荧光分光光度计的自学--熊世威201111002005

• 不同物质由于分子结构的不同,其激发态能 级的分布具有各自不同的特征，这种特征 反映在荧光上表现为各种物质都有其特征 荧光激发和发射光谱；，因此可以用荧光 激发和发射光谱的不同来定性地进行物质 的鉴定。 • 在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧 光强度与该物质的浓度通常有良好的正比 关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光 物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类 似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
荧光分光光度计的特点
1、具有荧光测试光门自动启动功能 2、具有测试数据，自动打印功能。 3、检测灵敏度高，测量范围宽。 4、可连接微机工作站，扩展分析测试功能。 5、自动曲线回归。
荧光分光光度计的功能Baidu Nhomakorabea
1、波长扫描 波长扫描功能主要包括荧光强度和发光强度两种 数据模式。通过荧光强度数据模式可以得到样品 的激发光谱和荧光光谱，是一种比较常用的方法。 2、时间扫描 时间扫描是在规定的时间间隔内采集被测样品的 荧光强度随时间变化曲线。可以用来监测被测样 品的物理化学变化，动力学法可被执行。
荧光分光光度计的应用
• 1.医学和临床检验———生物体试料的临床分析 • 2.药学和药理学———天然药物分析，药品质量 控制和药物代谢的研究 • 3.生物化学———对于生物体内微量物质的测定 • 4.食品工业———食品中痕量组分的测定 • 5.污染物的分析———大气污染、环境卫生检测， 食品污染物研究等 • 6.有机和无机化学———用吸光光度法不能测定 的痕量组分分析
3、光度值法 使用波长法进行定量，高达20个标准样品能被测 量，通过标准浓度的每个点来绘制多边形标准曲 线，回归标准曲线的制备可使用一次、二次、三 次方的曲线或折线，同时可获得其相关系数R及 R2。 4、三维扫描 可以得到三维图、等高线图，快速进行未知样品 荧光峰位的测定。 5、强大的图谱处理功能 两个谱图可进行加、减、乘、除运算，也可以计 算谱图面积；具有光谱校正和快门控制等。
荧光分光光度计的技术参数
• • • • • • • • • • • • 1.光源: 150W 氙灯 2.波长范围:200nm-900nm 3.灵敏度：S/N>500(峰对峰) 4.光栅: 1200grooves/250nm blazing 5.波长扫描速度: 最大5000nm/min 6.波长驱动器速度:10,000 nm/min 7.波长精确度:+ 2 nm 8.波长重复性:+ 2 nm 9.狭缝宽度: 1，2，5，10，20 nm 10.尺寸: 518mm(W)×604mm(D)×272mm(H) 11.重量: 43.7kg 12.电源: 100~132V 50/60 Hz或者180~240V 50/60 Hz （可选）
（5）检测器 一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将 光信号放大并转为电信号。 （6）显示装置 • 以前，显示装置有数字电压表，记录仪和 阴极示波器等，现在，人们可以通过计算 机软硬件技术根据不同要求，来选择不同 的直观的视频读出方式。
荧光分光光度计的发展历程
• 荧光分光光度计的发展经历了手控式荧光 分光光度计，自动记录式荧光分光光度计， 计算机控制式荧光分光光度计三个阶段； 荧光分光光度计还可分为单光束式荧光分 光光度计和双光束式荧光分光光度计两大 系列。其他的还有低温激光Shpol’skill荧光 分光光度计，配有寿命和相分辩测定的荧 光分光光度计等。
荧光分光光度计基本原理
• 由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光 片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出 荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所 接受，然后以图或数字的形式显示出来。 物质荧 光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子 吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子 是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量 又以光的形式放出，从而产生荧光．
荧光分光光度计结构
（1）光源 为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出 强度较大的连续光谱，且在300nm～ 400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。 （2）激发单色器 置于光源和样品室之间的为激发单色器或第 一单色器，筛选出特定的激发光谱。
（3）发射单色器 置于样品室和检测器之间的为发射单色 器或第二单色器，常采用光栅为单色器。 筛选出特定的发射光谱。 （4）样品室 通常由石英池(液体样品用)或固体样品 架(粉末或片状样品)组成。测量液体时，光 源与检测器成直角安排；测量固体时，光 源与检测器成锐角安排。
仪器分析作业（二）
荧光分光光度计自学
专业：生态学 姓名：熊世威 学号：201111002005
荧光分光光度计的百科解释
• 荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发 出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光 谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿 命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了 分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定, 不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子 在各种环境下的构象变化, 从而阐明分子结构与功 能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描 范围一般是190~650nm，发射波长扫描范围是 200~800nm。可用于液体、固体样品（如凝胶条） 的光谱扫描。