第六章 2微生物的代谢实验

与分解代谢有关的生化实验（二）

1、了解各生化实验的原理

2、能配制相应的培养基，选用合适的指示剂

3、能准确判断结果，并进行表示

1、VP试验

2、硫化氢试验

3、尿素酶试验

4、复合生化试验

①动力靛基质尿素酶试验 MIU

②克氏双糖铁培养基试验 KIA

克氏双糖铁培养基试验 KIA

KIA可能出现的四种颜色所表示的意义

讲授为主

实验报告

反复强调微生物实验操作的注意事项

复习：相关理论知识

引入：不同种类的微生物能产生不同的酶类，因此，不同的微生物能够利用的营养物质是不同的。即使是针对相同的营养物质，不同的微生物有不同的利用方法（导致最终产物不同）。

人为的设计一些培养基和检测方法，可以比较方便的了解微生物的生理过程。

实验二与分解代谢有关的生化试验

5.VP试验

①培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基（葡胨水）

②指示剂：VP试剂（VP甲液和VP乙液）

③原理：

④结果判断和表示方法

培养基颜色变红—————— + 培养基颜色不变（或变棕色）——————－

注意：

若滴加甲液和乙液后没有变色，不能马上判断结果为阴性。

乙酰甲基甲醇在碱性条件下被氧化需要一段时间。

再放入培养箱培养2—4h以后，判

断结果。

原理：

含硫氨基酸

2S + Fe 2+

，

+ Pb 2+

7. 尿素酶试验

尿素培养基配方：

蛋白胨 1g NaCl 5g

葡萄糖 1g 磷酸二氢钾 2g

尿素 终浓度2% 酚红溶液 3ml

蒸馏水 1000ml

①培养基：尿素培养基（pH6.8）

②指示剂：酚红

③原理： 尿素3， 指示剂变色，桔黄色红色

④结果判断和表示方法：

培养基颜色变红———— +

培养基颜色不变（桔黄）

————— —

6、硫化氢试验

8、复合生化试验

①动力靛基质尿素酶试验 MIU

MIU培养基配方：

胰蛋白胨 10g

NaCl 5g

葡萄糖 1g

磷酸二氢钾 2g

尿素终浓度2%

酚红溶液 2ml

琼脂 3g

蒸馏水 1000ml

结果判断和表示方法：

看穿刺线：模糊 + 清晰—

看培养基颜色：红色+ 无变化—

加靛基质试剂：红色+ 无变化—

②克氏双糖铁培养基试验 KIA

培养基配方：

蛋白胨 20g 乳糖 10g 牛肉膏 3g 葡萄糖 1g 酵母膏 3g 硫酸亚铁铵 0.3g NaCl 5g 硫代硫酸钠 0.5g 酚红溶液 6ml 琼脂粉 13g 蒸馏水 1000ml

可观察四种生化结果：

①是否利用葡萄糖②是否利用乳糖

③是否产生H2S ④是否产生气体

结果判断和表示方法：

例1：大肠杆菌在KIA上的生化表现为：上层黄色，下层黄色，培养基断裂，无黑色沉淀。

表示方法：AG/AG,－

例2：变形杆菌在KIA上的生化表现为：上层红色，下层黄色，有黑色沉淀，培养基没有断裂，也没有产生气泡。

表示方法？