1、基因工程及主要研究内容
基因工程课题研究方案范文
基因工程课题研究方案范文一、课题背景随着生物技术的快速发展，基因工程已经成为生物学、医学、农业和工业等领域的一个重要工具。
基因工程的研究和应用已经取得了许多成果，但仍然存在许多挑战和难题需要解决。
本课题旨在利用基因工程技术，研究和解决一些亟待解决的生物学和医学问题，推动基因工程在生物学和医学领域的应用和发展。
二、课题目的本课题的主要目的是研究和解决一些重要的生物学和医学问题，推动基因工程在生物学和医学领域的应用和发展。
具体包括以下几个方面：1. 利用基因工程技术，研究和解决一些基因突变引起的疾病问题，提高疾病的诊断和治疗效果。
2. 利用基因工程技术，研究和解决一些重要的生物学问题，推动生物科学的发展。
3. 探索新的基因工程技术和方法，推动基因工程技术的创新和发展。
三、课题内容本课题的具体研究内容包括以下几个方面：1. 利用 CRISPR/Cas9 基因编辑技术，研究和解决一些基因突变引起的疾病问题。
通过基因编辑技术修复受损基因，提高疾病的诊断和治疗效果。
2. 利用基因工程技术，研究和解决一些重要的生物学问题，如基因调控、信号传导和细胞分化等。
推动生物科学的发展。
3. 探索新的基因工程技术和方法，如基因组编辑、合成生物学和纳米生物技术等。
推动基因工程技术的创新和发展。
四、研究方法本课题的研究方法主要包括以下几个方面：1. 利用 CRISPR/Cas9 基因编辑技术，对基因突变进行精准修复。
首先设计合适的 sgRNA，然后利用 Cas9 蛋白识别并切割靶基因，最后通过修复模板对靶基因进行修复。
2. 利用转基因技术构建基因编辑材料，如质粒、病毒、纳米粒子等，实现基因编辑技术的高效传递和表达。
3. 利用全基因组测序技术和高通量数据分析技术，研究和解决一些重要的生物学问题。
通过分析大规模基因组数据，揭示生物学过程的规律和机制。
4. 利用合成生物学技术构建新的生物体系，如合成细胞、人造酶等，实现生物学合成和改造。
《生物技术概论》1基因工程
二、目的DNA片段的获得
（三）DNA片段的化学合成 1.合成引物 2.合成DNA寡核苷酸连杆 3.合成基因片段
第二节 DNA重组
三、DNA片段的连接
（一）DNA连接酶 （二）DNA片段之间的连接 1. 互补黏性末端片段之间的连接 2.平末端DNA片段之间的连接 3.DNA片段末端修饰后进行连接 4. DNA片段加连杆或衔接头后连接
（六）基因可以通过复制把遗传信息传递给下 一代
第一节 基因工程概述
三、基因工程操作的基本技术路线
第一节 基因工程概述
四、基因工程研究最突出的优点
打破了常规育种难以突破的物种之间的界限， 可以使原核生物与真核生物之间、动物与植物 之间，甚至人与其他生物之间的遗传信息进行 相互重组和转移。人的基因可以转移到大肠杆 菌（E.coli）中表达，细菌的基因可以转移到动 植物中表达。
第二章 基因工程
第一节 基因工程概述
一、基因工程的含义
按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外 DNA重组和转移等技术，有目的地改造生物种 性，使现有物种在较短的时间内趋于完善，创 造出新的生物类型，这就是基因工程的基本含 义。
第一节 基因工程概述
二、基因工程研究的理论依据
（一）不同基因具有相同的物质基础 （二）基因是可以切割的 （三）基因是可以转移的 （四）多肽与基因之间存在对应关系 （五）遗传密码是通用的
质粒基因组、病毒（噬菌体）基因组、线粒体 基因组和叶绿体基因组也有少量的基因
第四节 目的基因的制备
二、分离目的基因的途径
（一）利用限制性内切核酸酶酶切法直接分离 目的基因
吴乃虎—基因工程原理
目录第一章基因与基因工程第一节基因研究的发展第二节基因的现代概念第三节基因工程的诞生及其主要的研究内容第二章基因操作的主要技术原理第一节核酸的凝胶电泳第二节核酸分子杂交第三节细菌转化1.肺炎球菌的转化2.大肠杆菌的转化3.细菌转化频率第四节DNA核苷酸序列分析第五节基因的化学合成第六节基因定点突变第七节基因扩增第八节研究DNA与蛋白质相互作用的方法第三章基因克隆的酶学基础第一节核酸内切限制酶与DNA分子的体外切割1.寄主控制的限制与修饰现象2.核酸内切限制酶的类型3.I 型和III型核酸内切限制酶的基本特性4.II型核酸内切限制酶的基本特性[1].基本特性[2].同裂酶[3].同尾酶[4].限制片段末端的连接作用5.核酸内切限制酶的命名法6.影响核酸内切限制酶活性的因素[1].DNA的纯度[2].DNA的甲基化程度[3].酶切消化反应的温度[4].DNA分子的结构[5].核酸内切限制酶的缓冲液7.核酸内切限制酶对DNA的消化作用[1].核酸内切限制酶与靶DNA识别序列的结合模式[2].核酸内切限制酶对DNA分子的局部消化作用[3].核酸内切限制酶对真核基因组DNA的消化作用第二节DNA连接酶与DNA分子的体外连接1.DNA连接酶2.粘性末端DNA片段的连接3.平末端DNA片段的连接[1].同聚物加尾法[2].衔接物连接法[3].DNA接头连接法4.热稳定的DNA连接酶[1].寡核苷酸连接测定法[2].连接酶链式反应(LCR)第三节DNA聚合酶1.DNA聚合酶I与核酸杂交探针的制备[1].DNA聚合酶I[2].DNA缺口转移[3].DNA杂交探针的制备2.大肠杆菌DNA聚合酶I 的Klenow片段与DNA末端标记3.T4 DNA聚合酶和取代合成法标记DNA片段4.依赖于RNA的DNA聚合酶与互补DNA的合成5.T7 DNA聚合酶6.修饰的T7 DNA聚合酶第四节DNA及RNA的修饰酶1.末端脱氧核苷酸转移酶与同聚物加尾2.T4多核苷酸激酶与DNA分子5’-末端的标记3.碱性磷酸酶与DNA脱磷酸作用第五节核酸外切酶1.核酸外切酶VII (exo VII)2.核酸外切酶III (exo III)3.λ核酸外切酶(λ exo)和T7基因6核酸外切酶第六节单链核酸内切酶1.S1核酸酶与RNA分子定位2.Bal1 核酸酶与限制位点的确定第四章基因克隆的质粒载体第一节质粒的一般生物学特性1.质粒DNA2.质粒DNA编码的表型3.质粒DNA的转移[1].质粒的类型[2].F质粒[3].质粒DNA的接合作用4.质粒DNA的迁移作用5.质粒DNA的复制类型6.质粒DNA的不亲和性[1].质粒的不亲和性现象[2].质粒不亲和性的分子基础7.第二节质粒DNA的复制与拷贝数的控制1.质粒DNA复制的多样性2.ColE 1质粒DNA复制的启动3.质粒DNA拷贝数的控制[1].天然质粒拷贝数的控制[2].杂种质粒拷贝数的控制4.质粒复制控制的分子模型[1].抑制蛋白质稀释模型[2].自体阻遏蛋白质模型5.第三节质粒DNA的分离与纯化1.氯化铯密度梯度离心2.碱变性法3.微量碱变性法4.影响质粒DNA产量的因素[1].寄主菌株的遗传背景[2].质粒的拷贝数与分子大小5.第四节质粒载体的构建与类型1.天然质粒用作克隆载体的局限性2.质粒载体必须具备的基本条件3.质粒载体的选择记号[1].高拷贝数的质粒载体[2].低拷贝数的质粒载体[3].失控的质粒载体[4].插入失活型的质粒载体[5].正选择的质粒载体[6].表达型的质粒载体4.第五节重要的大肠杆菌质粒载体1.pSC101 质粒载体[1].应用pSC101 质粒作基因克隆载体的实例一---葡萄球菌质粒基因在大肠杆菌中的表达[2].应用pSC101 质粒作基因克隆载体的实例二---在大肠杆菌中克隆非洲爪蟾2.Col 1质粒载体3.pBR322质粒载体[1].pBR322质粒载体的构建[2].pBR322质粒载体的优点[3].pBR322质粒载体的改良[4].应用pBR322质粒作为基因克隆载体的实例---水稻夜绿体光诱导基因psbA的结构分析4.pUC 质粒载体[1].pUC 质粒载体的结构[2].pUC 质粒载体的优点5.其他重要的质粒载体[1].丧失迁移功能的的质粒载体[2].能在体外转录克隆基因的质粒载体[3].穿梭质粒载体第六节质粒载体的稳定性问题1.质粒载体不稳定性的类型[1].结构的不稳定性[2].分离的不稳定性2.影响质粒载体稳定性的主要因素[1].新陈代谢负荷对质粒载体稳定性的效应[2].拷贝数差度对质粒载体稳定性的影响[3].寄主重组体系对质粒载体稳定性的效应3.随机分配的分子机理[1].通过精巧的控制环路使质粒拷贝数的差度限制在最低的水平[2].通过位点特异的重组作用消除天然质粒的寡聚体[3].通过调节细胞的分裂活动阻止无质粒细胞的产生[4].大肠杆菌素的合成增进了质粒的稳定性4.主动分配的分子机理[1].分配区的结构与功能[2].预配对模型[3].二聚体的解离有助于质粒的主动分配[4].寄主致死功能对质粒稳定性的效应5.第五章噬菌体载体和柯斯载体第一节噬菌体的一般生物学特性第二节λ噬菌体载体第三节柯斯质粒载体第四节单链DNA噬菌体载体第五节噬菌体载体第六章基因的分离与鉴定第一节DNA克隆片段的产生与分离1.基因组DNA克隆片段的产生与分离2.DNA片段的大小分部3.编码目的基因的克隆片段的富集第二节重组体DNA分子的构建及导入受体细胞1.外源DNA片段同载体分子的重组[1].外源DNA片段定向插入载体分子[2].非互补粘性末端DNA分子间的连接[3].最佳连接反应2.重组体分子导入受体细胞的途径[1].重组体DNA分子的转化或转染[2].体外包装的λ噬菌体的转导第三节基因克隆的实验方案1.互补作用基因克隆2.cDNA基因克隆[1].cDNA文库的建立[2].不同丰度mRNA的cDNA克隆[3].全长cDNA的合成[4].cDNA克隆的优越性3.基因组DNA克隆[1].应用 噬菌体载体构建基因组文库[2].应用柯斯质粒载体构建基因组文库4.基因定位克隆[1].拟南芥菜简介[2].RFLP分子标记[3].RFLP作图的原理与步骤[4].染色体步移[5].大尺度基因组物理图谱的构建第四节克隆基因的分离1.应用核酸探针分离克隆的目的基因[1].核酸探针的来源[2].寡核酸探针的的人工合成[3].假阳性克隆的克服2.应用差别杂交或扣除杂交法分离克隆的目的基因[1].差别杂交[2].差别杂交的局限性[3].扣除杂交3.应用mRNA差别显示技术分离克隆的目的基因[1].mRNA差别显示的原理[2].mRNA差别显示的基本过程[3].mRNA差别显示的局限性4.引用表达文库分离克隆的目的基因5.酵母双杂交体系[1].酵母双杂交体系的基本原理[2].酵母双杂交体系的寄主菌株[3].酵母双杂交体系的实验程序第五节重组体分子的选择与鉴定1.遗传检测法[1].根据载体表型特征选择重组体分子的直接选择法[2].根据插入序列的表型特征选择重组体分子的直接选择法2.物理检测法[1].凝胶电泳检测法[2].R-检测环法3.菌落或噬菌斑杂交筛选法4.免疫化学检测法[1].放射性抗体检测法[2].免疫沉淀检测法[3].表达载体产物之免疫化学检测法5.DNA蛋白筛选法6.转译筛选法[1].杂交抑制的转译[2].杂交选择的转译第七章基因的表达与调节第八章真核基因在大肠杆菌中的表达第一节真核基因的大肠杆菌表达体系第二节大肠杆菌的表达载体第三节克隆的真核基因在大肠杆菌中的表达第四节影响克隆基因在大肠杆菌中表达效率的因素第九章植物基因工程第十章哺乳动物基因工程第一节哺乳动物基因转移的遗传选择标记第二节外源DNA导入哺乳动物细胞的方法第三节SV 40病毒载体第四节反转录病毒载体第五节其他的病毒载体第十一章重组DNA与现代生物技术第十二章重组DNA与医学研究第一章基因与基因工程第一节基因研究的发展第二节基因的现代概念第三节基因工程的诞生及其主要的研究内容1.质的新组合，并使之参与到原先没有这类分子的寄主细胞内，而能够持续稳定的繁殖。
第一章 基因工程概述
或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。
因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基
本元件。
基因工程的基本概念
B 基因工程的基本定义
基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，
包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的
是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技
术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模
酶工程
基因工程的基本概念
D 基因工程的基本形式
第一代基因工程 蛋白多肽基因的高效表达 经典基因工程 第二代基因工程 蛋白编码基因的定向诱变 蛋白质工程
第三代基因工程 代谢信息途径的修饰重构 途径工程
第四代基因工程 基因组或染色体的转移
基因组工程
第二节 基因工程的诞生和发展
一、基因
泛基因阶段
孟德尔遗传因子阶段
（如胰岛素）、干扰素、乙肝疫苗等 研制新型疫苗（HIV、霍乱、单纯疱疹病毒等）
生产具有药用价值的生物制剂，如水蛭素等
3. 基因诊断
– 遗传性疾病的分子诊断
– 癌症的分子诊断 – DNA指纹
4. 基因治疗
是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异 常引起的疾病，以达到治疗目的。
3．断裂基因
1个基因被间隔区分成不连续的若干区段，这种编码序列不连续的间断基因被称为 断裂基因。
4．假基因
不能合成出功能蛋白质的失活基因 。
5．重叠基因
不同基因的核苷酸序列有时是可以共用的 即重叠的。
现代对基因的定义是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列， 是遗传物质的最小功能单位。
二、 基因工程的诞生
顺反子阶段
1957 年，本泽尔（Seymour Benzer）以T4噬菌 体为材料，在DNA分子水平上研究基因内部的精细结 构，提出了顺反子（cistron）概念。 顺反子是1个遗传功能单位，1个顺反子决定 1条多肽链。
简述生物技术涉及的五大工程及其研究内容
简述生物技术涉及的五大工程及其研究内容一、基因工程基因工程，又称为遗传工程，是利用分子生物学技术，对生物体的遗传物质进行操作和改造，以达到定向改变生物性状和性能的目的。
基因工程的研究内容包括基因克隆与表达、基因突变与功能研究、基因组编辑等。
基因工程在农业、医药、工业等领域有着广泛的应用，如转基因作物、基因治疗、生物制药等。
二、细胞工程细胞工程是指利用细胞生物学和分子生物学技术，对细胞进行培养、改造和繁殖，以获得具有特定性状的细胞或组织。
细胞工程的研究内容包括细胞培养与繁殖、细胞分化与发育、细胞融合与基因转移等。
细胞工程在农业、医学、环保等领域有广泛的应用，如组织工程、干细胞治疗、胚胎工程等。
三、酶工程酶工程是利用酶学和生物化学技术，对酶进行分离、纯化、改造和大规模生产，以获得具有特定催化性能的酶。
酶工程的研究内容包括酶的分离与纯化、酶的改造与定向进化、酶的生产与应用等。
酶工程在工业、医药、环保等领域有广泛的应用，如生物传感器、生物催化、环保治理等。
四、发酵工程发酵工程是指利用微生物的代谢特点和反应机制，通过大规模培养和控制发酵条件，生产出具有特定性能的代谢产物。
发酵工程的研究内容包括微生物的代谢调控、发酵过程优化、发酵产物分离纯化等。
发酵工程在食品、饮料、化工、医药等领域有广泛的应用，如酒精制造、抗生素生产等。
五、蛋白质工程蛋白质工程是指利用分子生物学技术，对蛋白质进行设计和改造，以达到改变蛋白质的性状和性能的目的。
蛋白质工程的研究内容包括蛋白质结构与功能分析、蛋白质设计与合成、蛋白质修饰与改造等。
蛋白质工程在医药、农业、工业等领域有广泛的应用，如抗体药物研发、酶制剂生产等。
总结：生物技术涉及的五大工程各有其独特的研究内容和应用领域，但它们之间也存在相互联系和交叉。
基因工程和细胞工程是其他三大工程的基础，酶工程和发酵工程则分别涉及到生物催化和大规模培养技术，而蛋白质工程则更侧重于蛋白质的设计和改造。
《基因工程》实验教学教案
《基因工程》实验教学教案一、实验背景基因工程是一门应用生物学的分支，通过对基因的操作和重组，实现对生物性状的改良和功能的研究。
本实验教学旨在让学生了解基因工程的基本原理，掌握基因克隆、表达和检测的方法，培养学生动手实践能力和创新思维。
二、实验目标1. 了解基因工程的基本原理及实验步骤；2. 掌握PCR扩增、DNA提取、酶切、连接、转化等实验技术；3. 学会分析实验结果，提高学生解决实际问题的能力；4. 培养学生团队合作精神和创新思维。
三、实验内容1. 基因克隆：利用PCR扩增目的基因，并进行酶切、连接，将目的基因插入到载体中；2. 基因转化：将重组载体导入受体细胞，筛选转化成功的细胞；3. 基因表达：对转化成功的细胞进行诱导表达，检测目的蛋白的表达情况；4. 实验结果分析：分析实验数据，探讨实验过程中可能存在的问题，并提出改进措施；四、实验材料与仪器1. 材料：大肠杆菌、质粒、PCR试剂、酶切酶、连接酶等；2. 仪器：PCR仪器、电泳仪、离心机、恒温培养箱、显微镜等。
五、实验步骤1. 实验前的准备工作：了解实验原理，阅读相关文献，准备实验材料和仪器；2. 基因克隆：设计引物，进行PCR扩增，酶切目的基因和载体，连接目的基因与载体，转化大肠杆菌；3. 基因转化：将重组载体导入受体细胞，筛选转化成功的细胞；4. 基因表达：对转化成功的细胞进行诱导表达，检测目的蛋白的表达情况；5. 实验结果分析：分析实验数据，探讨实验过程中可能存在的问题，并提出改进措施；注意事项：1. 严格遵循实验步骤和操作规范，确保实验安全；2. 实验过程中遇到问题，及时与教师沟通，寻求帮助；3. 注重团队合作，共同完成实验任务。
六、实验教学安排1. 理论讲解：2课时2. 实验操作：4课时3. 实验结果分析与讨论：2课时七、实验评价1. 实验操作的正确性和熟练程度；2. 实验结果的准确性及分析的深度；4. 团队合作与沟通能力的展现。
基因工程研究内容
基因工程研究内容介绍基因工程是现代生物科学中重要的一个领域，它研究的是通过改变生物体的基因来改变其性状和特性。
基因工程为人类提供了解决各种生物问题的新途径，包括治疗疾病、增加农作物产量、改善动物品种等。
本文将详细探讨基因工程的研究内容。
基因工程的基础知识DNA和基因的结构•DNA是一个双螺旋结构的分子，由四种碱基（腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶）组成。
•基因是DNA上的一个特定片段，它携带着特定的遗传信息。
重组DNA技术•重组DNA技术是基因工程的核心技术之一，它可以将不同生物体的DNA片段组合在一起，形成新的DNA分子。
•重组DNA技术包括DNA切割、DNA连接和DNA复制等步骤。
基因工程在不同领域的应用生物医学领域基因治疗•基因治疗是利用基因工程技术治疗疾病的一种方法。
它通过将正常的基因导入患者的细胞中，修复或替代有缺陷的基因，从而治疗疾病。
•基因治疗有望用于治疗遗传性疾病、癌症和传染性疾病等。
生物药物的生产•基因工程可以用于生产各种重要的生物药物，例如人类胰岛素、生长因子和抗体等。
通过将目标基因导入微生物或细胞中，使其具备生产相关药物的能力。
农业领域转基因农作物•基因工程可以用于改良农作物，增加其产量和抗病性。
通过导入抗虫、抗病、耐旱等相关基因，使农作物具备更好的生长特性。
•转基因农作物包括转基因玉米、大豆、棉花等。
动物领域动物基因改良•基因工程可以用于改良动物品种，改善其产量和质量。
通过导入生长速度更快、抗病能力更强等相关基因，改良畜禽动物的性状。
基因克隆•基因工程可以用于动物的克隆，如克隆羊“多莉”。
通过将目标动物的DNA 导入到受体动物的卵细胞中，再将克隆胚胎移植到母体中，实现动物的基因克隆。
基因工程的伦理问题基因工程作为一项具有重要意义的技术，也面临着一些伦理问题。
1. 遗传信息的隐私保护 2. 基因歧视和不平等问题 3. 对自然生态系统的影响 4. 人类与自然界的关系重新定义结论基因工程凭借其独特的优势和广阔的应用前景，正日益成为生物科学研究的热点领域。
生物技术定义及研究内容
生物技术定义及研究内容生物技术是指利用生命科学基础理论、原理与技术手段，通过对生物体、生物质及其体内成分的管理、研究、开发和应用而形成的一种交叉学科。
生物技术是现代生命科学与工程技术的融合产物，其研究内容涵盖了生物体、生物控制、生物经济、生物制造等多个方面。
主要包括以下几个研究内容：一、基因工程技术：基因工程技术是生物技术研究的核心内容之一。
通过插入、删除或修改生物体基因组中的特定基因，使生物体具备特定的遗传特征，具有广泛的应用前景。
基因工程技术已经被应用于农业、医药、工业等领域，例如转基因作物的培育、基因治疗等。
二、细胞工程技术：细胞工程技术是通过对细胞的生长、分化、增殖、分裂等生物学行为的研究，控制和调控细胞的结构和功能。
细胞工程技术已经应用于组织工程、干细胞研究、再生医学等领域，为解决生物医学问题提供了新的思路和方法。
三、蛋白质工程技术：蛋白质工程技术是研究和开发蛋白质的结构、功能及其相互作用等方面的技术手段。
通过合成、改造和修饰蛋白质分子，可以使其具备特定的功能和应用价值。
蛋白质工程技术已在医药、食品、能源等领域得到广泛应用，如抗体药物的开发、酶的改良等。
四、生物传感技术：生物传感技术是通过对生物体内外信息的感知、传递和处理，实现对生物过程的监测和控制的技术手段。
生物传感技术已被广泛应用于环境监测、医学诊断、食品安全等领域，例如生物传感器的开发、基因芯片的应用等。
五、生物能源技术：生物能源技术是利用生物质作为原料，通过生物转化和相关工程技术，生产可再生的能源。
生物能源技术包括生物柴油、生物乙醇、生物气体等多个方面，已成为解决能源需求和环境问题的重要途径。
在以上研究内容的基础上，生物技术还涉及到生物信息学、生物材料学、生物药学等多个学科的交叉与应用。
同时，生物技术的发展也引发了一系列的伦理、法律、安全等问题，需要与社会、政策、环境等多个领域的专业人士密切合作，以推动生物技术的安全、可持续发展。
基因工程研究的主要内容
基因工程研究的主要内容
基因工程研究的主要内容包括基因定位、基因克隆、基因表达调控、基因编辑、基因治疗等方面。
其中，基因定位是指确定基因在染色体上的位置，主要运用PCR、SNP等技术；基因克隆是指将目标基因从DNA中扩增出来，常用的方法有限制性酶切、PCR、基因文库筛选等；基因表达调控是指通过调节基因的转录和翻译过程来控制基因的表达，主要包括启动子调控、转录因子介导的调控等；基因编辑是指利用CRISPR-Cas9等技术对基因进行精准编辑，可用于基因疾病的治疗和基因改良等方面；基因治疗是指通过改变受体基因或递送基因药物治疗某些疾病，如基因修复、基因敲除等。
- 1 -。
基因工程的基本概念2基因工程的诞生3基因工程的研究内容4基因
Boyer-
Cohen 实验
3 基因工程的研究内容
1 ）目的基因的获取
从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或 PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的 DNA片断。
2 ）重组体的制备
将目的基因的DNA片断插入到能自我复制 并带有选择性标记（抗生素抗性）的载体 分子上。
3 ）重组体的转化 将重组体（载体）转入适当的受体细胞中。
7 ）DNA测序技术
1975年F. Sanger、A. Maxam和W. Gilbert发明 了DNA快速测序技术。
C 基因工程的诞生
1 ）Berg的开创性实验
1972年斯坦福大学的Paul Berg小组完成 了首次体外重组实验：
将SV40的DNA片断与噬菌体的 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱNA片断连接起来。
2 ）Boyer-Cohen实验
Werner Arber Hamilton O. Smith Daniel Nathans 理论预见限制酶 得到第一个限制酶 用限制酶切得
SV40 DNA片断
2 ) DNA连接酶（ligase）
1967年5个实验室几乎同时发现了DNA连接酶 。
3 ) 载体（vector）
1972年前后使用小分子量的细菌质粒和噬菌 体作载体。在细菌细胞里的大量扩增。
1 基因工程的基本概念
A 重组DNA技术的基本定义
• 重组DNA技术是指将一种生物体（供体）的基
因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种 生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗 传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序 ，也称为分子克隆技术。
• 因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三 大基本元件。
➢1982年,首次批准重组动物疫苗----抗球虫 病疫苗.
基因工程知识要点
名词解释:一：绪论1.基因工程:（1）狭义：基因工程是指将一种或多种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿遗传并表达出新的性状。
（2）广义：基因工程为DNA重组技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。
（上游技术：狭义的基因工程；下游技术则涉及含有重组外源基因的生物细胞（基因工程菌或细胞）的大规模培养以及外源基因表达产物的分离纯化过程。
广义基因更倾向于工程学的范畴）2.遗传工程:基因工程原称遗传工程3.克隆:二：第一章：4.限制性核酸内切酶:指能在特异位点上催化双链DNA分子的断裂，产生相应的限制性片段。
5.回文结构:多数Ⅱ类酶识别序列为4、5或6个碱基对，而且具有180度旋转对称的回文结构。
6.同尾酶:有些酶的识别位点不同，但切出的DNA片段具有相同的末端序列，这些酶称为同尾酶。
7.同裂酶:识别位点和切割位点均相同的不同来源地酶称为同裂酶8.粘性末端:任何一种Ⅱ酶产生道德两个突出末端在足够低的温度下均可退火互补，因此这种末端称为粘性末端。
9.平末端:10.限制性核酸内切酶的酶活性单位(U):11.限制性核酸内切酶的星活性:12.连杆(linker):13.衔接头(adaptor):问答：一：绪论1.举例说明基因工程发展中的三个大事件：2.开展基因工程的理论基础:3.基因工程研究的主要内容是什么：二：第一章4.限制性核酸内切酶反应的体系组成是什么:5.引起限制性核酸内切酶的星活性的因素有哪些：6.DNA片段之间的连接方式有哪些？7.DNA聚合酶，RNA聚合酶，反转录酶，末端转移酶，多核苷酸激酶，碱性核酸酯酶，有哪些主要特性，他们在基因工程中的主要特性是什么：。
基因工程的概念和主要内容
(6)基因可通过复制把遗传信息传递给下一代：经重组的基因一般来说是能传代的
3.2 基因工程的主要内容
与宏观的工程一样，基因工程 的操作也需要经过“切”、“接”、 “检查”等过程，只是各种操作的工 具不同，被操作的对象是肉眼难以直 接观察的核酸分子。
Hale Waihona Puke 基 因 工 程 的 操 作 过 程
• 基因工程研究的理论依据
(1)不同基因具有相同的物质基础:具有遗传功能的特定核苷酸序列的DNA片段 (2)基因是可切割的：大多数基因彼此之间存在着间隔序列 (3)基因是可以转移的：基因可在不同生物之间转移，或在染色体DNA上移动
(4)多肽与基因之间存在对应关系：普遍认为，一种多肽就有一种相应的基因 (5)遗传密码是通用的：一系列三联密码子同氨基酸之间的对应关系，在所有生物中都
• • • • • •
一、基因研究的发展过程 二、DNA的组成、结构和功能 三、基因工程的概念及主要内容 四、工具酶和基因载体 五、基因工程的基本技术 六、基因工程在食品产业中的应用
三、基因工程的概念及主要内容
3.1 基因工程的概念 3.2 基因工程的主要内容
3.1 基因工程的概念
基因工程也就是DNA重组技术，是用人工的方法 把不同生物的遗传物质（基因）分离出来，在体外进 行剪切、拼接、重组，形成重组体，然后再把重组体 引入宿主细胞中得以高效表达，最终获得人们所需要 的基因产物。
生物工程概论复习提纲
五大工程的定义、研究内容。
1.基因工程：在基因水平上操作并改变生物遗传特性的技术。
即按照人们的需要，用类似工程设计的方法将不同来源的DNA分子在体外构建成重组DNA分子，然后导入受体细胞，并在受体细胞内复制、转录和表达。
2.细胞工程：以细胞为基本单位，在体外条件下进行培养、繁殖或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意愿发生改变，达到改良生物品种和创造新品种的目的，从而加速繁育动植物个体，或获得某种有用物质。
3.蛋白质工程：以蛋白质结构和功能的研究为基础，运用遗传工程的方法，借助计算机信息处理技术，从改变和合成基因入手，定向改造天然蛋白质或设计全新的蛋白质，使之具有特定的结构、性质和功能，更好地为人类服务。
4.发酵工程：利用包括工程微生物在内的某些微生物或动、植物细胞及其特定功能，通过现代工程技术手段生产各种特定的有用物质；或者把微生物直接用于某些工业化生产。
5.酶工程：利用酶、细胞器或细胞所具有的特异催化功能，以及对酶的修饰改造，借助于生物反应器，生产人类所需产品。
基因工程研究的理论依据是什么？1.不同基因具有相同的物质基础；2.基因是可以切割的；3.基因是可以转移的；4.多肽与基因之间存在对应关系；5.遗传密码是通用的；6.基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代。
基因工程的工具酶有哪些？其作用是什么？1.限制性核酸内切酶，一类识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核苷酸内切酶；2.DNA连接酶，催化双链DNA片段紧靠在一起的3'-OH与5'-P基团之间形成磷酸二酯键，连接两末端的酶；3.DNA聚合酶，能够催化DNA复制和修复DNA分子损伤的一类酶；4.碱性磷酸酶，用于脱去DNA（RNA）5'末端的磷酸根，使5'-P成为5'-OH，此过程称核酸分子的脱磷酸作用；5.S1核酸酶，水解单链DNA或RNA，产生带5'-P的单核苷酸或寡核苷酸。
基因工程原理
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基因工程原理
基因工程(gene engineering)常和 以下名称混用
• 遗传工程(genetic engineering); • 基因克隆(gene cloning); • 分子克隆(molecular cloning); • 基因操作(gene manipulation); • 重组DNA技术(recombination DNA technique)
义指II型限制酶。
2. 命名：限制酶由三部分构成，即菌种名、菌
系编号、分离顺序。 例如：HindⅢ 前三个字母来自于菌种名称 H. influenzae，“ｄ”表示菌系为ｄ型血清型； “Ⅲ”表示分离到的第三个限制酶。
EcoRI—Escherichia coli RI HindⅢ—Haemophilus influensae d Ⅲ SacI (II)—Streptomyces achromagenes I (Ⅱ)
6、将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，使之在新 的遗传背景下实现功能表达，产生出人类所需要的物质。
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三、基因工程技术及其应用
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转基因植物
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转基因动 物作为生 物发生器
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基因工程原理
基因本身也是一个产业
Байду номын сангаас
５）限制酶切后产生两个末端，末端结构是５’-Ｐ和３’-Ｏ
Ｈ
2. 末端种类
１）３’-端突起，个数为２或４个核苷酸
Pst I 5’-CTGCAG-3’ 5’-CTGCA
G-3’
3’-GACGTC-5’ 3’-G
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4、基因克隆或DNA分子克隆：利用微生物制备大量纯 一的特定DNA片段的过程。
5、重组DNA技术：将不同来源的DNA分子通过酶切、 连接的方法重新组合在一起的技术。
2、生物防护标准（针对大肠杆菌）： （1）EK1级：符合该标准的大肠杆菌菌株一般都要死亡的；
（2）EK2~3级：符合该标准的大肠杆菌菌株在自然环境中 则是无法存活的。
1.6 重组DNA技术的应用和发展
1.6.1 基因结构和功能的研究 1.6.2 基因组研究 1.6.3 转基因作物研究 1.6.4 转基因动物的研究 1.6.5 基因工程药物研究 1.6.6 遗传性疾病的基因诊断和治疗研究 1.6.7 生物反应器的研究 1.6.8 生物种系发生和进化研究
基因工程
授课对象：本科生 授课学时：48学时 主讲教师：恩 和
§1基因工程及其主要的研究内容
1.1基因工程的诞生
1.1.1基因工程诞生的理论基础
1、40年代确定了遗传物质的化学本质；
2、50年代揭示了DNA分子的双螺旋模型和半保留复制 机
理，并提出了“中心法则”；
3、60年代提出了操纵子学说，并破译了通用遗传密码。
1.4.2 主要的研究内容或步骤 1、从生物体基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步
骤，分离带有目的基因的DNA片段；
2、在体外，将带有目的基因的外源DNA片断连接到能 够自我复制的并具有选择标记的载体分子上，形成重组DNA 分子；
3、将重组DNA分子通过适当的方法转移到合适的受体细胞或 寄主细胞，并与之一起增殖；
1.5.2 重组DNA研究的安全准则（美国国家卫生研究院
NIH 1976 年）
1、物理防护标准： （1）P1 级实验室：一般的装备良好的普通微生物实验室；
（2）P2 级实验室：在前者的基础上，装备负压的安全操 作柜；
（3）P3 级实验室：ห้องสมุดไป่ตู้负压实验室+安全操作柜；
（4）P4 级实验室：专用实验大楼+与其它建筑物有安全 的隔离 带+细菌操作带手套+其它必要的隔离装置+实验者不 会直 接接触细菌等。
总之，以基因工程为核心的新型生物技术将解决人们常 规方法无法解决的一些障碍和难题，对人类的进步和发展做 出贡献，同时，与任何先进技术一样，人类不能忽视基因工 程技术可能带来的负面效应和危险。
1、通过基因工程可能产生人类难于控制的危险生物物种； 2、破坏生命的自然进化； 3、病毒等载体更容易使后果不详的重组DNA分子在人类 和其它生物体内传播； 4、基因工程中作为选择性标记或应用目的而广泛采用的 抗菌素抗性基因的传播，有可能带来无法抑制的微生物，从 而给人类健 康带来危害； 5、转基因物种的现实和潜在的危险； 6、基因武器的实际危险性比任何现有的武器都大； 7、恐怖主义分子掌握先进的生物技术； 8、新型生命有机体可能破坏自然规律和平衡。
4、从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了重组DNA分 子的受体细胞克隆；
5、从这些筛选出来的受体细胞克隆中提取出已经得到扩 增的目的基因，供进一步分析研究使用；
6、将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，使之 在新的遗传背景下实现功能表达，产生出人类所需要的物质
1.5 基因工程的安全性 1.5.1人类 对基因工程安全性的担忧
1.1.4 基因工程的诞生
1、1972年，斯坦福大学的P.Berg小组第一次成功完成 了DNA的体外重组：
SV40(EcoR1切）+ λ 噬菌体(EcoR1切）+DNA连接酶
2、1973年，斯坦福大学的S.Cohen等人第一次成功完 成了基因克隆实验：
R6-5(kanr)+pSC101(Tetr)+ EcoR1→+DNA ligase →重组DNA分子→转化E.coli → E.coli (Tetr 、kanr)
1.1.2基因工程诞生的技术基础
1、DNA分子的体外切割技术； 2、DNA分子的核苷酸序列分析技术； 3、琼脂糖凝胶电泳技术和Southern印迹转移
杂交技术
1.1. 3个对基因工程的诞生具有重要意义的发现
1、DNA连接酶（1967、1970）和核酸限制性内切 酶（1972）的发现；
2、基因克隆载体：质粒和噬菌体； 3、大肠杆菌转化难题的解决
1.2 基因工程的诞生与有关学科间的关系
1.3 重要历史事件
1.4 基本概念及主要的研究内容
1.4.1 基本概念 1、基因工程：在体外将核酸分子插入人工改造构建的病
毒、质粒 或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之 参入到原先没有这类分子的寄主或受体细胞内，而能持续稳 定地繁殖。
2、遗传工程：以改变生物体性状特征为目标的遗传信息 量的操作，它既包括了常规的选择育种，也包括了相对复杂 的基因克隆等不同的技术层次。