超高效液相色谱系统简介
高效液相色谱简介及操作
HPLC和经典液相色谱法的比较
3.高效液相色谱法的分类
• 通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色 谱法和凝胶色谱法四大类。
4.如何阅读色谱图？？
tR：保留时间；tM：死时间； ：调整保留时间； W：峰宽
• 定性分析：在同一色谱系统中相同物质具 有相同的保留值 • 定量分析：组分含量与其响应值（峰高或 面积）成正比
2 色谱柱使用的注意事项
• 色谱柱在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动。 • 当分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存（一般 为甲醇）。 • 每天工作结束后用适当的溶剂来清洗柱。
3 其他注意事项
• 未经提取净化的蛋白样品、血样、生物样品绝对禁 止直接进样分析。 • 要注意流动相的脱气。 • 避免使用高粘度的溶剂作为流动相。 • 使用新鲜配制的流动相，特别是水溶剂或缓冲液建 议不超过两天，最好每天更换。
（5）色谱柱平衡后，打开检测器（开灯） （6）测定样品 （7）清洗仪器
色谱柱及流路清洗 进样阀清洗 进样针清洗
四、主要注意事项
1 泵使用的注意事项
•
• •
• •
防止任何固体微粒进入泵体（用0.22 um或0.45 um 的微孔滤膜过滤） 流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲盐的流 动相不应保留在泵内更不允许留在柱内。 泵工作时防止溶剂瓶内的流动相用完，否则空泵运 转一是会使大量空气进入柱内柱床崩塌、也会磨损柱塞、 密封圈，最终产生漏液。 输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力。 流动相应先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量 的稳定性和分析结果。
c. 荧光检测器 (FLD) 只适用于具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基 酸、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定。
高效液相色谱和超高效液相色谱
高效液相色谱和超高效液相色谱高效液相色谱（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）和超高效液相色谱（Ultra High Performance Liquid Chromatography，UHPLC），是现代分析化学中常用的分离技术。
它们可以对复杂的混合物进行分离和定量分析，广泛应用于药物分析、食品分析、环境分析、生物分析等领域。
本文将从原理、仪器、方法和应用等方面，介绍高效液相色谱和超高效液相色谱的基本知识。
一、原理高效液相色谱和超高效液相色谱的原理基本相同，都是利用样品在流动相中的分配系数差异，通过固定相和流动相的作用，将混合物中的化合物分离出来。
不同的是，超高效液相色谱采用了更小的颗粒固定相，使得流动相可以更快地通过固定相，从而提高了分离效率和分离速度。
在高效液相色谱和超高效液相色谱中，样品首先被注入流动相中，然后通过固定相的柱子。
固定相通常是一种多孔的固体材料，如硅胶、C18等。
样品中的化合物在流动相中的分配系数不同，因此在通过固定相时，会被分离出来。
分离出来的化合物，会在检测器中被检测到，从而实现分离和定量分析。
二、仪器高效液相色谱和超高效液相色谱的仪器基本相同，主要由注射器、流动相泵、柱子、检测器和计算机控制系统等组成。
（一）注射器注射器是将样品引入流动相中的关键部分。
常用的注射器有手动注射器和自动进样器。
手动注射器通常用于小样品量的分析，而自动进样器可以实现高精度、高效率的样品进样。
（二）流动相泵流动相泵是将流动相送入柱子中的装置。
其主要功能是控制流动相的流速和流量，并确保流动相的稳定性。
常用的流动相泵有恒压流量泵和梯度流量泵。
恒压流量泵可以保持恒定的流量，适用于等浓度的流动相。
梯度流量泵可以实现不同浓度的流动相混合，从而实现更好的分离效果。
（三）柱子柱子是高效液相色谱和超高效液相色谱的核心部分，用于固定相的分离。
常用的柱子材料有硅胶、C18、C8等。
高效液相色谱仪使用说明书
高效液相色谱仪使用说明书序言高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography, HPLC）是一种常用的分离技术，广泛应用于药物分析、食品安全监测、环境检测等领域。
本说明书旨在提供关于高效液相色谱仪的基本操作原理、使用方法和注意事项等信息，以帮助用户正确、高效地使用该仪器。
一、仪器概述高效液相色谱仪主要包括进样系统、色谱柱、泵液系统、检测器和数据处理系统等基本组成部分。
1. 进样系统进样系统用于将待测样品引入色谱柱中进行分离。
常见的进样方式包括自动进样器、手动进样器和微量注射器等。
2. 色谱柱色谱柱是分离相和固定相组成的圆柱体，是进行样品分离的关键组件。
用户应根据待测样品的特性选择适当的色谱柱型号和填充物。
3. 泵液系统泵液系统通过输送流动相将样品送入色谱柱中，并提供足够的压力以保持流速和流动相性质的稳定。
泵液系统可根据实际需求配置恒压、梯度或等压梯度等控制方式。
4. 检测器检测器用于监测和记录样品的化学信号，并将其转化为可读的信号输出。
常见的检测器包括紫外可见检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
5. 数据处理系统数据处理系统用于采集、处理和分析检测到的信号，通常配备有专业的软件。
用户可根据需要选择合适的数据处理系统，并进行适当的参数设置。
二、操作方法1. 仪器准备（1）保证仪器通电正常并处于稳定工作状态。
（2）检查流动相储液瓶中是否有足够的流动相，并确保其配制符合要求。
（3）检查色谱柱的连接情况，确保柱座和柱连接部位严密无泄漏。
（4）开启数据处理系统，确保与色谱仪的连接正常。
2. 样品准备根据实验要求选择合适的样品，并进行必要的前处理工作，如过滤、稀释等。
3. 进样操作（1）将样品溶液通过合适的进样方式加入进样器中。
（2）设置进样体积和进样方式等参数，并进行进样操作。
4. 流动相系统设置（1）根据实验要求选择合适的流动相，注入流动相储液瓶中。
（2）设置流速、梯度等参数，并进行流动相系统的初始化。
高效液相色谱法简介
高效液相色谱的特点
高压——压力可达150～300 kg/cm2。色谱
柱每米降压为75 kg/cm2以上。
高速——流速为0.1～10.0 mL/min。 高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中
同时分离成份可达100种。
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。
同时消耗样品少。
第二节
塑料块 Teflon
1 cm
工作电极 (Pt, Au, 碳糊)
e.电导检测器
电导检测器主要用于离子色谱的检测。 原理： 根据待测物在一些介质中电离后所产 生的电导（电阻的倒数）变化来测量电离物质 的含量。 电导检测器的主要部件是电导池。其响应 受温度影响较大，因此需要将电导池置于恒温 箱中。另外，当 pH>7时，该检测器不够灵敏。 电导检测器不能用于梯度洗脱。
◆恒流泵
注射型泵------输出精确，无脉动，需更换溶剂而中断工作。
往复型泵------造价低廉，溶剂更换方便，但存在脉动。 （使用较多） 对流量变化敏感的检测器会有噪声 干扰，此时可连接一脉动阻尼器。
◆恒压泵--------压力恒定，但流量不恒定（现在已经较少使用）。
输液泵操作注意事项：
防止固体微粒进入泵体 流动相不应含有腐蚀性物质 防止溶剂瓶内的流动相被用完 不超过规定的最高压力 流动相一般应该先脱气
F=2.3QKI0εCl
Q为量子产率，K为荧光效率，ε为摩尔吸光系 数，l为光径长度。
F=KC
特点：选择性好，
专属型检测器，灵敏 度比紫外检测器高 （检测限10-10 g/ml） 对多环芳烃，维 生素 B 、黄曲霉素、 卟啉类化合物、农药 、药物、氨基酸、甾 类化合物等有响应；
c. 示差折光检测器
高效液相色谱仪主要组成
高效液相色谱仪主要组成高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种在化学分析中广泛使用的分离技术，主要用于分离和测定样品中的化合物。
HPLC是液相色谱的一种进化形式，相比传统的液相色谱，其分离效率更高，分离速度更快。
下面将介绍HPLC的主要组成部分。
1.液相输送系统：液相输送系统由溶剂供应、进样、混合和泵送过程组成。
其中，溶剂供应单元负责提供所需的溶剂，通常由一个贮液瓶和一组输送管道组成。
进样器用于将待分析样品注入到流动相中，常见的进样方式有汽缸进样和自动进样器。
混合器用于混合不同的溶剂以得到所需的流动相。
泵送单元负责将混合好的流动相通过色谱柱进行分离。
2.色谱柱：色谱柱是HPLC中最为重要的部分，用于分离样品中的化合物。
色谱柱是由特定的填充材料填充而成，填充材料可以根据待分离样品的性质选择不同的类型，如反相色谱柱、离子交换色谱柱等。
色谱柱通常由不锈钢、玻璃或硅胶等材料制成。
在色谱柱两端，通常会安装一些连接件，如高压接头和柱连器，以确保柱与其他部件的连接牢固。
3.检测器：检测器用于检测色谱柱流出的化合物，并将其转化为可以被记录和分析的电信号。
常见的HPLC检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
不同的检测器可以对不同类型的化合物进行特异性检测。
4.数据处理系统：数据处理系统用于记录、处理和分析HPLC实验得到的数据。
数据处理系统通常由计算机和相关的软件组成。
计算机负责与HPLC仪器的其他部件进行通信，并将检测到的信号转化为数字数据。
软件则用于对数据进行处理和分析，如峰识别、峰面积积分和定量分析等。
5.控制系统：控制系统用于控制整个HPLC仪器的运行。
控制系统通常由一个控制面板和相应的控制器组成，用于设置和调节液相输送系统、检测器和数据处理系统的参数。
通过控制面板，用户可以设置流速、柱温、检测器波长等参数，以满足不同的分析要求。
UPLC(超高效液相色谱)简介
UPLC（超高效液相色谱）简介超越HPLC随着科学技术的进步，对液相色谱技术的要求也不断提高，单从技术角度的改进已经不行。
这就需要同时从科学与技术的角度出发，或者说从理论高度对液相色谱重新认识。
因此，UPLC（超高效液相色谱）概念得以提出，将HPLC的极限作为自己的起点。
在1996年，Waters公司推出Alliance HPLC时的主要目标是提高液相色谱的"精度"。
当时多数公司都认为HPLC技术已经发展到极致了、而同时用户对性能没有更高的需求，因此HPLC的目标应该是降低成本、走向更低的价格以获得更广泛的应用。
针对这样的观念，Waters公司提出：HPLC的技术没有到达极限，用户对HPLC有更高的要求，HPLC精度的提高对更好、更可靠的结果有极大的益处，对法规的遵从也是一个极大的促进。
站在当今世界科技前沿的液相色谱用户现在又有了新的需求。
首先是改进生产力的需求，因为大量的样品需要在很短的时间内完成，例如代谢组学分析；其次是在生化样品及天然产物样品的分析中，样品的复杂性对分离能力提出了更高的要求；第三是在与MS及MS/MS等检测技术联用时，对连接的质量提出了更高的要求。
简而言之，我们需要"更快地得到更好的结果"。
今天我们发现，随着科学技术的进步，对液相色谱技术的要求也不断提高，单从技术角度的改进已经不行。
这就需要同时从科学与技术的角度出发，或者说从理论高度对液相色谱重新认识。
因此UPLC（超高效液相色谱）概念的提出也就十分自然。
简而言之，UPLC是用HPLC的极限作为自己的起点。
理论基础早在1956年，J.J van Deemter就发表了他著名的理论：van Deemter曲线及其方程式。
最早这个理论是用在气相色谱上的，但是后来出现的液相色谱上也能应用这个理论。
Waters公司引入UPLC的概念就是由研究这个著名的方程式开始。
首先探讨一下这个著名的方程式。
超高效液相色谱简介及应用比较
3 讨论与结论 3. 1 通过对磺胺类药物 HPLC和 UPLC的分析结 果比较 ,显示 UPLC的主要优势在于缩短了分析时 间 ,同时减少了溶剂用量降低了分析成本 。 3. 2 利用 UPLC技术 ,有助于解决传统 HPLC遇到 的分离组分愈多 ,耗时 、耗能愈大的技术问题 ,有效 地提高工作效率 ,并可进一步拓宽液相色谱的应用 范围 ,特别是对于基质复杂的混合痕量组分的分 析 ,通过 UPLC方法研究或从 HPLC 到 UPLC 方法 转换可获得更高的分析通量 。
[摘 要 ] 介绍了超高效液相色谱的技术特点和优势 ,并对磺胺类药物的测定进行了 HPLC和 UPLC两种条件下的分析比较 ,结果表明 :超高效液相色谱方法的突出优点体现在节省分析时间 和溶剂用量上 ,尤其对基质复杂的痕量组分测定采用该方法以提高分析通量是今后发展的必然 趋势 。 [关键词 ] 超高效液相色谱 ;磺胺类药物 ;高效液相色谱 ;分析
流速 /
(mL ·m in - 1 )
1. 0
0. 5
柱温 / ℃
30
30
进样量 /μL
20
2
波长 /λ
270
270
分析时间 /m in
25
3
溶剂用量
(mL) /样
25
1. 5
·50·
中国兽药杂志 2010, 44 (4) : 48～50 /胡海燕 ,等
表 2 UPLC与 HPLC测定猪肉中磺胺类药物数据比较
与传统的 HPLC相比 , UPLC的速度 、灵敏度和 分离度分别是 HPLC的 5 ～9 倍 、3 倍和 1. 7 倍 ,这 就拓展了我们进一步研究的空间 :保持分离度而追 求更快的分析速度 ,或在同样及较 HPLC更短的时 间内优化分离度再分出更多的色谱峰 。笔者利用 UPLC 转化参数换算 , 将同时测定磺胺二 甲嘧 啶 ( SM2 ) 、磺胺间甲氧嘧啶 ( SMM ) 、磺胺甲基异噁唑 ( SM Z) 、磺胺地索辛 ( SDM )和磺胺喹噁啉 ( SQ ) 5种 磺胺类药物的 HPLC 方法转换并优化为 UPLC 方 法 ,通过两种测定条件 (表 1)和检测图谱 (图 1、图 2)比较可知 : 5 种磺胺类药物的分离由原来的 25 m in (HPLC)缩短至 3 m in (UPLC) ,从而使一个样品 检测的分析时间缩短了约 1 /8, 进样量减少了 1 /
高效液相色谱HPLC简介
h
AB
1/10h
拖尾
T
f
＝
B A
前伸
液相色谱图相关术语(3)
色谱图相关术语: 基线(Baseline):在正常操作条件下,仅由流动相所 产生的响应信号的曲线 基线飘移(Baseline Drift):基线随时间定向的缓 慢变化 基线噪声(N)(Baseline Noise):由各种因素所引起 的基线波动
• 溶剂过滤：常用0.5μm膜过滤。HPLC级溶剂：无微粒，无紫外吸收，已用 0.2μm膜过滤。
• 贮液瓶要不定期更换，要有2～3个备用瓶，定期用酸、水、溶剂清洗。 • 沉子：用三个月后必须清洗或更换，若未用沉子，则必须用0.5μm膜过滤。
溶剂脱气
脱气：正相色谱如非水性凝胶色谱的流动相不必脱气，反相色谱的流动相需 要脱气。 He氦气脱气：10min可以除去80～90％溶入的气体，但价格昂贵 真空脱气：这是最常用的方法，可用真空抽滤流动相的方法代替。 超声脱气：使用方便，但只能脱气30％ 加热回流：最彻底的脱气方法，混合流动相不能用
底相交两点之间的距离 –半(高)峰宽(Peak Width at Half Height):通过峰
高的中点作平行于峰底的直线,其与峰两侧 相交两点之间的距离
HPLC的图形结果 --色谱图(Chromatogram)
色谱图:色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间 的曲线图,其纵坐标为信号强度,横坐标为保留时间.
改变a的途径 改变固定相 改变流动相 改变温度 改变样品的本身性质
在反相HPLC中溶剂强度会随着水/有机流动相中的有机相增加而增加 。
确定最佳的溶剂强度
• “试-凑法”，即先用一种可能过强的流动相，在后面的实验中逐步减小溶 剂强度以增加k’，当所有谱峰的k’介于1—20时，其流动相已经接近最佳 了。
超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水、沉积物和生物样品中57种全-多氟化合物
超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水、沉积物和生物样品中57种全-多氟化合物超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水、沉积物和生物样品中57种全/多氟化合物概要：全/多氟化合物（PFASs）是一类广泛存在于环境及生物体中的污染物，由于其高毒性、高生物蓄积性和长半衰期，对生态环境和人类健康造成潜在风险。
因此，对于这些化合物的快速、准确测定方法的发展至关重要。
本研究旨在开发一种超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）方法，以同时测定水、沉积物和生物样品中57种全/多氟化合物。
引言：全/多氟化合物是一类人工合成的有机污染物，由于其独特的物化特性，被广泛应用于防潮、阻燃、润滑等领域。
然而，由于全/多氟化合物的持久性、生物蓄积性和毒性，它们已成为全球环境污染的重要问题。
目前已经发现的全/多氟化合物超过3,000种，其中包括全氟烷基磺酸盐（PFASs）、全氟烷基胺盐（PFASAs）等。
这些化合物具有高度稳定性和生物传播性，即使在环境中存在很低的浓度，也可能对生态环境和人类健康产生潜在风险。
现有的全/多氟化合物分析方法主要包括气相色谱-质谱法（GC-MS）和液相色谱-质谱法（LC-MS）。
然而，由于PFASs的高亲水性和复杂的基质干扰，传统的液相色谱-质谱方法在样品净化和分离上存在一定的局限性。
因此，开发一种高效准确的测定方法具有重要意义。
方法：本研究选取了57种典型的全/多氟化合物作为目标分析物，包括全氟烷基磺酸盐、全氟烷基胺盐等。
样品净化采用固相萃取（SPE）方法，利用氟化硅固相胶囊柱对样品进行预处理。
色谱分析采用UPLC-MS/MS系统，为了提高色谱分离效果，选择C18色谱柱。
质谱采用电喷雾离子源（ESI）和正离子模式。
结果与讨论：经过方法优化，我们成功开发了一种UPLC-MS/MS方法，可以同时测定水、沉积物和生物样品中的57种全/多氟化合物。
该方法具有高灵敏度、高选择性和较低的方法检出限。
在水样中，该方法的平均回收率在70%-110%之间，相对标准偏差低于15%。
UPLC超高效液相色谱入门指南沃特世
首先，导入采集到的色谱数据；其次，进行基线校正以消除背景干扰；接着，进行峰识 别与积分以确定各色谱峰的保留时间和峰面积；最后，根据标准曲线进行定量分析，得
到各组分的浓度信息。
结果解读与报告生成
结果解读
根据处理后的色谱数据和定量分析结果， 可以解读出样品中各组分的含量和相关信 息。需注意检查数据的合理性和准确性。
妥善处理。
核实实验室是否遵守环保法规 和相关标准，如废水、废气、 噪声等排放是否符合环保要求。
个人防护措施和应急处理能力培训
对实验人员进行个人防护知识培训，包括如何正确佩戴和使用个人防护装备，如防护服、护目镜、手 套等。
提供应急处理能力培训，包括如何应对实验过程中可能出现的突发情况，如化学品泄漏、火灾等。
避免污染和交叉污染措施
使用高质量的试剂和溶剂， 减少杂质和污染物的引入。
对于不同性质的样品，要 采用不同的进样器和色谱 柱，避免交叉污染的发生。
ABCD
定期清洗进样器、色谱柱 和检测器等部件，避免残 留物对后续分析的影响。
在更换样品或溶剂时，要 彻底清洗相关部件，确保 无残留物对后续分析造成 干扰。
生物分析
要点二
食品分析
UPLC可用于生物样品（如血液、尿液等）中生物标志物的检 测和分析。
UPLC可用于食品添加剂、营养成分等的检测和分析。
沃特世UPLC技术特点
高品质色谱柱
先进的仪器设计
沃特世提供多种类型的高品质色谱柱，满足 不同分离需求，确保分析结果的准确性和可 靠性。
沃特世UPLC仪器设计先进，操作简便，具有 高度的稳定性和可靠性，确保长时间运行的 稳定性和准确性。
分离系统
即色谱柱，是实现样品中各组分分离的关 键部分。
高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展
高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展一、概述高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于药物分析的重要技术，具有快速、高效、灵敏度高和分辨率高等特点。
自20世纪70年代以来，随着色谱理论和仪器技术的不断发展，HPLC已成为药物分析领域中不可或缺的工具。
其利用不同物质在固定相和流动相之间的分配差异，通过高压泵将流动相推动通过装有固定相的色谱柱，实现样品中各组分的分离。
随后，通过检测器对分离后的组分进行检测，从而实现对药物成分的定性和定量分析。
近年来，随着药物分析需求的不断提高，HPLC在药物分析中的应用研究也取得了显著的进展。
在药物质量控制方面，HPLC可用于药物有效成分的含量测定、杂质含量的检测以及药物制剂中各组分的分离分析等。
HPLC还可应用于药物代谢产物的分析，为药物研发提供重要的参考信息。
在药品检验中，HPLC的应用不仅提高了检验的准确性和效率，还有助于实现药品检验的自动化和智能化。
同时，随着HPLC技术的不断发展，其在药物分析中的应用也将不断拓展和完善。
本文旨在综述HPLC在药物分析中的应用研究进展，为相关领域的研究和实践提供参考和借鉴。
1. 高效液相色谱技术简介高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的色谱分析技术，广泛应用于化学、医学、工业、农学、商检和法检等多个学科领域。
作为色谱法的一个重要分支，HPLC以液体为流动相，通过高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱。
在柱内，各成分因与固定相发生作用的大小、强弱不同，而在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出，进入检测器进行检测，实现对试样的分析。
HPLC具有“四高一广”的特点，即高压、高速、高效、高灵敏度和应用范围广。
高压是因为流动相为液体，流经色谱柱时受到的阻力较大，需要高压泵来推动流动相通过色谱柱。
高效液相色谱组成
高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种常用的分析方法，主要用于分离和分析混合物。
高效液相色谱系统一般由以下几个部分组成：
1. 流动相：流动相是液相色谱中的溶剂，用于将样品分离成不同的组分。
常见的流动相包括水、甲醇、乙腈等。
2. 泵：泵是整个系统的核心部件，负责抽取流动相并推动其在系统中流动。
泵通常包括高压输液泵、过滤器和脱气装置等。
3. 进样系统：进样系统用于将样品注入到流动相中。
常见的进样方式有手动进样和自动进样。
4. 色谱柱：色谱柱是分离混合物的主要部件，样品在色谱柱中通过固定相和流动相之间的相互作用进行分离。
常见的色谱柱类型有反相色谱柱、正相色谱柱等。
5. 检测器：检测器用于检测分离后的样品组分。
常见的检测器包括紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
6. 数据处理系统：数据处理系统用于收集和处理检测器产生的信号，以便分析和识别样品中的成分。
数据处理系统可以包括计算机、工作站和相应的软件。
7. 控制系统：控制系统用于监控和调节整个液相色谱系统的运行参数，如流速、温度、压力等。
8. 辅助设备：辅助设备包括如压缩空气、冷却装置、真空泵等，用于支持整个系统的正常运行。
《高效液相色谱仪》课件
目 录
• 高效液相色谱仪简介 • 高效液相色谱仪的组成和工作原理 • 高效液相色谱仪的操作流程 • 高效液相色谱仪的维护与保养 • 高效液相色谱仪的实验技术与应用实例
01
高效液相色谱仪简介
定义与特点
定义
高效液相色谱仪是一种分离和分 析复杂混合物中各组分的仪器， 基于物质在固定相和流动相之间 的分配差异实现分离。
。
食品工业
用于检测食品中的添加剂、农 药残留和营养成分等。
高效液相色谱仪的发展历程
起源
20世纪50年代初，基于经典液 相柱色谱的原理，开发出了高
效液相色谱法。
发展
20世纪60年代，出现了填充柱 和柱切换技术，提高了分离效 率。
革新
20世纪70年代，出现了高效微 粒固定相和新型检测器，提高 了灵敏度和选择性。
流动相的纯化和过滤
确保流动相的纯度和清洁度，以避免对色谱柱和检测器造成污染。
流动相的脱气
使用真空脱气法或超声波脱气法去除流动相中的气泡，以避免对色 谱分离造成干扰。
色谱柱的安装与选择
安装色谱柱
按照仪器说明书正确安装色谱柱 ，确保密封性和稳定性。
色谱柱的选择
根据样品的性质和分离要求，选择 合适的色谱柱类型和规格。
检测器对流出的组分进行 检测，并将信号记录下来 ，形成色谱图。
高效液相色谱仪的分离原理
分配原理
组分在固定相和流动相之 间的分配平衡是实现物质 分离的基础。
吸附与解吸平衡
组分在固定相上的吸附与 流动相中的溶解度差异导 致分离。
分子间作用力
分子间的相互作用力（如 范德华力、氢键等）影响 组分的吸附与解吸平衡。
物的分子结构和化学键信息。
高效液相色谱-串联质谱仪的结构组成
高效液相色谱-串联质谱仪的结构组成高效液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）是一种常用的分析仪器，通过结合高效液相色谱（HPLC）和串联质谱（MS/MS）的技术，可以实现对复杂样品的定性和定量分析。
下面是LC-MS/MS的结构组成和主要部件的介绍。
LC-MS/MS仪器主要由以下几个组成部分组成：1.样品处理系统：包括样品进样器、样品预处理装置等。
样品处理系统主要负责将待测样品进行前处理，例如样品的预处理、稀释、净化等。
2.高效液相色谱系统（HPLC）：包括溶剂输送、样品进样和分离柱。
HPLC系统通过溶剂输送系统将样品和溶剂进行混合，并推动样品溶液通过分离柱，实现样品的分离。
3.串联质谱系统（MS/MS）：包括离子化源、质量分析器和检测器。
串联质谱系统通过离子化源将分离后的化合物转化为离子，然后通过质量分析器进行质量筛选和分析，最后由检测器检测离子的信号。
4.数据获取和分析系统：包括数据接收和数据处理系统。
数据获取和分析系统通过采集质谱图谱数据，并进行数据处理、质谱图比对和峰面积计算等操作，最终得到分析结果。
LC-MS/MS仪器的基本工作原理是：首先，通过样品处理系统将待测样品进行前处理；然后，样品进入HPLC系统，通过溶剂输送系统和分离柱进行分离；接着，分离后的化合物进入MS/MS系统中的离子化源，通过电离技术将分离后的化合物转化为离子；然后，离子经过质量分析器进行质量筛选和分析；最后，经过检测器检测离子的信号，并通过数据获取和分析系统获得最终的分析结果。
LC-MS/MS仪器的性能和灵敏度取决于多个方面，如样品处理系统、HPLC系统、离子化源、质量分析器和检测器的性能等。
常用的离子化源有电喷雾离子源（ESI）和电动喷雾离子源（API）等；常用的质量分析器有四极杆质量分析器（Q）和飞行时间质量分析器（TOF）等；常用的检测器有电子增强器、多道数量器（MCA）和多螺旋型电子增强器（EMAM）等。
总的来说，高效液相色谱-串联质谱仪是一种能够实现复杂样品的定性和定量分析的重要分析仪器。
uplc超高效液相色谱构造
UPLC（Ultra Performance Liquid Chromatography），即超高效液相色谱，是一种新型的液相色谱技术。
与传统的HPLC相比，UPLC有更高的分离效率、更短的分离时间和更高的灵敏度。
下面将介绍UPLC的构造和原理。
一、UPLC的构造UPLC主要由以下几个部分组成：1. 溶液系统：包括溶液瓶、泵、混合器等。
将不同的试剂按一定比例混合，形成分析用的溶液。
2. 进样系统：包括进样器和进样针。
将待分析的样品通过进样针注入进样器中，再通过管道输送到流动相中。
3. 色谱柱：UPLC采用的是直径较小的固定相柱，通常为1.7-2.5 μm。
色谱柱的直径越小，表面积就越大，能够提供更高的分离效率和更快的分离速度。
4. 检测器：包括UV检测器、荧光检测器等。
根据不同分析物的特性选择不同类型的检测器。
5. 数据处理系统：通过计算机对检测器输出的信号进行处理和分析，得到分析结果。
二、UPLC的原理UPLC是一种基于液相色谱的分离技术。
液相色谱的分离原理是利用样品与流动相之间的相互作用，使不同成分在固定相柱上发生不同程度的吸附和解吸作用，从而实现分离。
UPLC与HPLC的最大区别在于色谱柱的粒径。
UPLC采用的是直径较小的固定相柱，通常为1.7-2.5 μm，而HPLC使用的是直径为5 μm左右的固定相柱。
由于固定相粒径更小，且表面积更大，因此能够提供更高的分离效率和更快的分离速度。
在UPLC中，样品通过进样器注入进样针中，然后通过管道输送到色谱柱中。
流动相以一定的速率通过色谱柱，在不同成分之间可发生吸附和解吸作用，分离出不同的化合物。
分离完成后，样品到达检测器。
检测器通过检测样品吸收或荧光等性质，输出对应的信号。
这些信号经过数据处理系统处理和分析，得到分析结果。
总之，UPLC的构造和原理都非常简单明了，同时由于其超高的分离效率和速度，使其在化学、生物等领域得到广泛应用。
uplc超高效液相色谱构造
UPLC（Ultra Performance Liquid Chromatography）是一种高效率的液相色谱技术，其主要用于分离和分析极其复杂的混合物。
与传统的HPLC（High Performance Liquid Chromatography）相比，UPLC具有更高的峰分辨率、更短的分离时间和更高的灵敏度。
下面将详细介绍UPLC超高效液相色谱构造。
一、UPLC液相色谱仪的组成UPLC液相色谱仪由以下几个部分组成：进样器、泵、柱温箱、检测器和数据处理系统。
1. 进样器进样器是UPLC系统的重要组成部分。
它负责将待测样品注入到色谱柱中。
进样器通常分为自动进样器和手动进样器两种类型。
自动进样器可以实现多个样品的连续进样，提高了分析效率和准确性。
2. 泵泵是UPLC系统的核心部件。
它负责将溶剂以一定的流速压入色谱柱中，从而实现对样品的分离。
UPLC系统中常用的泵有恒流泵和梯度泵两种，其中梯度泵可以在一定程度上提高色谱分离的效果。
3. 柱温箱柱温箱是UPLC系统中的关键部件之一。
它可以控制色谱柱的温度，从而提高分离效率和峰形。
柱温箱通常由加热器、冷却器和温度控制器等组成。
4. 检测器检测器是UPLC系统中对分离物进行检测和定量的关键部件之一。
常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
其中，紫外检测器是最常用的检测器之一，可以对各种化合物进行检测和定量。
5. 数据处理系统数据处理系统是UPLC系统中对实验数据进行处理和分析的重要软件部件。
它可以实现峰面积、保留时间和相对峰高等数据的计算和统计，为分析师提供准确可靠的数据基础。
二、UPLC液相色谱柱的选择UPLC液相色谱柱的选择对于分析结果至关重要。
由于UPLC能够处理复杂的混合物，所以要求色谱柱具有较高的分离效率和分离能力。
常用的UPLC液相色谱柱主要包括以下几种：1. C18柱C18柱是最常用的UPLC液相色谱柱之一。
它具有较高的分离能力和分离效率，可以用于分离各种疏水性化合物。
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发展背景
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理论基础
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仪器组成
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实际应用及展望
20世纪90年代，高效液相色谱发展的目标应该是 降低成本、走向更低的价格以获得更广泛的应用 实际上，高效液相色谱的技术没有到达极限，用 户对HPLC有更高的要求 超高效液相色谱是用高效液相色谱的极限 作为自己的起点
UPLC(Ultra Performance Liquid Charomatography) UHPLC(Ultra High Performance Liquid Charomatography) UFLC(Ultra Fast Liquid Charomatography) …………
BEH(Ethylene Bridge Hybrid)
应用 与传统的HPLC相比，UPLC的速度、灵敏度及分离
度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍。因此UPLC在代谢 组学分析、天然产物的分析及其他一些生化领域有较 多应用。
使用UPLC与质谱检测器连接，会对天然产物分析， 特别是中药研究领域的发展是一个极大的促进。
因此，建立UPLC系统需要解决的主要问题： 1、提高色谱柱的性能； 2、高压溶剂输送单元（超过15,000psi,约103MPa）； 3、高速检测器；优化流动池以解决高速检测及扩散问 题； 4、完善的系统整体性设计。
输液泵压力： 6,000psi(42MPa)→15,000psi(103MPa) 色谱柱填料粒径： 5μm → 1.7μm 检测器流动池体积： 10μL→500nL 其他
氨基酸分析
HPLC 40min
UPLC 10min
天然产物分析
展望 发展更小粒径填料 与质谱仪联用 痕量及复杂天然产物、代谢产物的分析 发展国产超高效液相色谱
van Deemter方程简化形式：
H=a(dp)+b/u+c(dp)²u 理论塔板高度（H）与流速（线速度；u）及填 料颗粒度（dp）之间的关系，其中，a项代表了 颗粒度和柱床填装的优良程度；b项代表了轴向 扩散；而c项则代表了传质
Байду номын сангаас
由曲线可以看出： 颗粒度越小柱效越高 其次每个颗粒度尺寸有自己的最佳柱效的流速 最后，更小的颗粒度使最高柱效点向更高流速（线 速度）方向移动，而且有更宽的线速度范围