双荧光素酶报告系统
双荧光素酶系统实验操作步骤及方法-
3. Stop & Glo® Reagent配制：现用现配，先将Stop & Glo® Buffer放在37度温箱中平衡至室温（15-30min），再 将1倍体积的50X Stop & Glo® Substrate加入49倍体积的将 Stop & Glo® Buffer中。
B．样品制备
1. 仔细地将生长培养基从待检细胞孔中吸出。用1XPBS漂洗 细胞2-3次。此过程必须仔细，并尽量将漂洗用PBS 吸尽
6. 测量完毕后，请将最后检测的EP管取出后，关闭仪器。 7. 实验结果的处理与分析：采用双样本等方差t检验进行处
理，P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。
四、注意事项
由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达 到室温后再进行测定。
Renilla荧光素酶检测工作液后需配制后立即使用，不可配 制成工作液后长期保存。
刺激物处理 转染细胞 启动子-Luc
未处理对照
LUC
细胞内目的基因 的转录被激活
启动子
测得的荧光值
启动子-Luc的 启动子被激活
Luc的转录 Luc表达量
同时，为了减少内在的变化因素（如：培养细胞的数目 和活力的差别，细胞转染和裂解的效率等）对实验准确 性的影响，将带有海肾荧光素酶基因（Rinilla luciferase） 的质粒（phRL-TK）作为对照质粒与报告基因质粒共转 染细胞，提供转录活力的内对照，使测试结果不受实验 条件变化的干扰。
率，因而非常灵敏。另外，在宿主细胞及检测试剂中均检 测不到背景发光。 检测快速，每个样品只需几秒钟。
二、实验原理
利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，把感兴趣 的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞， 适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶 活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。
双荧光素实验报告
一、实验目的1. 掌握双荧光素酶实验报告系统的基本原理和操作方法。
2. 学习利用双荧光素酶报告系统检测基因表达和调控。
3. 理解双报告基因在实验中的作用及其对实验结果的影响。
二、实验原理双荧光素酶实验报告系统是一种常用的分子生物学实验方法，用于检测基因表达和调控。
该系统利用两种荧光素酶——萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase, FLUC）和海肾荧光素酶（Renilla Luciferase, Rluc）——作为报告基因。
FLUC在生物发光反应中具有较高的光强度和较宽的线性范围，而Rluc则具有较长的发射波长，可以作为内对照，确保实验结果的准确性和可比性。
在双荧光素酶实验中，通常将带有实验报告基因的载体共转染带有Rluc的载体到细胞中。
通过检测两种荧光素酶的活性，可以评估实验组与对照组之间基因表达和调控的差异。
三、实验材料1. 细胞系：HEK293细胞2. 载体：带有实验报告基因的载体和带有Rluc的载体3. 转染试剂：脂质体转染试剂4. 检测试剂：荧光素酶底物和荧光素酶检测仪器四、实验步骤1. 细胞培养：将HEK293细胞接种于6孔板，培养至对数生长期。
2. 载体构建：将实验报告基因克隆到带有荧光素酶报告基因的载体中，构建双荧光素酶报告基因载体。
3. 转染：按照脂质体转染试剂说明书进行细胞转染，将双荧光素酶报告基因载体和带有Rluc的载体共转染到细胞中。
4. 细胞培养：转染后继续培养细胞，收集细胞样品。
5. 荧光素酶活性检测：按照荧光素酶底物说明书进行荧光素酶活性检测，分别检测FLUC和Rluc的活性。
6. 数据分析：将FLUC和Rluc的活性进行比较，分析实验组与对照组之间基因表达和调控的差异。
五、实验结果1. 荧光素酶活性检测：通过荧光素酶底物检测，成功检测到FLUC和Rluc的活性。
2. 数据分析：实验组与对照组相比，FLUC活性显著提高，而Rluc活性无明显变化。
六、实验讨论1. 双荧光素酶实验报告系统是一种有效的基因表达和调控检测方法，可以用于研究基因功能、信号通路和细胞反应。
双荧光素酶报告系统
基本原理
将目的基因转录调控原件构建入带有荧光素酶(Firefly luciferase)的表达载体，构建成报告基因质粒，使这段 序列调控荧光素酶(luciferase)的转录表达。然后将报告基因质粒转染细胞，给予其不同的处理后裂解细胞，并加 入底物荧光素(luciferin)，luciferase可催化luciferin发出荧光(最强波长在560nm左右)。检测得到的荧光值高低 可以判断不同处理组对该转录调控原件的影响。为避免由于质粒转染细胞时效率差异所造成的误差，通常会转入 Renilla luciferase的报告基因质粒作为内参(最强波长在465nm左右)，即双荧光报告系统。
3基本步骤
基本步骤
➊查询靶基因的转录调控作用位点 ➋载体的选择与构建 预测到靶基因的调控元件后，通常需要制备重组载体，根据研究种类的不同，报告基因载体及表达载体也有 所差异。研究其他分子对转录因子活性的影响时，需要构建报告基因载体和表达靶基因影响因素的载体
基本步骤
➌转染 将所要检测的质粒和带有海肾荧光素酶基因的质粒转染进入细胞内，扩增表达荧光素酶。
领域。
2 基本原理
基本原理
双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素。 萤火虫萤光素酶是一种胞内蛋白，大小为61KDa。在氧气、ATP和镁离子同时存在的条件下，催化底物萤火 虫萤光素氧化，生成氧化萤光素，并发出黄绿色光，其最强发光波长为560nm。
海肾萤光素酶也是一种胞内蛋白，大小为36KDa。只需要氧气就可以催化腔肠素，氧化生成高能产物 coelenteramide，并发出蓝光，其最强发光波长为465nm。
海肾报告基因，可以排除不同组之间细胞生长状况、细胞数目以及转染
效率带来的干扰，起到校正的作用，从而使实验结果更为可靠。
Dual-Luciferase 双荧光素酶报告基因检测系统
Dual-Luciferase®双荧光素酶报告基因检测系统产品包装目录号价格Dual-Luciferase® Reporter Assay System 100 次检测E19101000次检测E1960Dual-Luciferase® Reporter Assay System10-pack1000次检测E1980Dual-Luciferase® Reporter 1,000 AssaySystemPassive Lysis 5× Buffer 30ml E1941描述：普洛麦格公司的双荧光素酶报告基因(DLR™)检测系统为双报告基因检测提供有效手段。
在DLR™ 检测中，萤火虫(Photinus pyralis)荧光素酶和海肾(Renilla reniformis)荧光素酶可在单个样品中连续测量。
测量过程是：加入荧光素酶检测试剂II (LARII)产生萤火虫荧光信号，信号持续至少1 分钟，这样先测量萤火虫荧光素酶报告基因。
定量萤火虫荧光强度之后，再在同一样品中加入Stop & Glo®试剂，将上述反应猝灭，并同时启动海肾荧光素酶反应，同时进行第二次测量。
如果使用带有试剂自动注射器的荧光发光计，两个检测可在4秒内完成。
在DLR™检测系统中，两个报告基因产生的线性检测范围均在小于10-18摩尔的灵敏度范围内，两个报告基因在实验宿主细胞内均无内源活性。
另外，此系统中一体化形式的双荧光素酶检测既可快速定量检测转染细胞，也可用于快速定量检测无细胞转录/翻译反应体系中的两个报告基因。
普洛麦格公司的合成海肾基因phRL系列：普洛麦格公司曾为双荧光素酶报告基因（DLR™）检测系统设计了萤火虫荧光素酶报告基因载体和野生型海肾报告基因载体pRL系列。
phRL和pRL系列载体均提供海肾荧光素酶的组成性表达，可与任何实验用萤火虫荧光素酶载体组合，共同转染哺乳动物细胞。
双荧光素酶报告数据分析(3篇)
第1篇摘要：双荧光素酶报告系统（Dual Luciferase Reporter Assays, DLRA）是一种广泛应用于生物科学研究中的细胞功能检测技术。
通过分析荧光素酶的活性，可以评估细胞内信号通路的激活情况，从而研究基因表达调控、细胞增殖、细胞凋亡等多种生物学过程。
本文将对双荧光素酶报告数据分析的方法、注意事项以及结果解读进行详细阐述。
一、引言双荧光素酶报告系统是一种基于荧光素酶活性的细胞功能检测技术，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。
荧光素酶是一种在细胞内自然存在的酶，能够将荧光素底物催化生成荧光物质。
在双荧光素酶报告系统中，通常使用两种荧光素酶：萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase, FL）和海肾荧光素酶（Renilla Luciferase, RL）。
FL的荧光强度通常作为报告基因的活性，而RL的荧光强度则作为内参基因，用于校正实验误差和细胞活力。
二、实验原理双荧光素酶报告系统的基本原理是：将目的基因与荧光素酶基因（FL或RL）的启动子连接，构建报告基因质粒。
将报告基因质粒转染到细胞中，细胞内荧光素酶的活性与目的基因的表达水平成正比。
通过检测细胞内两种荧光素酶的荧光强度，可以评估目的基因的表达水平。
三、实验方法1. 构建报告基因质粒（1）设计荧光素酶基因（FL或RL）的启动子序列，并与目的基因序列连接。
（2）将连接好的基因序列克隆到载体质粒中，构建报告基因质粒。
2. 细胞培养与转染（1）培养细胞至对数生长期。
（2）用脂质体或电穿孔等方法将报告基因质粒转染到细胞中。
3. 荧光素酶活性检测（1）收集转染后的细胞，用荧光素酶底物进行孵育。
（2）使用荧光光度计检测细胞内FL和RL的荧光强度。
4. 数据分析（1）计算FL和RL的相对荧光强度（RFU）。
（2）计算目的基因的表达水平（FL/Rlu）。
四、数据分析方法1. 相对荧光强度（RFU）计算RFU = 荧光强度 / 标准曲线斜率2. 目的基因表达水平计算目的基因表达水平 = FL/Rlu其中，FL为FL的相对荧光强度，Rlu为RL的相对荧光强度。
promega双荧光素酶说明书
promega双荧光素酶说明书
Promega双荧光素酶说明书
一、简介
Promega双荧光素酶系统是一种灵敏的报告基因检测工具，用于检测细胞
或组织中荧光素酶的表达水平。
该系统包括荧光素酶基因报告质粒、荧光素酶活性检测试剂和荧光检测仪。
通过将荧光素酶基因报告质粒转染到细胞中，可以监测荧光素酶的表达水平，从而了解基因的表达情况。
二、主要特点
1. 高灵敏度：可检测低至 pg荧光素酶的活性。
2. 快速：可在短时间内完成检测。
3. 简便：无需特殊设备，只需一台荧光检测仪即可完成检测。
4. 稳定：荧光素酶基因报告质粒可在细胞内稳定表达，提供可靠的检测结果。
三、使用方法
1. 转染荧光素酶基因报告质粒：将荧光素酶基因报告质粒转染到细胞中，按照说明书操作。
2. 培养细胞：在适宜条件下培养细胞，使荧光素酶表达。
3. 收集细胞：离心收集细胞，并洗涤去除培养基中的荧光素酶抑制剂。
4. 检测荧光素酶活性：将细胞悬浮在检测缓冲液中，加入荧光素酶活性检测试剂，充分混匀后进行荧光检测。
5. 数据分析：通过荧光检测仪获取数据，并使用相关软件进行数据分析。
四、注意事项
1. 请在专业人员的指导下操作。
2. 避免直接接触试剂，以免对皮肤和眼睛造成刺激。
3. 试剂应存放在阴凉干燥处，避免阳光直射和高温。
4. 转染荧光素酶基因报告质粒时，应遵循无菌操作原则，避免交叉污染。
双荧光素酶报告基因检测系统-promega
Dual—Luciferase® Reporter Assay试剂准备Luciferase Assay Buffer II 10mlLuciferase Assay Substrate 1vialStop ＆Glo® Buffer 10mlStop ＆Glo® Substrate，50X 200ulPassive Lysis Buffer （PLB)，5X 30ml1.1X PLB：加1体积的5X Passive Lysis Buffer （PLB)到4体积的dH20中，40C保存(一个月)。
R II：将Luciferase Assay Substrate重悬于10ml Luciferase AssayBuffer II 中（—200C保存1个月,-700C保存1年)。
3.1X Stop ＆Glo 试剂：1体积50X Stop ＆Glo® Substrate加入49体积的Stop & Glo® Buffer中（-200C保存15天）。
（每次试验需要100ul）细胞处理1. 吸除细胞培养液2. 1X PBS轻柔的冲洗细胞3. 加入1X PLB（推荐用量）4.细胞溶解室温条件下，轻摇细胞15min,瞬时转染和报告基因实验采用脂质体介导技术转染。
重组质粒分别为p-629/+100,p—401/+100,p—238/+100，p-80/+100,p—25/+100。
pGL3- basic为阴性对照；同时以转染phRL-tk(海肾荧光素酶)作内对照。
具体转染方法参照转染(Polifectamine Reaent）说明书进行。
1。
将质粒DNA(3。
2µg)与phRL-tk （0。
8µg）按1：4混合后为A液，混匀30s，PolyFect(QIAGEN)与无血清无抗生素的DMEM按1:50混匀后为B 液，混匀30s;2。
A+B混匀（B加入A）15s，室温下孵育5—10 min；3. 吸出六孔板中的培养液，用无血清无抗生素的DMEM洗3遍，然后加入AB混合液，每孔0。
双荧光素酶测试系统及海肾类对照报告基因载体
双荧光素酶测试系统及海肾类对照报告基因载体1.什么是双荧光素酶报告基因测试系统（DLR）DLR测试系统灵敏，方便，在一个系统中用于测量两个单独的荧光素酶报告基因，萤火虫荧光素酶及海洋海肾荧光素酶(Renilla reniformis)，DLR测试系统可用于细胞裂解物及无细胞的翻译系统。
2.有哪些海肾荧光素酶载体海肾荧光素酶载体pRL用于在转染的哺乳细胞中组成性地表达海肾荧光素酶。
这类载体还有T7启动子，可用T7RNA聚合物在体外合成海肾荧光素酶，有4个不同的载体：A pRL-SV40载体??? pRL-SV40载体含SV40增强子及早期启动子区域，可在多种细胞中组成性地高表达海肾荧光素酶。
pRL-SV40载体还含有SV40的复制起始区，可在表达SV40大T抗原的细胞中，如COS-1，COS-7细胞中，瞬时及附加体似地复制。
B pRL-CMV载体pRL-CMV载体含有CMV极早增强子及启动子，可在多种细胞中组成性地高表达海肾荧光素酶。
a pRL-TK载体pRL-TK载体含HSV胞嘧啶激酶启动子区域，在多种细胞中组成性地弱表达海肾荧光素酶。
b pRL-null载体pRL-null载体缺真核启动子及增强子，在海肾荧光素酶基因的上游含有多克隆位点。
3.用双报告基因有何优点一般地说，实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达，而另一个报告基因作为内对照，以提供实验报告基因测试的归一化。
将实验报告基因的活力与内对照报告基因的活力作归一化可消除实验中不同测试间所固有的变化，这些变化减弱实验准确度，其中包括培养细胞的数目及活力的差异，细胞转染及裂解的效率。
海肾荧光素酶可用作对照报告基因及实验报告基因。
在双荧光素酶报告基因测试中，将萤火虫荧光素酶作为实验报告基因，海肾荧光素酶作为对照报告基因。
4.相比用CAT或β-半乳糖苷酶对表达数据作归一化，双荧光素酶报告基因测试系统有何优点用双荧光素酶报告基因测试（DLR）有几个优点：•快速•DLR测试不需保温或对样品作预处理。
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验是一种常用的基因报告系统，能够通过观察荧光信号来定量分析特定基因的表达水平。
其原理基于双荧光素酶（Dual-Luciferase）系统，包括火萤酶（Firefly Luciferase）
和海洋鞭毛虫荧光素酶（Renilla Luciferase）两个荧光素酶。
首先，将感兴趣的基因的启动子区域与火萤酶编码区（报告基因）相连，构建成荧光素酶表达载体。
另外，还需要构建一个含有海洋鞭毛虫荧光素酶编码区的载体作为内部参照基因。
这样，在同一细胞中同时表达火萤酶和海洋鞭毛虫荧光素酶。
实验中，将这两种载体转染至细胞中。
细胞内转染后，荧光素底物（firefly luciferin和coelenterazine）与相应的荧光素酶结
合发生催化反应，产生融合的荧光信号。
接下来，利用荧光素酶检测试剂盒，分别检测火萤酶和海洋鞭毛虫荧光素酶的活性。
以火萤酶为例，实验中会加入火萤酶底物luciferin，该底物在酶的作用下会发出黄绿光信号，测量这
种荧光的强度。
同样地，还需检测海洋鞭毛虫荧光素酶的活性。
通过比较火萤酶和海洋鞭毛虫荧光素酶的相对活性，可以间接反映感兴趣基因的表达水平。
如果观察到火萤酶信号增强、而海洋鞭毛虫荧光素酶活性不变，说明感兴趣基因在表达上调。
反之，如果火萤酶信号减弱、而海洋鞭毛虫荧光素酶活性不变，说明感兴趣基因在表达下调。
这样，双荧光素酶实验可以作为分子生物学研究中的一种定量检测方法，用于研究基因的调控机制、信号通路等。
双荧光素酶报告基因检测系统的开发
Dual-luciferase reporter assay kit(1) Promega公司双荧光素酶报告基因(DLR TM)检测系统试剂盒组分：Promega的DLR TM检测试剂盒专利给出了Luciferase assay bufferII和Stop & Glo® buffer的相关组分和浓度范围，没有具体的数值。
我在专利和文献中也没有找到针对DLR TM检测试剂盒中的passive lysis buffer的成分。
Assay protocol：(2) 文献中用到的几种非商业性双荧光素报告基因检测系统细胞裂解液（cell lysis buffer）配方：(a)源自promega公司的单荧光素酶报告试剂盒：T ris-phosphate（PH7.8）25mMEGTA or EDTA2mMDTT2mMBSA1mg/mlTriton X-1001%Glycerol10%(b) Make the following stock solutions.1M HEPES pH 8 (室温RT)1M DTT (4℃)100mM MgCl2 (RT)裂解液第二种配方（100ml体系）：来自/cgi-bin/prot/view_cache.cgi?ID=250710ml 1M HEPES PH80.5ml 1M DTT2ml 100mM MgCl22ml Triton X10085ml distilled water反应缓冲液：Firefly Luciferase Assay；Renilla Luciferase Assay Reagent。
a>“A noncommercial dual luciferase enzyme assay system for reporter gene analysis”文献作者给出了2种荧光素酶活性检测的反应试剂配方，并与promega公司试剂盒进行了效果比较，检测效率和灵敏度都很高，不逊于promega产品。
双荧光素酶报告基因系统验证miRNA的靶基因笔记
双荧光素酶报告基因系统验证miRNA的靶基因笔记(⼀)什么是双荧光素酶？答：双荧光素酶通常是指萤⽕⾍荧光素酶和海肾荧光素。
其中荧⽕⾍荧光素是从甲⾍（Photinus pyralis）中分离得到，分⼦量为61kDa；⽽海肾（Renilla）荧光素酶则是从海肾（Renilla reniformis）中分离，分⼦量为36kDa。
这两种酶的区别之⼀是他们的底物和辅因⼦不同：萤⽕⾍荧光素酶需要荧光素、氧⽓、ATP和镁离⼦同时存在才能发光；⽽海肾荧光素酶仅需要腔肠素（coelenterazine）和氧⽓。
萤⽕⾍荧光素酶和海肾荧光素酶的区别之⼆是发光的颜⾊不同：萤⽕⾍荧光素酶产⽣的光颜⾊呈现黄绿⾊，波长550-570nm；⽽海肾荧光素酶产⽣蓝光，波长480nm。
正是由于这两种酶的底物和发光颜⾊不同，所以在双报告实验中得到⼴泛应⽤，它们的发光原理如下所⽰：(⼆)为什么要采⽤双荧光素酶报告系统？答：单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，⽽双报告基因则通过共转染的“对照”作为内参为试验提供⼀基准线，从⽽可以在最⼤程度上减⼩细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，使得数据结果更为可信。
(三)双荧光素酶在miRNA验证其靶基因⽅⾯的原理是什么？答：答：双萤光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤⽕⾍萤光素酶和海肾萤光素酶，两者没有种源同源性并对应不同的反应底物，故⽽没有交叉⼲扰。
得益于超强的光信号和超⾼的信噪⽐，本系统被⼴泛⽤于 miRNA 靶基因验证。
miRNA 主要通过作⽤于靶基因的 3’UTR 起作⽤，可以将⽬的基因 3’UTR 区域构建⾄载体中报告基因 luciferase 的后⾯，通过⽐较过表达或者⼲扰miRNA 后，报告基因表达的改变（监测萤光素酶的活性变化）可以定量反映 miRNA 对⽬的基因的抑制作⽤，也即⽤荧光值来判断miRNA是否和靶基因结合。
(四)在利⽤双荧光素酶验证miRNA的靶基因⽅⾯，插⼊的3’UTR长度应该是多少？答：靶基因的3’UTR长度不⼀，将全长都插⼊载体中不切实际，通常只插⼊包括miRNA结合位点前后200bp左右的序列，⼤概就是400bp[1]，但也有⽂献插⼊的是80个bp[2]，有⽂献选择了200多个bp[3]，但严格来讲，应该选择400bp，以结合位点为中⼼，上游200bp，下游200bp。
双荧光素酶数据处理
双荧光素酶数据处理
双荧光素酶（Dual-Luciferase）报告系统是一种常用的生物荧
光素酶报告基因表达系统，用于研究基因调控、信号转导和蛋白质
相互作用等生物学过程。
对双荧光素酶数据进行处理时，需要考虑
以下几个方面：
1. 数据采集和标准化，首先要确保数据采集的准确性和一致性，使用标准化的实验操作流程和仪器设置来获取数据，以减少实验误
差对结果的影响。
2. 数据分析，双荧光素酶报告系统通常包括火萤酶（Firefly luciferase）和海洋光明蛋白（Renilla luciferase）两种荧光素
酶的活性测定。
数据处理时需要分析两种酶的活性比值或相对活性
变化，以确定基因表达水平或信号通路活性的变化。
3. 数据解释，在进行数据处理时，需要结合实验设计和研究目的，对双荧光素酶数据进行合理的解释。
比如，可以通过对照组和
实验组的数据对比，来判断基因表达水平的变化或信号通路的活化
或抑制。
4. 统计分析，为了确保数据处理的可靠性和科学性，通常需要进行统计学分析，比如t检验、方差分析等，来验证实验结果的显著性和可重复性。
5. 结果呈现，最后，将经过处理和分析的双荧光素酶数据以图表或统计指标的形式呈现出来，清晰地展示实验结果和结论，以便他人理解和验证。
总之，双荧光素酶数据处理需要严谨的实验操作、合理的数据分析和解释，以及科学的统计分析，最终将结果清晰地呈现出来。
这样才能确保研究结果的可靠性和科学性。
双荧光素酶报告系统
双荧光素酶报告系统随着生物技术的快速发展和应用范围的不断扩大，开展基因表达研究的方法也越来越多样化。
其中，双荧光素酶报告系统就是一种常用的技术手段。
它能够用于检测和研究基因的表达和调控，为科研人员提供了无限的可能性。
双荧光素酶（Dual-Luciferase）报告系统基本上由两个主要组分构成：绿色荧光素酶（Firefly luciferase）和红色荧光素酶（Renilla luciferase）。
通过将这两种酶表达于细胞内，研究人员可以利用它们产生的荧光信号量化基因的表达水平。
在该报告系统中，绿色荧光素酶被用作内参来标准化实验结果。
内参即内部参照物，用来消除实验中不同样本之间的差异，确保数据的可靠性。
绿色荧光素酶的表达与我们要研究的基因表达是相互独立的，因此其表达水平可以作为一个恒定的参照标准。
在实验操作中，首先将研究人员关心的基因的启动子序列与绿色荧光素酶基因连接，构建成一个融合基因。
然后，将融合基因导入到需要研究的细胞中。
当该细胞中的基因启动子活性被调控时，绿色荧光素酶基因也会被相应地表达出来。
通过底物注入等方法，实验人员可以测量绿色荧光素酶产生的荧光强度，从而得出基因的表达水平。
而红色荧光素酶则被用作载体的内部对照，用来衡量转染效率。
转染效率指的是将目的基因导入到细胞中的有效程度。
通过在同一融合载体中将红色荧光素酶基因与目的基因连接，测量其产生的荧光信号，可以准确地获得目的基因在细胞中的转染效率。
双荧光素酶报告系统的使用不仅可以直观地反映基因的表达水平和调控机制，还可以用于筛选和评价药物的有效性。
通过构建特定的基因转染系统，可以快速高效地筛选出对目标基因具有影响的化合物。
这为药物研发提供了一种新的思路和方法。
双荧光素酶报告系统的应用不仅限于基础科学研究领域，还广泛应用于生物医学研究、农业生物技术和环境科学等领域。
例如，在癌症研究中，可以利用双荧光素酶报告系统来研究癌症相关基因的表达变化及其对药物治疗的敏感性。
双荧光素酶报告实验原理
双荧光素酶报告实验原理一、实验背景双荧光素酶（Dual-Luciferase）报告系统是一种常用的基因表达分析方法，它利用荧光素酶和反向转录酶的活性来定量测定转录因子对基因表达的影响。
该系统可以同时测定内部对照和实验组样品，从而减少误差和提高可靠性。
二、实验原理1. 基本原理该系统包含两种不同的荧光素酶：火萤酶（Luciferase）和海藻酸酯酶（Renilla）。
这两种荧光素酶都需要ATP作为底物，但它们分别与不同的底物反应而产生不同颜色的荧光。
在实验中，首先将感兴趣的DNA片段插入到一个启动子区域上，并将其与另一个含有Renilla基因的质粒共转染给细胞。
然后使用两种不同颜色的底物来检测这两种荧光素酶活性，从而得到相应的数据。
2. 实验步骤（1）细胞培养：将感兴趣的细胞株培养至合适密度。
（2）质粒构建：将感兴趣的DNA片段插入到一个启动子区域上，并将其与另一个含有Renilla基因的质粒共转染给细胞。
（3）荧光素酶检测：使用两种不同颜色的底物来检测这两种荧光素酶活性，从而得到相应的数据。
（4）数据分析：计算出目标基因表达量与Renilla表达量之比，从而得到相应的数据。
三、实验注意事项1. 在实验中应严格控制各步骤的时间和温度，避免对实验结果产生影响。
2. 应选择适当的细胞株和质粒，以确保实验结果准确可靠。
3. 应在实验前进行相关预处理工作，如对细胞进行转染等。
四、实验优缺点1. 优点：（1）该系统可以同时测定内部对照和实验组样品，从而减少误差和提高可靠性。
（2）该系统具有高灵敏度和高特异性，能够检测非常低水平的基因表达变化。
（3）该系统操作简单、快速、方便。
2. 缺点：（1）该系统需要使用专门的仪器来检测荧光素酶活性，成本较高。
（2）该系统的灵敏度受到许多因素的影响，如细胞株、质粒等，需要进行优化。
五、实验应用领域双荧光素酶报告系统广泛应用于基因表达分析、转录因子筛选和药物筛选等领域。
它可以帮助研究人员了解基因调控机制，并为新药研发提供有力支持。
双荧光素酶报告基因原理
双荧光素酶报告基因原理双荧光素酶报告基因是一种常用于生物学研究的工具，其原理是利用双荧光素酶（Dual-Luciferase）系统来检测基因表达水平和调控机制。
该系统包括火萤酶和甲基火萤酶两种酶，通过测量这两种酶的活性，可以对目标基因的表达进行定量分析。
下面将对双荧光素酶报告基因的原理进行详细介绍。
首先，双荧光素酶报告基因系统利用了两种不同的荧光素底物，火萤酶底物和甲基火萤酶底物。
在该系统中，火萤酶底物首先被加入到待检测的样品中，然后通过火萤酶的催化作用产生荧光素，发出强烈的黄绿色荧光。
接着，甲基火萤酶底物被加入到同一样品中，通过甲基火萤酶的催化作用产生荧光素，发出强烈的蓝色荧光。
这两种荧光素的发光强度可以分别被检测仪器所测定，从而实现对目标基因表达水平的准确测量。
其次，双荧光素酶报告基因系统还包括了内参基因的设计。
内参基因是一个稳定表达的基因，其表达水平不受外界因素的影响。
在双荧光素酶报告基因实验中，内参基因的存在可以帮助消除实验误差，使得实验结果更加可靠。
通常情况下，内参基因的表达水平会被用来对目标基因表达水平进行校正，从而得到更加准确的结果。
最后，双荧光素酶报告基因系统的原理还涉及到对基因调控机制的研究。
通过对目标基因表达水平的测量，可以进一步探究该基因在不同生物学过程中的调控机制。
例如，在转录因子的研究中，可以利用双荧光素酶报告基因系统来分析转录因子对目标基因的调控效应，从而揭示基因调控网络的复杂性。
总之，双荧光素酶报告基因系统是一种灵敏、准确的基因表达分析工具，其原理简单清晰，操作方便快捷。
通过对目标基因表达水平的测量，可以帮助科研人员深入了解基因的功能和调控机制，为生物学研究提供重要的技术支持。
希望本文对双荧光素酶报告基因的原理有所帮助，谢谢阅读！。
荧光双报告系统
荧光双报告系统简介荧光双报告系统（Fluorescent Dual Reporter System）是一种常用于生物学研究中的分子工具。
通过引入两个不同的荧光报告基因来实现对目标基因表达的定量监测和可视化。
荧光双报告系统具有灵敏、准确、实时监测等优势，在基因调控、药物筛选、细胞信号传导等领域发挥着重要作用。
原理荧光双报告系统的原理基于自然界存在的一些生物现象和分子机制，其中常用的有双荧光素酶（Dual Luciferase）、绿色荧光蛋白（GFP）和红色荧光蛋白（RFP）等。
双荧光素酶系统双荧光素酶系统采用荧光物质荧光素（luciferin）和酶荧光素酶（luciferase）来实现荧光信号的产生。
该系统使用两种不同的荧光素和对应的荧光素酶，通常为火萤石酶（firefly luciferase）和海啸藻酶（Renilla luciferase）。
引入双荧光素酶基因到表达目的基因的启动子区域，通过检测两种荧光素酶在细胞中的表达水平，可以获得目标基因的表达量。
GFP和RFP系统GFP和RFP是最常使用的荧光蛋白，它们能够在细胞中发出绿色和红色荧光。
利用GFP和RFP的特性，可以通过将它们作为报告基因连接到目标基因的启动子或编码区，来实现对目标基因表达的监测。
通过荧光显微镜或流式细胞术等技术，可以实时观察到目标基因的表达情况。
应用荧光双报告系统广泛应用于各个领域的研究中，具有许多重要的应用价值和优势。
基因调控研究荧光双报告系统可以用来研究基因调控的过程和机制。
通过构建包含目标基因启动子的荧光双报告载体，并使用转染等技术将其导入到细胞中，可以通过荧光测定的方式来定量检测目标基因的表达量。
进而可以研究转录因子、启动子序列、染色质结构等因素对基因表达水平的影响。
药物筛选荧光双报告系统可以用于高通量药物筛选。
通过将荧光双报告载体导入到特定的细胞系中，可以在细胞级别上对药物的效果进行快速筛选和评价。
该系统能够实时监测目标基因的表达水平，从而判断药物对目标基因的调控效果。
双荧光素酶报告
双荧光素酶报告双荧光素酶（Dual-Luciferase）报告系统是一种常用的生物荧光检测技术，用于研究基因表达调控、信号转导通路和药物筛选等领域。
该系统利用荧光素酶（Firefly Luciferase）和甲氧基荧光素酶（Renilla Luciferase）作为报告基因，通过检测这两种荧光素酶的活性来分析靶基因的表达水平及其调控机制。
在双荧光素酶报告系统中，Firefly Luciferase和Renilla Luciferase分别作为实验基因和内参基因，通过对这两种荧光素酶的活性进行连续检测，可以准确、快速地分析靶基因的转录水平及其受到的调控。
Firefly Luciferase作为实验基因，其活性的变化反映了靶基因的表达水平；而Renilla Luciferase作为内参基因，其活性的稳定性则可以用来校正实验误差，保证实验结果的准确性和可靠性。
双荧光素酶报告系统的应用非常广泛，既可以用于体外细胞实验，也可以应用于体内动物实验。
在基因表达调控研究中，研究人员常常利用该技术来分析转录因子的激活或抑制效应，探究信号通路的调控机制；在药物筛选领域，双荧光素酶报告系统也被广泛应用于筛选潜在的药物靶点和药效物质。
双荧光素酶报告系统的优势在于其高灵敏度、高稳定性和高通量性，能够满足科研工作者对于快速、准确、高通量的生物荧光检测需求。
同时，该技术操作简便，不需要昂贵的仪器设备，适用于各类实验室的科研人员进行基因表达调控和药物筛选研究。
总之，双荧光素酶报告系统作为一种重要的生物荧光检测技术，为科研工作者提供了一个强大的工具，能够帮助他们深入研究基因表达调控和药物筛选等领域，推动生命科学领域的发展和进步。
相信随着该技术的不断完善和应用，将会为科研工作者带来更多的惊喜和突破，为人类健康和生命科学研究做出更大的贡献。
双荧光素酶报告系统
双荧光素酶报告系统双荧光素酶报告系统（dual luciferase reporter assay system）是一种常用的生物学实验技术，用于研究基因调控、信号转导通路、蛋白质相互作用等生物学过程。
该技术利用荧光素酶和甲基荧光素酶作为报告基因，通过测定其荧光素酶活性来分析靶基因的表达水平和调控机制。
本文将介绍双荧光素酶报告系统的原理、操作步骤和应用范围，希望能够为相关研究人员提供一定的参考和帮助。
双荧光素酶报告系统的原理。
双荧光素酶报告系统利用两种不同的荧光素酶，荧光素酶（firefly luciferase）和甲基荧光素酶（Renilla luciferase）。
荧光素酶作为感光酶，能够将底物荧光素转化为可见光，而甲基荧光素酶则能将底物甲基荧光素转化为可见光。
通过测定这两种荧光素酶的活性，可以分别得到两个不同的荧光信号，从而实现对靶基因表达水平和调控机制的研究。
双荧光素酶报告系统的操作步骤。
1. 转染，将感兴趣的靶基因启动子区域克隆到双荧光素酶报告载体中，然后将该载体与甲基荧光素酶报告载体一起转染至目标细胞中。
2. 荧光素酶活性测定，在转染后一定时间，使用相应的底物分别对荧光素酶和甲基荧光素酶进行反应，然后测定其荧光素酶活性。
3. 数据分析，根据荧光素酶和甲基荧光素酶的活性测定结果，计算其相对荧光单位（RLU值），并进行比较分析，得出靶基因的表达水平和调控机制。
双荧光素酶报告系统的应用范围。
双荧光素酶报告系统在生物学研究中具有广泛的应用范围，主要包括以下几个方面：1. 研究基因调控，通过分析靶基因启动子区域的活性，揭示基因的调控机制，如转录因子的结合和调控效应等。
2. 分析信号转导通路，通过构建信号转导通路相关的双荧光素酶报告系统，研究信号分子的调控作用和相互关系。
3. 探究蛋白质相互作用，利用双荧光素酶报告系统分析蛋白质相互作用的影响因素和调控机制。
4. 高通量筛选，应用双荧光素酶报告系统进行药物筛选和基因组学研究，实现大规模的功能分析和筛选。
双荧光素酶报告分析
双荧光素酶报告分析引言双荧光素酶（Dual-Luciferase）报告系统是一种广泛应用于生物学研究中的实验技术。
该系统利用荧光素酶（Luciferase）酶的催化活性，通过测量荧光信号的强度来研究基因表达、信号转导和细胞代谢等过程。
本文将介绍双荧光素酶报告系统的原理、操作流程以及数据分析方法。
双荧光素酶报告系统原理双荧光素酶报告系统由两种荧光素酶构成：荧光素酶1（Luciferase 1）和荧光素酶2（Luciferase 2）。
荧光素酶1（Firefly Luciferase）主要用于检测目标基因表达水平，而荧光素酶2（Renilla Luciferase）则作为内部对照用于标准化实验结果。
这两种酶的催化反应都需要荧光素底物供应。
当目标基因表达时，荧光素酶1会催化荧光素底物产生荧光信号。
通过测量荧光信号的强度，可以了解目标基因的活性水平。
同时，荧光素酶2也会催化荧光素底物产生荧光信号，用于对实验结果进行内部对照和标准化。
实验操作流程1.细胞转染：首先，将目标基因转染入感兴趣的细胞中。
这一步可以通过化学方法或者质粒转染等技术实现。
2.荧光素底物处理：待转染细胞充分恢复并生长后，将荧光素底物加入培养基中。
荧光素底物会被细胞摄取，并被荧光素酶催化产生荧光信号。
3.荧光信号测量：使用荧光酶标仪或者其他荧光测量设备对细胞培养物进行测量。
通过测量荧光强度，可以得到目标基因表达的水平。
4.数据分析：将荧光素酶1产生的荧光信号除以荧光素酶2产生的荧光信号，可以得到标准化后的目标基因表达水平。
根据实验需求，可以采用不同的统计方法和图表来分析和展示结果。
数据分析方法在双荧光素酶报告分析中，常用的数据分析方法包括以下几种：1.对照组和实验组比较：将实验组的荧光信号值与对照组进行比较，通过统计学方法（如t检验或方差分析）确定差异的显著性。
2.报告基因表达水平分析：比较不同实验条件下报告基因的表达水平，可以了解目标基因在不同条件下的变化趋势。
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双荧光素酶报告系统双荧光素酶报告基因测试∶ 结合萤火虫和海洋腔肠荧光素酶先进的共报告基因测试技术在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ,通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。
但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal,GUS)不够便利,因为各自的测试化学,处理要求,检测特点存在差异。
Promega提供一种先进的双报告基因技术,结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。
双荧光素酶报告基因测试系统,结合pRL载体系统,表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶,在单管中进行双荧光素酶报告基因测试,快速,灵敏,简便。
系统还提供PLB 裂解液,用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞,不需操作单个样品。
对于正在使用萤火虫荧光素酶报告基因载体的研究人员。
双荧光素酶报告基因测试系统将使他们立即体会到该系统的便利。
介绍双报告基因用于实验系统中作相关的或成比例的检测, 通常一个报告基因作为内对照, 使另一个报告基因的检测均一化。
检测基因表达时双报告基因通常用来瞬时转染培养细胞，带有实验报告基因的载体共转染带有不同的报告基因作为对照的第二个载体。
通常实验报告基因偶联到调控的启动子, 研究调控基因的结构和生理基础。
报告基因表达活力的相对改变与偶联调控启动子转录活力的改变相关，偶联到组成型启动子的第二个报告基因，提供转录活力的内对照, 使测试不被实验条件变化所干扰。
通过这种方法, 可减少内在的变化因素所削弱的实验准确性, 比如, 培养细胞的数目和活力的差别, 细胞转染和裂解的效率。
使用萤火虫荧光素酶,结合氯霉素乙酰转移酶(CAT), β-半乳糖苷酶(β-Gal), 或葡萄醛酸糖苷酶(GUS)的双报告基因,近几年已普遍使用。
但这些双报告基因组合削弱了荧光素酶操作的优势 , 比如荧光素酶测试和定量可在几秒钟内进行, 但CAT, β-Gal和GUS测试法, 则在定量前需要长时间的保温。
另外,这些报告基因受限于它们的灵敏度和线性应答范围, 必须注意不要超过这些范围, 内源性细胞活力也会干扰这类报告基因的使用。
许多类型的细胞有内源β-Gal或GUS表达, 不利于准确定量报告基因表达, 胞内去乙酰酶活力干扰CAT活力测试。
尽管在高温下预处理细胞裂解液(1,2), 会降低内源性β-Gal和CAT测试的干扰，但这些处理也会快速失活荧光素酶。
因此,在此类双报告基因检测中, 必须以不同的步骤分别处理共转染的细胞裂解液。
理想的双报告基因方法应该使用户能够以萤火虫荧光素酶所具有的速度,灵敏和线性范围对同一样品中的两个报告基因同时测定。
这在传统的报告基因, 如CAT, β-Gal和GUS是不可能的, 由于它们测试化学,处理要求所固有的局限。
相反 , 结合萤火虫 ( Photinus pyralis ) 和海洋腔肠 ( Renilla reniformis ) 双荧光素酶， Promega 的双荧光素酶报告基因测试 (DLR) 系统可满足这些要求，在单管中完成这些测试。
双荧光素酶报告基因测试化学荧火虫和海洋腔肠荧光素酶都具有生物发光报告基因的卓越的测试特点 , 但它们在进化上的起源不同 , 因此 , 具有不同的酶学结构和底物要求。
这些差别用来发展了 DLR 测试化学 , 选择性地区别这两种发光报告基因的活力。
萤火虫荧光素酶是一个 61kDa 单亚基蛋白质 , 酶活力不需翻译后修饰 (3,4), 在翻译后即可作为遗传报告基因。
在 ATP,Mg 2+ 和 O 2 存在下，通过甲虫荧光素的氧化反应发光 ( 图 1) 。
在常规反应条件下 , 荧光素的氧化发生时 , 以荧光素 -AMP 作为中间体 , 转换非常缓慢。
结果 , 在底物和酶混合后 , 测试化学产生"闪烁"的光 , 并迅速衰减。
专利化的测试试剂 , 定量萤火虫荧光素酶活力 , 掺入了辅酶 A(CoA), 增强快速酶转换来提高反应动力学 (5), 导致持续的"闪烁"发光信号 ( 图2) 。
图 1由萤火虫和Renilla荧光素酶催化的生物发光海洋腔肠荧光素酶，一个 36 kDa单亚基蛋白质，纯化自天然来源的Renilla reniformis(6)，含有3%的碳水化合物，但是和萤火虫荧光素酶一样，酶活力不需翻译后修饰，在翻译后即可作为遗传报告基因。
海洋腔肠荧光素酶所催化的发光反应，利用O 2 和海样腔肠荧光素(coelenterazine) (图1)。
当用DLR测试化学作实验时，海洋腔肠荧光素酶反应的动力学产生闪烁型发光信号，在检测过程中缓慢地衰减(图2)。
在 DLR测试系统中，用单个裂解液分步测定萤火虫和海洋腔肠荧光素酶活力。
在完成萤火虫荧光素酶活力("实验"报告基因)的测定后，萤火虫发光被快速湮灭，并同时激活海洋腔肠荧光素酶的发光反应("对照" 报告基因)。
因此，DLR测试系统整合了两个测试化学，对共表达的两个报告基因作快速地定量，酶来自转染细胞裂解液，或无细胞转录/翻译反应。
萤火虫荧光素酶测试的线性范围延伸达酶浓度的8个数量级，可测定≤1fg (大约10 -20 摩尔)的实验报告基因酶(图3A)。
用双荧光素酶报告基因测试系统，海洋腔肠荧光素酶的线性范围达酶浓度的7个数量级，较低的底限是≤ 10fg (大约3×10 -19 摩尔)的对照报告基因酶(图3B)，并且这两个酶的特异活力相似。
图 2 用双荧光素酶报告基因测试由萤火虫和Renilla荧光素酶产生的发光。
CHO细胞(1×10 6 /60mm培养板)共转染pGL3Control和pRL SV40载体DNA。
细胞用PBS洗涤后，加入400μl PLB制成裂解液。
将20μl 小量细胞裂解液和100μl荧光素酶测试试剂II(LARII)混合，萤火虫荧光素酶的活力立即用荧光照度仪检测(细线示踪)。
100μl Stop &Glo TM 试剂加入到荧光照度仪管中，湮灭萤火虫荧光素酶反应，同时激活Renilla荧光素酶反应，并立即检测Renilla荧光素酶的活力(粗线示踪)。
Turner Designs 型号20/20荧光照度仪配有计算机用来示踪荧光发射，12秒内完成两次测试。
双荧光素酶报告基因测试系统的方式定量两个报告基因荧光素酶的发光信号，可在制备裂解液后立刻进行，不需将样品分成小组分或作额外的处理。
因海洋腔肠和萤火虫荧光素酶均呈现闪烁型反应动力学，作双荧光素酶报告基因测试不需要有试剂注射器的荧光照度仪。
通常DLR测试，大约需要30秒钟完成，如图4所说明。
起始萤火虫荧光素酶报告基因测试时，将一份裂解产物和荧光素酶测试试剂II (LAR II)混合。
在完成萤火虫荧光素酶测试时，此时萤火虫发光被湮灭，同时激活海洋腔肠荧光素酶的发光，加入Stop & Glo TM 试剂到样品管。
在1秒钟内，Stop & Glo TM 试剂湮灭大于10 5 滴度萤火虫反应的发光信号(图5)，并同时激活海洋腔肠荧光素酶。
图 3 萤火虫荧光素酶和Renilla荧光素酶发光反应的线性范围。
纯化的萤火虫和Renilla荧光素酶连续地用含1mg/ml BSA的1×PLB稀释，配有计算机的Turner Designs荧光照度仪用来检测10秒钟的总荧光，在最初2秒的预读延迟后。
直接检测高浓度的两种荧光素酶的发光反应时，在荧光照度仪的样品室中加入中性密度滤光片。
在含10fg和100fg的Renilla荧光素酶反应中测试发光，需减去来自海洋腔肠荧光素自发光的背景信号。
两种荧光素酶的发光活力对各自的测试变化浓度作图。
图 4 用手工荧光照度仪或配有试剂加样器的荧光照度仪的双荧光素酶测试方式。
如荧光照度仪配有两个加样器，将裂解液预先分装到荧光照度仪的管子中，随后按序自动加入Luciferase Assay Reagent II (LAR II) , Stop & GloTM 试剂。
PLB裂解液PLB裂解液 (Passive Lysis Buffer)，经特别设计可有效裂解培养的哺乳细胞，而不必刮下贴壁细胞或作冻融循环。
尽管PLB设计应用于被动裂解过程中，但它可靠的裂解效果同样有益于使用常规处理方法制作的裂解液。
无论使用何种裂解方法，对培养的哺乳细胞而言，释放到PLB裂解液中的萤火虫和海洋腔肠荧光素酶报告基因酶是定量和可靠的 (图6)。
被动裂解液的一个明显优点，是可以抑制低水平的非酶促发光 (自发光)，这是海洋腔肠荧光素在水溶液中的固有特点。
通常用来制备细胞裂解液的试剂可增强海洋腔肠荧光素自发光，包括Triton? X-100, Promega的细胞培养裂解试?(CCLR) 和报告基因裂解试剂(RLB)，这些试剂还会显著抑制海洋腔肠荧光素酶的发光反应。
PLB经特别设计用来最大地增强荧光素酶活力，使自发光减弱到最低，可提供最优的测试灵敏度，定量很低水平的海洋腔肠荧光素酶。
另外，PLB抑制发泡，非常适合高通量应用，可用于自动化系统中将培养在多孔板中的细胞组制备成裂解液并测试。
图 5双荧光素酶报告基因测试系统湮灭萤火虫荧光素酶发光和激活Renilla荧光素酶发光。
CHO细胞裂解液有共转染pGL3 -Control和pRL SV40载体DNA，按图2描述的方法制备。
萤火虫荧光素酶(报告基因1) 和Renilla荧光素酶 (报告基因2) 活力检测在10秒内完成，最初有2秒的预读延迟。
为了显示Stop & Glo TM 试剂湮灭报告基因1的高效率，加入等体积的Stop & Glo TM 试剂 (缺少海洋腔肠荧光素无法激活Renilla荧光素酶反应)，萤火虫荧光素酶发光被湮灭而又不激活Renilla荧光素酶发光。
在这一实验中，湮灭萤火虫荧光素酶反应的残留发光，小于未湮灭反应值的0.0004%图 6 用PLB裂解哺乳细胞的高效率和被动或主动裂解方法。
用pGL3-Control 和pRL-SV40载体DNA共转染图示的培养哺乳细胞，制备裂解液时，向贴壁细胞加入PLB，温和摇动培养液达15分钟 (被动细胞裂解)，或从培养板中刮下贴壁细胞，在-80℃进行 1次冻/融循环(主动细胞裂解)。
萤火虫和Renilla荧光素酶活力用DLR方法确定，如图4所示。
为了便于比较，报告基因活力用主动裂解方法对每种细胞进行归一化。
图A：萤火虫荧光素酶报告基因活力。
图B：Renilla荧光素酶报告基因活力。
海洋腔肠荧光素酶对照载体 pRL系列设计的 pRL载体系列可在哺乳动物细胞中，组成型地表达海洋腔肠荧光素酶。
这些载体含有克隆自Renilla reniformis (7)海洋腔肠荧光素酶的cDNA (R luc )，在R luc基因中导入了3个碱基替换，消除了内Bgl II, Bam H I和Nar I 酶切位点，这些突变不造成海洋腔肠荧光素酶表达的氨基酸序列的改变。