大赛路手性柱Q&A及手性分离经验

优化手性化合物的分离方法时，如何增加分离选择性？

正相手性色谱柱上增加分离度的方法有：降低流动相中醇的含量、降低柱温、更换流动相中醇的种类、更换手性柱。

建立手性化合物的分离方法时，选定了正相手性柱之后，如何选择流动相？

流动相首选正己烷和异丙醇的混合溶液，根据样品的酸碱性决定是否添加酸碱性添加剂。如果是中性样品则不需要添加添加剂，如果是酸性样品需要添加三氟乙酸或乙酸，如果是碱性样品需要添加二乙胺，添加剂的量一般为0.1 %。流动相中醇的含量一开始可以使用30%，根据样品出峰的快慢和分离度再调整醇的含量。流动相中醇的种类一般使用异丙醇，也可以使用乙醇。

建立手性化合物的分离方法时，如何选择手性柱？

根据文献或者参考大赛璐公司的《应用指南》中结构类似物的分离方法，选择手性柱；另外可以寄少量消旋品，大赛璐公司能免费为您选择分离最佳的手性柱。

手性柱使用完了之后如何清洗保存？

正相手性色谱柱如果使用正己烷和醇类的混合流动相之后，只需要用正己烷/异丙醇=90/10(v/v)的保存溶液冲洗30 min即可。反相手性色谱柱如果使用了水溶液和乙腈的混合流动相之后，只需要用水/乙腈=70/30(v/v)的保存溶液冲洗30 min即可。

CROWNPAK® CR(+)柱流动相中甲醇含量有要求吗？

CROWNPAK® CR(+)柱流动相中甲醇含量为0％-15%，甲醇的含量一旦超过15%，CROWNPAK® CR(+)柱会被损害。

正相手性柱进了水后，柱子会不会损坏？

正相手性色谱柱（例如AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H）一旦进了水，柱压会升高，但是只要柱压不超过柱压上限，柱子就不会损坏。只需用无水乙醇低流速(0.1-0.2 ml/min)将水全部充分置换出来，再用正相流动相低流速(0.1-0.2 ml/min)将乙醇全部置换出来就能继续使用该正相手性色谱柱。

样品的保留时间漂移，可能是哪些原因，如何解决？

1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。

2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。

3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。该情况在MA（+）柱上出现较多。

4、酸碱性的样品，有时在中性条件下能分开，峰形尚可，但保留时间会漂移；加入相应的酸碱添加剂即可。

5、流动相污染。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。需清洗色谱柱，流动相和样品溶液尽量现用现配。

（小极性样品的溶解）正相方法分析布洛芬时，有时峰形难看甚至达不到基线分离，什么原因？如何解决？

该方法为Hexane/IPA=99/1，极性很小；若样品不是溶解在流动相中，则结果很可能达不到基线

分离。采用流动相溶解即可。通常手性分析时，若流动相为H/I，H/E体系，且Hexane不超过85%，则溶解样品时可用流动相，也可用100%醇直接溶解。谱图通常差别不大。但是对小极性样品和流动相，尤其hexane超过90%时，一定注意用流动相溶解。

新柱CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE与原来的大赛璐手性柱有什么区别？

CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE是将多糖衍生物共价键合在硅胶上，而大赛璐原来的手性柱固定相都是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。正因为是共价键合，所以CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE柱能使用任何液相流动相，比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。CHRALPAK

IA/IB/IC/ID/IE与大赛璐原有的正相柱相比，扩大了溶剂选择的范围，增加了新的分离选择性，在原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE上得以分开。

键合型手性柱CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE的再生方式？

在再生前请先冲洗手性柱，以防止残留物对于再生效果的影响。IA柱修复方法：先用EtOH小流速冲洗30min，再用DMF，小流速冲洗3小时，然后EtOH过渡，验柱。若效果不好，再用EtOH 冲洗30min，然后THF冲洗2小时。IB柱，IC柱修复方法：用乙酸乙酯冲洗30min-120min，在室温下保存2天或更久。验柱。

CHIRALPAK® AD-H、CHIRALPAK® AS-H、CHIRALCEL® OD-H、CHIRALCEL® OJ-H四款最常用正相色谱柱的区别是什么？

区别是固定相的种类不同。CHIRALPAK AD-H、AS-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉衍生物；CHIRALCEL OD-H、OJ-H的硅胶表面涂敷的是纤维素衍生物。CHIRALPAK AD-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)；CHIRALPAK AS-H硅胶表面涂敷有直链淀粉-三[(S)-α-甲基苄基氨基甲酸酯；CHIRALCEL OD-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]; CHIRALCEL OJ-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]。不同种类的多糖衍生物决定了这些手性柱的分离对象各不相同，既相互包含，又相互补充。

CHIRALPAK® AD-3柱和CHIRALPAK® AD-H柱和CHIRALPAK® AD是什么区别？

CHIRALPAK® AD-3、CHIRALPAK® AD-H柱和CHIRALPAK® AD的填料种类是一样的，表面涂敷的都是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)，手性选择性基本相同。只不过填料的粒径不一样，CHIRALPAK® AD-3是3μm，CHIRALPAK® AD-H是5 μm，CHIRALPAK® AD是10 μm。CHIRALPAK® AD-3的柱效最高。

CHIRALPAK AD-H柱和CHIRALPAK AD是什么区别？

CHIRALPAK AD-H柱和CHIRALPAK AD的填料种类是一样的，表面涂敷的都是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)，手性选择性基本相同。只不过填料的粒径不一样，CHIRALPAK AD-H 是5 μm，CHIRALPAK AD是10 μm。CHIRALPAK AD-H能代替CHIRALPAK AD并且CHIRALPAK AD-H柱效更高。

正相手性色谱柱中保存液是什么？

正相手性色谱柱AD-H/AD-3、AS-H/AS-3、OD-H/OD-3、OJ-H/OJ-3中的保存液是正己烷/异