ICH Q6B 生物技术产品和生物制品的检验方法和可接受标准

Q6B 生物技术产品和生物制品的检验方法和可接受标准1．绪论1．1目的本指南尽可能地提供了一套统一的制定和进行生物技术产品和生物制品的国际规格合理性评价的基本指南，以支持新的上市申请。

1．2背景规格定义为由一系列检查项目、引用的分析方法和相应的可接受标准组成，可接受标准可以是数值限度、范围或其它检查项目描述的标准。

规格制订了一套与其用途相适应的原料药、制剂和在生产其它阶段所用物料应遵循的标准。

“符合规格”是指原料药和制剂，按所列分析方法进行检查，会符合可接受标准。

规格是关键的质量标准，由生产商提出并做合理性评价，作为批准（药品）的条件，由药政管理机构批准。

规格是保证产品质量和一致性总控制策略的组成部分。

总控制策略的其它方面包括在开发阶段依据标准对产品进行全面的特征化、坚持按GMP要求生产、验证的生产工艺、原料检验、生产过程检验和稳定性试验等。

规格用以确保原料药和制剂质量，而不是确定产品的全面特性。

因此，规格的制定应着重研究在保证产品的安全性和有效性方面有意义的分子结构和生物学特性。

1．3适用范围本指南采纳和解释的基本原则将适用于蛋白质、多肽及其衍生物和含有这些成分的产品（如结合物）。

这些蛋白质和多肽是由基因重组或非重组的细胞培养表达系统生产，能被高度纯化，并用一套合适的检验规程进行鉴定。

本指南概括的基本原则也可能适用于从动物组织或体液中分离的蛋白质和多肽。

为了确定它的适用性，生产商应与有关的管理机构协商。

本指南未包括抗生素、合成的肽和多肽、肝素、维生素、细胞代谢物、DNA产品、过敏源提取物、常规疫苗、细胞制品、全血和血细胞成分。

对于化学物质，在ICH的另一指南“Q6A规格：新原料药和制剂的检验方法和可接受标准：化学物质”中有专门介绍。

本指南不介绍具体的检验方法和可接受标准，也不适应于临床前和/或临床研究的样品。

2．制定质量规格应考虑的原则2．1鉴定采用适宜的技术，生物技术产品和生物制品的鉴定，包括物理化学性质、生物活性、免疫化学性质、纯度和杂质测定，需要制定相关的标准。

可接受标准的制定和合理性评价，应依据临床前和/或临床研究中所用批号获得的数据、证明生产一致性所用批号的数据、稳定性研究数据和相关的开发数据。

在产品开发阶段，和必要时生产工艺的重大改变，需要对产品进行详尽的鉴定。

在申报时，如合适，产品应与合适的参考标准进行比较；如有可能，最好将产品与其天然品进行比较。

生产商在申报时应制订经过标化的内控参照物质，以供产品批号的生物学和物理化学检测。

新的检验技术在不断发展，现有的分析方法在不断改进，应合理采用。

2．1．1物理化学性质对拟定产品的物理化学性质的鉴定程序，一般包括组成测定、物理性质和一级结构测定。

有时通过合适的物理化学方法，可获得制定产品更高级结构的信息（可通过其生物学活性推测其可靠程度）。

由于蛋白质是由活的生物体生物合成的，它会出现一定程度的结构性的异质体（heterogeneity），因此，拟定产品可能是预期的遗传转译后修饰的各种形式的混合体（如糖蛋白）。

这些形式可能有活性，它们的存在也许不会对产品的安全性和有效性产生不利影响（见2.1.4部分）。

申请人应定义拟定产品的异质体类型，并证明它与临床前和临床研究所用批号的一致性。

如果已经证明每批产品的异质体的类型是一致的，就不必对混合体的每一种形式的活性、有效性和安全性（包括免疫性）进行评价。

原料药和制剂在生产和/或贮存过程中也会产生异质体。

因为这些产品的异质体决定了它们的质量，因此异质体的程度和概况应加以鉴定，以确保批与批之间的一致性。

当拟定产品的变化与拟定产品在活性、有效性和安全性方面有事实上的可比性时，应将异质体看作产品的相关物质。

当工艺改变或产品降解而导致异质体类型与临床前和临床开发所用的样品不一致时，应对这些变更的严重程序做出评价。

测定物理化学性质的分析方法见附录6.1，新的分析技术在不断发展，现有的分析方法在不断改进，应合理采用。

当用于产品的批放行时，应从这些方法中选择一些适宜的方法，并进行合理性评价（见第4部分）。

2．1．2生物活性在建立完整的鉴定档案时，生物学性质的评价成为基本的步骤。

生物活性是重要的生物学性质，它是描述了产品具有特定生物学能力，能达到拟定的生物学作用。

申请人应测定生物学活性有效的生物含量测定方法，生物活性测定的方法举例如下：●测定产品对生物体产生生物反应的动物试验方法；●在细胞水平上测定产品的生化和生理效应的细胞转录检测方法；●利用酶反应速率或免疫相互作用诱导的生物反应等方法测定生物活性的生化检验方法。

其它方法，如配体和受体结合检测方法，也是可行的。

效价（以单位表示）是利用与生物学性质相关的产品性质，对产品的生物活性进行定量检测，而总量（以质量表示）则是对蛋白质含量的物理化学测定。

模拟与临床相同的生物活性有时是不必要的，但在药效学和临床研究中，需确立临床反应和生物学测定活性的相互关系。

当含量测定可行并适合时，生物学含量测定结果应以用国际或国家参考标准品校正的活性单位表示。

在没有这种参考标准品时，应制订标化的内控参考物质，各批号产品的含量结果以内控参考物质的单位报告。

通常，对于复杂的分子，获得的大量理化信息往往不能确定其高级结构，但可从产品生物学活性加以推论。

在这种情况下，应用可置信限度较宽的生物学含量方法，并结合专门的定量测定方法，也是可以接受的。

用物理化学方法代替生物学方法测定产品的生物学活性，必须具备以下条件：●药物的物理化学信息，包括高级结构，可通过物理化学方法完全确定，方法也能证明与生物活性的相互关系；●存在已制定完整的生产历史档案。

当理化测试方法和生物方法具有相互关系时，其只用于生物活性的定量时，其结果应用质量表示。

对于产品的批放行检验（见第4部分），选择相应的定量方法，生物学方法还是物理化学方法，申请人应进行合理性评价。

2．1．3免疫化学性质当拟定产品是抗体时，对其免疫性质应进行全面鉴定。

如条件许可，应进行抗体与纯化的抗原和抗原特定部分的结合测试，来确定亲和力、亲和性和免疫性质（包括交叉反应）。

另外，应用生化方法确定目标分子和相关抗原结合部位，以及抗原本身的结合部位。

对于有些原料药和制剂，蛋白质分子需要使用免疫化学方法（如ELISA，Western Blot法，利用不同抗体能识别蛋白质分子的不同受体）进行测定。

蛋白质的免疫化学性质可用于它的鉴别、均一性或纯度测定，也可以用于定量。

如果免疫化学特性作为批放行标准，应提供抗体的所有有关资料。

2．1．4纯度、杂质和污染物测定绝对纯度和相对纯度，对分析方法有一定的挑战性，其结果与所用方法密切相关。

以往，生物制品的相对纯度用特定活性（每毫克生物制品的生物活性单位）来表示，其结果也和所用方法有关。

因此，原料药和制剂的纯度一般用几种方法结合起来进行评价。

由于生物技术产品和生物制品的分子特性和独特的生物合成工艺，原料药可能含有几种分子实体或变异体。

如这些分子实体来源于所预期的转录后修饰品，则应作为拟定产品的一部分。

当拟定产品的变异体是在生产和/或储存过程中形成的，如其性质与拟定产品具有可比性，则应作为产品的相关物质，而不是杂质（见2.1.1部分）。

如合适，应对产品相关物质制定单个和/或总的可接受标准。

对于批放行的纯度检测（见第4部分），只需选用其中一部分适用的方法并进行合理性评价。

●杂质对于原料药和制剂（可能由拟定产品和多个产品相关物质组成），除了对其纯度进行评价外，申请人还应对其中可能存在的杂质进行评价。

这些杂质可能与工艺有关，也可能与产品有关。

杂质的结构可能是已知，部分鉴定的或没有鉴别。

如果可能产生一定量的杂质，这些杂质应尽可能予以鉴定，以确定存在的程度，如条件许可，还应评估其生物学活性。

工艺相关杂质是指那些在生产过程中产生的杂质，即细胞基质（宿主细胞蛋白、宿主细胞NDA）、细胞培养基（如诱导剂、抗生素或培养基成分）或后续工序产生的杂质（见附录6.2.1部分）。

产品的相关杂质（如前体、某些降解产物），是在生产和/或贮存过程中产生的分子变异体，这些变异体在活性、有效性和安全性方面与拟定产品相比，不占主导地位。

杂质的可接受标准要根据临床前和临床研究使用的批号及证明生产一致性批号的数据而定。

对产品相关性和工艺相关性的杂质应制订单个和/或总的可接受标准。

在某些情况下，对有些选择的杂质不必制订可接受标准（见2.3部分）。

用于测定杂质存在的分析方法的示例见附录6.2。

新的分析方法在不断发展，现有的分析技术在不断改进，应合理采用。

对于批放行检验（见第4部分），只需选用一部分适用的方法并评价其合理性。

●污染物产品中的污染物包括所有外部带来的物质，而不是生产工艺的一部分，如化学品及生化物质（如微生物蛋白酶）和/或微生物。

污染物应严格避免，和/或用合适的中间过程的可接受标准、原料药的行动限或制剂的质量规格来控制（见2.3部分）。

对于外源性病毒和支原体污染，不宜采用行动限的概念，而应考虑采用ICH两个指南提出的策略，指南即“Q5A 生物技术产品和生物制品质量：来源于人或动物细胞系生物技术产品的病毒安全性评价”和“Q5D生物技术产品和生物制品质量：用于生物技术产品和生物制品生产的细胞基质的来源和鉴定”。

2．1．5总量总量，一般按蛋白质的含量测定，它对生物技术产品及生物制品至关重要，通常选择合适的物理化学方法测定。

有时还要证明所得总量值与生物含量呈正比关系。

当这种关系存在时，在生产过程中可测定总量而不是测定生物活性。

2．2分析方法应考虑的有关问题2．2．1参考标准品和参考物质新的分子实体进行药品申请，一般不可能有国际标准品或国家标准品可用，申请人应制定经标化的内控一级参考物质。

该参考物质应用产品的代表性批号和临床样品制备而得。

用于产品批检验的内控工作参考物质应用一级参考标准品标化。

如能获得国际或国家标准品，则应尽可能用其标化参考物质。

进行生物学测定和理化检测使用同一参考物质是比较理想的，但有时也需要用各自的参照物质。

另外，对产品相关物质、产品相关杂质和工艺相关杂质有时也需要分别制订参照物质。

参考物质的制造和/或纯化的方法的描述应包括在申请文件中，鉴定的文件、贮存条件和稳定性的支持资料也应提供。

2．2．2分析方法的验证在向主管部门申报资料时，除了用于生物技术产品和生物制品特殊问题用的特殊分析方法外，申请人应按ICH指南“Q2A分析方法验证术语”和“Q2B分析方法验证：方法学”的要求，对质量规格中的分析方法进行了验证。

2．3工艺控制2．3．1与工艺有关的问题完善的工艺设计和对生产能力的认识，是开发一个可控的、可重复的、生产满足标准的原料药和制剂工艺策略的组成部分。

与此相关，应根据从开发初期到商业规模生产的整个过程中积累的关键资料，去评价限度的合理性。