大赛路手性柱Q&A及手性分离经验
分离柱类型
用途
保护柱柱芯(×3) 分析柱 分析柱
内径 (mm) 4.0 4.6 4.6
长度 (mm)
10 150 250
填料粒径 (μm) 5 5 5
微径柱
2.1 150
5
半制备保护柱
10
20
5
半制备柱
10 150
5
半制备柱
20 250
5
CHIRLPAK® IC
5 μ 硅胶表面共价键合有纤维素－三(3,5－二氯苯基氨基甲酸酯)
100:0 到
50:50
极性溶剂
CHIRALCEL® OF,OG
100:0 到
80:20 100:0-85:15
和 40:60-0:100
CHIRALCEL® OF,OG CHIRALPAK® AD
甲醇 乙醇 或者两者的混合物
CHIRALPAK® AD(-H),AS(-H)
CHIRALCEL®
乙腈 或者 乙腈与醇类的混合物
微径柱
4.6 150 4.6 250
2.1 150
(μm) 5 5 5
5
83337 CHIRALPAK® IC
半制备保护柱
10
20
5
83335 CHIRALPAK® IC
半制备柱
10 150
5
83345 CHIRALPAK® IC
半制备柱
20 250
5
CHIRALPAK® 和CHIRALCEL®
大赛璐多糖衍生物正相手性柱
19145
CHIRALPAK® AS /SFC
SFC 半制备柱 20
250
10
CHIRALPAK® AD,AS ； CHIRALCEL® OD, OJ这四根手性柱应用最广泛，加起 来能分离 80%以上的手性化合物。
大赛璐手性柱使用注意事项
9/79
Part. 1-5
正相柱的冲洗与保存
实验完成后：如流动相中有酸性或碱性添加剂，先用不加添加剂的同 比例流动相冲洗柱子（20倍柱体积），再用出厂保存溶剂冲洗保存（ 20倍柱体积）。比如ADH柱实验用的流动相是正己烷：乙醇：二乙 胺=70:30:0.1，用完了以后先用正己烷：乙醇=70:30冲洗，最后用正 己烷：异丙醇=90:10冲洗保存。 柱子被污染：按照大赛璐《多糖涂覆型手性柱（正相流动相）冲洗方 法》进行冲洗 注意：醇的黏度大，注意冲洗时的流速； AYH不可以用100%异丙醇冲洗，否则柱效会下降，但这种损 伤是可修复的，用乙醇将异丙醇从柱子中置换出来即可恢复柱效。
B.仪器当前流动相中含有一些会破坏柱子的溶剂（如乙酸乙酯、二氯甲烷和四氢呋喃等） ，仪器先不接柱子，接上两通
1. 用异丙醇或乙醇冲洗所有管路 （至少60ml） -> 置换掉对柱子有损伤的溶剂 2. 用实验所需流动相冲洗所有管路（约30ml） -> 置换醇 C.仪器当前流动相是传统的非水流动相（如正己烷、异丙醇和乙醇），仪器先不接柱子， 接上两通，直接用实验所需流动相冲洗所有管路（约30ml）即可
CHIRALPAK® AD-3/AD-H/AD CHIRALPAK® AS-3/AS-H/AS CHIRALPAK® AY-3/AY-H CHIRALPAK® AZ-3/AZ-H CHIRALCEL® OD-3/OD-H/OD CHIRALCEL® OJ-3/OJ-H/OJ CHIRALCEL® OZ-3/OZ-H CHIRALCEL® OX-3/OX-H CHIRALCEL® OB-H/OB CHIRALCEL® OC-H/OC CHIRALCEL® OA CHIRALCEL® OG CHIRALCEL® OF CHIRALCEL® OK
大赛璐手性分析进展
14
一、新型固定相的开发及应用
• 选择性优势 • 苯甲酸仲丁酯 Hexane/IPA=99/1 单峰 • AY-H EtOH/MeOH=95/5 分离度1.8
O
trans-Stilbene oxide
26
Peak-1
24
40
Peak-2
OZ-H
OZ-H
35
22
20 30
HETP (µm)
18
16
HETP (µm)
25
14
OZ-3
20
12
OZ-3
15
10
8
6 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5
10 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5
HO COOH O
Thalidomide
O
CH 3O N CH 3O OMe
N O O N H
O
OMe
Laudanosine
0
12
24
36
48
60
0
12
24
36
48
60
0
12
24
36
48
60
Retention time (second)
Retention time (second)
Retention time (second)
• 柱效更高 • 相同保留时间，分离度更大
O N O NH
2.3
Rs=3.08
大赛璐柱子使用
1、OD柱与ODH柱是不是一种柱子啊，另外还有AD与ADH，OJ与OJH关于手性柱，OD柱与ODH柱是不是一种柱子啊？OD柱与ODH柱是不是一种柱子啊，另外还有AD与ADH，OJ与OJH，谢了柱子的型号不同说明他的手性填充物不同。
OD和OD－H的区别是相同的填充物，OD－H的填充密度大，更紧，效果更好。
CHIRALPAK AD-H柱和CHIRALPAK AD是什么区别？CHIRALPAK AD-H柱和CHIRALPAK AD的填料种类是一样的，表面涂敷的都是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)，手性选择性基本相同。
只不过填料的粒径不一样，CHIRALPAK AD-H是5 μm，CHIRALPAK AD是10 μm。
CHIRALPAK AD-H能代替CHIRALPAK AD并且CHIRALPAK AD-H柱效更高。
2.手性柱谱图中异构体的分离度下降了，这可能是什么原因，该怎么办？分离度下降的原因有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化，或者色谱柱受损柱效发生了变化。
首先查看是否是因为温度、流动相成分等外在因素发生了变化导致分离度下降，如果排除了各种外在因素就有可能是分析柱本身的柱效下降导致的。
如果分离度在短时间内急剧下降伴随柱压上升，可能是有强极性溶剂损害了柱子；如果分离度在长时间内慢慢下降，可能是柱头受污染或柱头塌陷，需要更换保护柱或者更换分析柱。
3.正相手性色谱柱柱压高了怎么办？手性柱压力高的原因有可能是流动相中醇的含量太高，或者液相流路中有堵塞，或者柱头有样品析出，或者填料被压缩柱头塌陷等。
针对不同的原因请有针对性的采取相应的措施。
如果是流动相中醇含量太高，则需要升高温度或者降低流速。
如果液相流路中有堵塞需要排除堵塞。
如果柱头有样品析出则需要使用流动相溶解样品以及样品预处理除掉样品中易析出的成分。
如果填料被高压压缩柱头塌陷，则需要重新购买新的手性柱。
4.正相手性柱进了水后，柱子会不会损坏？正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H一旦进了水，柱压会升高，但是只要柱压不超过柱压上限，柱子就不会损坏。
大赛璐手性柱-HPLC操作与维护
2.多糖涂敷型正相手性柱
D Normal Phase 多糖 O.,LT CHIRALPAK® AD-3/AD-H/AD A)C CHIRALPAK® AS-3/AS-H/AS IN CHIRALPAK® AY-3/AY-H (CH CHIRALPAK® AZ-3/AZ-H S CHIRALCEL® OD-3/OD-H/OD IE CHIRALCEL® OJ-3/OJ-H/OJ 涂敷 OG CHIRALCEL® OZ-3/OZ-H DAICEL CHIRAL T正EC相HNOL CHIRALCEL® OX-3/OX-H
泵
柱子与检测器之间
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2.1多糖涂敷型正相手性柱-使用前
※ 溶剂切换 .,LTD A.仪器当前流动相是水相流动相（如水/缓冲液-乙腈/甲醇等），仪器先不接柱子，接上两通 INA)CO 1. 用水冲洗仪器所有管路（至少60ml） H -> 除去有机相和缓冲盐溶液 S(C 2. 用异丙醇或乙醇冲洗所有管路 （至少60ml） IE -> 置换水 OG 3. 用实验所需流动相冲洗所有管路（约30ml） OL -> 置换醇 CHN B.仪器当前流动相中含有一些会破坏柱子的溶剂（如乙酸乙酯、二氯甲烷和四氢呋喃等），仪 TE 器先不接柱子，接上两通 IRAL 1. 用异丙醇或乙醇冲洗所有管路 （至少60ml） CH-> 置换掉对柱子有损伤的溶剂 EL 2. 用实验所需流动相冲洗所有管路（约30ml） DAIC -> 置换醇
柱子描述：例如AD-H，5μm硅胶表面涂敷有直链 淀粉-三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）
直链 淀粉
纤维素
×
丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、 乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃等
√ 正己烷、异丙醇、乙醇、甲醇、乙腈
大赛璐多糖衍生物反相手性柱
大赛璐多糖衍生物反相手性柱产品概述：CHIRALPAK AD-H，AS-H和CHIRALCEL OD-H，OJ-H在正相领域中获得了广泛的应用，大赛璐同时也开发了相应的反相手性柱。
与正相柱相比较，反相柱涂敷的手性聚合物与正相柱相同，但是所用的硅胶不同。
反相高效液相色谱手性系列柱CHIRALPAK AD-RH、CHIRALPAK AS-RH、CHIRALCEL OD-RH和CHIRALCEL OJ-RH是分别将淀粉-3，5-二甲苯基氨基甲酸酯、淀粉-s-a-甲基苄基氨基甲酸酯、纤维素-3，5-二甲苯基氨基甲酸酯和纤维素-4-甲苯甲酸酯涂敷在5μm的硅胶表面。
反相柱也适合应用于LC/MS中。
CHIRALPAK AD-3R、CHIRALPAK AS-3R、CHIRALCEL OD-3R和CHIRALCEL OJ-3R 是填料粒径为3μm 的反相手性色谱柱，使用了高通用性的手性选择剂，可对各类化合物进行光学拆分。
由于能实现很高的理论塔板数，即使是短柱也可以在缩短分析时间的基础上显示出优异的分离能力。
更小粒径填料的优点：更高效更快出峰时间优化HPLC系统一般而言，这四种反相手性柱的应用范围和手性分离性能与它们各自相应的正相柱（CHIRALPAK? AD、CHIRALPAK? AS、CHIRALCEL? OD和CHIRALCEL? OJ）相似，但需要说明的是反相柱里的色谱填料基质与正相柱有所不同。
为避免损坏手性柱，正相与反相两类手性柱不宜混用。
反相柱使用水－有机溶剂流动相，适合分析水溶性样品（比如生物活性样品），或者对pH有特定要求的样品。
要避免极端pH，因为这样会损伤固定相的硅胶基质。
反相柱主要适用于下列分析对象：1. 使用含水的流动相进行手性拆分；2. 手性拆分水溶性样品；3. 离解或可离解样品的拆分；另外，反相手性柱在必要时可以与通常的非手性普通反相柱（如ODS柱）串联使用，以便使待分离组分与样品中的其他杂质分开。
大赛璐if色谱柱说明书
大赛璐if色谱柱说明书一、产品概述大赛璐if色谱柱是一种优质、高效的液相色谱分析仪器配件。
色谱柱内填充着特制的大赛璐if固定相，可广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
本说明书详细介绍了大赛璐if色谱柱的性能特点、使用方法和注意事项，以帮助用户正确高效地使用该产品。
二、产品特点1. 高效分离能力：大赛璐if色谱柱填充物具有独特的表面性质，能够有效分离复杂混合物中的成分，提高分析效果。
2. 快速分析速度：采用高效的填充材料和优化的柱片结构，大赛璐if色谱柱能够在短时间内完成复杂样品的分析，提高工作效率。
3. 耐酸碱性能强：大赛璐if色谱柱的填充物具有良好的耐酸碱性能，能够适应不同样品的酸碱条件。
4. 耐高温性能好：大赛璐if色谱柱能够在高温下保持稳定的性能，提供长时间的使用寿命。
三、使用方法1. 样品前处理：在使用大赛璐if色谱柱进行分析前，需要对样品进行前处理以去除杂质和提纯样品。
2. 柱片连接：将色谱柱与色谱分析仪器连接，在连接过程中要保证连接处密封严密，以避免柱片泄漏。
3. 流动相准备：根据分析要求，准备好合适的流动相，并将其加载到色谱仪中。
4. 参考标准品：准备好参考标准品，在分析过程中进行检测和校准。
5. 样品加载：将经过前处理的样品加载到色谱仪中，控制好样品的注入速度和量。
四、注意事项1. 色谱柱存储：大赛璐if色谱柱应存放在阴凉、干燥的地方，避免阳光直射和高温。
2. 柱片清洗：每次使用完毕后，应将色谱柱进行清洗，以避免污染和交叉感染。
3. 流动相选择：根据样品的性质和分析要求，选择合适的流动相，并进行必要的调整和优化。
4. 柱片更换：当发现色谱柱分离效果下降或柱片出现损坏时，应及时更换新的色谱柱。
5. 操作规范：在使用大赛璐if色谱柱时，应严格按照说明书和操作规范进行操作，以确保分析结果的准确性。
五、售后服务大赛璐if色谱柱提供全面的售后服务，包括产品技术支持、常见问题解答以及售后维修等。
大赛璐手性柱注意事项
避免将手性柱暴露在强磁场或电场中，以防影响分离效 果。
使用后应将手性柱妥善存放，避免过度震动或碰撞。
03
使用过程中的注意事项
操作步骤
确保手性柱的安装稳固，避 免在使用过程中发生倾斜或 移动。
流动相的流速应保持稳定， 避免过快或过慢，以免对手 性柱造成损害。
在使用前，应先对手性柱进 行充分的平衡和排气，确保 柱内无气泡。
避免与强氧化剂接触
手性柱应远离强氧化剂和腐蚀性物质，以防损坏。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
使用过程中，应定期检查手 性柱的性能，如有问题应及 时处理。
安全防护
使用手性柱时应佩戴化学防护 眼镜和实验服，防止意外伤害
。
避免使用带有腐蚀性和氧化性 的流动相，以免对手性柱造成
损害。
在使用过程中，应保持室内通 风良好，防止有害气体积累。
对于易燃、易爆或有毒的试剂 和气体，应严格按照安全规定 进行操作。
适用范围
01
02
03
手性分离
适用于各种手性化合物的 分离，如氨基酸、糖类、 药物等。
生物活性物质分离
可用于生物活性物质如酶、 抗体和细胞等的分离纯化。
复杂样品分离
适用于复杂样品中手性化 合物的分离，如代谢产物、 天然产物等。
操作原理
手性识别
大赛璐手性柱通过手性固 定相与手性化合物的相互 作用，实现对手性分子的 拆分。
柱效降低
总结词
柱效降低可能是由于固定相流失、柱污染或长时间使用导致的。
详细描述
为解决柱效降低的问题，可以检查色谱柱的固定相是否流失，对色谱柱进行适当的清洗和维护。如果色谱柱使用 时间过长，可能需要更换新的色谱柱以恢复其性能。同时，确保流动相的质量和清洁度也是避免柱污染的关键措 施。
手性柱介绍
手性色谱柱知识介绍手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。
通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。
要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。
这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。
手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。
这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。
由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。
在手性拆分中，温度的影响是很显著的。
低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。
因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。
迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。
不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。
根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系：第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。
第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。
此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。
第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。
这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。
第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。
第5类：蛋白质型手性色谱柱。
手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。
Chiralpak AD-中文说明
CHIRALPAK® 是大赛璐化学工业有限公司的注册商标。
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Nov 2005 Page 4
填料类型 直链淀粉衍生物
纤维素衍生物
纤维素衍生物 冠醚
配基交换 聚甲基丙烯酸酯
色谱柱名称
CHIRALPAK® AD CHIRALPAK® AD-H CHIRALPAK® AD-RH
CHIRALPAK® AS CHIRALPAK® AS-H CHIRALPAK® AS-RH
如果要将正己烷换成甲醇或乙腈，或者要换成不同的极性溶剂，强烈建议使用 100％的异丙醇作为过渡溶剂，过渡流速小一 些（异丙醇粘度较大）。
‘ 乙腈中的醇含量（异丙醇除外）超过 15％的话，会损伤固定相。
’ 其它种类的醇（异丙醇，正丁醇，异丁醇等）也能使用，但选择性不同，另外浓度不能超过 15％
2
Nov 2005 Page 3
B – 流动相添加剂
如果分离碱性或者酸性化合物，可 能需要在流动相加入少量添加剂
“ 用来分离伯胺样品 ” 用来分离伯胺醇样品
碱性样品 需要
碱性添加剂 二乙胺(DEA) 丁胺(Butyl amine“) 乙醇胺(Ethanol amine”)
< 0.5% 一般 0.1%
酸性样品 需要
酸性添加剂 甲酸(HCOOH) 三氟乙酸(TFA) 乙酸(CH3COOH)
烷烃Œ/ 异丙醇
烷烃Œ/ 乙醇•
烷烃Œ/ 甲醇Ž
甲醇•+•
乙腈•+‘ 没有烷烃
100/0 to
0/100
100/0 to 85/15 and
40/60 to 0/100
100/0 to 85/15 and
40/60 to 0/100
大赛璐键合手性柱使用指南
一、键合手性柱简介多糖涂敷型手性柱，如CHIRALPAK®AD-H/CHIRALPAK®AS-H/CHIRALCEL®OD-H/CHIRALCEL®OJ-H等，其涂敷在硅胶表面上的各种衍生物有可能被一些有机溶剂溶解或溶胀。
因此，可用作流动相组分及样品溶解液的溶剂非常有限。
通过化学键合的方法将多糖衍生物固定在硅胶表面而制得的键合型手性固定相，即可克服涂敷型手性固定相的不足之处。
为了满足市场的需求，大赛璐公司凭借多年的研究成果和独有的技术，已推出了新一代化学键合型手性色谱柱系列：CHIRALPAK®IA，CHIRALPAK®IB和CHIRALPAK®IC。
CHIRALPAK®IA是将淀粉-3,5-二甲苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面（5 µm），相应的涂敷型色谱柱是CHIRALPAK®AD （CHIRALPAK®AD-H）；CHIRALPAK®IB 是将纤维素-3,5-二甲苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面（5 µM）, 相应的涂敷型色谱柱是CHIRALCEL®OD （CHIRALCEL®OD-H）；CHIRALPAK®IC将纤维素-3,5-二氯苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面（5 µM）（注意：相应的涂敷型色谱柱没有商品化）。
其化学结构式如下图所示。
新一代化学键合型手性柱具有下列特点：·通用于所有液相色谱流动相·新分离选择性·样品溶解液没有任何限制·高柱效高分离性能·柱寿命长，可再生·操作方便，简单，灵活新一代共价键合手性柱不仅可以使用那些常用在涂敷型手性柱上的流动相体系，如烷烃/醇类，更为重要的是还适用于诸如乙酸乙酯、四氢呋喃、甲基叔丁基醚、二氯甲烷、三氯甲烷等这些不适宜用在涂敷型手性柱上的溶剂。
Lux手性色谱柱资料
氯原子拥有强电负性， 可产生偶极作用。
#F[IBO$IBOLWFUBE[F &JKJ:BTIJNB :PTIJP0LBNPUP +$ISPNBUPHSBQIZ
XXXQIFOPNFOFYDPN
Lux Cellulose-2
™
H
H H C O
C N H
Cl Cl H N C O O
H C
C H C H H
O C O C
H
引进供电子基团或是吸电子基团，例如氯原子，均有利于改善这 种通过苯基氨基甲酸酯衍生的手性固定相的旋光拆分能力。此外， 在苯环单侧的间位和对位取代比邻位取代更有利于提高手性识别 2 能力。
O
NH基团产生分子内氢键， 也与溶质形成氢键，两者 相平衡。
H H C O
C N H
H
Cl Cl H C H N C O C H C H H O C O
C
H
H
O
H N Cl Cl
C
C
H
C O
H
H
O
H H
C
H
研究结果同时指出，直链淀粉苯基氨基甲酸酯衍生物上 1 的邻位取代的甲基或氯原子，有很强的手性分离能力。
XXXQIFOPNFOFYDPN
SIMPLIFIED CHIRAL SEPARATIONS
这种通用的、新型的氯 氯代纤维素 固定相提高您手性筛选的成功率。
Lux Cellulose-2
™
手性选择介质是纤维素三（3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯）
大赛璐手性柱使用注意事项
Normal Phase
CHIRALPAK® AD-3/AD-H/AD CHIRALPAK® AS-3/AS-H/AS CHIRALPAK® AY-3/AY-H CHIRALPAK® AZ-3/AZ-H CHIRALCEL® OD-3/OD-H/OD CHIRALCEL® OJ-3/OJ-H/OJ CHIRALCEL® OZ-3/OZ-H CHIRALCEL® OX-3/OX-H CHIRALCEL® OB-H/OB CHIRALCEL® OC-H/OC CHIRALCEL® OA CHIRALCEL® OG CHIRALCEL® OF CHIRALCEL® OK
10/79
Part. 1-6
几个常见问题
Q1：甲醇、乙腈能不能用作流动相？ 可用100%甲醇或乙腈作流动相，但必须用异丙醇或乙醇完全置换掉 正己烷才可以。 Q2：手性柱可以倒接使用吗？ 只有在柱子出现问题后，正接冲洗无效，可考虑倒接冲洗；一直按 箭头方向使用有利于柱子的稳定性。 Q3：样品可以直接用甲醇溶解进样吗？ 对烷烃溶解度差的样品，可用醇先溶解，再用流动相稀释；如析出， 建议用键合型手性柱或反相手性柱分析。
Normal Phase
CHIRALPAK® AD-3/AD-H/AD CHIRALPAK® AS-3/AS-H/AS CHIRALPAK® AY-3/AY-H CHIRALPAK® AZ-3/AZ-H CHIRALCEL® OD-3/OD-H/OD CHIRALCEL® OJ-3/OJ-H/OJ CHIRALCEL® OZ-3/OZ-H CHIRALCEL® OX-3/OX-H CHIRALCEL® OB-H/OB CHIRALCEL® OC-H/OC CHIRALCEL® OA CHIRALCEL® OG CHIRALCEL® OF CHIRALCEL® OK
手性柱使用手册ChiralcelODH-中文
Nov 2005 Page 1请在使用色谱柱前仔细阅读本《使用手册》填料结构： 5 μ硅胶表面涂布有纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]出厂保存溶剂： 正己烷 / 异丙醇（90:10 v/v ）该色谱柱在出厂之前都已经通过了检测，检测条件、结果和批号信息请查阅“出厂检测报告”。
警 告 ：将色谱柱接到色谱仪之前，必须先用合适的溶剂冲洗流路（包括流通阀和定量环）。
有些溶剂（比如丙酮、氯仿、DMF 、二甲基亚砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF ）会破坏手性固定相的结构。
如果使用的是自动进样器，进样间隔的冲洗液也必须更换成合适的溶剂。
150 x 4.6 mm ID 250 x 4.6 mm ID分析柱250 x 10 mm ID半制备柱250 x 20 mm ID半制备柱流动相方向 参照色谱柱标签上的箭头典型流速• 1.0 ml/min不要超过 1.5 ml/min5.0 ml/min 不要超过7.0 ml/min 18 ml/min 不要超过25 ml/min 柱压范围‚ < 50 Bar (约700 psi)ƒ 不要超过100 Bar (约1400 psi)温度0 to 40°C• 最大流速也和流动相粘度（流动相成分）有关，必须小心不能超过柱压上限。
流动相 250 x 4.6 mm ID 150 x 4.6mm ID 250 x 10 mm ID 250 x 20 mm ID 烷烃/醇类 90:101.0 to 1.5 ml/min 5.0 to 7.0 ml/min 18 to 25 ml/min100% 乙醇0.5 ml/min2.0 to3.0 ml/min5.0 to 8.0 ml/min100% 异丙醇0.2-0.3 ml/min1.0 ml/min3.0 to 5.0 ml/minR =手性柱 CHIRALCEL ® OD-H使用手册33‚柱压指色谱柱压降，即接上柱子后系统的压力与未接柱子时系统压力的差值。
大赛璐手性柱使用注意事项
Normal Phase
CHIRALPAK® AD-3/AD-H/AD CHIRALPAK® AS-3/AS-H/AS CHIRALPAK® AY-3/AY-H CHIRALPAK® AZ-3/AZ-H CHIRALCEL® OD-3/OD-H/OD CHIRALCEL® OJ-3/OJ-H/OJ CHIRALCEL® OZ-3/OZ-H CHIRALCEL® OX-3/OX-H CHIRALCEL® OB-H/OB CHIRALCEL® OC-H/OC CHIRALCEL® OA CHIRALCEL® OG CHIRALCEL® OF CHIRALCEL® OK
若您遇到此类分析故障，请对照出厂报告重新确认柱子的性能或与大赛璐联系。
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Part. 1-3
常见使用故障—柱压
长期超压会引起柱头塌陷，反压上升，柱效下降
• 原因：
–流动相或样品溶液过滤不彻底，固体颗粒堵塞管路或柱头，会引起柱压过高。 –样品中成分在柱头析出或强烈吸附，会引起柱压升高。 –流速过快，会引起柱压过高，特别是当使用粘度高的溶剂（如IPA, EtOH，流速 应控制在0.1-0.3 ml/min）
11/79
2.多糖涂覆型反相手性柱
Immobilized Type
CHIRALPAK® CHIRALPAK® CHIRALPAK® CHIRALPAK® CHIRALPAK® CHIRALPAK® IA/IA-3 IB/IB-3 IC/IC-3 ID/ID-3 IE/IE-3 IF/IF-3
Normal Phase
Reverse Phase
CHIRALPAK® AD-3R/AD-RH CHIRALPAK® AS-3R/AS-RH CHIRALPAK® AY-3R/AY-RH CHIRALPAK® AZ-3R/AZ-RH CHIRALCEL® OD-3R/ODRH/OD-R CHIRALCEL® OJ-3R/OJ-RH CHIRALCEL® OZ-3R/OZ-RH CHIRALCEL® OX-3R/OX-RH
第十一期 常见手性色谱柱的使用条件
第十一期常见手性色谱柱的使用条件，2014-03-10蒋竞波谱分析常见手性色谱柱的使用条件1）使用频率最高的还是常说的四大金刚，据大赛璐说这四大金刚能解决90%的手性化合物的差分，即正相的 AD-H,AS-H,OD-H,OJ-H,反相的AD-RH,AS-RH,OD-RH,OJ-RH,个人使用过程的体会来看，发现这四根柱子的确不愧为四大金刚，效果的确很不错2）另外大赛璐新推出的IA,IB,IC,ID,使用起来感觉主要好处是，正反相都能用，另外就是感觉好像要比四大金刚耐用一些，3）常见色谱柱分类情况如下正相有：l直链淀粉衍生物CHIRALPAK®AD / AD-H/AD-3CHIRALPAK®AS / AS-H/AS-3CHIRALPAK®AY-H/AY-3CHIRALPAK®AZ-H/AZ-3l纤维素衍生物CHIRALCEL® OD / OD-H/OD-3CHIRALCEL®OJ / OJ –H/OJ-3CHIRALCEL®OZ –H /OZ-3CHIRALCEL®OA, OB, OC CHIRALCEL®OF, OG, OK CHIRALCEL®CA-1反相有：反相CHIRALPAK®AD-RH/AD-3RCHIRALPAK®AS–RH/AS-3RCHIRALCEL®OD-RH/OD-3RCHIRALCEL®OJ–RH/OJ-3RCHIRALPAK®AY–RH/AY-3RCHIRALCEL®OZ–RH/OZ-3R正反相都能用的：共价键合型CHIRALPAK®IA/IA-3CHIRALPAK®IB/IB-36）从倾向来看，我比较推荐的使用反相，因为一般来说，反相纯度方法一般会优先于手性方法开发，如果用反相开发手性，流动相pH以及梯度，温度等基本可以参考，基本不会有峰型的问题，后期需要做的主要是柱子填料的选择，相对来说要来的快，不过也有很多人比较喜欢正相，正相有的时候的确有它的优越性，从大赛璐附的一些谱图来看，正相分离的时候，看起来分离度一般都不反相要好，这个就是萝卜白菜各有所爱了。
Daicel手性柱使用溶剂的限制
手性柱应用介绍1 Daicel手性柱使用溶剂的限制众所周知，手性柱固定相对溶剂很敏感，使用时稍有不慎，即可对固定相造成不可修复的损伤。
一般情况下，要避免使用的溶剂有丙酮、氯仿、二氯甲烷、THF和DMSO等，即使少量上述溶剂残留在管路、进样阀中也是色谱柱的潜在威胁，所以事先必须清洗干净。
2 为什么柱效会降低？有没有再生方法？所有大赛璐柱子在出厂前均已检测柱效合格。
造成柱效降低的原因有：1）柱效急速下降绝大多数情况是色谱柱固定相被损伤(溶解/水解脱落)，造成固定相损伤的物质可能来源于样品，溶剂，也可能来源于上一次进样残留于管路、进样阀中的杂质。
这种情况对柱子冲洗或再生已无效。
2）柱效逐渐下降原因：有强保留物质逐渐聚集在柱头筛板甚至是固定相上解决办法：用强溶剂冲洗或更换筛板3）旧柱子能分开的化合物换上新柱子就分不开了原因：“记忆效应”（有时，也有批次间的差异），一些强保留物质（如additive）保留在固定相上对手性诱导环境有一定的影响。
解决办法：如果之前用过添加剂，就在流动相中继续添加此类添加剂，并对柱子平衡数小时再进样，但此方法有时仍然解决不了问题，这时应该可虑更换其它的分离条件。
3 如果样品不溶于正己烷/醇体系，怎么办？一般情况下，分析用时，0.5-1mg/mL的浓度就可以满足检测，所以不用加大样品浓度对于酸、碱化合物，在流动相中适当的加入少量的强酸或强碱（如TFA/DEA）有助于样品的溶解，推荐添加浓度在0.1-0.2%，大于此浓度会损坏固定相。
4 几种常用手性柱的使用（以5μ和10μ填料为例）1）Chiralpak ADIPA：0-100% in alkane（n-hexane or iso-hexane, or n-heptane）EtOH: 0-15% in alkane or 60-100% in alkane（n-hexane or iso-hexane, or n-heptane）MeOH: (1)0-100% EtOH or IPA in MeOH or 0-15% ACN in MeOHIdeal starting conditions: MeOH/EtOH 50:50(v/v) when alcohol mixtures are required(2)0-15% in alkane or 60-100% in alkane（n-hexane or iso-hexane, or n-heptane）【注意：使用纯极性溶剂做流动相后，此色谱柱应做到专柱专用】ACN：not compatible with alkane0-100% IPA in ACN or 0-15% MeOH or EtOH in CAN【注意：使用纯极性溶剂做流动相后，此色谱柱应做到专柱专用】MTBE: Not allowedAcid: TFA or CH3COOH, <0.5%, Typically 0.1%Base: DEA or Butyl amine or Ethanol amine, <0.5%, Typically 0.1%Column-Temp: below 40DEG2）Chiralpak AD-H同Chiralpak AD，不同之处在于，当使用正己烷/乙醇（甲醇）体系时，醇比例范围可以是0-100% 3）Chiralpak OD-H同AD-H，不同之处在于，OD-H可以使用MTBE/alkane（或Alkane/EtOH），MTBE<50%, 当使用MTBE 后，色谱柱平衡时间要加长4）Chiralpak OD同OD-H，不同之处在于，OD不能使用ACN体系CYCLOBOND I 2000CYCLOBOND I 2000 是β-环糊精化学键合固定相，CYCLOBOND I 2000及其衍生物CYCLOBOND I 2000 AC，SP和RSP可以运行于反相或极性有机相模式。
手性柱使用方法及手性方法过程
25
Threonine
0.39 2.58 4.20
2.0
0.4
0
10/79
第三代手性色谱柱
CHIRALPAK® IA, IB
11/79
CHIRALPAK® IA与IB研发背景
涂敷型
正相: 正己烷, 异丙醇, 乙醇 反相: 水, 乙腈, 甲醇, 乙醇, 异丙醇
键合型
CHIRALPAK® IA, CHIRALPAK® IB
N
・条件
Cl
流动相 ： 正已烷 / 异丙醇 / 二乙胺 = 90 / 10 / 0.1
流量 ： 1.0 ml/min. 温度 ： 25 °C 检测波长 ： UV 254nm
¿
N1
AS
1.33
3600
AS-H
1.46
12200
3.4 times
11 / 47
2) H series columns
・条件
流动相 ： 正已烷 / 异丙醇 = 90 / 10
流量 ： 1.0 ml/min.
温度 ： 25 °C 检测波长 ： UV 254nm
AS AS-H
6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0
0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 Minutes
AS-H
O
¿
N1
1.30
9800
1.32
2.0
0.8
25
Proline
0.73
1.00
---
1.5
0.4
0
Phenylglycine 1.06 2.35 7.14
2.0
1.0
40
Histidine
0.90
大赛璐手性分析方法筛选与优化 (2)-65页文档资料
三氟乙酸 (TFA) 醋酸
*1 主要用于1级胺 *2 主要用于1级氨基醇
添加量
≦0.5％ 通常0.1％
≦0.5％ 通常0.1％
不同添加剂对手性分离的影响
mv
mv 12.240
14.853 mv
mv
1200
1: 220 nm, 4 nm Retention Time
1000
F 0.4
0.2
35
（没出峰 )
30
25
20
15
10
5
0.0
COOH
0
5
10 15 20 25 30 35 40
Minutes
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Minutes
流量：1.0mi/min.温度：40℃、检测波长：ＵＶ（254ｎｍ）
流动相 Hex/IPA=90/10
Minutes
Minutes
Minutes
4.36
80
80
70
OF 70
OG
60
60
50
50
40
40
30
30
20
20
10
10
0
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 150 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Minutes
Minutes
其它
Chiral -AGP ® CROWNPAK® CR (＋), (－)
CHIRALPAK® OT(＋), OP (＋) CHIRALPAK® WH, MA (＋) CHIRALPAK ® QD-AX CHIRALPAK ® QN-AX
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优化手性化合物的分离方法时，如何增加分离选择性？正相手性色谱柱上增加分离度的方法有：降低流动相中醇的含量、降低柱温、更换流动相中醇的种类、更换手性柱。
建立手性化合物的分离方法时，选定了正相手性柱之后，如何选择流动相？流动相首选正己烷和异丙醇的混合溶液，根据样品的酸碱性决定是否添加酸碱性添加剂。
如果是中性样品则不需要添加添加剂，如果是酸性样品需要添加三氟乙酸或乙酸，如果是碱性样品需要添加二乙胺，添加剂的量一般为0.1 %。
流动相中醇的含量一开始可以使用30%，根据样品出峰的快慢和分离度再调整醇的含量。
流动相中醇的种类一般使用异丙醇，也可以使用乙醇。
建立手性化合物的分离方法时，如何选择手性柱？根据文献或者参考大赛璐公司的《应用指南》中结构类似物的分离方法，选择手性柱；另外可以寄少量消旋品，大赛璐公司能免费为您选择分离最佳的手性柱。
手性柱使用完了之后如何清洗保存？正相手性色谱柱如果使用正己烷和醇类的混合流动相之后，只需要用正己烷/异丙醇=90/10(v/v)的保存溶液冲洗30 min即可。
反相手性色谱柱如果使用了水溶液和乙腈的混合流动相之后，只需要用水/乙腈=70/30(v/v)的保存溶液冲洗30 min即可。
CROWNPAK® CR(+)柱流动相中甲醇含量有要求吗？CROWNPAK® CR(+)柱流动相中甲醇含量为0％-15%，甲醇的含量一旦超过15%，CROWNPAK® CR(+)柱会被损害。
正相手性柱进了水后，柱子会不会损坏？正相手性色谱柱（例如AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H）一旦进了水，柱压会升高，但是只要柱压不超过柱压上限，柱子就不会损坏。
只需用无水乙醇低流速(0.1-0.2 ml/min)将水全部充分置换出来，再用正相流动相低流速(0.1-0.2 ml/min)将乙醇全部置换出来就能继续使用该正相手性色谱柱。
样品的保留时间漂移，可能是哪些原因，如何解决？1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。
2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。
3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。
该情况在MA（+）柱上出现较多。
4、酸碱性的样品，有时在中性条件下能分开，峰形尚可，但保留时间会漂移；加入相应的酸碱添加剂即可。
5、流动相污染。
溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。
需清洗色谱柱，流动相和样品溶液尽量现用现配。
（小极性样品的溶解）正相方法分析布洛芬时，有时峰形难看甚至达不到基线分离，什么原因？如何解决？该方法为Hexane/IPA=99/1，极性很小；若样品不是溶解在流动相中，则结果很可能达不到基线分离。
采用流动相溶解即可。
通常手性分析时，若流动相为H/I，H/E体系，且Hexane不超过85%，则溶解样品时可用流动相，也可用100%醇直接溶解。
谱图通常差别不大。
但是对小极性样品和流动相，尤其hexane超过90%时，一定注意用流动相溶解。
新柱CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE与原来的大赛璐手性柱有什么区别？CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE是将多糖衍生物共价键合在硅胶上，而大赛璐原来的手性柱固定相都是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。
正因为是共价键合，所以CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE柱能使用任何液相流动相，比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。
CHRALPAKIA/IB/IC/ID/IE与大赛璐原有的正相柱相比，扩大了溶剂选择的范围，增加了新的分离选择性，在原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE上得以分开。
键合型手性柱CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE的再生方式？在再生前请先冲洗手性柱，以防止残留物对于再生效果的影响。
IA柱修复方法：先用EtOH小流速冲洗30min，再用DMF，小流速冲洗3小时，然后EtOH过渡，验柱。
若效果不好，再用EtOH 冲洗30min，然后THF冲洗2小时。
IB柱，IC柱修复方法：用乙酸乙酯冲洗30min-120min，在室温下保存2天或更久。
验柱。
CHIRALPAK® AD-H、CHIRALPAK® AS-H、CHIRALCEL® OD-H、CHIRALCEL® OJ-H四款最常用正相色谱柱的区别是什么？区别是固定相的种类不同。
CHIRALPAK AD-H、AS-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉衍生物；CHIRALCEL OD-H、OJ-H的硅胶表面涂敷的是纤维素衍生物。
CHIRALPAK AD-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)；CHIRALPAK AS-H硅胶表面涂敷有直链淀粉-三[(S)-α-甲基苄基氨基甲酸酯；CHIRALCEL OD-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]; CHIRALCEL OJ-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]。
不同种类的多糖衍生物决定了这些手性柱的分离对象各不相同，既相互包含，又相互补充。
CHIRALPAK® AD-3柱和CHIRALPAK® AD-H柱和CHIRALPAK® AD是什么区别？CHIRALPAK® AD-3、CHIRALPAK® AD-H柱和CHIRALPAK® AD的填料种类是一样的，表面涂敷的都是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)，手性选择性基本相同。
只不过填料的粒径不一样，CHIRALPAK® AD-3是3μm，CHIRALPAK® AD-H是5 μm，CHIRALPAK® AD是10 μm。
CHIRALPAK® AD-3的柱效最高。
CHIRALPAK AD-H柱和CHIRALPAK AD是什么区别？CHIRALPAK AD-H柱和CHIRALPAK AD的填料种类是一样的，表面涂敷的都是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)，手性选择性基本相同。
只不过填料的粒径不一样，CHIRALPAK AD-H 是5 μm，CHIRALPAK AD是10 μm。
CHIRALPAK AD-H能代替CHIRALPAK AD并且CHIRALPAK AD-H柱效更高。
正相手性色谱柱中保存液是什么？正相手性色谱柱AD-H/AD-3、AS-H/AS-3、OD-H/OD-3、OJ-H/OJ-3中的保存液是正己烷/异丙醇=90/10(v/v)。
其它手性色谱柱的保存液请查阅使用说明书上的说明。
正相手性色谱柱使用前需要注意什么？将正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H接上液相色谱仪之前先要保证液相色谱系统中的所有管路均为正相流动相。
如果液相系统里面是反相溶液，比如水/乙腈=50/50(v/v)。
那么需要先用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路（包括所有溶剂入口、六通阀、检测器等），然后用正相流动相冲洗液相的所有管路，最后再接上正相手性色谱柱；如果液相系统的反相流动相中含有缓冲盐，要先用纯水冲洗HPLC系统，然后用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路，最后用正相流动相冲洗。
正相手性色谱柱的柱压范围是多少？正相手性色谱柱（例如：AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H）中的柱压绝对不能超过9.8 MPa，最好不超过5 MPa。
所以建议在实际使用过程中，在液相仪器上设置泵的保护压力为6 MPa，这样一旦系统的压力超过6 MPa，泵就会自动停止运行，保护手性柱不受高压破坏。
蛋白质柱AGP的使用条件和限制？∙IPA含量最好低于25%，其他有机相含量最好低于15% λ∙建议使用温度：20℃-25℃λ∙ pH范围：4-7 λ∙缓冲盐溶液浓度不超过100mM λ∙AGP的负载量不大，通常情况下配置样品浓度0.05-0.5mg/ml，进样量1µl-20µl比较合适。
不同样品，可以适度调整。
负载过大时将导致分析结果不准确，表现为分离度显著下降和柱效降低。
使用手性柱时若柱压过高，会对柱子有影响吗？另外，柱压过高是什么原因造成的呢？有什么解决办法吗？？长期超压会引起柱头塌陷，反压上升，柱效下降。
原因：λ∙流动相或样品溶液过滤不彻底，固体颗粒堵塞管路或柱头，会引起柱压过高。
λ∙样品中成分在柱头析出或强烈吸附，会引起柱压升高。
λ∙流速过快，会引起柱压过高，特别是当使用粘度高的溶剂，如IPA, EtOH，流速应控制在0.1-0.3 ml/min解决办法：λ∙每种柱子有特定的承压范围，请仔细参照相应的《色谱柱说明书》。
λ∙彻底过滤流动相及样品溶液。
λ∙样品预处理λ∙更换流动相时，或者刚把柱子刚接上仪器的时候，逐步增加流速λ∙仪器设定保护柱压化合物在手性柱中的“残留效应”经常会对影响手性柱的分离度和出峰时间等，该如何处理？如何冲洗？残留物在普通流动相中可长时间地稳定保留1.用醇洗涤可除去大部分的碱性残留物2.用酸洗涤也可除去碱性残留物3.用碱洗涤可除去酸性残留物推荐分开使用酸性条件手性柱和碱性条件手性柱手性柱谱图中异构体的分离度下降了，可能是什么原因，该怎么办？分离度下降的原因有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化，或者色谱柱受损柱效发生了变化。
首先查看是否是因为温度、流动相成分等外在因素发生了变化导致分离度下降，如果排除了各种外在因素就有可能是分析柱本身的柱效下降导致的。
如果分离度在短时间内急剧下降伴随柱压上升，可能是有强极性溶剂损害了柱子；如果分离度在长时间内慢慢下降，可能是柱头受污染或柱头塌陷，需要更换保护柱或者更换分析柱。
手性柱谱图中的峰出现裂分，可能是什么原因，该怎么办？峰裂分的原因有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化，或者色谱柱受损柱效发生了变化。
有时样品溶液浓度太高，进样量太大也会裂缝，这种情况只需减少浓度进样量即可。
如果排除了各种外在因素，那么色谱柱本身的原因可能是柱头被污染，或者柱压太高导致柱头塌陷。
柱头污染的话，可以按照说明书采用不同的溶剂溶剂冲洗色谱柱，最好是反方向冲洗；或者更换保护柱。
如果是压力太高导致柱头塌陷，那么除了增补填料，基本没有其他方法补救了，只能更换色谱柱。
基线不稳定可能是哪些原因，如何解决？1.仪器刚从反相置换到正相系统时，基线会不稳定，只需要多平衡一会儿即可。
2.检测器污染。
卸下检测器，更换透镜；或者取出透镜，用甲醇、异丙醇、水或其他溶剂（根据该仪器平时的使用情况而定）超声清洗。
安装时注意透镜的方向，一面是平面，一面凸透。
3.确认使用的两元（或三元四元）流动相彼此互溶性良好。
4.确认正使用的流动相和仪器之前刚用过的流动相彼此互融；若不互融，需要选择合适的溶剂过渡。