生化实验室尿酸UA氧化酶法作业指导书
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生化实验室尿酸UA氧化酶法作业指导书
1、前言
试验名称:尿酸测定,英文名称:UA,方法:氧化酶法。本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室,目的是指导工作人员正确的在科华KHB-450全自动生化分析仪上测定血清、血浆、样本中的尿酸浓度,以保证测定结果的准确可靠。
尿酸是嘌呤、核酸的代谢产物,因此,尿酸水平异常可作为上述物质代谢异常的指征,高尿酸血症可见于:肾功能障碍、痛风、白血病、红细胞增多症、动肪粥样硬化、糖尿病、甲状腺机能减退、或其他遗传疾病,尿酸水平低可见于威乐逊氏病。
2、测定原理
本试验采用改良的Trinder氏方法,其反应原理:
尿酸+O2+H2O尿酸酶尿囊素+CO2+H2O2
H2O2+AAP+TBHBA过氧化物酶醌亚胺色素+H2O
上式中AAP为4-氨基安替比林
TBHBA为3-羟基-2,4,6三溴甲酸
在上述反应中,红色醌亚胺色素的生成量与样本中尿酸的浓度成正比,通过在520nm波长处测定吸光度的变化值,从而计算出尿酸的浓度,试剂中亚铁氰化钾可抑制样本中胆红素
的干扰。
3、试剂
试剂生产商:长海科华生物工程股份有限公司。
剂型:液体双试剂。
包装量:R1:4*40ml R2:4*20ml
注册号:沪食药监械(准)字2010第2400028号。
生产许可证号:沪药管械生产许20030916号。
基本成份:
试剂1:
过氧化物酶300u/l
3-羟基-2,4,6三溴甲酸 2.5mmol/l
亚铁氰化钾0.05mmol/l
磷酸盐缓冲液150mmol/l
4-氨基安替比林0.7mmol/l
含非反应性填充物及稳定剂
试剂2:
磷酸盐缓冲液150mmol/l
尿酸酶500u/l
储存条件和有效期:试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。启用后2―10℃可稳定14天,若试剂混浊,或空白在520nm 下吸光度值高于0.4A时,则不能使用。
4、标准品:使用试剂盒附带标准品
5、质控品:
生产商:英国Randox公司。
剂型:干粉试剂,用5ml去离子水复溶,完全溶解30分钟后使用。
保存条件:未溶解时2―8℃稳定至有效期,复溶后2―8℃稳定一周。
6、、样品要求:
样品采集前病人准备无特殊要求,空腹,用肝素锂抗凝管或促凝管常规方法肘静脉采血,血标本4000转离心3分钟,分离血清样本,应不溶血。
无污染血清样品室温可保存三天,冷冻保存可稳定6个月。样品拒收标准遵照《安阳鼎城医院标本收集管理制度》要求执行。
7、质控品分析要求:
每批分析需做高、低两个值。失控范围和失控后处理遵照《安阳151医院检验科室内质控操作规范》的规定设置。质控品分析操作见上述OLYMPUS AU640标准化操作规程。8、校准品分析要求
校准操作见上述标准化操作规程。
9、设备
设备生产商:上海科华公司公司
设备型号:AU-400
10、操作步骤:
见KHB-450全自动生化分析仪标准化操作规程第四节
12、计算方法
尿酸浓度(mmol/l)=样本管吸光度/校准管吸光度*校准液浓度(mmol/l)。
13、技术参数:
可测定范围:0--4720umol/l
试剂空白起始吸光度:≦0.30A (520nm 37℃)。
相对偏差:≦±10%
批内精密度:CV%≦6%
批间精密度:相对极差(%)≦6%
14、参考范围:
男性:208-428umol/l
女性:155-357umol/l
15、报告方式:umol/l
16、注意事项:
a、当样品中尿酸浓度大于900umol/l时,可用生理盐水稀释,计算结果时乘以稀释倍数。
b、反应颜色可稳定15分钟。
c、试剂中含有防腐剂和稳定剂,可能存在一定的刺激作用或毒性,请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触,即用大量清水清洗。请勿吞服。
17、替代方法:如因特殊情况本试验不能正常工作,在征得患者同意后在安阳地区医院用同样方法测定。