荧光分光光度计的结构与应用
荧光分光光度计的原理 光度计工作原理
荧光分光光度计的原理光度计工作原理荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。
其能供应包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等很多物理参数，从各个角度反映了分子的成键和结构情况。
通过对这些参数的测定，不但可以做一般的定量分析，而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化，从而阐明分子结构与功能之间的关系。
荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190～650nm，发射波长扫描范围是200～800nm。
可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。
荧光分光光度计的原理：由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。
物质荧光的产生是由在通常情形下处于基态的物质分子吸取激发光后变为激发态，这些处于激发态的分子是不稳定的，在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光。
不同物质由于分子结构的不同，其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
在溶液中，当荧光物质的浓度较低时，其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系，即IF=KC，利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析，与紫外—可见分光光度法仿佛，荧光分析通常也接受标准曲线法进行。
超微量分光光度计的日常维护和保养超微量分光光度计是一类很紧要的分析仪器，常用于定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。
利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器，常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
无论在物理学、化学、生物学、医学、材料学、环境科学等科学讨论领域 ,还是在化工、医药、环境检测、冶金等现代生产与管理部门 ,紫外可见分光光度计督有广泛而紧要的应用。
超微量分光光度计是精密光学仪器，正确安装、使用和保养对保持仪器良好的性能和保证测试的精准度有紧要作用。
荧光分光光度计原理
荧光分光光度计原理荧光分光光度计是一种用来测量物质荧光特性的仪器，它通过激发样品产生荧光，然后测量样品发出的荧光强度来分析样品的成分和结构。
荧光分光光度计原理的理解对于正确操作和数据解释至关重要。
首先，荧光分光光度计的原理基于样品受到激发光照射后发出的荧光现象。
当样品受到特定波长的激发光照射后，其内部原子或分子处于激发态，随后会发生非辐射跃迁，从而发出荧光。
荧光分光光度计利用荧光强度来定量分析样品中的成分，因此对激发光源和荧光检测器的选择十分重要。
其次，荧光分光光度计的原理还涉及荧光发射光谱的测量。
荧光分光光度计通过选择合适的激发波长和检测波长来测量样品发出的荧光光谱，从而获得样品的荧光特性信息。
这种原理的应用使得荧光分光光度计成为一种重要的分析仪器，在生物医学、环境监测、材料科学等领域有着广泛的应用。
另外，荧光分光光度计的原理还包括荧光强度的标定和校准。
在进行荧光分光光度计测量之前，需要进行荧光强度的标定和校准，以确保测量结果的准确性和可靠性。
荧光分光光度计的原理要求对仪器进行精确的校准，同时还需要考虑到样品的荧光特性和测量条件的影响。
最后，荧光分光光度计的原理还涉及到荧光强度与样品浓度或成分之间的关系。
通过建立荧光强度与样品浓度或成分之间的标准曲线，可以实现对样品中目标成分的定量分析。
这种原理的应用使得荧光分光光度计成为一种灵敏、快速、准确的分析方法。
总之，荧光分光光度计原理的理解对于正确操作和数据解释至关重要。
通过对荧光分光光度计原理的深入了解，可以更好地应用该技术进行样品分析和研究，为科研和实验工作提供有力的支持。
紫外、荧光分光光度计说明
一、设备名称：RF-5301PC荧光分光光度计；二、使用原理1、荧光分光光度计由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。
荧光是光致发光，任何荧光物质都具有激发光谱和发射光谱，发射波长总是大于激发波长。
荧光激发光谱是通过测定荧光体的发光通量随波长变化而获得的光谱，反映不同波长激发光引起荧光的相对效率。
荧光发射光谱是当荧光物质在固定的激发光源照射后所产生的分子荧光，是荧光强度对发射波长的关系曲线，表示在所发射的荧光中各种波长相对强度。
由于各种不同的荧光物质有它们各自特定的荧光发射波长，可用它来鉴定荧光物质。
有些发荧光的物质其荧光强度与物质的浓度成正比，故可用荧光分光光度法测定其含量。
在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
利用某些物质受激发出的荧光，其光强度与该物质的含量成一定函数关系的性质而制成的。
三、组成结构光源、光件、样品池、检测器、数据处理器1、荧光分光光度计图RF5301PC荧光分光光度计主要是由激发光源、激发单色器、样品池、发射单色器、检测器以及数据处理系统几部分组成1. 光源：为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。
2．激发单色器：置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。
3．发射单色器：置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。
筛选出特定的发射光谱。
4．样品室：通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。
测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。
全波长荧光分光光度计 用途
全波长荧光分光光度计用途全波长荧光分光光度计的用途全波长荧光分光光度计是一种用于测量物质荧光强度的仪器。
荧光是指物质在受到激发后发出的短波长光。
荧光分光光度计是一种专门测量荧光光谱的仪器，它能够测量物质在不同波长的光激发下所发出的荧光光谱，并根据荧光强度的变化来分析物质的性质和浓度。
全波长荧光分光光度计具有广泛的应用领域。
以下是一些主要的用途：1. 化学分析：全波长荧光分光光度计可以用于分析和检测化学物质。
通过测量物质的荧光光谱，可以确定物质的组成、浓度、结构和化学性质。
这对于药物研发、环境监测、食品安全等领域具有重要意义。
2. 生物医学研究：在生物医学领域，全波长荧光分光光度计被广泛应用于细胞生物学、免疫学、药物研发等方面。
通过测量荧光光谱，可以研究细胞内的生物分子、药物与细胞相互作用的过程，以及疾病的发生机制。
3. 环境监测：全波长荧光分光光度计在环境监测中有着重要的应用。
它可以用于检测水体、大气和土壤中的污染物，如重金属、有机污染物、光学增白剂等。
荧光分析技术具有高灵敏度、高选择性和快速分析的特点，可以在环境监测中发挥重要作用。
4. 材料科学：全波长荧光分光光度计在材料科学中也具有重要的应用价值。
它可以用于研究材料的光学性质、表面缺陷、结构特征等。
通过荧光光谱的测量，可以了解材料的荧光发光机制，为材料的设计和改进提供重要参考。
总的来说，全波长荧光分光光度计是一种功能强大的仪器，广泛应用于化学分析、生物医学研究、环境监测和材料科学等领域。
它通过测量物质的荧光光谱，可以提供详细的物质信息，帮助科学家们深入研究物质的性质、结构和相互作用机制。
随着技术的不断发展，全波长荧光分光光度计将继续在各个领域发挥重要的作用，并为科学研究和应用创新提供有力支持。
荧光分光光度计的基本原理
荧光分光光度计的基本原理荧光分光光度计（Fluorescence Spectrophotometer）是一种测量物质荧光强度的仪器。
它可用于分析、研究、检测生物分子的结构、功能和相互作用等领域，在生物学、化学、生物医学、制药等领域有着广泛的应用。
本文将介绍荧光分光光度计的基本原理及其测量过程。
荧光的基本原理荧光是自然界中一种常见的现象，指的是物质受到激发后放出的短波长光线，这种现象与物质的分子结构和化学成分有关。
当物质受到激发后，外部能量使得其激发态能量提高，分子内部发生跃迁，最终返回到基态时发出荧光。
荧光的光谱分布范围通常从400nm到750nm，与吸收光谱的重叠区有关。
荧光测量的原理荧光的强度与物质的分子结构、环境条件和激发波长等因素有关。
荧光分光光度计采用的测量原理是荧光分析，它通过激发光激发荧光，然后测量荧光发射的强度，从而分析样品中某种荧光物质的含量。
在荧光分析中，激发光的波长需要与目标荧光物质的吸收光谱重叠，以激发目标荧光物质的分子。
当荧光物质受到激发后，分子会从基态到激发态跃迁，然后辐射出相应的荧光。
荧光的强度与荧光物质的浓度成正比，因此可以通过测量荧光强度来计算荧光物质的浓度。
荧光强度的测量需要使用荧光分光光度计。
该仪器可以选择恰当的激发波长，测量荧光发射的强度，并将荧光强度转换为相应的荧光物质浓度值。
荧光分光光度计的组成及测量过程荧光分光光度计的组成包括光源、单色器、样品室、检测器和记录装置等。
在测量过程中，样品需放置在样品室内，通过调节激发光波长和荧光发射波长来测定样品中荧光物质的浓度。
荧光分光光度计的具体测量过程如下：1.设定激发波长：荧光分析中，激发波长需要与目标荧光物质的吸收光谱重叠，以激发目标荧光物质的分子。
通过调节单色器可以选择恰当的激发波长。
2.注入样品：样品通过样品室，可以防止激发光对测量的影响。
样品需要与激发波长重叠，并且需要稳定地放置在样品室内。
3.测量荧光强度：通过检测器测量样品产生的荧光强度。
荧光分光光度计
固定某一激发波长，测定荧光发射强度随发射波长
变化得到的光谱。
1 二维荧光光谱（常规荧光光谱）
2 三维荧光光谱
三维立体图
等高线图
（2）吸收特征频率的光后，应可产生具有一定量子效率 的荧光，即量子效率K足够大
3 荧光分析的特点
三、荧光分光光度计的构成
四、荧光分光光度计的应用
任何荧光化合物都具有两种特征光谱：
荧光激发光谱（吸收光谱） 固定某一发射波长，测定该波长下的荧光发射强度 随激发波长变化所得的光谱。 荧光发射光谱（荧光光谱）
荧光分光光度计
一. 概述
二.荧光分析的基本原理
三.荧光分光光度计构成
四.荧光分光光度计的应用
一、概述
荧光分析可以定性或定量分析。
荧光分光光度计就是利用荧光这一特性进行物质 分析的仪器。
二、荧光分析的基本原理
1 荧光的产生
2 荧光强度与浓度之间的关系 荧光强度与浓度的关系
F = K（I0—I）
I0——入射光辐射功率； I——透射光辐射功率；荧光 量子产率（K）。 根据前面所学习朗伯－比尔定律可以得到 F = KI02.303 εbc 即在低浓度时，溶液的荧光强度与荧光物质的浓度 成正比，这是荧光法定量的基础。
产生并观察到荧光的条件： （1）分子具有与辐射频率相应的荧光结构
f98荧光分光光度计说明书_概述
f98荧光分光光度计说明书概述1. 引言：概述：本文是《f98荧光分光光度计说明书》的概述部分。
本部分将简要介绍该说明书的结构、目的以及主要内容，以便读者更好地理解并使用该荧光分光光度计。
文章结构：本说明书主要包括引言、正文、f98荧光分光光度计的使用指南、常见问题解答和故障排除、结论和展望等几个部分。
引言部分为整篇文章的开头，为读者提供了对全文内容的基本了解。
目的：该说明书旨在向用户详细介绍f98荧光分光光度计及其工作原理、特点和功能。
同时，通过使用指南和常见问题解答，帮助用户正确操作仪器，并解决在实验过程中可能遇到的问题和故障。
接下来，我们将逐一介绍“1. 引言”中所列出的各小节内容。
2. 正文:2.1 什么是f98荧光分光光度计:f98荧光分光光度计是一种专门用于测量和分析样品中的荧光特性的仪器。
它通过激发样品中的荧光物质并测量其产生的荧光信号来获取关于样品的信息。
f98荧光分光光度计可以广泛应用于许多领域，如生物学、化学、医学等。
2.2 f98荧光分光光度计的工作原理:f98荧光分光光度计使用一定波长范围内的激发源来激发样品中的荧光物质。
这些激发源可以是可见或紫外线的灯管或激光器。
当样品被激发时，其中的荧光物质会吸收能量并重新辐射出以较长波长的荧光信号。
f98荧光分光仪通过检测和记录这些荧光信号的强度来测量样品中所含有的荧-4.3 数据处理与结果解读”: {不要使用markdown,不要包含网址亮物质。
该仪器还可以根据用户需求进行专门设置和调整，以提高测量的准确性和灵敏度。
2.3 f98荧光分光光度计的主要特点和功能:- 高灵敏度：f98荧光分光光度计具有极高的灵敏度，可以检测到样品中微量的荧光物质，并提供准确的测量结果。
- 宽波长范围：该仪器可在可见光至紫外线范围内进行测量，适用于不同波长下的荧光样品。
- 多种测量模式：f98荧光分光仪支持多种不同的测量模式，如荧光强度、寿命等，方便用户根据需求进行选择。
荧光分光光度计结构功能简介
F-4500荧光分光光度计结构功能简介
(introduction of F-4500 Fluorospectrophotometry)
某些物质的分子能吸收能量而发射荧光，根据荧光的光谱和荧光的强度，对物质进行定性或定量分析。
通常所指的分子荧光是指紫外－可见光荧光，即利用某些物质受到紫外光照射后，发出比吸收的紫外光波长更长或相等的紫外光荧光或可见光荧光，通过测定物质分子产生的荧光强度进行分析的方法称为荧光分析。
荧光分析的主要特点是灵敏度高，捡出限为10-7～10-9g/ml.同种物质的稀溶液，其产生的荧光强度与浓度呈线性关系。
利用这个性质对物质进行定量分析。
F－4500荧光分光光度计
F－4500荧光分光光度计主要功能:
①波长扫描功能；已知激发波长，扫描发射波长，或已知发射波长，扫描激发波长。
②时间扫描功能，观察荧光物质的荧光随时间变化的情况。
③荧光光度值测定功能，用于定量分析。
④3-D扫描功能，三维光谱扫描功能。
操作方法：
1）打开计算机主机电源打开F－4500荧光分光光度计电源开关（Power），打开氙灯启动按钮，打开仪器运行开关（Run）。
2）启动FL－solutions应用软件，设置测量方法，选择测量模式。
如【波长扫描】【时间扫描】【荧光光度值测定】【3－D扫描】等。
按测量模式，设置相应的测量参数
3）用空白液调零，按照测量模式及仪器提示进行样品测试。
4）保存测量数据
5）退出应用程序，关仪器运行开关（Run）,关仪器电源开关（Power）,等5分钟再打开（Power）让风扇散热。
关计算机电源及显示器。
6）清洗荧光比色杯。
荧光分光光度计基本结构和原理
荧光分光光度计基本结构和原理荧光分光光度计是一种应用广泛的光学分析仪器。
它利用样品所发生的荧光现象进行分析和测量，能够对分子结构和特性进行研究。
本文将介绍荧光分光光度计的基本结构和原理。
基本结构荧光分光光度计由以下部分组成：光源光源是荧光分光光度计的重要组成部分，能够提供稳定的光照射样品的能量。
常用的光源包括氙灯、汞灯、钨灯等。
其中氙灯是最常用的光源，因为其稳定性好，能够提供广泛的光谱范围。
单色器单色器是荧光分光光度计的关键组件，用于分离不同波长的光线。
荧光分光光度计使用紫外线通过样品，当紫外线所包含的能量高到一定程度时，样品会发生荧光现象，在荧光光谱上会产生一个峰值，这个峰值可以用单色器来检测。
常用的单色器有单色棱镜单色器和光栅单色器。
样品室样品室是荧光分光光度计中放置样品的位置。
样品室通常是一个长方体玻璃腔体，内部涂有荧光性涂料，并有入光和出光口。
荧光分光光度计中的样品室通常要求在光学性能、耐药性和化学惰性等方面具有优异的性能。
探测器探测器是荧光分光光度计的另一个关键部分。
它能够测量样品室中荧光发射的电流信号，将之转化为数字信号，然后通过计算机进行处理。
通常使用具有高量子效率和线性范围的二极管阵列探测器。
计算机荧光分光光度计的数据处理都是由计算机完成的。
计算机能够控制光源、单色器、样品室和探测器的工作，进行测量、数据处理和结果输出。
通过计算机的操作，可以实现更高效、更精准的荧光分光光度计分析。
原理荧光分光光度计的原理是利用物质在可见紫外光谱范围内吸收能量而发生荧光现象。
通过紫外线激发样品，样品吸收能量后会发生能级跃迁，一般从基态到激发态或低能级到高能级，随后又迅速从激发态退回到基态时，会放出一些能量，或称为荧光，荧光光谱上一般能观察到一个峰值。
荧光分光光度计通过将紫外线转化为荧光，并测量荧光的信号强度来定量分析样品中的化合物。
多种荧光现象可以用来检测样品的不同特性或成分，如化学成分、含量、质量、结构等。
荧光分光度计实验报告
一、实验目的1. 掌握荧光分光光度计的基本原理和操作方法。
2. 了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用。
3. 通过对荧光光谱的测定，掌握激发光谱和发射光谱的绘制方法。
4. 学会运用荧光分光光度法对物质进行定性和定量分析。
二、实验原理荧光分光光度法是一种基于物质在特定波长范围内吸收光子后，发出荧光现象进行定性和定量分析的方法。
实验原理如下：1. 荧光现象：当物质吸收光子后，其外层电子从基态跃迁到激发态，随后以辐射跃迁的方式返回基态，发射出一定波长的光，称为荧光。
2. 激发光谱：在固定发射波长下，被测物吸收的荧光强度随激发光波长的变化曲线。
激发光谱反映了不同波长的光激发物质产生荧光的能力。
3. 发射光谱：在固定激发波长下，被测物发射的荧光强度随发射光波长的变化曲线。
发射光谱反映了物质在特定激发波长下，发射荧光的能力。
4. 荧光强度与浓度的关系：在稀溶液中，荧光强度与物质的浓度成正比。
根据比尔定律，荧光强度与物质浓度、激发光强度和溶液的摩尔吸光系数有关。
三、实验仪器与试剂1. 实验仪器：荧光分光光度计、紫外可见分光光度计、比色皿、样品池、计算机等。
2. 实验试剂：待测物质标准溶液、溶剂、荧光猝灭剂等。
四、实验步骤1. 仪器调试：打开荧光分光光度计，预热仪器，调整光源和检测器，使仪器达到最佳工作状态。
2. 激发光谱扫描：设定固定发射波长，扫描激发光波长，记录荧光强度，绘制激发光谱。
3. 发射光谱扫描：设定固定激发波长，扫描发射光波长，记录荧光强度，绘制发射光谱。
4. 样品测定：将待测物质配制成一定浓度的溶液，测定其荧光强度，并与标准溶液进行比较，计算待测物质的含量。
5. 数据处理：利用计算机软件对实验数据进行处理，绘制激发光谱、发射光谱，并进行定量分析。
五、实验结果与分析1. 激发光谱：根据实验数据，绘制激发光谱，分析激发波长对荧光强度的影响。
2. 发射光谱：根据实验数据，绘制发射光谱，分析发射波长对荧光强度的影响。
实验一 荧光分光光度计的使用
实验一 荧光分光光度计的使用一、实验目的1.通过实验强化对荧光分光光度法的理解。
2.了解荧光分光光度计的结构和使用方法。
二、实验原理荧光分析法适宜一定强度的激发光经第一单色器分光，选择最佳波长的光去激发液池内的荧光物质。
该物质发出的荧光可射向四面八方，但通过液池后的激发余光是沿直线传播的。
为了准确的进行荧光测定，检测器不能直接对准光源通常在液池的一边，与激发光成直角关系。
1. 荧光激发光谱：将激发荧光的光源用单色器分光，连续改变激发光波长，固定荧光发射波长，测定不同波长激发光下物质溶液发射的荧光强度)(F ，作λ-F 光谱图称激发光谱。
从激发光谱图上可找到发生荧光强度最强的激发波长ex λ，选用 ex λ可得到强度最大的荧光。
2.荧光发射光谱：选择ex λ作激发光源，用另一单色器将物质发射的荧光分光，记录每一波长下的 F ，作 λ-F 光谱图称为荧光发射光谱。
荧光发射光谱中荧光强度最强的波长为em λ。
ex λ与 em λ一般为定量分析中所选用的最灵敏的波长。
三、仪器与试剂1.仪器：Cary Eclipse 型荧光分光光度计2.试剂：核黄素试剂四、实验步骤1.试剂配制：取适量核黄素加水配置成溶液。
将溶液加入荧光比色皿，再将比色皿放入荧光分光光度计中。
2.测定（1）荧光发射光谱打开程序，单击set up，跳出一个窗口，单击Emission，则Excitation 固定，设为350nm。
再将扫描波长设定为400~600nm。
狭缝定为5，单击OK，等Start变绿灯时单击，仪器扫描出图，此为荧光发射光谱。
如下图。
（2）荧光激发光谱打开程序，单击set up，跳出一个窗口，单击Excitation，则Emission 固定，设为370nm。
再将扫描波长设定为200~500nm。
狭缝定为5，单击OK，等Start变绿灯时单击，仪器扫描出图，此为荧光激发光谱。
如下图。
五、注意事项1.荧光比色皿四面均透光，用手拿取时应拿棱边，避免碰到透光面。
荧光分光光度计原理和使用方法
荧光分光光度计原理和使用方法
荧光分光光度计是一种用于分析荧光的仪器，它可以测量物质吸收荧光时产生的发光强度。
其基本原理是将样品在特定波长下激发，使其发生荧光，然后通过荧光的发射波长来确定样品的化学成分和浓度。
荧光分光光度计的使用方法如下：
1. 准备样品：准备好需要分析的样品溶液，并将其置于荧光分光光度计的样品池中。
2. 设置激发波长：根据样品的特性和需要分析的化学物质，选择适当的激发波长。
3. 设置荧光检测波长：根据需要分析的物质和荧光特性，选择适当的荧光检测波长。
4. 调整荧光分光光度计参数：根据荧光信号强度和需要分析的物质，调整荧光分光光度计的增益、滤波器等参数。
5. 测量荧光信号：启动荧光分光光度计，测量样品的荧光信号强度。
6. 分析荧光信号：根据荧光信号的强度和波长，分析样品的化学成分和浓度。
荧光分光光度计应用广泛，可以用于分析生物分子、环境污染物、食品添加剂等多种化学物质。
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荧光分光光度计结构
荧光分光光度计结构
荧光分光光度计是一种用于测量样品荧光强度的仪器，由荧光激发源、样品室、荧光检测器、光学滤光片和数据采集系统等组成。
以下是详
细介绍：
荧光分光光度计结构简介：
1.荧光激发源：荧光分光光度计的荧光激发源通常为氙气灯或汞灯。
这些灯具有稳定的高辐射能力，可以发出一系列不同波长的光线，以激
发样品的荧光发射。
2.样品室：荧光分光光度计的样品室通常由两个平行的固定面组成。
样品通过夹在这两个面之间的物理空间中进行测量。
此外，样品室还包
括温度控制器和稳定的气氛控制，以确保实验精度。
3.荧光检测器：荧光分光光度计的荧光检测器常常是光电倍增管。
当发射荧光的样品通过样品室时，荧光着陆在检测器上。
荧光发射可以被
荧光检测器感应并转换成电信号输出。
4.滤光片：荧光分光光度计还配备有一系列光学滤光片，使得荧光检测器只能检测到特定的波长范围内的光。
这有助于减少杂质荧光的干扰
并增加实验的灵敏度。
5.数据采集系统：荧光分光光度计的数据采集系统对信号进行放大、采集、数字化和处理。
该系统提供了两个输出信号，一个用于荧光强度测量，另一个用于波长扫描测量。
荧光分光光度计是重要的分析实验仪器，被广泛应用于科学研究和工业制造等领域。
它具有高分辨率、高信噪比、低检测限和广泛范围的荧光检测能力。
它是分子荧光学、荧光检测等领域中必不可少的仪器之一。
荧光分光光度计(分子荧光)
荧光分光光度计（分子荧光）Fluores_cence •1楼1、基本原理在室温下分子大都处在基态的最低振动能级，当受到光的照射时，便吸收与它的特征频率相一致的光线，其中某些电子由原来的基态能级跃迁到第一电子激发态或更高电子激发态中的各个不同振动能级，这就是在分光光度法中所述的吸光现象。
跃迁到较高能级的分子，很快通过振动弛豫、内转换等方式释放能量后下降到第一电子激发态的最低振动能级，能量的这种转移形式，称为无辐射跃迁。
再由第一电子激发态的最低振动能级下降到基态的任何振动能级，并以光的形式放出它们所吸收的能量，这种光便称为荧光。
荧光分析法具有灵敏度高、选择性强、需样量少和方法简便等优点，它的测定下限通常比分光光度法低2~4个数量级，在生化分析中的应用较广泛。
荧光分析法是测定物质吸收了一定频率的光以后，物质本身所发射的光的强度。
物质吸收的光，称为激发光；物质受激后所发射的光，称为发射光或荧光。
如果将激发光用单色器分光后，连续测定相应的荧光的强度所得到的曲线，称为该荧光物质的激发光谱（ex citation spectrum）。
实际上荧光物质的激发光谱就是它的吸收光谱。
在激发光谱中最大吸收处的波长处，固定波长和强度，检测物质所发射的荧光的波长和强度，所得到的曲线称为该物质的荧光发射光谱，简称荧光光谱（fluorescence spectrum）。
在建立荧光分析法时，需根据荧光光谱来选择适当的测定波长。
激发光谱和荧光光谱是荧光物质定性的依据。
某些物质的分子能吸收能量而发射出荧光，根据荧光的光谱和荧光强度，对物质进行定性或定量的方法，称为荧光分析法（fluoresc ence analysis）。
对于某一荧光物质的稀溶液，在一定波长和一定强度的入射光照射下，当液层的厚度不变时，所发生的荧光强度和该溶液的浓度成正比，这是荧光定量分析的基础。
2、检测荧光的仪器测定荧光可用荧光计和荧光分光光度计，其二者的结构复杂程度不同，但其基本结构是相似的。
荧光分光光度计(分子荧光)
荧光分光光度计（分子荧光）Fluores_cence •1楼1、基本原理在室温下分子大都处在基态的最低振动能级，当受到光的照射时，便吸收与它的特征频率相一致的光线，其中某些电子由原来的基态能级跃迁到第一电子激发态或更高电子激发态中的各个不同振动能级，这就是在分光光度法中所述的吸光现象。
跃迁到较高能级的分子，很快通过振动弛豫、内转换等方式释放能量后下降到第一电子激发态的最低振动能级，能量的这种转移形式，称为无辐射跃迁。
再由第一电子激发态的最低振动能级下降到基态的任何振动能级，并以光的形式放出它们所吸收的能量，这种光便称为荧光。
荧光分析法具有灵敏度高、选择性强、需样量少和方法简便等优点，它的测定下限通常比分光光度法低2~4个数量级，在生化分析中的应用较广泛。
荧光分析法是测定物质吸收了一定频率的光以后，物质本身所发射的光的强度。
物质吸收的光，称为激发光；物质受激后所发射的光，称为发射光或荧光。
如果将激发光用单色器分光后，连续测定相应的荧光的强度所得到的曲线，称为该荧光物质的激发光谱（ex citation spectrum）。
实际上荧光物质的激发光谱就是它的吸收光谱。
在激发光谱中最大吸收处的波长处，固定波长和强度，检测物质所发射的荧光的波长和强度，所得到的曲线称为该物质的荧光发射光谱，简称荧光光谱（fluorescence spectrum）。
在建立荧光分析法时，需根据荧光光谱来选择适当的测定波长。
激发光谱和荧光光谱是荧光物质定性的依据。
某些物质的分子能吸收能量而发射出荧光，根据荧光的光谱和荧光强度，对物质进行定性或定量的方法，称为荧光分析法（fluoresc ence analysis）。
对于某一荧光物质的稀溶液，在一定波长和一定强度的入射光照射下，当液层的厚度不变时，所发生的荧光强度和该溶液的浓度成正比，这是荧光定量分析的基础。
2、检测荧光的仪器测定荧光可用荧光计和荧光分光光度计，其二者的结构复杂程度不同，但其基本结构是相似的。
一般荧光分光光度计纵坐标
一般荧光分光光度计纵坐标荧光分光光度计是一种广泛应用于化学、生物和物理领域的仪器，用于测量物质在特定波长下的荧光强度。
在使用荧光分光光度计时，我们需要了解仪器上的各个部分以及它们的功能。
其中，纵坐标是荧光强度的测量结果，它的数值与样品的荧光强度成正比。
纵坐标的单位通常是荧光强度（Fluorescence Intensity），表示样品在特定波长下的荧光发射强度。
荧光强度的测量结果可以用于分析样品的化学成分、光物理特性以及反应动力学等信息。
在荧光分光光度计上，纵坐标的数值通常是一个连续的范围，可以通过调节仪器的参数来适应不同样品的测量需求。
纵坐标的数值由仪器的光学系统测量得出。
光学系统由光源、滤光片、单色器、样品室和光电二极管等组成。
光源发出的光经过滤光片的选择，单色器的单色分离，然后照射到样品室中的样品上。
样品吸收光能后会发生荧光发射，光电二极管会测量并转换这个发射光强度为电信号，最终在纵坐标上显示出荧光强度的数值。
在使用荧光分光光度计时，我们需要设置一系列参数来确保测量的准确性和可靠性。
其中，波长是最关键的参数之一，它决定了荧光分光光度计所测量的荧光发射的特定波长范围。
通过调节仪器上的波长选择器，我们可以选择适合样品的荧光发射波长范围，从而获得准确的测量结果。
另一个重要的参数是积分时间，它是指在单个波长下测量荧光强度的时间长度。
积分时间越长，测量的荧光强度越准确，但同时也会增加测量的时间。
在实际应用中，我们需要根据样品的特性来选择合适的积分时间，以确保测量的结果既准确又高效。
此外，纵坐标的刻度也需要被正确设置。
在荧光分光光度计上，纵坐标的刻度通常是线性的，即荧光强度与纵坐标上的数值成正比。
因此，在进行荧光测量时，我们可以根据纵坐标的数值来推断样品的荧光强度。
总之，荧光分光光度计纵坐标是表示样品荧光强度的数值，其大小与样品在特定波长下的荧光发射强度成正比。
纵坐标的数值由仪器的光学系统测量得出，通过调节仪器的参数，如波长和积分时间，可以获得准确的荧光测量结果。
荧光分光光度计的应用幻灯片PPT
目前用苯高并效( a液)芘的检测主要 采用层析- 荧光分光光度法和高效液相色谱法。今应
相色的谱测仪定和要荧光分光光度计对日常饮用水中苯并( a ) 芘进展检测, 满足了地表水
2 实验局部
2.1 主要仪器及试剂
高效液相色 谱仪, 51 0 泵, Wa t e r s 公司;Rheodyne 7725 i 六通进样 阀, 带 20 μ L 进样
2.4 回收率实验
取 1 L 垃圾渗出液蒸馏, 向蒸馏液中分别参加含苯胺 0. 100、0. 200 mg 的 标准溶液, 然后用蒸馏水稀释至2 L 后直接进样分析, 结果见表1。可 以看出, 本法的回收率在 96% ~ 104 % 之间。图 2 b、 c 是垃圾渗出液 的加标回收荧光光谱。
2.5流动注射- 荧光分光光度计联用的检测性能
3 结果与讨论 3.1负高压的选择 在试验条件下, 选择不同的光电倍增管负高压 300、 290、 28 0、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ260 V
时测定和 绘制标准曲线, 试验说明负高压在 290 V 时, 砷、 汞标准曲 线 r均大于 0 .
999。 3.2硼氢化钾溶液浓度的影响 试验说明硼氢化钾的浓度高, 砷测定曲线回归好, 但是汞测得荧光值小,
砷
汞混合标准储藏液 A s 1μg/ ml, Hg 0. 1μg/ ml; 砷汞混合标准应用液 As 100 n g/ ml , Hg 10 n g/ ml; 标准溶液稀释均用蒸馏水；复原剂( 5% 硫脲- 抗坏血 酸溶液) ；5% HCl 溶液 ； 0. 01 mo l/ L N a O H 溶液；1% K HB4 - Na O H 溶液 2.3 分析步骤
1.2.2抗坏血酸标准溶液 准确称取60℃真空枯燥2h的0.0500g抗坏血酸，用50g/L偏磷酸溶解并定 至50mL棕色容量瓶中，即为1mg /L的抗坏血酸标准储藏液.用偏磷酸逐级 稀释，配置成0 0.2 1 5 10 20mg /L标准溶液，其余步骤同样品前处理. 1.2.3荧光光度计参数条件 测量模式: 光度测量法，激发波长350nm，发射波长430nm，积分时间 0.1s，延迟时间按0.1s，激发波长狭缝宽度5.0nm，发射波长狭缝宽度 5.0nm，光电倍增管电压250V. 2 结果与讨论 2.1 方法的检出限 标准曲线和相关系数 连续11次进空白样品，根据3倍标准偏差计算得出本方法VC检出限为 0.95mg/kg 回归方程为Y=0.0073X－0.029，相关系数为0.9996。可见本方 法检出限较低，在测量浓度0～20mg /L范围内线性良好。
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［１］ 赵文宽等．仪器分析．北京：高等教育出版社，２００１ ［２］ 陈国珍等．．荧光分析法． ．第二版．北京：科技出版
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２４０． ［４］ 方光荣等．光谱学于光谱分析，２ ０ ０ ２ ，２ ２ ：６ ３ １ ． ［５］ 王 尊 本 等 ． 环 境 化 学 ． １ ９ ８ ５ ， ４ （ ３ ）：６ １ ． ［６］ 陈雁君等．中国预防医学杂志，１９ ９ ３，２７ （１ ）：５３ ． ［７］ 白春礼等．世界科技研究与发展，１ ９ ９ ９ ，２ １ （４ ）：
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｆｌｕｏｒｉｍ ｅｔｅｒｙ ｈ ａｖｅ ｔｈ ｅ ｃｈ ａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｈ ｉｇ ｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔ，ｔａｋｉｎｇ ｔｈ ｅ ｔｉｔｔｌｅ ｓａｍ ｐ ｌｅ， ｎｏｗ ａｌｒｅａｄ ｙ ｈ ａｓ ｂｅｅｎ ｃｏｍ ｐ ｒｅｈ ｅｎｓｉｖｅｌｙ ａｐ ｐ ｌｉｅｄ ｉｎ ｂｉｏｃｈ ｅｍ ｉｓｔｒｙ ， ｃｈ ｅｍ ｉｓｔｒｙ ， ｍ ｅｄ ｉｃｉｎｅ ａｎａｌｙ ｓｉｓ， ｆｏｏｄ ｅｘａｍ ｉｎａｔｉｏｎ， ｇ ｅｏｇ ｒ ａｐ ｈ ｙ， ｍ ｅｔａｌｌｕｒ ｇ ｙ， ｍ ｅｄ ｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ， ｅｎｖｉｒｏｎｍ ｅｎｔ ｓｃｉｅｎｃｅ ｓｔｕｄ ｉｅｓ ｉｎ ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｏ ｏｎ ．Ｔｈ ｅ ｄ ｅｖｅｌｏｐ ｍ ｅｎｔ ｏｆ ｔｈ ｅ ｆｌｕｏｒｉｍ ｅｔｅｒｙ ａｎａｌｙ ｚ ｅｓ ｒｅｌａｔｅ ｔｏ ａｐ ｐ ｌｉｅｄ ｔｈ ｅ ｄ ｅｖｅｌｏｐ ｍ ｅｎｔｏｆ ｔｈ ｅ ｉｎｓｔｒｕｍ ｅｎｔ’ｓ ａｐ ｐ ｌｉｃａｔｉｏｎ． ａｓ ｆｏｌｌｏｗ ｓ ｉｎｔｒｏｄ ｕｃｅ ｔｈ ｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ， ｓｏｒｔ ， ａｐ ｐ ｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈ ｅ Ｓｐ ｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｉｍ ｅｔｅｒ． Ｋｅｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ Ｓｐ ｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｉｍ ｅｔｅｒ， Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ，Ｓｏｒｔ ，Ａ ｐ ｐ ｌｉｃａｔｉｏｎ
多种氨基酸的分析、在肌肉和心脏疾病中非常 注意细胞内离子浓度的测定；核糖核酸（Ｒ Ｎ Ａ ）和 脱氧核糖核酸（Ｄ Ｎ Ａ ）的相关研究，如 Ｄ Ｎ Ａ 、Ｒ Ｎ Ａ 的检测和定量，用以鉴别病毒细菌等的 ＤＮＡ／酶相互 作用研究，Ｄ Ｎ Ａ 密码的改变导致癌症病因研究，能断 裂 Ｄ Ｎ Ａ 限制酶测定，荧光ＰＣＲ（Ｄ Ｎ Ａ 的放大）的研究等； 蛋白质和酶的作用研究，如 Ｄ Ｎ Ａ 的表达、细胞膜流动 性及细胞膜内蛋白质研究、涉及抗体、蛋白质和酶的 ＥＬＩＳＡ 测定研究、酶活性测定等［７］。尤其是各种新型 蛋白和核酸荧光标记物的引入，各种荧光酶联免疫分 析技术 、偏振荧光测定技术以及为克服生物样品紫外 区背景荧光和散射光的严重干扰而提出的近红外区荧 光测定技术的发展，为医学和生命科学领域提供了丰 富的研究手段。
以前，显示装置有数字电压表，记录仪和阴极示 波器等，现在，人们可以通过计算机软硬件技术根据 不同要求，来选择不同的直观的视频读出方式［３］。
２ 荧光分光光度计分类
荧光分光光度计的发展经历了手控式荧光分光光 度计，自动记录式荧光分光光度计，计算机控制式荧 光分光光度计三个阶段；荧光分光光度计还可分为单
光源应具有强度大、适用波长范围宽两大特点，常 用光源有高压汞灯、氙灯、氙－ 汞弧灯等。此外，紫外 激光器、固体激光器、高功率连续可调染料激光器和二 极管激光器等荧光光源把荧光法的应用范围拓宽。 １．２ 滤光片和单色器
在荧光光度计中，通常采用干涉滤光片和吸收 滤光片作为激发光束和荧光辐射的波长选择器。在荧 光分光光度计中至少选用一个，而常常是用两个光栅 单色器，且均带有可调狭缝，以供选 年 ３ 月出生，助理实验室师，Ｔｅｌ ： ０４５１ — ５５１９ ０５１５ — ８ ２０７， Ｅ — ｍ ａｉｌ：ｘ ｉａｏｗ ｅｉｌｉｎａ＠ １６３．ｃｏｍ ．
６１
技术与应用
生命科学仪器 ２００７ 第 ５ 卷 ／ ７ 月刊
光束式荧光分光光度计和双光束式荧光分光光度计两 大系列。其他的还有低温激光Ｓｈ ｐ ｏｌ’ｓｋｉｌｌ荧光分光光 度计，配有寿命和相分辩测定的荧光分光光度计等。
生命科学仪器 ２００７ 第 ５ 卷 ／ ７ 月刊
技术与应用
荧光分光光度计的结构与应用
魏立娜
（东北农业大学理学院应用化学系，哈尔滨 １５００３０）
摘要 荧光法因其具有灵敏度高，取样量少等特点，现已广泛应用于生化、化学、药物分析、食品检验、 地理、冶金、医学、环境科学和生命科学研究等各个领域。荧光分析法的发展与仪器应用的发展是密不可分的。本文介 绍了荧光分光光度计的结构、分类、应用。
关键词 荧光法， 荧光分光光度计， 结构， 分类， 应用
荧光法的固有灵敏度高，取样量少，检测限通常比 吸收光谱法低 １￣３ 个数量级，可达 ｎｇ ﹒ ｍ ｌ－ １ 级；线性范 围也常大于吸收光谱，又有荧光寿命，荧光量子产率，激 发峰波长，发射峰波长等多种参数因而有较好的选择 性［１］。但也由于荧光法的高灵敏度，使得定量荧光法引 入严重的基体干扰，荧光法在定量分析的应用不如吸收 光谱法，因为吸收紫外可见光的物质种类要比吸收相应 区域辐射而产生荧光的物质多。 目前荧光分析法广泛应 用于生化、化学、药物分析、食品检验、地理、冶金、 医学、环境科学和生命科学研究等各个领域。
（荧光分光光度计结构示意图）
带。理想的单色器应在整个波长区内有相同的光子通 过效率，不幸的是这种理想的单色器不存在。 １．３ 检测器
一般普通的荧光分光光度计均采用光电倍增管作 为检测器。它是很好的电流源，在一定条件下其电流 量与入射光强度成正比。此外，还有光导摄像管、电 子微分器、电荷耦合器阵列检测器。 １．４ 显示装置
荧光仪器是用来测定荧光物质的性质和含量的分 析仪器，通常分两大类：荧光光度计和荧光分光光度 计［２］。荧光分光光度计技术在现代科学的发展中正显 示出独特的作用，越来越得到人们的重视。下面将对 荧光分光光度计的结构，分类，发展和应用作以简单 介绍。
１ 荧光分光光度计的结构
一般荧光分光光度计由光源、激发光源、发射 光源、试样池、检测器、显示装置等组成。 １．１ 光源
３ 荧光分光光度计应用
理论上，具有刚性结构和平面结构的分子；π电 子共轭体系的分子；给电子取代基的化合物都可用直 接荧光法测定。间接荧光法测定是目标分析物本身不 具备荧光发射能力，但具备使某种荧光物质荧光猝灭的 能力，或者可以通过氧化还原偶联酶催化等手段使其转 化为荧光物质，而进行间接测定［４］。以下是荧光分光光 度计在现代各科学领域中的应用： ３．１ 环境检测领域：
曾用荧光法分析食品和药品中的化合物如：：维 生素 Ａ 、维生素 Ｂ１、Ｂ２（核黄素）、Ｂ６ 、Ｂ１２、维 生素ＢＣ（叶酸或蝶酰谷氨酸）、 维生素Ｃ、维生素Ｄ 、维 生素 Ｅ（生育酚）、维生素 Ｐ（芦丁）、 维生素 Ｆ（烟酸）、维 生素 Ｋ，抗生素药中的青梅毒、金霉素、四环素、抗 霉素、链霉素和放线菌素Ｄ 等，抗疟疾药中的奎宁、疟 涤平、扑疟母星、嘧啶甲胺和利凡诺等，麻醉药中的 大麻醇、唛啶盐酸盐、四氢大麻醇、吗啡、可待因、罂
荧光分光光度计检测技术已经成为环境污染监测 中污染物定性和定量分析的有效手段。如不同类型不 同场地的石油及其产品成份各有不同，其荧光光谱也有 着显著的区别，利用油标可在激发 ３１０ｎｍ ，发射 ３６５ ｎｍ 处测量淤泥和海水中油污样品中总油的含量．还可以对 机油、柴油、重油、原油及液压油进行初步鉴定［５；］ 空 气尘埃中多环芳烃的检测。其他如阴离子表面活性剂 作为洗涤剂污染的主要成份，叶绿素 ａ、叶绿素 ｂ、脱镁 叶绿素 ａ 和脱镁叶绿素 ｂ 作为水环境浮游植物生物量 和水体富营养化的重要指标以及多环芳烃等都可用荧 光分光光度计测量。 ３．２ 食品和药物成份分析领域：
１２．
Ｔｈ ｅ Ｃ ｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ａ ｐ ｐ ｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈ ｅ Ｓｐ ｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｉｍ ｅｔｅｒ
Ｌｉｎａ Ｗ ｅｉ （Ｄ ｅｐ ａｒｔｍ ｅｎｔ ｏｆ Ａｐ ｐ ｌｉｅｄ Ｃｈ ｅｍ ｉｓｔｒｙ ，Ｎ ｏｒｔｈ ｅａｓｔ Ａｇ ｒ ｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈ ａｒｂｉｎ １５００３０）
６２
粟碱、那可汀、吐根酚碱、依米丁、麻黄素、马 钱子碱盐酸盐、毛果（芸香）盐酸盐、弗勒可丁、 二丁卡因、麦角酸二乙胺等，镇痛药中扑热息痛、 阿司匹林、消炎痛吲哚美辛等，镇静药中的氨基比 林、苯并二氮杂卓、巴比妥、苯丙胺等以及吩噻嗪 类药物、奎诺酮类药物、利血平、异烟肼、６－ 巯 基 嘌 呤 等 ［ ６ ］。 ３．３ 医学和生命科学及其相关领域：