杀菌剂生物测定技术
实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法一、实验目的掌握抑菌圈法测定杀菌剂的生物活性的方法及步骤。
二、实验原理本实验主要采用抑菌圈法来测定杀菌剂的生物活性。
抑菌圈法是利用杀菌剂在琼脂平板上产生的抑菌效果来对其生物活性进行测定的一种方法。
通常，将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，使其均匀地分布在琼脂上。
然后，将含有细菌培养物的琼脂平板放入恒温箱中进行培养。
在培养一段时间后，观察平板上是否出现了抑菌圈，并测量抑菌圈的直径来评估杀菌剂的生物活性。
三、实验仪器和材料1.显微镜2.恒温箱3.滴定管或移液管4.琼脂平板5.细菌培养物6.杀菌剂溶液四、实验步骤1.准备琼脂平板。
将琼脂平板置于恒温箱中，加热至溶化状态后取出，待其稍微冷却后均匀地倒入培养皿中。
2.滴加杀菌剂溶液。
将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，并用移液管在平板上转动，使杀菌剂均匀地分布在琼脂上。
3.检验杀菌剂效果。
取一定量的细菌培养物，将其在琼脂平板上均匀涂布。
4.培养细菌。
将含有细菌培养物的琼脂平板放入预先恒温箱中，设置合适的温度和培养时间。
5.观察抑菌圈。
在培养一段时间后，取出琼脂平板，用显微镜观察平板上是否出现了抑菌圈。
6.测量抑菌圈直径。
使用直尺或量角器等工具测量抑菌圈的直径，并记录结果。
五、实验注意事项1.操作时要注意无菌技术，以避免细菌污染。
2.滴加杀菌剂溶液时要均匀并轻柔，以保证杀菌剂能充分分散在琼脂平板上。
3.培养细菌时要控制好温度和培养时间，以确保细菌能够充分生长。
4.观察抑菌圈时要注意使用合适的放大倍数，以免错过细小的抑菌圈。
5.测量抑菌圈直径时要使用准确的测量工具，以获得准确的结果。
六、实验结果处理根据实验所得的抑菌圈直径数据，可以通过计算其平均值、标准差等统计指标来评估杀菌剂的生物活性。
较大的抑菌圈直径通常表示杀菌剂具有较强的抑菌效果，反之则表示其抑菌效果较弱。
可以将实验结果与已有的标准值进行比较，以判断杀菌剂的生物活性。
七、实验结果分析根据测得的抑菌圈直径结果，可以对杀菌剂的生物活性进行分析。
（整理）农药生物测定实验指导.
（整理）农药⽣物测定实验指导.农药⽣物测定实验指导（⾃编试⽤1.0）主编：姜兴印副主编：赵春青张卫光制药⼯程专业⽤⼭东农业⼤学植物保护学院2008年9⽉棉铃⾍⼈⼯饲料制备⼀、实验⽬的学习棉铃⾍⼈⼯饲料制备技术和⽅法。
本⽅法还适合⽟⽶螟等⼈⼯饲料的制备。
⼆、实验⽤品和仪器设备仪器设备：天平、⾼压灭菌器、罐头瓶、电饭锅、筛⼦（40⽬）、量筒、搪瓷盘、温度计实验物品：⼩麦粉、⽟⽶粉、黄⾖粉、啤酒酵母粉、琼脂、棉叶、V C、棉油、苯甲酸钠、⼭梨酸钾、兽⽤链霉素、⽔等三、实验⽅法1. 配⽅：2. ⼩麦粉、⽟⽶粉、黄⾖粉、酵母粉和棉叶装⼊罐头瓶中，⾼压灭菌40min.（120℃）3. ⽔+琼脂煮开冷却⾄70℃，加⼊Vc、防腐剂、棉油混匀，再加⼊混合好的其他成分，充分混匀。
4. 倒⼊搪瓷盘，加盖冷却后放⼊冰箱中备⽤。
四、质量检查饲料冷却后观察颜⾊和固化成型情况。
五、实验报告农药⽣物测定药剂配制⼀、实验⽬的学习⽣物测定药剂配制的实验操作技术和⽅法。
⼆、实验⽤品和仪器设备电⼦天平、计算器、烧杯、移液管、吸⽿球、记号笔、容量瓶、量筒等。
实验原药：93%顺式氯氰菊酯，95%吡⾍啉实验制剂：50%多菌灵WP，2.5%功夫EC(w/w)，33%施⽥补EC(w/v)三、实验⽅法1. 原药母液的配制与稀释（1）⽤丙酮配制2％顺式氯氰菊酯母液50mL，然后稀释成200mg/L 50mL 丙酮液。
（2）⽤丙酮配制1％吡⾍啉母液50mL，然后稀释成125mg/L 50mL丙酮液（3）将顺式氯氰菊酯和吡⾍啉按照5：2的⽐例混合，配制1.5%混剂50mL 丙酮液。
2. 制剂的稀释（1）50%多菌灵WP，稀释成200mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。
（2）2.5%功夫EC，稀释成1000mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。
（3）33%施⽥补EC，稀释成150mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。
四、结果计算和处理将以上每⼀种母液配制和稀释需要原药和制剂的量计算，并详细描述配制和稀释过程。
09第二章 第三节 杀菌剂的生物测定方法
水溶性药剂、乳油稀释液或稳定的悬浮液（胶悬剂的稀释液）可用此
法，而WP由于是悬浮性差，不宜采用。 优点：操作简单迅速，无需特殊设备
缺点：药剂和孢子始终充分接触，与病害防治的实际相差很大，测得
的毒力往往偏高。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
二、杀菌剂温室植株测定方法
针刺法测定农药对番茄灰霉病防治效果的活体试验
二、杀菌剂温室植株测定方法
对照（3d）
40%多菌灵WP1500×（3d）
一种植物精油1000×
针刺法测定农药对番茄灰霉病防治效果的活体试验
二、杀菌剂温室植株测定方法
盆栽法测定农药对小麦白粉病的防治效果
二、杀菌剂温室植株测定方法
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法
3、孢子悬浮液的准备
菌种
无菌水，搅匀
菌种悬浮液
二层纱布过滤 除去菌丝体及破碎培养基
离心 无菌水洗
洗净的孢子
调至浓度5000个/mL（10×10倍，35个孢子）
Байду номын сангаас
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法
3、孢子悬浮液的准备
菌种应是标准菌种，供试菌种应符合以下条件： ①菌种纯粹，在一般培养基上易大量产生孢子； ②多代繁殖不易产生变异； ③孢子个体较大，易于在显微镜下观察萌发情况；
④在分类上有一定的代表性，而且是重要的植物病害病原菌。
2、生长速率法
杀菌剂生物测定技术
2.含毒介质培养法
有3种： （1）抑菌圈法 （2）生长速率法 （3）最小浓度法
（1）抑菌圈法的原理
基本原理是在已经接种供试菌的洋菜培养基 （通常在培养皿内）表面，利用各种方法（管 碟法，滤纸片法，孔碟法 ）使药液和培养基接 触，恒温培养一定时间后，由于药剂的渗透扩 散作用，施药部位周围的病菌被杀死或生长受 到抑制，从而产生了抑制圏。根据抑菌圈的大 小来比较不同杀菌剂的毒力大小。
用十字交叉法测量抑菌圈的直径
孔碟法
用灭菌后的打孔器直接在凝固好的 含孢培养基上打成圆孔，将定量的药 液滴入圆孔中，恒温培后测量抑菌圏 的大小，进行杀菌剂毒力比较。
影响抑菌圈法测定结果的因素
主要有以下几个方面的
1 对供试菌的要求 在较粗放的比较 杀菌剂毒力的测定中，对菌种的要求不 必过严，只要在培养基中容易培养而且 抑菌圈清楚的均可采用。
孢子萌发的标准
以病菌孢子作为指示物进行杀菌剂毒力测定。 用孢子液和不同浓度的药液混合，恒温保湿培养， 培养一定时间后即可检查孢子萌发率。一般在低 倍镜下，每处理随机检查200个孢子。
抑制率计算
孢子萌发率（%）＝萌发孢子数/检查孢子数X100 若对照组有20%以上孢子不萌发，则应重做。
对照萌发率－处理萌发率 抑制孢子萌发率（%）＝－－－－－－－－－X100
抑菌圈法示意图
注意事项
上述操作应尽量在无菌条件下进行，
以防污染
操作室的温度最好在26～28℃左右，
如室温太低，则50℃左右的培养基在操作 过程中迅速冷凝，无法制作平板
十字交叉法测量抑菌圈的直径 ，消除误
差
滤纸片法
（1） 配制不同浓度的药液
（2） 配孢子悬浮液
（3） 制含孢子的平板
农药室内生物测定技术与方法
农药室内生物测定技术与方法张宗俭(沈阳化工研究院农药生物测定中，沈阳110021)一、农药生物测定的含义及其用途农药生物测定是指利用靶标生物(昆虫、螨类、病原微生物、线虫、植物等)的活体或离体器官、组织、细胞或其代谢物等(如酶、蛋白质等)为试材，测试或鉴别生物活性物质的类型、反应症状或其活性大小的一种方法。
简单地说，农药生物测定技术就是利用靶标生物等对药剂的反应来鉴别农药毒力或药效的一种技术。
农药生物测定主要包括杀虫剂(杀螨剂)、杀菌剂(杀线虫或抗病毒剂等)、除草剂、杀鼠剂以及植物生长调节物质等的生物测定技术。
它涉及靶标生物、测试物质(药剂)、反应症状及强度、测试环境条件等多方面的因素。
一个好的生物测定技术或方法应具备易于操作、结果反应灵敏、重现性好、且使用物质的剂量与反应之间有良好的相关性。
农药生物测定技术与农药的使用和开发同时产生，经过长期不懈创新、完善和发展，已经成为研究生理活性物质、靶标生物以及反应强度三者关系的一项专门技术，被广泛应用于新农药的筛选以及作用特性和应用技术评价等研究之中。
纵观目前农药生物测定的研究概况，室内农药生物测定技术主要应用于以下几个方面：1．刨制农药生物活性筛选研究：随着农业生产的发展和人们对地球环境生态和人类健康等的要求不断提高，高效、低毒、环境友好型新农药的开发应用给人类社会和生产企业带来巨大的效益，但同时也由于新农药开发的难度与费用日益增加，如何利用生物测定技术快速高效地筛选新化合物，并准确评价其生物活性以及应用技术，估测其农药生物评价技术报告会市场前景及将来在市场上的占有率和利润额，是决定其创制农药研究成功与否的关键。
利用生物测定方法研究同一类结构或同一作用类型化合物的化学结构与生物活性关系的规律(sAR)以及与靶标作用位点的结合关系，为定向创制新农药和计算机辅助设计新化合物提供基础数据和理论依据。
生物活性筛选被称为农药创制的“眼睛”．对新农药开发研究起着举足轻重的作用。
霉菌--生长速率法
菌落生长速率的表示方法 菌落达到一个给定的大小所需要的时间（天或小时） 在单位时间内菌落直径的大小
生长速率法常用的菌种 苹果腐烂病菌（Valsa mali） 小麦纹枯病菌（Rhzoctonia solani ） 棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporium） 葡萄白腐病菌（Coniothyrium diplodiella） 小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces graminis） 辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）
6
7
五、实验数据及其处理 纯生长量=菌落平均直径-菌饼直径 抑菌率（%）=[(对照菌落纯生长量-处理菌落纯生长量/ 对照纯生长量]×100%
8
50%多菌灵对苹果腐烂病菌的抑制作用(生长速率法)
菌落直径（mm）
药 剂
浓度（mg/L）
浓度 对数
ⅠⅡ
ⅢⅣ
平均
ห้องสมุดไป่ตู้
抑制 （%）
机 率 值
9
机率值
6 y = 0.9624x + 2.8171
大家好
1
实验十 杀菌剂的生物测定--生长速率法
2
一、实验目的 学习并掌握杀菌剂的生物测定方法之一--生长速率法
二、实验原理 生长速率法是杀菌剂毒力测定的常规方法之一，适用于不 长孢子而菌丝生长较快的真菌，是通过菌落生长的速度快 慢来衡量药剂的毒力大小 生长速率法又叫含毒介质法，它是将供试药剂与培养基混 合，以培养基上菌落的生长速度来衡量化合物的毒力大小。 一般多用于那些不产孢子或孢子量少而菌丝较密的真菌
4
三、试剂和仪器设备 高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种针、纱布、吸 管、消毒培养皿、打孔器、无菌小烧杯 PDA培养基 病原菌（苹果腐烂病菌） 供试杀菌剂(多菌灵)
实验十杀菌剂的生物测定生长速率法
五、实验数据及其处理
纯生长量=菌落平均直径-菌饼直径 抑菌率（%）=[(对照菌落纯生长量-处理菌落纯生长量/ 对照纯生长量]×100%
50%多菌灵对苹ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ腐烂病菌的抑制作用(生长速率法)
菌落直径（mm）
药 剂
浓度（mg/L）
浓度 对数
ⅠⅡ
ⅢⅣ
平均
抑制 （%）
机 率 值
6 y = 0.9624x + 2.8171
5
机率值
4
3
1
2
3
浓度对数
六、问题讨论
根据实验结果比较各种供试药剂之间对病原菌菌丝生长 的抑制作用
菌落生长速率的表示方法 菌落达到一个给定的大小所需要的时间（天或小时） 在单位时间内菌落直径的大小
生长速率法常用的菌种 苹果腐烂病菌（Valsa mali） 小麦纹枯病菌（Rhzoctonia solani ） 棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporium） 葡萄白腐病菌（Coniothyrium diplodiella） 小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces graminis） 辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）
三、试剂和仪器设备 高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种针、纱布、吸 管、消毒培养皿、打孔器、无菌小烧杯 PDA培养基 病原菌（苹果腐烂病菌） 供试杀菌剂(多菌灵)
四、实验步骤
将培养基加热溶化，冷却至45-50℃，加入供试药液制成 含药液的培养基，并分别倒入培养皿中冷却
以无菌操作手续，用打孔器打取圆形菌块后用接种针挑至 培养皿中央，然后将培养皿置于培养箱（27℃）中培养即可
一、实验目的
学习并掌握杀菌剂的生物测定方法之一--生长速率法
常用杀菌剂生物测定中稀释母液的配制方法
Ｐ ｅ ａ ａ ｉｎｏ ａ ｅ ｌｔ ｎ ｆ ｕ ｇｃｄ ｓｉ ｂ Ｔｏ ｉｉ ｏ ｓａ ｒ ｐ ｒ ｔｏ ｆ Ｗ ｔｒＤｉ ｉ ｓｏ ｎ ｉｉｅ Ｌａ ｘｃｔ Ｂｉａ ｓ ｙ ｕ ｏ Ｆ ｎ ｙ
１ ａ ｔ ｅｉ ｇ ｅ ｉ ｎ ． ｈ ｏ ａ ｅ ｏ ｙ ｌ ｈ ｘ ｎ ｎ ｓ０ ｔ ． ％， ｎ ％ ｎ Ｂｕ ｙ ｌｏ ｏ ｓ ｄ ｅ ｔ ｎ ｒ ａ ｅｔ ｅ ％ ｃｉ ｒ ｄ ｅ ｔ ｔ ｅ ｄ ｓ ｇ ｆ ｃ ｏ ｅ ａ ｏ ｅ ｗａ ２５ ｖ ｎ ｃ ｏ ａｄ１ － ｔｌ ｃ ｈ ｌ ａ Ｗａ ａ ｄ ｄ ｉ ｏ ｔ ｉ ｃｅ ｓ ｎ ｏ ｈ
Ｔｈ ｂ ｖ ｙ ｔ ｍｓ ｃ ｕ ｄ ｒｄ ｃ ｈ ｉ ｕ ｂ ｃ ｆ ｓ ｌｅ ｔ ｎ ｕ ｆｃ ａ ｔ ｎ ｔ ｅ ｂ ｏ ｓ ｙ ｒ ｓ ｌ ，ｉ ｒ ｖ ｅｒ ｅ ａ ｏ ｅ ｓ ｓｅ ｏ ｌ ｅ ｕ ｅ ｔ ｅ ｄ ｓ ｒ ａ ｅ ｏ ｏ ｖ ｎ ｓ ａ ｄ ｓ ｒａ ｔ ｎ ｓ ｏ ｈ ｉ ａ ａ ｕ ｔ ｍｐ ｏ ｅ ｔ ｉ ｔ ｎ ｓ ｅ ｓ ｈ ｒ ｌ ｂｌ ｙａ ｄｃ ｍｐ ａ ｉ ｔ ． ｅｉ ｉ ｔ ｏ ａ ｂ ｌ ｙ ａ ｉ ｎ ｒ ｉ ）
配制成 ｌ ％水悬浮剂母液 ，其 中润湿分散 剂为 ２ １０ ｌ 农乳 ５０，粘度调节剂为 ０ ％黄原 ％ ６２和 ％ ０ ． ２
胶。上述母液体 系组成简单 ，减 少了 有机溶剂、表面活性剂等对毒 力测定结果的干扰，便于提 高
生物测定结果的可靠性和可比性 。
关键词：杀菌 剂；母 液 ；配制
２ １ １） ７ ０ 摘要： 介绍了杀菌剂生物测定 中常用杀菌剂稀释母 液的配制方法。 于杀菌剂原油及 易溶于环 对
杀菌剂毒力测定
一、杀菌剂毒力测定方法 2 .3结果检查及其表示方法 十字交叉测2个直径，以其平均值代
表菌落大小。
抑制 1 生 处 对 长 理 照 率 菌 菌 菌 菌落 落 饼 饼 1直 直 直 直 % 0
36
一、杀菌剂毒力测定方法
3 滤纸片附着法(adsorption technique)
6. 数据处理 计算校正的孢子萌发率，求出毒力回
归线，EC50，EC90及95%置信限。
30
一、杀菌剂毒力测定方法
2 生长速率法(mycelium growth rate test)
将不同浓度的药液与融化的培养基混 合，制成带毒培养基平面，在平面上 接种病原菌，以病原菌生长速度快慢 来判定药剂毒力大小。
6
一、杀菌剂毒力测定方法
1.2 液剂的附着 A、混合滴加 将供试药剂与孢子悬浮液混合滴加于
载玻片上。对水溶性药和稳定的悬浮 剂可得到正确的结果。对于非水溶性 药剂，因沉降快而不易获得正确结果。 简单迅速，适于大规模初筛。测得结 果一般偏高。
7
一、杀菌剂毒力测定方法
B、定量滴加药膜法 定量滴加药液（用水或有机溶剂均
温度不同。适于低温的孢子，如小麦 黑穗病菌的厚垣孢子，温度超过 21~22℃ 就不能萌发。
17
一、杀菌剂毒力测定方法 1.4 孢子萌发条件 B、湿度：真菌孢子一般要求在水滴
中才能萌发，但也有少数真菌孢子， 如白粉病菌的分生孢子，在相对湿度 很低的情况下也能萌发。
18
一、杀菌剂毒力测定方法
1.4 孢子萌发条件 C：光照：光照对多数真菌孢子萌发
40
一、杀菌剂毒力测定方法
4 扩散法 管碟法： 在试验平面上放4个牛津杯（外径8mm，
内径6mm，高10mm）。用移液管将已 知浓度的标准液和不同浓度的待测液 移圆筒内，在适温下培养，让其形成 抑菌圈。测其直径。
杀菌剂的毒力测定方法
生长速率测定法注意事项：
1）带毒培养基的制作
应先加药液再加培养基（1：9）； 对一些受热易分解的药剂则要待培养基 冷却到50度左右时再加入。
2）接种病原菌
如果是菌丝接种，打孔制作菌饼时 取材要从种菌皿的外缘开始，避免使用 中心区的菌丝。
如果是孢子液接种，用接种针蘸取 孢子液后，在带药培养基上划一直线。
6 扩散法
原理：在已接种的培养基上加少量的 抗菌物质，使其接触培养基和病原菌，经 一定时间培养后，接触部分的周围由于抗 菌物质的扩散，而产生抑菌圈（或抑菌 带），其大小与药剂浓度有关系，以此来 比较杀菌剂的毒力大小。
此法主要用于抗生素的效价测定。
农用抗生素的效价
效价是衡量抗生素有效成份和质量好坏的 一个指标。
药剂抗菌力也即药剂毒力。
5 气体效力测定
原理：有些杀菌剂具有挥发性，且有杀 菌特性，在测定这类杀菌剂毒力时，可将麦 芽汁-琼脂培养基置于皿底内，冷凝后接种病 原菌孢子，然后盖上皿盖并倒过来使底成 “盖”，使盖成“底”，并将杀剂菌剂置于 “底”内，放到适于病菌孢子发芽生长的环 境中培养一定时间后观察。
如：嘧啶胺类化合物在室内，以 100ug/ml对灰霉病菌孢子没有抑制作用； 300ug/ml对菌丝生长也不能抑制； 1ug/ml的浓度在田间使用时，却能很好 的防治灰霉病。
药剂与病菌的作用关系
传统的：以其“毒力”抑制或杀死病菌。一 般是一致的。
病菌
药剂
环境
新类型的杀菌剂：
影响病菌的致病过程； 影响寄主的抗病性；
即在各处理组的调查孢子总数中增加调查 孢子数量，增加的数量根据对照组孢子萌发 率换算出来。
如：CK孢子萌发率达98%时，在调查处理 组时，拟定调查数量为100时，此时就要调查 102个，并对其不萌发孢子数减去2，然后计 算孢子萌发率。
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法work Information Technology Company.2020YEAR实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法一、实验目的学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。
二、实验原理抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。
在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。
其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。
但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。
根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。
三、实验材料供试药剂：速克灵或扑海因。
供试病原菌：番茄灰霉病菌。
实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。
四、实验方法采用管碟法。
将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。
1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。
灭菌蒸馏水为对照。
2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。
在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。
用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法work Information Technology Company.2020YEAR实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法一、实验目的学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。
二、实验原理抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。
在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。
其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。
但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。
根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。
三、实验材料供试药剂：速克灵或扑海因。
供试病原菌：番茄灰霉病菌。
实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。
四、实验方法采用管碟法。
将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。
1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。
灭菌蒸馏水为对照。
2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。
在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。
用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。
农药室内生物测定技术与方法
农药室内生物测定技术与方法张宗俭(沈阳化工研究院农药生物测定中，沈阳110021)一、农药生物测定的含义及其用途农药生物测定是指利用靶标生物(昆虫、螨类、病原微生物、线虫、植物等)的活体或离体器官、组织、细胞或其代谢物等(如酶、蛋白质等)为试材，测试或鉴别生物活性物质的类型、反应症状或其活性大小的一种方法。
简单地说，农药生物测定技术就是利用靶标生物等对药剂的反应来鉴别农药毒力或药效的一种技术。
农药生物测定主要包括杀虫剂(杀螨剂)、杀菌剂(杀线虫或抗病毒剂等)、除草剂、杀鼠剂以及植物生长调节物质等的生物测定技术。
它涉及靶标生物、测试物质(药剂)、反应症状及强度、测试环境条件等多方面的因素。
一个好的生物测定技术或方法应具备易于操作、结果反应灵敏、重现性好、且使用物质的剂量与反应之间有良好的相关性。
农药生物测定技术与农药的使用和开发同时产生，经过长期不懈创新、完善和发展，已经成为研究生理活性物质、靶标生物以及反应强度三者关系的一项专门技术，被广泛应用于新农药的筛选以及作用特性和应用技术评价等研究之中。
纵观目前农药生物测定的研究概况，室内农药生物测定技术主要应用于以下几个方面：1．刨制农药生物活性筛选研究：随着农业生产的发展和人们对地球环境生态和人类健康等的要求不断提高，高效、低毒、环境友好型新农药的开发应用给人类社会和生产企业带来巨大的效益，但同时也由于新农药开发的难度与费用日益增加，如何利用生物测定技术快速高效地筛选新化合物，并准确评价其生物活性以及应用技术，估测其农药生物评价技术报告会市场前景及将来在市场上的占有率和利润额，是决定其创制农药研究成功与否的关键。
利用生物测定方法研究同一类结构或同一作用类型化合物的化学结构与生物活性关系的规律(sAR)以及与靶标作用位点的结合关系，为定向创制新农药和计算机辅助设计新化合物提供基础数据和理论依据。
生物活性筛选被称为农药创制的“眼睛”．对新农药开发研究起着举足轻重的作用。
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法摘要：本实验主要研究了七杀菌剂的生物活性测定方法，抑菌圈法。
该方法通过在琼脂平板上播种细菌，再在平板上施加一定浓度的七杀菌剂，观察并测量周围的抑菌圈直径，从而评估七杀菌剂对细菌的抑制作用。
实验结果表明，抑菌圈直径与七杀菌剂浓度呈正相关关系，且抑菌圈直径越大，表示七杀菌剂的抑菌效果越好。
通过该方法可以快速、简便地评估七杀菌剂的生物活性，为进一步研究其抗菌机制和优化配方提供了参考。
关键词：七杀菌剂；抑菌圈法；生物活性；抑菌圈直径一、引言七杀菌剂是一类特殊作用机制的植物杀菌剂，具有广谱杀菌、低滴效、低残留、不发生抗性等优点，被广泛应用于农业防病生产中。
评估七杀菌剂的生物活性是研究抗病机理、筛选优良品种和优化配方的重要手段。
目前，常用的七杀菌剂生物活性测定方法包括最小抑菌浓度法、抑菌圈法和微量滴定法等。
本实验采用抑菌圈法对七杀菌剂的生物活性进行测定，该方法简单易行、时间短，能够客观直观地评估抗菌剂的抑菌效果，被广泛应用于杀菌剂的筛选和评估中。
二、材料与方法2.1实验材料-七杀菌剂：根据实验需要选择合适的七杀菌剂；-革兰氏染色培养基：包括琼脂和所需培养成分；-细菌：根据实验需要选择合适的细菌菌种；- 培养皿：直径90 mm的培养皿；-无菌棉花：消毒后用于吸水；-直尺：用于测量抑菌圈的直径。
2.2实验步骤步骤一：制备琼脂平板1)按照革兰氏染色培养基的配方将琼脂和所需培养成分溶解在适量的蒸馏水中；2)加热溶液，使其均匀溶解；3)微量加热，使溶液达到沸腾状态；4)关火，冷却至50-60°C左右；5)待溶液冷却至室温，但还能滴落时，加入适量的细菌菌液；6)快速均匀摇晃培养皿，使菌液均匀分布；7)等待琼脂凝固，形成琼脂平板。
步骤二：制备七杀菌剂根据使用七杀菌剂的需要，按照使用说明书中的配方调配适量的七杀菌剂浓度。
步骤三：进行抑菌实验1)在琼脂平板表面平均涂布一层细菌菌液；2)在涂布完成后，使用消毒的锥形杯钻按规定距离在琼脂平板上扎孔；3)将七杀菌剂溶液滴入孔内，注意控制滴入的量和浓度；4)将培养皿倾斜，使溶液均匀涂布在琼脂平板上；5)撤去孔内的溶液，用无菌棉花吸干孔内的溶液；6)将培养皿倒置放置于恰当的环境中进行培养；7)培养一定时间后，观察并测量抑菌圈的直径。
杀菌剂毒力测定
17
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 B、湿度：真菌孢子一般要求在水滴 中才能萌发，但也有少数真菌孢子， 如白粉病菌的分生孢子，在相对湿度 很低的情况下也能萌发。
1.4
18
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 C：光照：光照对多数真菌孢子萌发 的影响不大，但对某些真菌孢子有刺 激或抑制作用，如光照可刺激水稻黑 粉病菌厚垣孢子的萌发，抑制小麦秆 锈病菌夏孢子的萌发。
2.
26
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
药剂的配制 水溶性药剂直接用水溶解，其它药剂 选用合适的有机溶剂（甲醇、丙酮、 二甲基亚砜等）溶解，再用0.1%的吐 温80水溶液稀释，设置5~7个浓度， 有机溶剂最终含量不超过2%
4.
28
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
调查 当空白对照孢子萌发率达到90%以上 时，每重复了随机观察3个以上视野， 调查孢子总数不少于200个，分别记 录萌发数和孢子总数。
4
一、杀菌剂毒力测定方法
1、孢子萌发法
(spore germination method) 快速。广泛用于保护剂的测 定 此法适用于抑制病菌能量合 成系统，而使孢子不能萌发 的杀菌剂。
5
一、杀菌剂毒力测定方法
玻璃器皿的处理 清洁：以洗液浸泡数十分钟,用自来水 冲洗, 用蒸馏水清洗,防尘干燥. 载玻片保存于70%的酒精溶液内.
多菌灵对镰刀菌及由镰刀菌引起的赤
农药室内生物测定试验准则 杀菌剂8部分
农药室内生物测定试验准则杀菌剂8部分示例文章篇一：《农药室内生物测定试验准则之杀菌剂8部分》杀菌剂在农业生产中可是非常重要的角色呢，就像守护庄稼的小卫士。
今天咱们就来说说农药室内生物测定试验准则里关于杀菌剂的8部分。
我记得有一次去爷爷的田里，看到那些农作物有的叶子上长满了奇怪的斑点，爷爷就很发愁。
他说这可能是病菌在捣乱，如果有合适的杀菌剂就好了。
这就让我想到了科学家们做的这些室内生物测定试验，那可真是为了找到好的杀菌剂费尽心思啊。
在这第8部分里呢，首先是试验材料的准备。
这就像是做菜之前要准备食材一样重要。
对于杀菌剂的室内测定，要选好合适的病菌。
这病菌啊，不能随便乱选，得是那种经常危害农作物的病菌才行。
比如说小麦的锈病病菌，它可是让好多小麦都生病的罪魁祸首。
那怎么得到这些病菌呢？科学家们会从生病的农作物上小心地采集，就像寻宝一样仔细。
而且采集来的病菌还要好好保存，就像照顾小婴儿一样精心，要给它们合适的温度、湿度，不然它们就可能“罢工”，不好好配合试验了。
然后就是试验的植物啦。
这植物就像是舞台上的演员，没有它们，试验可没法进行。
要选择健康的植物，比如说要测试一种针对番茄的杀菌剂，那就要选那种叶子翠绿、茎干挺拔的小番茄苗。
这些小番茄苗要在合适的环境下生长，就像我们人要住在舒适的房子里一样。
不能太晒，也不能太阴暗，水分也要刚刚好，不然小番茄苗长得不好，试验结果就不准了。
接下来就是杀菌剂的配置了。
这就像是调一杯魔法药水。
杀菌剂要按照一定的比例和方法进行稀释。
我想啊，这就像我们冲果汁，果汁粉放多了太甜，放少了没味道。
杀菌剂如果浓度太高，可能会把植物也“毒死”，浓度太低呢，又杀不死病菌。
科学家们得小心翼翼地操作，用那些精确的仪器，就像厨师用天平称调料一样仔细。
在进行试验的时候，那可是很严谨的过程。
要把配置好的杀菌剂喷洒到植物上，就像给植物穿上一层防护衣。
不过这喷洒也有讲究呢，不能这里喷得多那里喷得少，得均匀地喷洒。
农药生物测定实验指导
农药生物测定实验指导（研究生）实验一培养基的制作、灭菌和病原菌的接种、培养一、实验目的：1、熟悉并掌握微生物用培养基的制作及灭菌的原理及使用；2、熟悉并掌握微生物的接种、培养及保存方法。
二、实验原理：培养基是供微生物生长的基物，分液体和固体两种。
按成分又可分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基。
培养真菌所用的培养基一般用马铃薯培养基，它是半组合培养基，制作比较简单，且能够完全满足微生物的营养要求。
灭菌是杀死所有微生物，保证培养基不被杂菌污染的重要手段之一。
灭菌的方法有四种：热力灭菌、过滤灭菌、化学灭菌和物理灭菌。
热力灭菌在微生物灭菌中占主要地位，分干热灭菌和湿热灭菌。
干热灭菌是利用热空气来灭菌，将玻璃器皿等放入烘箱中加热，一般用160-170℃处理1小时或150℃处理2小时，适用于经高温处理不易损坏的干燥物质。
湿热灭菌，即高压蒸汽灭菌，是将灭菌物放入灭菌锅内，维持一定的蒸汽压力，一般为1公斤/cm2左右（相当于121℃），维持半小时，以确保杀死所有微生物，适用于高温高压下不易分解变质的物质和玻璃器皿。
湿热灭菌比干热灭菌效率高。
病原菌接种培养是杀菌剂毒力测定经常进行的工作之一，因培养基性状不同，可采用不同的接种方法。
本实验是练习在固体培养基上接种。
固体培养基的接种方法分倾注和斜面两种接种方法。
接种后的菌种，必须放在适温下培养，在培养期间注意观察菌种的生长情况和有无杂菌污染，温度要保持恒温，培养成熟的菌种必须很好地保存。
三．主要仪器及试材：1、实验器皿：培养皿、容量瓶、移液管、无菌水、PDA培养基[注：以上器皿须经灭菌。
]2、实验仪器：超净工作台、灭菌锅、培养箱、打孔器、酒精灯等。
四．实验方法与步骤：（一）、培养基的制作：1、培养基的组成（PDA）：去皮马铃薯块200克葡萄糖（或蔗糖）10-20克琼脂17-20克水1000ml2、步骤：（1）、在大烧杯中加入1000ml的水，作上标记；（2）、称取去皮马铃薯200克，切成小块，放入盛有水的烧杯中，煮沸30分钟左右，将薯块捞出，留下汁液；（3）、称取17-20克琼脂（事先用水浸泡），加入烧杯中，煮溶后，称取葡萄糖（或蔗糖）10-20克，加入汁液中溶解。
农药生物测定
▪ 优点：快速、试验当天即可得结果
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定 （一）孢子萌发法 ▪ 1、萌发表面的处理 ▪ 萌发表面是孢子萌发的场所，必须符合以下条件： ▪ A.对孢子的萌发即无抑制作用又无促进作用； ▪ B.能使承受的液滴展布面积一致。
菌，以病菌的生长进度快慢来判定药剂毒力的大小。
▪ 病菌生长速度表示方法
▪ （1）药剂达到一定大小所需时间；
▪ （2）一定时间药剂直径的大小。
▪ 优点：操作比较简单；重现性好；病菌易于培养。
第二章 杀菌剂生物测定
第三节 杀菌剂的生物测定方法
一、杀菌剂皿内生物测定
（二）含毒介质培养法
▪ 2、生长速率法
▪ 步骤：
▪ 1、配制药液
▪ 2、制备带毒培养基
▪ 3、打制菌饼
▪ 4、移菌饼
▪ 5、培养（定时间或定半径）
▪ 6、结果检查
对照的菌落直径－处理的菌落直径
生长抑制率（%）＝
对照菌落直径
×100
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
2、生长速率法
一、杀菌剂皿内生物测定
（一）孢子萌发法 ▪ 4、高温、保湿培养
▪ 温度、湿度、pH、氧气
▪ 5、结果检查及表示
▪ 一定时间后检查孢子萌发率，一般在低倍镜下，随机检查200个孢子 ▪ 标准：孢子芽管大于孢子的短半径时，即算萌发，否则不算萌芽
杀菌剂生物测定
第一节 体壁的构造与功能
4.搅乱寄主和病菌间的生长关系，增强植物抗病性
提高寄主的抗病性
烯丙苯噻唑（probenazole）防治稻瘟病，又叫噻瘟唑
离体下对稻瘟病菌几乎无毒性，但是在水稻植株体内能够
启动防卫机制，诱导寄主细胞形成木质素化壁等物理屏障，阻 止病原菌进一步向邻近细胞蔓延；诱导寄主植物产生和积累
孢子萌发表面
普通的载玻片
普通的 载玻片 洗 液 10min 自来水冲 洗干净 蒸馏水 冲洗 防尘条件 下干燥
缺点：
供试菌的孢子悬浮液（或与药剂混合液）滴在
第一节 体壁的构造与功能
一、杀菌剂的毒杀作用方式
同一种药剂，由于使用浓度、处理时间的不同可能表
现出不同的毒杀作用方式。
生产上，为了保证对植物的安全和节约用药，一般多 利用杀菌剂的抑菌作用，因为这样（抑制病菌孢子萌 发或病菌生长）就能达到防病的目的。
但为了研究杀菌剂的作用机制，就必须区分清楚毒杀
本节重点
杀菌剂对病菌的毒杀作用方式 杀菌剂生物测定技术的基本类型
第二节 杀菌剂毒力、药效测定的基础操作及原理 一、试验器材的清洁及灭菌
常用的洗涤剂
试验器材的灭菌
二、植物病原菌的培养
培养基
菌种的培养与保存
一、试验器材的清洁及灭菌
（一）常用的洗涤剂
洗液
K2Cr2O7重铬酸钾（60g）+ 浓H2SO4（460mL）+水（300mL）
的作用。
杀菌剂毒力、药效测定方法尽管多种多样，但它的基本原 理离不开杀菌剂的毒力作用方式和使用方式。
一、杀菌剂的毒作用方式 二、杀菌剂的使用方式
三、杀菌剂生物测定技术的基本类型
实验二 杀菌剂生物活性测定-生长速率法
实验二杀菌剂生物活性测定-生长速率法一、实验原理将不同浓度的药液与融化的培养基混合，制成带毒培养基平面，在平面上接种病原菌，以病菌生长速度的快慢来判定药剂毒力的大小。
病菌生长速率可用两种方法表示：①一定时间内菌落直径的大小；②菌落达到一定直径所需的时间。
二、实验目的通过本试验要基本掌握杀菌剂室内（离体）活性的生物测定操作技术，掌握杀菌剂毒力回归曲线的制作及LC50的求解。
三、实验材料1．供试药剂：70%甲基托布津2．供试病原菌：苹果炭疽病菌3．马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基（PDA）配方：马铃薯200g；葡萄糖20g；琼脂粉10g（或琼脂条18g）；自来水1000 mL；pH自然偏酸（5-6）制作方法：选择质量较好的马铃薯，削皮，去芽眼，切成薄片，称取200g，加自来水1000mL，煮沸后改小火煮30min（直至马铃薯片呈半透明状），然后用4层沾湿纱布过滤，滤液用水补足至1000mL。
再加入琼脂10g，用玻棒搅拌使其溶解（可适当加热）后加入葡萄糖20g，搅匀，再补足水1000 mL，最后分装于试管（用于接斜面）或三角瓶（250mL三角瓶盛约150mL培养基），用无菌封口膜封好灭菌备用。
采用湿热灭菌法，121℃下保持30min。
4、实验器材：φ90cm的培养皿（72个），PDA培养基，1mL移液管（10个），酒精灯，10mL具塞刻度试管（10个），接种针（4个），超净工作台（2台）。
四、方法与步骤1．菌种准备实验室准备有菌源，在生测前一个星期请自行转接。
对菌种的要求：病原菌应容易培养，菌丝生长快速、整齐，产生孢子缓慢；菌丝最好在培养基平面上呈平伏放射状生长（有利于结果的测量）。
在φ90cm的培养皿中，倒入约10-15mL PDA。
从培养皿或者斜面培养基上取一块病菌，放在培养皿中间，于26℃下培养（3-7d）备用。
2．药液准备将供试药剂70%甲基托布津用无菌水分别稀释成800、400、200、100、50、25mg/L 六个浓度的药液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
教学ppt
7
三、杀菌剂室内主要生测方法
孢子萌发法 含毒介质培养法
叶碟法
管碟法 滤纸片法 孔碟法 生长速率法 最小浓度法
抑菌圈法
教学ppt
8
1.孢子萌发法
孢子萌发法是历史最悠久而广泛被采用 的 杀 菌 剂 毒 力 测 定 方 法 。 早 在 1807 年 。 Prevost 就采用此法，后经不少学者改进， 使之日趋规范、合理。
第三章 杀菌剂生物测定技术
供试菌种 杀菌剂生测的应用 杀菌剂生测方法 杀线虫生测方法 杀菌剂盆栽试验 杀菌剂田间药效试验
教学ppt
1
杀菌剂室内生物测定的主要内容 是将杀菌物质作用于细菌、真菌或 其他病原微生物，根据其作用的大 小来判定药剂的毒力。或将杀菌物 质施于植物，对病害发生的有无或 轻重观察比较来判定药剂的效果。
教学ppt
9
原理：都是将供试药剂附着在载玻片上或其 他平面上，然后将供试病菌孢子悬浮液滴在 上面（或将施于悬浮液和药液混合后滴在玻 片上），在保温，保温条件下培养一定时间 后镜检，以孢子萌发率判断杀菌剂毒力。孢 子萌发法的突出优点是快速，试验当天即可 获得结果，尤其适合于保护剂的筛选。
教学ppt
10
教学ppt
16
抑菌圏法的优缺点
抑菌圏法的优点
精确度高 操作简单
抑菌圏法的缺点
溶解性 扩散性
教学ppt
17
抑菌圈法示意图
教学ppt
含有孢子 的培养基
不同浓度 的药液
18
教学ppt
19
根据施加药剂在洋菜培养基表 面的方式，抑菌圈法又分为管碟法 （牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法。
教学ppt
20
管碟法 又称牛津杯法
教学ppt
24
注意事项
上述操作应尽量在无菌条件下进行，
以防污染
操作室的温度最好在26～28℃左右，
如室温太低，则50℃左右的培养基在操作 过程中迅速冷凝，无法制作平板
十字交叉法测量抑菌圈的直径 ，消除误
差
教学pptຫໍສະໝຸດ 25滤纸片法（1） 配制不同浓度的药液
教学ppt
22
（4）在每皿培养基上按合适的间隔放置6个 不锈钢小管（即牛津杯，外径8.0士 0.lmm。 内径6.0士0.1mm，高10.0士0.lmm），其中1 个管为对照，其余5管为5个不同浓度的药液， 在适合的温度下培养一段时间，取出用十字 交叉法测是抑菌圈的直径。
教学ppt
23
抑菌圈法示意图
教学ppt
2
一、供试菌种
供试病原菌要求
在分类上有一定代表性，最好是重要的农 业植物病害的病原菌， 而且容易培养， 多代繁殖不易产生变异。
教学ppt
3
常用的供试菌种
番茄灰霉病菌（Botrytis cintrea） 番茄早疫病菌（Alternaria solani） 辣椒炭疽病菌（Colletotrichum capsici） 苹果轮纹病菌（Physalospora berengeriana） 苹果炭疽病菌（Glomerella cingulata） 苹果腐烂病菌（Valsa mali） 葡萄黑痘病菌（Elsinoe ampelina） 葡萄白腐病菌（Coniothyrium diplodiella）
教学ppt
14
2.含毒介质培养法
有3种： （1）抑菌圈法 （2）生长速率法 （3）最小浓度法
教学ppt
15
（1）抑菌圈法的原理
基本原理是在已经接种供试菌的洋菜培养基 （通常在培养皿内）表面，利用各种方法（管 碟法，滤纸片法，孔碟法 ）使药液和培养基接 触，恒温培养一定时间后，由于药剂的渗透扩 散作用，施药部位周围的病菌被杀死或生长受 到抑制，从而产生了抑制圏。根据抑菌圈的大 小来比较不同杀菌剂的毒力大小。
教学ppt
4
水稻稻瘟病菌（Piricularia oxyzae） 小麦赤霉病菌 (Gibberella zeae) 小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces graminis） 玉米大斑病菌（Exserohilum turcicum） 玉米弯孢病菌（Curvularia lunocto） 棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporium） 枯草杆菌（Bacillus subtilis） 白菜软腐病菌（Erwinia carotovora sub sp.carotovora） 水稻白叶枯病菌（Xanthomonas campestrispv.oryzae） 等。
（1） 用灭菌蒸馏水将供试药剂配制成一系列 梯度浓度，一般5~7个浓度。 （ 2 ） 制备一定“浓度”的供试菌悬浮液（如 真菌，则宜用孢子悬浮液），浓度以在低倍镜 （15X10倍）下每视野80一100个左右孢子为宜。
教学ppt
21
（3）待培养基冷至50℃左右（凭经验估计）， 迅速吸取10ml菌液加入培养基内，充分混合后， 倒入灭菌的培养皿中，制成含菌培养基平板。
对照萌发率－处理萌发率 抑制孢子萌发率（%）＝－－－－－－－－－X100
对照萌发率
教学ppt
12
LC50 和LC95的计算
将抑制孢子萌发率换算成机率值，作为Y； 药剂的浓度以对数值来表示作为X，直线回归， 求得回归方程Y＝a+bx，可得LC50和LC95.。
教学ppt
13
孢子萌发法的适用范围
孢子萌发法只适用于产生孢子的真菌。 一般的供试病菌有： 马铃薯晚疫病菌（Phytophthora infestans） 水稻稻瘟病菌（Piricularia oryzae） 小麦赤霉病菌（Gibberella zeae） 玉米大斑病菌（Exserohilum turcicum）
孢子萌发的标准
以病菌孢子作为指示物进行杀菌剂毒力测定。 用孢子液和不同浓度的药液混合，恒温保湿培养， 培养一定时间后即可检查孢子萌发率。一般在低倍 镜下，每处理随机检查200个孢子。
教学ppt
11
抑制率计算
孢子萌发率（%）＝萌发孢子数/检查孢子数X100 若对照组有20%以上孢子不萌发，则应重做。
教学ppt
5
二、杀菌剂生物测定的应用
1 从大量合成化合物中筛选出有可能作为 杀菌剂的化合物
2 为特定的植物病害寻找有效的药剂，为 此需要进行筛选杀菌剂毒力的比较
3 杀菌剂作用方式及作用机制的研究
教学ppt
6
4 杀菌剂抗性的研究 5 杀菌剂混用及剂型研究 6 杀菌剂抗雨水冲刷能力及残效作用的研究 7 某些杀菌剂（特别是农用抗菌素）的微量分析