谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(比色法)
碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号 产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。
绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。
细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。
本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。
本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。
细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。
谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。
在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。
但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。
谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。
GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ，并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。
适当设置应体系，前后两个反应合并起来后，GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时，该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素，此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。
从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。
本试剂盒的具体反应原理如下：两个反应相合并：本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。
图中可见，对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。
图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。
本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
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碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒
¾ 谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。如果以过氧 化氢为底物进行检测，则同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。本 试剂盒利用了一种间接测定的方法。谷胱甘肽过氧化物酶可以催化GSH产生GSSG，而谷胱甘肽还原酶可以利用NADPH 催化GSSG产生GSH，通过检测NADPH的减少量就可以计算出谷胱甘肽过氧化物酶的活力水平。在上述反应中，谷胱甘 肽过氧化物酶是整个反应体系的限速步骤，因此NADPH的减少量和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关。
e. 所有试剂使用前须在水浴中或PCR仪等设备上温育到25℃。
3. 样品测定：
表1
空白对照 (blank)
样品本底对照
样品 (sample)
谷胱甘肽过氧化物酶l
176-184 µl
待测样品
－
2-10 µl
2-10 µl
GPx检测工作液
10 µl
10 µl
10 µl
谷胱甘肽还原酶
0.4 µl
4 µl
8µl
GPx检测工作液体积
10.4 µl
104 µl
208µl
d. 15mM过氧化物试剂溶液的配制。取21.5微升过氧化物试剂(t-Bu-OOH)加入10毫升Milli-Q级纯水，混匀，即配制成
15mM过氧化物试剂溶液。配制好的15mM过氧化物试剂溶液仅限当日使用，且需尽量在冰浴上存放。
产品编号 S0056
谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒
产品名称 谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB 比色法)说明书
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒自备材料：1、匀浆器或研钵、离心管或小试管、低温离心机、水浴锅2、蒸馏水、PBS或生理盐水、70%乙醇3、分光光度计、比色皿操作步骤(仅供参考)：1、配制GSSG标准储存液：取12.5mgGSSG标准加入2mlddH2O，溶解并混匀，即为GSSG 标准储存液(10mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
2、配制GSH清除剂工作液：在1mlGSH清除剂中加入9ml70%乙醇，溶解并混匀，即为GSH 清除剂工作液。
3、配制NADPH工作液：在33.2mgNADPH中加入4mlddH2O，即成NADPH工作液，一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
4、配制DTNB储存液：在79.2mgDTNB中加入16mlDMSO，溶解并混匀，即为DTNB储存液(12.5mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
5、配制GR工作液：按GR：GSSGassaybuffer=1:49的比例混合，即为GR工作液。
-20℃保存，1个月有效。
注意：试剂(I)量较少，使用前应先4℃离心后再使用。
6、配制标准品：把GSSG标准储存液(10mM)用蛋白清除试剂稀释成50μM标准溶液，然后依次稀释成25、12.5、6.25、3.125μMGSSH标准溶液，取空白、3.125、6.25、12.5、25、50μMGSSG标准溶液6个点作标准曲线。
注意：由于GSSG标准在蛋白清除试剂中不太稳定，用蛋白清除试剂配制的GSSG溶液必须新鲜配制后使用，不可冻存后再使用。
7、准备样品：①红细胞或血浆样品：取新鲜血液，600r/min离心10min，沉淀为红细胞，上清为血浆。
对于红细胞，用PBS洗涤两次，取约50μl红细胞沉淀或血浆，加入50μl蛋白清除试剂，充分Vortex振匀。
4℃或冰浴放置10min，4℃10000r/min离心10min，取上清，用于GSSG测定，样品需暂时4℃保存备用，不立即测定的样品可以-70℃保存，但不宜超过10天。
小鼠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)ELISA检测试剂盒说明书
小鼠谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）ELISA检测试剂盒说明书小鼠谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。
严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。
全部液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、30、60、120、240、480U/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒说明书
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。
GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
测定原理：GSH-Px催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。
自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调节移液器、酶标仪、96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置：试剂一：液体120mL×1瓶，室温保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体10μL×1支，-20℃保存。
试剂四：液体200μL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
GSH-Px测定操作：1. 酶标仪预热30 min，调节波长到340 nm。
2. 混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min。
3. 混合试剂配制：临用前，在试剂二中加入试剂一20 mL，充分震荡溶解后加入全部试剂三，混匀。
南京建成生物工程研究所价目表
南京建成生物工程研究所价目表南京建成生物工程研究所价目表二○○四年七月一、抗氧化检测试剂及科研试剂：（注：**为新试剂盒）序号产品名称规格单位检测方法售价厂家A001 超氧化物歧化酶（SOD）测试盒100T 盒羟胺法240.00 建成50T 盒羟胺法130.00 建成A003 丙二醛（MDA）测试盒100T 盒TBA法150.00 建成50T 盒TBA法90.00 建成A002 黄嘌呤氧化酶（XOD）测试盒50T 盒比色法130.00 建成A015 总抗氧化能力（T-AOC）测试盒50T 盒比色法120.00 建成25T 盒比色法70.00 建成A018 羟自由基测试盒50T 盒比色法150.00 建成A052 超氧阴离子自由基（O ）测试盒50T 盒比色法130.00 建成A044 髓过氧化物酶（MPO）测试盒50T 盒比色法160.00 建成A007 过氧化氢酶（CAT）测试盒紫外分光光度法100T 盒紫外比色法100.00 建成可见光分光光度法100T 盒钼酸铵法100.00 建成A064 过氧化氢（H2O2）测试盒50T 盒比色法50.00 建成A004 谷胱甘肽—S转移酶（GSH—ST）测试盒80T 盒比色法200.00 建成A005 谷胱甘肽—过氧化物酶（GSH—PX）测试盒50T 盒比色法200.00 建成A062 谷胱甘肽－还原酶(GR)测试盒50T 盒比色法200.00 建成A006 还原型谷胱甘肽（GSH）测试盒50T 盒比色法180.00 建成A061 氧化型谷胱甘肽(GSSG) 测试盒50T 盒比色法180.00 建成A063 巯基（-SH）测试盒50T 盒比色法180.00 建成A034 单胺氧化酶（MAO）测试盒50T 盒紫外比色法150.00 建成A012一氧化氮（NO）测试盒(硝酸还原酶法) 50T 盒比色法300.00 建成25T 盒比色法180.00 建成A013 一氧化氮（NO）测试盒（化学法测NO2—）100T 盒比色法150.00 建成A014 -1 一氧化氮合成酶（NOS）测试盒[（T－NOS、iNOS、cNOS）三型同时出结果] 50T 盒比色法480.00 建成25T 盒比色法260.00 建成A014-2 一氧化氮合成酶（NOS）测试盒[总NOS（T－NOS）] 50T 盒比色法350.00 建成25T 盒比色法200.00 建成A019-1 乳酸（LD）测试盒（测全血）50T 盒紫外比色法240.00 建成50T 盒可见光比色法240.00 建成A019-2 乳酸（LD）测试盒（测血清、组织）50T 盒比色法200.00 建成A020 乳酸脱氢酶（LDH）测试盒100T 盒比色法240.00 建成50T 盒比色法130.00 建成A016-1 A TP酶测试盒（组织及细胞膜需高速离心）(可测Na+K+、Ca2+Mg2+ ATPase) 100T 盒比色法240.00 建成50T 盒比色法150.00 建成A016-2 A TP酶测试盒（组织及细胞膜不需高速离心）(可测Na+K+、Ca2+Mg2+ ATPase) 100T 盒比色法300.00 建成50T 盒比色法180.00 建成A057 Cu-A TP酶（Cu-A TPase）测试盒100T 盒比色法300.00 建成50T 盒比色法180.00 建成序号产品名称规格单位检测方法售价厂家A069 氢－钾A TP酶（H+-A TPase）测试盒100T 盒比色法300.00 建成50T 盒比色法180.00 建成A070-1 超微量A TP酶测试盒（可测Na+K+、Ca2+Mg2+ A TPase、总ATPase）200T 盒比色法390.00 建成100T 盒比色法230.00 建成A070-2 超微量A TP酶测试盒（可测总A TPase）100T 盒比色法300.00 建成50T 盒比色法180.00 建成A021 苹果酸脱氢酶测试盒50T 盒紫外比色法面议建成A022 琥珀酸脱氢酶测试盒50T 盒比色法240.00 建成A032 肌酸激酶（CK）测试盒50T 盒比色法180.00 建成A023 胆碱酯酶（CHE）测试盒50T 盒比色法70.00 建成A024 乙酰胆碱酯酶（T-CHE）测试盒50T 盒比色法150.00 建成A025 丁酰胆碱酯酶测试盒50T 盒比色法150.00 建成A027 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）测试盒50T 盒比色法100.00 建成A031 b-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）测试盒50T 盒比色法260.00 建成A053 β-葡萄糖醛酸苷酶测试盒50T 盒比色法200.00 建成A055** 红细胞NADH高铁血红蛋白还原酶测试盒50T 盒比色法260.00 建成A059 碱性磷酸酶（AKP）测试盒50T 盒比色法100.00 建成A060 酸性磷酸酶（ACP）测试盒50T 盒比色法130.00 建成A049 前列腺酸性磷酸酶（PACP）测试盒50T 盒比色法180.00 建成A058 抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）测试盒50T 盒比色法180.00 建成A068 钙调神经磷酸酶（CaN）测试盒25T 盒比色法200.00 建成A072 全血2，3-二磷酸甘油酸（2，3-DPG）测试盒50T 盒比色法面议建成A047 谷氨酰胺合成酶（GS）测试盒50T 盒比色法300.00 建成A048 腺苷脱氨酶(ADA)测试盒50T 盒比色法130.00 建成A073** 谷氨酰胺测试盒50T 盒比色法200.00 建成A074** 谷氨酸测试盒50T 盒比色法260.00 建成A075** 谷氨酰胺、谷氨酸（两种均可测）50T 盒比色法480.00 建成A076** 丙酮酸激酶（PK）测试盒50T 盒比色法面议建成A077** 己糖激酶（HK）测试盒50T 盒比色法面议建成A036 唾液酸（SA）测试盒(带SA标准) 50T 盒比色法200.00 建成A017-1 细胞凋亡测试盒（TdT酶、稀释液、POD）10片盒TUNEL法1450.00 建成A017-2 细胞凋亡测试盒（TdT介导的原位末端切口平移双标记法）(全套）10片盒TUNEL法1850.00 建成A008 维生素E（VE）测试盒50T 盒比色法130.00 建成A009 维生素C（VC）测试盒50T 盒比色法150.00 建成A010 维生素B1（V B1）测试盒50T 盒比色法面议建成A011 维生素B2（V B2）测试盒50T 盒比色法面议建成A026 总氨基酸（T—AA）测试盒80T 盒比色法100.00 建成A030-1 羟脯氨酸测试前处理试剂消化液50T 瓶比色法100.00 建成调PH试剂50T 瓶比色法70.00 建成A030-2 羟脯氨酸（Hyp）测试盒（可测血清、培养液、尿液、心肌、皮肤、软骨、肝脏等等）50T 盒比色法180.00 建成A041 5’-核苷酸酶（5’-NT）测试盒50T 盒比色法150.00 建成A035 D—木糖测试盒50T 盒比色法100.00 建成A056 糖化血红蛋白（GHb）测试盒15T 盒比色法55.00 建成A037 糖化血清蛋白（GSP）测试盒（果糖胺法）（带标准）50T 盒比色法150.00 建成25T 盒比色法80.00 建成A043 肝/肌糖元测试盒50T 盒比色法160.00 建成A038 脂蛋白（a）[LP（a）]测试盒96T 盒ELISA法380.00 建成A054 脂肪酶测试盒50T 盒比色法200.00 建成A067 总脂酶【脂蛋白脂酶（LPL）/肝脂酶（HL）】测试盒100T 盒比色法300.00 建成50T 盒比色法160.00 建成A042 游离脂肪酸(NEFA)测试盒50T 盒比色法160.00 建成A033 脂褐质测试盒50T 盒荧光比色法100.00 建成A039 血清铁测试盒50T 盒比色法100.00 建成A040 总铁结合力(TIBC)测试盒50T 盒比色法180.00 建成A029 铜兰蛋白（CP）测试盒50T 盒比色法150.00 建成A071 微量游离血红蛋白测试盒50T 盒比色法80.00 建成A028 白蛋白测试盒（溴甲酚绿法）100T 盒比色法30.00 建成A045-1 总蛋白定量测试盒（双缩脲法）100T 盒比色法30.00 建成A045-2 总蛋白定量测试盒（考马斯亮兰法）100T 盒比色法30.00 建成A046 蛋白标准品(总蛋白、白蛋白) 1ml 支7.00 建成A050-1 溶菌酶（LZM）测试盒（带标准）30T 盒试管比浊法60.00 建成A050-2 溶菌酶（LZM）测试盒（带标准）30T 盒平板法60.00 建成A050-3 溶菌酶标准品2mg 支6.00 建成A050-4 微球菌粉30mg 支40.00 建成A065 解脲（溶脲）支原体快速培养基（UU培养基）每人份支培养基10.00 建成A066 人型支原体快速培养基每人份支培养基10.00 建成A051-1 肝素溶液10ml 支20.00 建成A051-2 肝素抗凝管10ml 支2.00 建成二、不孕症系列酶免疫试剂：序号产品名称规格单位检测方法售价厂家B001 抗心磷脂抗体测试盒（ACL）IgG类48T 盒ELISA 160.00 建成抗心磷脂抗体测试盒（ACL）IgA类48T 盒ELISA 160.00 建成抗心磷脂抗体测试盒（ACL）IgM类48T 盒ELISA 160.00 建成B002 抗精子抗体测试盒（AsAb）IgG类48T 盒ELISA 160.00 建成抗精子抗体测试盒（AsAb）IgA类48T 盒ELISA 160.00 建成抗精子抗体测试盒（AsAb）IgM类48T 盒ELISA 160.00 建成B003 抗子宫内膜抗体测试盒（EmAb）IgG类48T 盒ELISA 260.00 建成抗子宫内膜抗体测试盒（EmAb）IgA类48T 盒ELISA 260.00 建成抗子宫内膜抗体测试盒（EmAb）IgM类48T 盒ELISA 260.00 建成B004 抗卵巢抗体测试盒（AoAb）IgG类48T 盒ELISA 260.00 建成抗卵巢抗体测试盒（AoAb）IgA类48T 盒ELISA 260.00 建成抗卵巢抗体测试盒（AoAb）IgM类48T 盒ELISA 260.00 建成三、常用试剂：序号产品名称规格单位检测方法售价厂家C001 钾（K）测试盒（带标准）30T 盒比色法（上机）45.00 建成30T 盒比浊法（手工）35.00 建成C002 钠（Na）测试盒（带标准）30T 盒比色法（上机）45.00 建成30T 盒比浊法（手工）35.00 建成C003 氯（Cl）测试盒（带标准）30T 盒比色法（上机）45.00 建成30T 盒比色法（手工）28.00 建成C004 钙（Ca）测试盒（带标准）30T 盒比色法（上机）40.00 建成30T 盒比色法（手工）30.00 建成C006 磷（Pi）测试盒（带标准）100T 套孔雀绿显色39.00 建成A059 碱性磷酸酶（AKP）测试盒50T 盒比色法100.00 建成A060 酸性磷酸酶（ACP）测试盒50T 盒比色法130.00 建成C009 谷丙转氨酶（SGPT）测试盒100T 盒比色法30.00 建成C010 谷草转氨酶（SGOT）测试盒100T 盒比色法30.00 建成C018 总胆红素、直接胆红素测试盒80T 套咖啡因比色法65.00 建成80T 套一步法65.00 建成C017 Υ—谷氨酰转移酶（Υ—GT）测试盒100T 套比色法88.00 建成C020 尿胆红素测试盒50T 套哈里森氏法25.00 建成C033 尿胆原测试盒50T 套25.00 建成C013 尿素氮（BUN）测试盒100T 套脲酶比色法36.00 建成100T 套二乙酰－肟比色法27.00 建成C016 淀粉酶（AMS）测试盒100T 套淀粉一碘比色法39.00 建成C012 尿酸测试盒50T 套比色法40.00 建成C011-1 肌酐（Cr）测试盒（苦味酸法）100T 套比色法（除蛋白）60.00 建成C011-2 肌酐（Cr）测试盒（苦味酸法）100T 套比色法（不除蛋白）40.00 建成C021 血红蛋白稀释液（测试液）5ml 支HICN比色法4.50 建成C022 血红蛋白标准品5ml×4支套比色法12.00 建成C023 血红蛋白校正液250ml 瓶比色法35.00 建成100ml 瓶比色法14.00 建成C024 血小板稀释液（计数液）100ml 瓶8.00 建成C025 白细胞稀释液（计数液）100ml 瓶8.00 建成C037 红细胞稀释液（计数液）100ml 瓶8.00 建成C026 血细胞仪清洗液250ml 瓶25.00 建成C028 CO2结合力测试盒2ml×3×10 套滴定法40.00 建成C034 脑脊液蛋白测试盒50T 盒磺基水杨酸法50.00 建成C038 血沉测试液100ml 瓶10.00 建成C039 嗜酸粒细胞直接计数液40ml×1 瓶50.00 建成C040 网织红细胞计数液8 ml×2 套试管法30.00 建成10 ml×1 瓶玻片法20.00 建成C035-1 尿蛋白定性测试盒100T 盒磺基水杨酸法30.00 建成C035-2 尿蛋白定量测试盒100T 盒CBB法30.00 建成C041 尿糖试剂100ml 瓶班氏法40.00 建成C027 尿粪隐血测试盒100T 套联苯胺法15.00 建成100T 套邻联甲苯胺法15.00 建成A051-1 肝素溶液10ml 支20.00 建成A051-2 肝素抗凝管10ml 支2.00 建成四、染液类序号产品名称规格单位检测方法售价厂家D001 碱性磷酸酶染液50片套染色50.00 建成D002 酸性磷酸酶染液50片套染色50.00 建成D003-1 酸性酯酶染液5.0ml×4 盒染色50.00 建成D003-2 中性酯酶染液5.0ml×4 盒染色50.00 建成D003-3 碱性酯酶染液5.0ml×4 盒染色50.00 建成D003-4 双重酯酶染液5.0ml´4 盒染色60.00 建成D009 快速血细胞染液50ml×2 套染色40.00 建成D004 糖元染液10ml×4 盒染色40.00 建成D005 苏木素染液50ml×1 瓶染色40.00 建成D019 伊红染液100ml×1 套染色50.00 建成D006 H-E染液套染色55.00 建成D007 瑞氏染液50ml×2 套染色40.00 建成D010 瑞氏一姬姆萨复合染液50ml×2 套染色40.00 建成D011 姬姆萨染液套染色30.00 建成D015 巴氏染液（脱落细胞染色）套染色50.00 建成D017 快速H-E组织细胞及脱落细胞染液10ml×4 染色20.00 建成D008 革兰氏染液50ml×4 套染色50.00 建成D012 抗酸染液50ml×2 套染色40.00 建成D013 溴酚兰溶液1.0ml 支染色10.00 建成D014 溴乙淀溶液1.0ml 支染色20.00 建成D016 细胞活性鉴别染液20ml 瓶伊文斯蓝法20.00 建成D018 血管通透性测试染液20ml 瓶美蓝法20.00 建成D020** 过氧化物酶染液5ml 套染色20.00 建成五、各种浓度及PH值的缓冲液：(注: 以下缓冲液PH值、摩尔浓度按客户要求配制。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法) 简介：谷胱甘肽(glutathione，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，保护组织细胞免受氧化损伤，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，故常简写为G-SH或GSH，易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、铅、汞、砷等)等结合，具有整合解毒作用。
谷胱甘肽具有广谱解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。
谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)(GSSG Assay Kit)是一种简单易行的氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测的试剂盒，其检测原理是先检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量，再检测总谷胱甘肽(T-GSH)含量T-GSH减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)：待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB反应，产生稳定黄色的TNB和GSSG；谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，由GSSG还原成的GSH和样品本身含有的GSH都与发色底物DTNB反应，生成黄色的TNB和GSSG，前后两个反应合并起来，总谷胱甘肽(GSSG+GSH)就相当于一个呈色的限速反应，总谷胱甘肽(T-GSH)含量决定了黄色含量。
通过分光光度法(酶标仪)检测410nm处吸光度，与相应处理的GSH标准比较，分别获得还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)，用T-GSH 减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。
该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量，亦可检测还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)含量。
鸭子谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX酶联免疫分析
鸭子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -PX)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.1 pmol/ml -24 pmol/ml使用目的：本试剂盒用于测定鸭子血清，血浆及相关液体样本中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -PX)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸭子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平。
用纯化的鸭子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)，再与HRP标记的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽过氧化物酶(GPX-PX)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中鸭子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)浓度。
试剂盒组成1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
凯基谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测试盒
注意
注 1：空白管、标准管一般只需做 1-2 只。
注 2：最佳取样量及最佳取样浓度因样品种类不同，其 GSH-PX 活力不一。根据酶的百分抑制率与酶的活 力呈抛物线关系，各种测定样品取样量及取样浓度不一样，在每测定一种新的样品前最好选择一个最佳取
样量及最佳取样浓度。
最佳取样浓度的摸索
测试前先预试以确定最佳取样浓度：当您第一次使用本试剂盒测试某一种新的样品时最好先做三只不同浓
4℃或室温保存 6 个月
4℃保存 6 个月 4℃避光保存五天
4℃保存
GSH 的分子量为 307，每次测定前将 1 支 3.07mg 的 GSH 标准品粉剂加到 GSH 标准品的溶剂应用液 中，定容至 10ml 即为 1mmol/L 的 GSH 溶液，现用 现配。
取 1mmol/L GSH 溶液 2ml 加 GSH 标准品溶剂应用 液 18ml 定容至 20ml，作标准曲线用，若不做标准 曲线可以不配。
保存条件 4℃
3 5 7
GSH 应用液的配制： 1mmol/L GSH 溶液
100u mol/L GSH 溶液 20umol/L 的 GSH 标准溶液
试剂二应用液的配制：将已配好的 甲乙两种混合。此为过饱和溶液， 室温静置冷却后，如有结晶，则取 上清进行实验。 加蒸馏水 100ml 溶解 每支加蒸馏水 10ml 溶解 标准品溶剂应用液：GSH 标准品 溶剂贮备液：双蒸水=1：9 即 10 倍稀释配成应用液；按所需量现用 现配。
二．试剂盒的组成和配制
25 Tests (50 Tubes)试剂盒的组成和保存： 试剂编号 1
2
3 4 5
名称 贮备液
甲粉 乙液 粉剂 液体 粉剂
6
GSH 标准品粉剂
(完整版)GSH-Px活力的测定SOP
主要目的：——测定物质谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px ）活力。
主要原理：——谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px ）可以促使过氧化氢（H 2O 2）与还原性谷胱甘肽（GSH ）反应生成H 2O 及氧化性谷胱甘肽（GSSG ）,谷胱甘肽过氧化物酶的活力可用其酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗，则可求出酶的活力。
H 2O 22O+GSSGGSH-Px 的活力以催化GSH 的反应速度来表示，由于这两个底物在没有酶的条件下，也能进行氧化还原反应（称为非酶促反应），所以最后计算此酶活力时必须扣除非酶促反应引起的GSH 减少的部分。
而GSH 含量的测定可以跟据GSH 和二硫代二硝基苯甲酸作用生成5-硫代二硝基苯甲酸阴离子呈现较稳定的黄色，在412nm 处测其吸光度即可计算出实验室签章一、试剂——谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）测定试剂盒（南京建成生物研究所）二、仪器设备——96孔酶标板——UV-Vis可见多功能酶标仪——旋涡混匀器——离心机——水浴锅——移液枪及其相应量程枪头三、实验方法根据试剂盒说明书具体操作步骤如下:1. 非酶管和酶管各加入1 mmol/LGSH 0.2 mL ，酶管加入稀释后的待测血清和组织匀浆液0.2 mL ，37 ºC 水浴预温5分钟，酶管和非酶管分别加入试剂一应用液0.1 mL ，37 ºC 水浴准确反应5分钟，酶管和非酶管分别加入试剂二应用液2 mL ，同时非酶管加入待测细胞上清液0.2 mL 。
混匀，3500-4000转/分，离心10分钟，取上清1 mL 作显色反应。
2. 空白管加入1 mL GSH 标准品溶剂应用液，标准管加入1 mL 20 μmol/LGSH 标准液，非酶管和酶管各加入上一步骤1 mL 上清液，然后空白管、标准管、非酶管和酶管各加入1 mL 试剂三应用液，0.25 mL 试剂四应用液和0.05 mL 试剂五应用液。
GSH-PX谷胱甘肽过氧化物酶
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）测试盒测定意义谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶。
它特异的催化还原性谷胱甘肽（GSH）对过氧化氢的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。
GSH-PX的活性中心是硒半胱氨酸，硒是GSH-PX的必需部分，每克分子酶含量含4克原子硒。
测定GSH-PX的活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标。
测定原理谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）可以促进过氧化氢（H2O2）与还原型谷胱甘肽（GSH）反应生成H2O氧化性谷胱甘肽（GSSG），谷胱甘肽过氧化物酶的活力可用其酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗，则可求出酶的活力。
GSH-PX的活力一催化GSH的反应速度来表示，由于这2个底物在没有酶的条件下，也能进行氧化还原反应（称非酶促反应），所以最后计算此酶活力时必须扣除非酶促反应所引起的GSH减少的部分。
GSH量的测定：GSH和二硫代二硝基苯甲酸作用生成5-二硫代二硝基苯甲酸阴离子呈现较稳定的黄色，在421nm处测其吸光光度即可计算出GSH的量。
试剂盒的组成和配制试剂编号名称数量及保存条件1 试剂一贮备液2ml×1瓶：4℃冷藏保存6个月试剂一应用液的配制：用时取0.1ml加蒸馏水至10ml,也就是等于是100倍稀释配制成应用液，现配现用，需要多少配多少：4℃保存。
2 试剂二甲粉一瓶：4℃冷藏保存6个月甲粉：加90-100℃的热蒸馏水170ml，充分完全溶解乙液50ml×1瓶：4℃冷藏保存6个月。
试剂二应用液的配制：将已经配好的甲液和乙液充分混合。
此为过饱和溶液，室温静置冷却后，如有结晶，则取上清进行实验；4℃冷藏保存6个月。
3 试剂三粉剂1瓶：4℃保存6个月。
试剂三应用液的配制：加蒸馏水200ml溶解；4℃避光保存6个月4 试剂四粉剂1瓶：4℃避光保存6个月。
试剂四应用液的配制：每支加蒸馏水50ml溶解；4℃避光保存6个月5 试剂五粉剂4支：4℃避光保存6个月。
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px_GPX)活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4499
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：UPLC-MS-4499规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×2瓶4℃保存试剂二液体10μL×1瓶4℃保存试剂三液体30mL×1瓶4℃保存试剂四液体15mL×1瓶4℃保存试剂五液体5mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存稀释液液体20mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入3.3mL稀释液，充分溶解；2、试剂二：临用前按2μL试剂二：10mL蒸馏水的比例稀释试剂二，现用现配；3、试剂三：瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；4、标准品：10mg还原型谷胱甘肽。
临用前加入0.405mL稀释液溶解为80μmol/mL的标准溶液备用。
产品说明：谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px或GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。
GPX能够催化还原型谷胱甘肽（GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。
GPX催化H2O2氧化GSH，产生GSSG，GSH能与DTNB生成在412nm处有特征吸收峰的化合物，412nm下吸光度的下降即可反应GPX的活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取0.05g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
GSSG。1 U=1000 mU。
c. 对于谷胱甘肽还原酶：1mU/ml＝1nmol NADPH/min/ml＝(A340/min)/0.00622 即相当于：[检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]=[A340/min(sapmle)－A340/min(blank)]/0.00622 注：[检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]的单位为mU/ml。
如果A340/min(sapmle)＝0.0255，A340/min(blank)＝0.0006，那么 [检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]= (0.0255-0.0006)/0.00622=4.0mU/ml
[样品中谷胱甘肽还原酶活力]= 4.0mU/mlX10X20/(0.5mg/ml)=1.6U/mg(蛋白)
注意事项：
¾ 本试剂盒检测时牵涉到氧化还原反应，所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。另外，硫酸钠、硫酸铵和铁氰化 物都会干扰本试剂盒的测定。请尽量避免。
¾ 样品可以立即测定，也可以-70℃冻存待以后测定。 ¾ 一定要严格控制反应时的温度，否则会引起较多误差。 ¾ NADPH不太稳定，要严格按照后续说明操作，谨防失活。 ¾ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 S0055
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
产品名称 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
包装 100次
产品简介：
¾ 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(Glutathione Reductase Assay Kit)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样 品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase)活性的试剂盒。谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷 胱甘肽(GSH)。谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。GSH可以清 除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒(谷胱甘肽底物法)产品技术要求jiuqiang
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒（谷胱甘肽底物法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清谷胱甘肽还原酶的含量。
1.1 包装规格包装规格见表1。
表1 包装规格1.2 主要组成成分主要组成成分见表2。
表2 主要组成成分2.1 外观试剂1a为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂1b为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。
试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.2 净含量液体试剂的净含量应不少于标称量。
2.3 试剂空白吸光度2.3.1 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≤1.5000。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率A340nm下测定试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤ 0.0100。
2.4 准确度与已上市产品进行比对试验：在[12，184] U/L区间内，相关系数r≥0.975，在[12，50] U/L区间内测定的绝对偏差应不超过±7.5 U/L，在(50，184]U/L区间内测定的相对偏差应不超过±15%。
2.5 分析灵敏度样本浓度为70U/L时，其吸光度变化率应不超过0.5000。
2.6 线性范围在[12，184] U/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[12，50]U/L区间内线性绝对偏差应不超过±7.5U/L，在(50，184] U/L区间内线性相对偏差应不超过±15%。
2.7 测量精密度2.7.1 重复性使用高、低不同浓度的血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。
2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。
2.8 瓶间差试剂1b、试剂2、质控品的瓶间差应≤10%。
GSH-PX测试盒说明书
GSH-Px测试盒说明书1. 10%匀浆制备：取0.2g组织块，预冷生理盐水漂洗、滤纸擦干、称重，放于5ml小烧杯中，取1.8ml预冷0.86%生理盐水、加入约1.2ml。
剪刀将组织剪碎。
2.剪碎组织倒入玻璃匀浆管，剩余生理盐水冲洗烧杯中残余组织一起倒入匀浆管，一起进行匀浆（冰浴中进行）。
3.制好的10%匀浆低温离心机离心，3000r/min，10-15min。
取上清液、弃沉淀。
取适量上清液进行各种测定。
4.样本前处理：将10%肝匀浆上清液稀释成1.0%、0.5%、0.4%、0.3% 0.25%、0.2%、0.1%、0.05%不同浓度，分别取不同浓度匀浆0.1ml，按如下步骤测量。
（1）酶促反应非酶管（ml）酶管（ml）1mmol/LGSH（ml）现配0.1 0.1 待测匀浆（ml）——0.137℃水浴预温5min试剂一应用液（ml）现配0.05 0.0537℃水浴准确反应5min试剂二应用液（ml） 1 1 待测匀浆（ml）0.1 ——混匀，3500-4000r/min，离心10min。
取上清0.5ml做显色反应。
①1mmol/L GSH溶液制备：现配现用，每次测定前将一支3.07mgGSH标准品粉剂（试剂六，共四支）加到GSH标准品的溶剂应用液中，定容至10ml，即得。
②标准品溶剂应用液：现用现配，贮备液（试剂一）：双蒸水=1:9，即稀释10倍，4℃保存。
③试剂一应用液：现用现配，需要多少配多少。
取0.1ml贮备液（试剂一），加双蒸水定容至10ml，即稀释100倍，4℃保存。
④试剂二应用液：甲粉加90-100℃双蒸水170ml，充分完全溶解后，与乙液充分混合，室温静置冷却（如有晶体析出则取上清液），4℃保存6个月。
（2）显色反应空白管标准管非酶管酶管GSH标准品的溶剂应用液（ml）0.520umol/L GSH标准液（ml）0.5上清液（ml）0.5 0.5 试剂三应用液（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 试剂四应用液（ml）0.125 0.125 0.125 0.125 试剂五应用液（ml）5d0.0025 0.0025 0.0025 0.0025混匀，室温静置15min，412nm处，1cm光径比色杯，双蒸水调零，测各管OD值。
第十节谷胱甘肽过氧化物酶（gshpx）活力测定
1.3.6.2 血或组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH －Px ）活力测定）活力测定 1.3.6.2.1 原理原理谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px ）是体内存在的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的系统。
对防止体内自由基引起膜脂质过氧化特别重要，其活力以催化GSH 氧化的反应速度，及单位时间内GSH 减少的量来表示，GSH 和5,5,5’5’5’--二硫对硝基苯甲酸（DTNB ）反应在GSH-Px 催化下可生成黄色的5-硫代2-硝基苯甲酸阴离子，于423nm 波长有最大吸收峰，测定该离子浓度，即可计算出GSH 减少的量，由于GSH 能进行非酶反应氧化，能进行非酶反应氧化，所以最后计所以最后计算酶活力时，必须扣除非酶反应所引起的GSH 减少。
减少。
1.3.6.2.2 试剂和仪器试剂和仪器仪器：可见光分光光度计、酶标仪、低温高速离心机、匀浆器、恒温水浴锅、微量加样器样器试剂：叠氮钠磷酸缓冲液试剂：叠氮钠磷酸缓冲液pH7.0 N a N 3 16.25mg 终浓度2.5mmol/L EDTA-N a2 7.44mg 终浓度0.2mmol/L N a2HPO 41.732g 终浓度0.2mol/L N a H 2PO 41.076g终浓度0.2mol/L加蒸馏水至100mL ，用少量HCL 、N a OH 调pH7.0，4℃保存。
℃保存。
1mmol/L 谷胱甘肽（还原型GSH ）溶液）溶液GSH 30.7mg 加叠氮钠磷酸缓冲液至100mL ，临用前配制，冰冻保存1－2日。
日。
1.25－1.5mmol/LH 2O 2溶液溶液取30％H 2O 2 0.15－0.17mL ，用双蒸水稀释至100mL ，作为贮备液，4℃避光保存，临用前将贮备液用双蒸水稀释10倍即可。
倍即可。
偏磷酸沉淀液偏磷酸沉淀液 HPO 3 16.7g （先用蒸馏水溶解）（先用蒸馏水溶解） EDTA 0.5g N a Cl280g加蒸馏水至1000mL ，用普通滤纸过滤，室温保存。
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组成：
编号 名称 试剂(A): 样品匀浆液 试剂(B): GSH 试剂(C): GSH 配制液 试剂(D): 氧化剂 试剂(E): 酸性沉淀剂 试剂(F): GSH-Px assay buffer 试剂(H): ddH2O 使用说明书
TO1033 50T 50ml
15.4mg 10ml 2×1ml 100ml 62.5ml 50ml
北京雷根生物技术有限公司
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(比色法)
简介：
谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase，GSH-Px)是一种含硒的水溶性四聚体 蛋白酶。几乎在所有组织中都有分布，在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发 生明显的变化，该酶可以清除活细胞内过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着 关键作用。
Leagene 谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(Glutathione Peroxidase Assay Kit)是一种 以过氧化氢为底物，通过比色法检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶活性的 试剂盒。绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中性组成 部分。细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。其检测原理是：GSH-Px 可催化谷胱甘肽(GSH)与苯甲酸显色液发生氧化反应，使之生成黄色阴离子，通过分光光度 计或酶标仪检测 422nm 处吸光度值测定该阴离子的浓度，间接推算 GSH 减少的量。本试 剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
—
0.1ml
2ml
1ml
4、 GSH-Px 显色反应: 可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：
Hale Waihona Puke 加入物质空白对照管 本底对照管 测定管
取上清液
—
1ml
1ml
空白对照
1ml
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GSH 检测缓冲液
1.25ml
1.25ml
1.25ml
苯甲酸显色液
0.25ml
0.25ml
0.25ml
②混匀，置于室温孵育 1min。以 ddH2O 调零，用分光光度计或酶标仪检测 422nm 处吸 光度值，定义为 A 空白、A 本底、A 测定。如果用分光光度计，比色杯光径应为，加入的上清
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量因根据比色杯的最小量程而定；如果用酶标仪，96 孔板每孔应加上清液。一般情况下， A 空白在 0.003-0.050 之间，A 本底在 0.10-0.3 左右。
计算：
谷胱甘肽过氧化物酶酶活力单位的定义：1 个酶活力单位(1unit)是指在 37℃， 每 1L 血清，排除非酶促反应，1min 内可以催化 1μmol/L GSH 氧化所需(减少)的酶量为一个 GSH-Px 活性单位。
TO1033 100T 100ml
30.8mg 20ml 2×1ml 200ml 125ml 100ml 说明书
Storage
RT -20℃
4℃ RT RT RT -20℃ 避光
操作步骤(仅供参考)：
1、 样本处理： 血清、血浆样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，如果含有应去除红细 胞后，直接检测，如超过检测范围，用生理盐水稀释后检测。血清去除红细胞的简易方法 如下：用抗凝管收集血液，颠倒混匀。取至少 500μl 全血，4℃ 3000g 离心 5min。弃上 清，用冰冷的红细胞沉淀 10 倍体积的样品匀浆液重悬沉淀，再同前离心，弃上清。加入约 红细胞沉淀 4 倍体积的冰冷的 ddH2O 裂解红细胞。12000g 离心 5min，取上清。亦可采 用红细胞裂解液去除红细胞，如 Leagene ACK 红细胞裂解液等。 组织样本：动物用含有 20U/ml heparin 的生理盐水(0.9% NaCl containing 20U/ml
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heparin)灌流清除血液后获取组织样品。按照每 20mg 组织加入 200μl 样品匀浆液的比例， 用玻璃匀浆器在 4℃或冰浴匀浆。4℃，12000g 离心 10min。取上清用于酶活性的测定。 细胞样本：对于贴壁细胞，由于后续用于酶活性的测定，避免使用胰酶消化细胞。可以 使用用细胞刮或 EDTA 处理细胞收集细胞。细胞用无菌的 PBS 或生理盐水洗涤 1 次。按照 每 106 细胞加入 300-500μl 匀浆液的比例用玻璃匀浆器在 4℃或冰浴匀浆，4℃ 12000g 离心 10min，取上清用于酶活性的测定。亦可采用 Leagene Western 及 IP 细胞裂解液, 参考相应说明裂解细胞样品，按照每 106 细胞加入 100-200μl 裂解液的比例进行裂解，取 上清用于酶活性的测定。 2、 GSH 工 作 液 的 配 制 ： 取 0.5ml ddH2O 加 入 15.4mg GSH 或 1.0ml ddH2O 加 入
加入物质
空白对照管 本底对照管
GSH 工作液(1mmol/L)
—
0.2ml
待测样品
—
—
ddH2O
0.2ml
0.2ml
混匀，置于 37℃水浴 5min。
氧化工作液(提前 37℃预温)
—
0.1ml
混匀，置于 37℃水浴 5min。
酸性沉淀剂
0.8ml
2ml
3500g 离心 10min。
取上清液
—
1ml
测定管 0.2ml 0.2ml
GSH-Px(U/L)= (A 本底－A 测定－A 空白)/(A 本底－A 空白)×200 c、计算示例：样品的蛋白浓度经测定为 0.5mg/ml，稀释 2 倍后进行测定。一般情况 下，A 空白在 0.003-0.050 之间，A 本底在 0.10-0.3 左右。如果 A 本底＝0.30，A 测定＝0.20， A 空白＝0.003 那么:
注意事项：
1、 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。 2、 本法中所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定，如果在样品中的还原剂无法避
免，例如 DTT、巯基乙醇等，则这些还原剂的总浓度至少低于 0.1mM。0.15mM 的 DTT 可以抑制 40%的酶活力。 3、 样品可以立即测定，也可以-70℃冻存待以后测定。 4、 一定要严格控制反应时的温度，否则会引起较多误差。
30.8mg GSH 中，充分溶解并混匀，即获得 GSH 储存液(100mmol/L)，立即分装后-20℃ 保 存 。 取 适 量 的 GSH 储 存 液 (100mmol/L) ， 按 GSH 配 制 液 :GSH 储 存 液 (100mmol/L)=99:1 的比例稀释至 1mmol/L，即为 GSH 工作液(1mmol/L)，该溶液 配制好以后可 4℃保存 1 天。 3、 GSH-Px 酶促反应: 可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：
[ 检 测 体 系 中 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 活 力 ]=(0.30-0.02-0.003)/(0.30-0.003) × 200 × 2=130.6U/L
[样品中谷胱甘肽过氧化物酶活力]=130.6U/L×2/(0.5mg/ml)=522.4mU/mg(蛋白)
参考区间：
成年人血清 GSP-Px：115±140μmol/L
有效期： 12 个月有效。
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