.041、0.040、0.042、0.041、0.041mg/mL。
计算结果显示，酱油样品中防
腐剂苯甲酸的平均含量为0.812g/kg，重复实验两两之间的绝对差值均低于算术平均值的10％，RSD=1.030％，低于2.0％。
实验证明，使用本方法测定酱油中苯甲酸含量重复性良好，结果准确可信。
4.加标回收实验结果
酱油加标0.0125mg/mL
酱油高浓度加标色谱图
通过上图可知，酱油高浓度加标样液在保留时间为10.411min处有峰出现，峰面积为197.4737，该峰是苯甲酸峰，该样液的苯甲酸浓度为0.065mg/mL。
根据实验所得数据，检出浓度分别为0.053、0.065、0.078、0.091mg/mL，计算不同加标
水平下苯甲酸的加标回收率，回收率分别为95.92%、98.13%、98.68%、98.36%。
实验要求，加标回收实验的回收率应该在90％-110％之间。
根据数据可知，本实验不同
加标水平的加标回收率都满足一般实验要求，说明该实验方法是准确可靠的。
4.结论
通过高效液相色谱法检测不同酱油样品的苯甲酸含量，实验测得三个酱油样品的苯甲酸
含量分别为0.39g/kg、0.50g/kg、0.81g/kg。
国家卫生部发布的GB2760-2014《食品安全国家
标准，食品添加剂使用标准》规定酱油中苯甲酸含量不得高于1g/kg，故三种酱油的苯甲酸
含量均符合食品安全国家标准。
将同一酱油样品在相同色谱条件下进行多次检测，重复性实
验的RSD=1.030%<2%，证明实验重复性良好。
通过加标实验，在不同加标浓度下，测得苯甲
酸的回收率都在90%-110%之间，回收率符合一般实验要求。
综上所述，该实验方法的系统
误差小，精确度高，结果较为可靠，完全满足国家质量监督和卫生部门的检验要求。
本实验
方法样品前处理简单，测定速度快，结果准确可靠，也可用于汽水，配制酒类中苯甲酸含量
的检测。